第41课时 生物技术在食品加工及其他方
面的应用
考点128 实践应用——果酒和果醋的制作
1．制作原理和发酵条件的比较
比较 果酒制作 果醋制作
制作原理 酵母菌先在有氧条件下大量繁殖，然后在无氧条件下进行酒精发酵 醋酸菌在氧气、糖源充足时，将糖分解成醋酸；当缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸
反应式 C6H12O6 酶 2C2H5OH＋2CO2 C6H12O6＋2O2 酶 2CH3COOH＋2CO2＋2H2O C2H5OH＋O2 酶 CH3COOH＋H2O
最适发酵温度 18～25℃ 30～35℃
对氧的需求 前期：需氧后期：不需氧 需充足氧
pH 酸性环境(3.3～3.5) 酸性环境(5.4～6.3)
发酵时间 10～12 d 7～8 d
2.红葡萄酒的生产流程线
3．装置图解读
(1)各部位的作用
①充气口：在醋酸发酵时连接充气泵进行充气。
②排气口：排出酒精发酵时产生的CO2；与排气管相连的长而弯曲的胶管：加水后防止空气中微生物的污染。
③出料口：是用来取样的。
(2)该装置的使用方法
使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，输入氧气。
1．下面是果酒和果醋制作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题：
(1)请将图1中的实验流程补充完整。
(2)冲洗的主要目的是________________，冲洗应特别注意不能________，以防止菌种的流失。
(3)图2中的充气口在__________时关闭，在________________时连接充气泵，并不断向内________。
(4)排气口在果酒发酵时排出的气体是由____________产生的________，在果醋发酵时排出的是________________________________________________________________________。
(5)从细胞核的构造看，酵母菌属于____________生物，醋酸菌属于____________生物。用________________染料使染色体着色，发现一个酵母菌细胞核中有17条染色体，该酵母菌是__________倍体。
(6)葡萄酒呈现红色的原因是_____________________，
重铬酸钾在酸性条件下与酒精的颜色反应为________色。
考点129 实践操作技术——腐乳的制作
1．原理
(1)腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异养需氧型。
(2)毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；产生的脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。
2．流程
3．影响腐乳品质的条件
(1)盐
长满毛霉的豆腐块(毛坯)与盐的质量分数比为5∶1。盐的浓度过高，影响腐乳口味；浓度过低，不足以抑制微生物生长，导致腐乳腐败变质。装瓶时分层加盐，并随层数的增加而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些，以防止杂菌从瓶口进入。
(2)酒
卤汤中酒的含量控制在12%左右。酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。酒精含量过高，对蛋白酶的抑制作用就大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物生长，豆腐易腐败，难以成块。
(3)香辛料
既可调制腐乳的风味，又具有防腐杀菌的作用。
(4)含水量
以70%为宜，若过高，则影响毛霉的有氧呼吸，且腐乳不易成形；若过低，则不利于毛霉的代谢和生长。
(5)发酵温度
前期的发酵温度控制在15～18℃，利于毛霉的生长。
(6)发酵时间
前期发酵和后期发酵的作用不同，所需时间应控制好，太长或太短都会影响腐乳的品质。
2．下列关于腐乳制作的描述中，错误的是 ( )
A．在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与
B．含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳
C．加盐和加酒都能抑制微生物的生长
D．密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染
考点130 生物技术应用——制作泡菜并检测亚硝酸盐的含量
1．泡菜的制作原理
泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
2．泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图
3．测定亚硝酸盐含量的原理和操作流程
(1)原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N 1 萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。
(2)操作流程
→→→
4．泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化
发酵时期 乳酸菌 乳酸 亚硝酸盐
发酵初期 少(有O2，乳酸菌活动受抑制) 少 增加(硝酸盐还原菌的作用)
发酵中期 最多(乳酸抑制其他菌活动) 积累、增多、pH下降 下降(硝酸盐还原菌活动受抑制，部分亚硝酸盐被分解)
发酵后期 减少(乳酸继续积累，pH继续下降，抑制其活动) 继续增多，pH继续下降 下降至相对稳定(硝酸盐还原菌被完全抑制)
3．下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：
(1)测定亚硝酸盐含量的方法是 。在样品处理过程中，用 将pH调至 ，在出现白色沉淀后，水浴加热至 ；在绘制标准曲线时，应以 为横坐标， 为纵坐标。
(2)泡菜腌制过程中起主要作用的是 和 。用水密封坛口的主要作用是 。在腌制时，适量加入少许白酒的作用是 。
考点131 生物科技新手段——PCR扩增技术
1．原理：DNA复制。
2．条件：模板、原料、酶、ATP。
3．场所：体外PCR扩增仪。
4．方向：DNA复制的具体过程涉及DNA双链的方向。DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，两磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
5．过程
(1)变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为单链，如下图：
(2)复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：
(3)延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：
6．检测PCR扩增效果
(1)将样品进行50倍稀释：取2 μL PCR反应液，加入98 μL蒸馏水。
(2)以蒸馏水作为空白对照，在波长260 nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。
(3)将步骤①中的DNA稀释液加入到厚度为1 cm的比色杯中，测定其在260 nm处的光吸收值(用A260 nm表示)。
注意 DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定。
(4)根据下面的公式计算DNA含量。
DNA含量(μg/mL)＝50×A260 nm×稀释倍数
注意 据测定，1 μg/mL的DNA在厚度为1 cm比色杯中，OD260为1相当于50 μg/mL的双链DNA。以此为标准，可以计算出样品中的DNA浓度。
7．PCR技术的应用
PCR技术模拟细胞内DNA的复制过程，实现对某一段DNA的扩增。PCR技术能在几小时内将极微量的DNA特异性地扩增上百万倍，从而有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛地应用于基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断、古生物学研究以及刑侦破案、亲子鉴定等诸多方面。
4．(创新题)多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答下列有关PCR技术的基本原理及应用问题。
(1)DNA的两条链是反向平行的，通常将________的末端称为5′端，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的________开始延伸DNA链。
(2)PCR利用DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细菌中分离到______________，它的发现和应用解决了上述问题。要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来，所用的培养基叫______________。
(3)PCR的每次循环可以分为__________________三步。假设在PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在5次循环后，反应物中大约有____个这样的DNA片段。
(4)请用简图表示出一个DNA片段PCR反应中第二轮的产物。
(5)简述PCR技术的主要应用。
考点132 生物技术实践应用——植物芳香油的提取
1．植物芳香油的基本知识
(1)成分：组成较复杂，主要包括萜类化合物及其衍生物。
(2)特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。
(3)应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉悦感；橘皮精油的主要成分是柠檬烯，具诱人的橘香味，是食品、化妆品和香水配料的优质原料。
2．玫瑰精油的提取流程与关键
鲜玫瑰花＋清水→水蒸气蒸馏→油水混合物分离油层除水玫瑰油
(1)安装装置顺序：从左到右，自下而上。
(2)温度计位置：温度计水银球的上限与蒸馏烧瓶支管的下限处在同一水平线上。
(3)冷凝管中的水流向：从下方进水，上方出水，与蒸气流向相反。
(4)加热时防暴沸：垫石棉网，向液体中加入几粒沸石或碎瓷片。
(5)烧瓶内液体量：烧瓶容积的1/3～2/3。
(6)除水：加入无水Na2SO4后，放置时间可适当延长些。
(7)温度及时间：为提高产品质量，要严格控制蒸馏温度，可适当延长蒸馏时间。
3．橘皮精油的提取流程与关键
石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油
(1)橘皮的处理：干燥后一定要用石灰水浸透，时间至少10 h以上。
(2)压榨液的处理：可以先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来。
5．(2010·课标全国卷，37)下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
(1)玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有_______________________
_________________________________________________的性质。蒸馏时收集的蒸馏液________(是、不是)纯的玫瑰精油，原因是____________________。
(2)当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和________。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是__________。
(3)如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会________，原因是___________________。
(4)密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度________的地方，目的是________。
(5)某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取精油时采摘花的最合适时间为 天左右。
(6)从薄荷叶中提取薄荷油时 (能、不能)采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是________________________________________________________________________。
考点133 生物科技实践应用——胡萝卜素的提取
1．萃取剂的选择与影响萃取的因素
(1)萃取剂的选择
有机溶剂分为水溶性和水不溶性两种。乙醇和丙酮能够与水混溶，是水溶性有机溶剂；石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等不能与水混溶，是水不溶性有机溶剂。
萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，且不与水混溶。另外还要考虑对人体是否有毒等安全问题。因乙醚沸点较低，苯和四氯化碳对人体有毒，所以本实验选用石油醚或乙酸乙酯作为萃取剂。
(2)影响萃取的因素
主要因素：萃取剂的性质和使用量。
次要因素：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度、萃取的时间等。
总之，溶解越充分，效果越好。
2．胡萝卜素的萃取方法
(1)胡萝卜素提取装置的设计
①提取装置：由铁架台、酒精灯、水浴锅、烧瓶、冷凝管等构成。安装顺序：从左到右，由下而上。拆除时相反。装置如图所示。
②由于有机溶剂易燃，直接使用明火加热易引起燃烧、爆炸——故采用水浴加热法。
③为防止加热时有机溶剂的挥发——在加热瓶口安装冷凝回流装置。
(2)纸层析鉴定步骤
①制作层析滤纸：在18 cm×30 cm滤纸下端距底边2 cm处做一条基线，在基线上取A、B、C、D四点。
②点样：用最细的注射器针头分别吸取0.1～0.4 mL溶解在石油醚中的标准样品和提取样品，分别在A、D和B、C点上点样。点样应该快速细致，在基线上形成直径为2 mm左右的圆点。
③层析：等滤纸上的点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于装有1 cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后，取出滤纸，让石油醚自然挥发。
④观察：与标准样品的胡萝卜素层析带相比较，观察提取效果。
提醒 此实验的目的是探究是否提取到了胡萝卜素，而必修教材中色素的提取与分离实验则是提取并分离四种色素，探究色素的种类和颜色。
6.如图为提取胡萝卜素的装置图，请据图回答下列问题：
(1)[⑤] 的作用是_____________________________________
___________________________________。
(2)[④] 内加入的萃取液一般是 ，原料在加入前，一般
要进行 、 处理。
(3)该萃取过程采用的是水浴加热，其目的是_______________________
___________________________________________________________。
(4)为了取得最佳萃取效果，萃取的时间应该 (“长”或“短”)。
1.果酒和果醋的酿制
考纲能力 技术实践能力
考题1 杨梅是浙江省的特色水果之一，为对其进行深加工，某厂进行了杨梅酒和杨梅醋的研制，基本工艺流程如下：
请回答：
(1)在制备杨梅酒过程中，为了提高杨梅的出汁率，在压榨前可加入一定浓度的纤维素酶和________酶。甲罐顶上弯管中加水的主要目的是__________。发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面不再有__________，说明发酵基本完毕。
(2)在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经__________处理的木材刨花，然后加入含________菌的培养液，使该菌__________在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，杨梅醋的pH可通过控制杨梅酒的________________来调节。
(3)若甲罐中的杨梅酒全部流经乙罐制成杨梅醋，则乙罐中CO2的产生量是________。
A．甲罐的两倍 B．与甲罐的相等
C．甲罐的一半 D．几乎为零
(4)在杨梅酒和杨梅醋发酵的整个过程中，某物质浓度随时间变化的趋势如图所示，该物质是______________________。
2.食醋和泡菜制作技术
考纲能力 知识的横向联系和实践应用能力
考题2 下面是有关食醋和泡菜制作的实验。请回答：
(1)食醋可用大米为原料经三步发酵来制作：
第一步：大米经蒸熟、冷却后加入淀粉酶，将原料中的淀粉分解成________(填中间产物)，然后进一步分解成葡萄糖，这一过程可用________________(填淀粉指示剂)来检测，因为该试剂遇淀粉呈蓝色，遇上述中间产物呈红色。
第二步：用________菌将葡萄糖转化成乙醇，这一发酵过程中，玻璃发酵瓶不应完全密闭的主要原因是______________________________。
第三步：用________菌将乙醇转化成乙酸，这一过程________(需要、不需要)氧气。
(2)泡菜发酵过程中，会产生多种酸，其中主要是________________，还有少量的亚硝酸。对亚硝酸盐的定量测定可以用________法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与N 1 萘基乙二胺盐酸盐偶联成________色化合物。进行样品测定时，还要取等量水进行同样的测定，目的是__________。
3.芳香油的提取
考纲能力 实践应用能力
考题3 (2011·山东卷，34)研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。
(1)柚皮易焦糊，宜采用________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过________除去其中的固体杂质。
(2)筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或__________接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是__________。实验前需对超净工作台进行__________处理。
(3)培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速率________。
(4)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。
体会 不同物质的提取分离方法
提取方法 方法步骤 适用范围
水蒸气蒸馏 水蒸气蒸馏、分离油层、除水过滤 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
压榨法 石灰水浸泡、漂洗、压榨、过滤、静置、再次过滤 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取
有机溶剂萃取 粉碎、干燥、萃取、过滤、浓缩 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中
1.关于葡萄酒的制作原理及操作
步骤不熟练
典例1 小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置中进行试验(如图)，恰当的做法是 ( )
①加入适量的酵母菌
②一直打开阀b通气
③一直关紧阀a，偶尔打开阀b几秒钟
④把发酵装置放到4℃冰箱中进行实验
A．①③ B．②④ C．①④ D．②③
纠错笔记 (1)果酒制作的微生物——酵母菌，酿酒时应为无氧条件，产生的气体及时导出，适宜温度条件为18～25℃。
(2)果酒与果醋制作中原料的消毒
①榨汁前葡萄应先冲洗再去枝梗，因为若先去枝梗，则在去梗的同时会使一些微生物侵入果实内部，给消毒带来一定的困难。
②体积分数为70%的酒精杀菌效果最强，其原因是浓度过低，杀菌力弱；浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。
2.对腐乳制作的相关知识辨析不清
典例2 下列是有关腐乳制作的几个问题，其中正确的是 ( )
①腐乳的制作主要是利用了微生物发酵的原理，起主要作用的微生物是青霉、曲霉和毛霉
②含水量为70%左右的豆腐适于做腐乳，用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形，且不利于毛霉的生长
③豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝，严格地说是直立菌丝，豆腐中还有匍匐菌丝
④决定腐乳特殊风味的是卤汤
⑤腐乳的营养丰富，是因为大分子物质经过发酵作用分解成小而且易于消化的物质
⑥卤汤中含酒量应该控制在21%左右，酒精含量过高，腐乳成熟的时间会延长；含量过低，不足以抑制微生物的生长
A．①②③④ B．②③④⑤
C．③④⑤⑥ D．①④⑤⑥
纠错笔记 (1)腐乳制作时，参与的微生物很多，但主要是毛霉。
(2)含水量70%为宜，过高、过低都影响腐乳的品质——形状、口味等。
(3)卤汤中盐、酒(含量12%左右)、香辛料都有杀菌、防腐与调味的功能。
(4)毛霉属于真菌，分为直立菌丝和匍匐菌丝，呈白色。
(5)制作原理：毛霉产生蛋白酶和脂肪酶，将豆腐中的蛋白质、脂肪分解为多肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等物质。
(6)腐乳制作过程中的杀菌消毒
①制作腐乳的玻璃瓶用温水冲洗并用酒精消毒。
②酒、盐、香辛料都有杀菌作用。
③接种、封瓶时都要进行无菌操作。
课时规范训练
【组题说明】
考 点 题 号 错题统计 错因分析
生物技术在食品加工中的应用 1、3
PCR 5
芳香油和胡萝卜素的提取 2、4
特别推荐 图形与实践相结合——1、2
1．如图为酿制葡萄酒的两个简易装置，请分析回答：
(1)果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌在有氧无氧条件下都能生存，所以，它属于________微生物。
(2)制作果酒，需将温度严格控制在________℃。制作果酒后制果醋，应将温度控制在________℃。
(3)甲装置中，A液体是________，NaHCO3溶液的作用是____________________；若用乙装置，在发酵过程中，必须进行的操作是________________________。与乙装置相比，甲装置的优点是____________________________________。
(4)葡萄汁装入发酵瓶时，要留有大约1/3的空间，这样做的优点是__________________。
2．下图甲为提取胡萝卜素的装置示意图，请回答有关问题：
(1)该装置表示的方法为 ，要想效果好，必须保证原料颗粒小， 。
(2)操作过程中应该避免明火加热，采用 加热，其原因是__________________。
(3)在加热瓶口安装冷凝回流装置的目的是____________________________________。
(4)图乙是胡萝卜素鉴定结果示意图。请据图回答：
该色素分离的方法是 ，实验组是 ，对照组是 。实验得出的结论是____________________________________________________________________。
(5)科学家通过现代生物技术获得了一株品质优良的胡萝卜植株，要想快速扩大种植规模，通常采用 技术，其原理是______________________________。
3．腐乳是通过微生物发酵制成的佐餐食品，其制作流程如下，请回答有关问题：
(1)民间制作腐乳时，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子，现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样做的目的是什么？ ____。
(2)制作腐乳的原料中哪种有机物含量比较高？______________，毛霉可利用体内的酶将其分解成哪些小分子有机物？________________________。
(3)在用盐腌制腐乳的过程中，若盐的浓度过低会出现什么现象？ ___________。
(4)卤汤中酒的含量为什么要控制在12%左右？ ________________。
4．(2011·海南卷，30)许多植物含有天然香料，如薄荷中含有薄荷油。现用薄荷叶提取薄荷油。
回答问题：
(1)薄荷油是挥发性物质。提取薄荷油时应选用______(鲜、干)薄荷叶作原料，其原因是_______________________________________________________________________。
(2)用萃取法提取薄荷油时，采用的溶剂是________，原理是______________________。
(3)用水蒸气蒸馏法提取薄荷油时，在油水混合物中加入氯化钠的作用是___________。
常用于分离油层和水层的器皿是__________。分离出的油层中加入无水硫酸钠的作用是__________，除去固体硫酸钠的常用方法是__________。
5．近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为________，细胞中是在__________的作用下使此键断裂的。
(2)当温度降低时，引物与模板________端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程中原料是________________，遵循的原则是________________。
(3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的______________和____________。
(4)PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为__________、________、________三个步骤。
答案
突破考点提炼方法
对位训练1 (1)醋酸发酵 (2)洗去浮尘 反复冲洗 (3)果酒发酵 果醋发酵 泵入空(氧)气 (4)酵母菌 二氧化碳(CO2) 剩余含氧量少的空气及二氧化碳 (5)真核 原核 龙胆紫或醋酸洋红 单 (6)红色葡萄皮中的色素溶解在发酵液中 灰绿
对位训练2 B
对位训练3 (1)光电比色法 氢氧化钠 8.0 60℃ 亚硝酸钠含量 光密度值
(2)假丝酵母 乳酸菌 为发酵创造无氧环境 使泡菜脆嫩，味道好
对位训练4 (1)磷酸基团 3′端 (2)耐高温的Taq DNA聚合酶 选择培养基
(3)变性、复性和延伸 32
(4)
(5)遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定(要求3项以上)。
对位训练5 (1)易挥发、难溶于水、化学性质稳定 不是 玫瑰精油与水蒸气一起蒸馏出来，所得到的是油水混合物 (2)蒸馏温度 在一定时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加 (3)减少 部分精油会随水蒸气挥发而流失 (4)较低 减少挥发 (5)a (6)能 薄荷油与玫瑰精油的化学性质相似
对位训练6 (1)冷凝管 降温，防止加热时有机溶剂挥发
(2)烧瓶 石油醚 粉碎 干燥
(3)避免有机溶剂明火加热引起燃烧、爆炸 (4)长
考题链接
考题1 (1)果胶 防止空气进入 气泡冒出
(2)灭菌 醋酸 附着 流速 (3)D
(4)酒精
考题2 (1)糊精 碘液(KI I2溶液) 酵母 发酵过程中会产生大量CO2，使瓶内压力升高而可能引起发酵瓶爆裂 醋酸 需要
(2)乳酸(或有机酸) (光电)比色 玫瑰红 作为对照
考题3 (1)压榨 过滤 (2)稀释涂布平板法 高压蒸汽灭菌锅 消毒 (3)氮源 越慢
(4)直径(或大小)
易错警示
典例1 A 典例2 B
课时规范训练
1．(1)兼性厌氧型 (2)18～25 30～35
(3)葡萄汁 吸收酵母菌酒精发酵产生的CO2 每隔12小时左右(一定的时间)将瓶盖拧松一次 既能及时吸收(发酵产生的)CO2，又能减少被杂菌污染的机会
(4)既为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气，又防止发酵旺盛时汁液溢出
2．(1)萃取法 萃取温度高、时间长 (2)水浴 有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸 (3)防止加热时有机溶剂挥发 (4)纸层析法 B、C A、D 萃取样品中含有β 胡萝卜素 (5)植物组织培养 植物细胞的全能性
3．(1)可以增加毛霉数量并且可以避免其他菌种污染，保证产品的质量 (2)蛋白质 小分子的肽和氨基酸 (3)不足以抑制微生物生长，导致豆腐腐败变质
(4)酒精含量过低，不足以抑制微生物生长，导致豆腐腐败变质；含量过高，腐乳成熟的时间将会延长
4．(1)鲜 鲜叶比干叶的薄荷油含量高 (2)有机溶剂 薄荷油溶于有机溶剂，而不溶于水
(3)增加水层的密度，有利于油层和水层的分离 分液漏斗 除去少量的水 过滤
5．(1)氢 解旋 解旋酶
(2)3′ 四种脱氧核苷酸 碱基互补配对原则
(3)温度 酸碱度
(4)变性 复性 延伸第40课时 微生物的分离和培养
考点125 生物技术手段——微生物实验室培养
1．培养基的类型及作用
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产
半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类鉴定
固体培养基 微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
化学成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产
合成培养基 培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 分类、鉴别
用 途 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长 培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐
鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)
2.培养基的配制原则和营养构成
(2)培养基的营养构成
①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项
(1)步骤：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板
(2)注意事项
①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。
②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项
(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。
①平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图)
注意 a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。
b．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
②稀释涂布平板法
Ⅰ.系列稀释操作(图1)
a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。
b．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡
皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。
c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。
图1
注意 移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。
Ⅱ.涂布平板操作如图2所示：
图2
注意 稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌”。具体如下：
①酒精灯与培养皿的距离要合适；
②吸管头不要接触任何其他物体；
③吸管要在酒精灯火焰周围使用。
1．自养微生物和异养微生物的营养比较
营养类型 碳 源 氮 源 生长因子
自养微生物 CO2、NaHCO3等含碳无机物 NH3、铵盐、硝酸盐等 一般不需要
异养微生物 糖类、脂肪酸等 铵盐、硝酸盐、蛋白质等 有些微生物需要
2.划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。
3．自养微生物的能源
(1)利用光能，如蓝藻等。
(2)依靠物质氧化过程中释放的能量，如硝化细菌，能利用NH3氧化过程中释放的化学能，
NH3既作为氮源，又作为能源。
4．异养微生物的能源
主要来源于有机物的氧化分解，碳源不仅为异养微生物提供构成细胞的物质，而且提供完
成整个生命活动所需的能量。
1．(2011·新课标全国卷，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和________________。
(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力__________。
(4)通常情况下 ，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
考点126 生物技术实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．筛选菌株的原理
微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
2．统计菌落数目的方法
(1)显微镜直接计数法
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
②方法：用计数板计数。
③缺点：不能区分死菌与活菌。
(2)间接计数法(活菌计数法)
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的
平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
3．细菌分离与计数的实验流程
土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数
记录数据表格
稀释度 104 105 106
1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值
菌落数/平板
菌数/克土壤
4.课题延伸——菌种的进一步鉴定
(1)原理：CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(2)方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。
2．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是 ( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取10－4、10－5的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C．将培养皿倒置，37 ℃恒温培养24～48小时
D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数
考点127 生物技术实践——分解纤维素的微生物的分离
1．纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：
纤维素纤维二糖葡萄糖
2．纤维素分解菌的筛选原理
→红色复合物红色消失，出现透明圈即可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
3．土壤中纤维素分解菌的筛选流程
土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。
3．有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题：
(1)培养基中加入的化合物A是________，为微生物的生长提供________，这种培养基属于__________培养基。
(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入________。
(3)在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度。若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是____________，操作时采用________灭菌的方法；还可用________方法操作。
(4)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是__________________。
1.微生物的实验培养
考纲能力 运用所学知识解决自然界和社会生活中有关生物学问题的能力
考题1 炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病，炭疽杆菌两端截平、呈竹节状
排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。
(1)细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。
(2)细菌鉴定：实验流程如下图所示
①对配制的液体培养基等需采取__________方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为__________(填“无机碳”或“有机碳”)。
②挑选可疑菌落制片后，用__________观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。
③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是________________，对照组试管中应加入______________，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组____________(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。
④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体。与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有____________。
2.选择培养基的用途
考纲能力 探究实验设计能力
考题2 氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表1。
图1
(1)配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的________。
(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是________________。
(3)从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于________培养基和________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是________。
(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。
(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线(如图2)。从图2可知，SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是________________。
将消毒和灭菌混为一谈
典例 培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是( )
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
纠错笔记
条件 结果 常用的方法
消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法和化学药剂消毒法
灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
提醒 (1)高温加热灭菌，其原理就是使细菌体内蛋白质变性，而达到杀灭细菌的作用。
(2)化学药剂的灭菌消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。
(3)体积分数为70%的乙醇杀菌效果最好。浓度过低，杀伤力弱；浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿则可选择75%的酒精进行消毒。
(4)灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物受其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
(5)培养基的制作是否合格的验证：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是合格的，否则需要重新制备。
课时规范训练
【组题说明】
考 点 题 号 错题统计 错因分析
微生物的培养 3、5
微生物的分离与计数 1、2、4、6
特别推荐 微生物分离技术实践应用——3、5、6
1.生产实践中应用的菌种主要来自土壤，从土壤中分离微生物的实验流程如下：
土壤取样―→选择培养―→梯度稀释―→鉴别培养
请回答下列有关问题：
(1)将土壤浸出液接种到特定培养基上，可以将酵母菌从混杂的微生物群体中分离出来，获得纯种酵母菌，这一过程叫做__________。在培养酵母菌的过程中，对培养基、接种环常采用的灭菌方法分别是___________________________________________。
(2)在使用酵母菌发酵生产酒精的过程中，影响酵母菌酒精发酵的主要因素有_________，
常使用__________的方法从发酵液中提取纯酒精。
(3)从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在__________环境中采集土样，所选择的培养基应以__________作为唯一碳源。
(4)纤维素分解菌能够合成纤维素酶，为了使纤维素酶反复使用，可以对纤维素酶进行__________处理，处理的方法有吸附法、共价键结合法和________法。
2．白僵菌高孢粉是国家林业局推广的高效生物杀虫剂之一，应用于多种林木和农作物害虫
的防治。白僵菌分生孢子附着在寄主表皮、气孔或消化道上，遇适宜条件开始萌发，生出芽管。同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶等溶解昆虫的表皮，通过芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，产生各种毒素，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。请回答下面的问题：
(1)从自然菌样中筛选较理想生产用菌种的一般步骤：采集菌样―→富集培养―→________―→性能测定。白僵菌的菌样应从________处采集。
(2)分离白僵菌菌种的培养基属于__________培养基。在配制白僵菌培养基时常加入蔗糖、硫酸铵、硝酸钾等成分，蔗糖属于__________营养物质。
(3)白僵菌纯培养常用的接种方法是______________和______________。
(4)分离与培养过程中，培养基和接种工具都要进行______处理，利用高温可以使微生物的__________等物质发生变性。
3．科学家利用基因工程技术成功地将人的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，生产出人的胰岛
素。在该过程中用质粒作为载体，已知质粒上含有抗氨苄青霉素(简称氨苄)和抗四环素的基因(位于不同区段)，目的基因与质粒的结合位点刚好位于抗氨苄青霉素基因结构内，且受体大肠杆菌体内不含质粒，也不含质粒上的抗药基因。导入完成后，实际上在得到的大肠杆菌中，有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒，只有少数导入的是重组质粒。某科研机构想从培养基上筛选出含重组质粒的大肠杆菌(即“目的菌种”)，他们设计了如下实验方案：
第一步：将得到的大肠杆菌接种在含__________的培养基上，筛选出含有质粒的大肠杆菌。
第二步：为选出“目的菌种”，将第一步筛选出的大肠杆菌用“影印法”分离。
(1)采用涂布平板法，将第一步筛选出的大肠杆菌以合适的稀释度涂布到含________质粒的大肠杆菌和含________质粒的大肠杆菌都能生长的培养基上，经培养后形成单菌落，如图B所示。
(2)通过消毒的“印章”(如图A所示)，将培养基上的菌落分别按原位印到下图所示的非选择培养基________和选择培养基________上(顺序不能颠倒，C培养基成分与B相同，D上含有氨苄青霉素)。
(3)培养后对照观察C、D培养基上的单菌落。
(4)在C培养基上挑取D培养基上____________的位置上的单菌落，从而获得含重组质
粒的大肠杆菌，即“目的菌种”。
4．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，
其技术流程为纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：
土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养
结合所学知识回答下列问题：
(1)最好选择怎样的环境采集土样？ ________________________________。
(2)以下是一种培养基配方：纤维素粉5 g、NaNO3 1 g、Na2HPO4·7H2O 1.2 g、KH2PO4 0.9 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、KCl 0.5 g、酵母膏0.5 g、水解酪素0.5 g(蒸馏水定容到1 000 mL)。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是_____________________。
(3)为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入__________染液，将筛选获得的菌液稀释后用________的方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生______的菌落作为菌种进行扩大培养。
(4)纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢？请设计实验进行检测。________。
5．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题：
(1)接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是________。培养基中加入化合物A的目的是筛选__________。
(2)实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。
(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量__________。
(4)转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用平板划线法或______________法，接种后，应将培养皿______(填“正放”或“倒置”)。
(5)下列有关平板划线操作的叙述，错误的是( )
A．在操作的第一步以及每次划线之前都要将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
(6)实验结束时，使用过的培养基应该进行________处理后，才能倒掉。
(7)若用水葫芦来去除该污染物，是否可行？为什么？_________________。
6．尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示。
请分析回答问题：
KH2PO4 1.4 g
Na2HPO4 2.1 g
MgSO4·7H2O 0.2 g
葡萄糖 10 g
尿素 1 g
琼脂 1.5 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100 mL
(1)此培养基能否用于植物组织培养？__________，理由是_______________。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选________________________________，
这种培养基属于____________培养基(依据用途划分)。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的____________和____________，实验需要振荡培养，原因是__________________________________。
(4)下列材料或用具中，需要灭菌的是_____(填序号)；需要消毒的是________(填序号)。
①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。
(5)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理： ___________________________。
答案
突破考点提炼方法
对位训练1 (1)原油 选择 (2)平板划线法
稀释涂布平板法 (3)强 (4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰
对位训练2 D
对位训练3 (1)纤维素 碳源 选择 (2)刚果红 (3)接种环 灼烧 稀释涂布平板 (4)防止造成环境污染
考题链接
考题1 (2)①高压蒸汽(98 kPa蒸汽) 有机碳 ②显微镜 ③细菌大量繁殖 等量生理盐水 低 ④吞噬细胞、浆细胞
考题2 (1)琼脂 (2)先调pH，后灭菌
(3)通用 选择 硝酸铵 (4)芽孢
(5)20 mg/L氯苯 碳源最早耗尽
易错警示
典例 A
错因分析 对灭菌和消毒的方法模糊不清。
课时规范训练
1．(1)纯培养 高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌
(2)温度、pH、氧气浓度等 蒸馏 (3)富含纤维素的 纤维素 (4)固定化 包埋
2．(1)纯种分离 感病昆虫 (2)选择 碳源 (3)平板划线法 稀释涂布平板法(或稀释混合平板法) (4)灭菌 蛋白质和核酸
3．四环素 (1)普通 重组 (2)C D
(4)不长菌落
4．(1)纤维素丰富的土壤环境 (2)培养基中纤维素是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长 (3)刚果红 涂布平板 透明圈 (4)向定量纤维素分解菌培养液中加入定量纤维素，定时测定葡萄糖产量的变化
5．(1)高压蒸汽灭菌法 目的菌 (2)异养需氧型 (3)减少 增加 (4)稀释涂布平板 倒置 (5)D (6)灭菌 (7)否。水葫芦会造成外来物种的入侵
6．(1)否 缺少植物激素(或缺少植物需要的各种营养)
(2)目的菌 选择 (3)尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气
(4)①和② ③ (5)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将
尿素分解为氨，pH增高，使酚红指示剂变红
