2022年高考生物三年高考真题及模拟题分类汇编：生物技术实践（word版含解析）
文档属性
| 名称 | 2022年高考生物三年高考真题及模拟题分类汇编：生物技术实践（word版含解析） |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 1.5MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 通用版 | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2021-10-05 19:36:10 | ||
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文档简介
生物技术实践
一、单选题
1．（2021·浙江高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是（ ）
A．将白萝卜切成小块
B．向容器中通入无菌空气
C．添加已经腌制过的泡菜汁
D．用沸水短时处理白萝卜块
2．（2020·海南高考真题）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（
）
A．羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料
B．提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的洗涤剂和食盐
C．预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D．在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色
3．（2020·北京高考真题）为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。
为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（
）
A．①+③
B．①+②
C．③+②
D．③+④
4．（2020·江苏高考真题）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（
）
A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
5．（2020·江苏高考真题）甲、乙两个实验小组分别进行了“酵母细胞固定化技术”的实验，结果如下图所示。出现乙组实验结果的原因可能为（
）
A．CaCl2溶液浓度过高
B．海藻酸钠溶液浓度过高
C．注射器滴加速度过慢
D．滴加时注射器出口浸入到CaCl2溶液中
6．（2020·江苏高考真题）某同学在线提交了在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋的实验报告，他的做法错误的是（
）
A．选择新鲜的葡萄略加冲洗，除去枝梗后榨汁
B．将玻璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁
C．酒精发酵期间，根据发酵进程适时拧松瓶盖放气
D．酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵
7．（2020·浙江高考真题）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（
）
A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
8．（2020·浙江高考真题）下列关于淀粉酶的叙述，错误的是
A．植物、动物和微生物能产生淀粉酶
B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高
C．枯草杆菌淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高
D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色
9．（2019·上海高考真题）下图表示利用β-糖苷酶时使用的一种酶的固定化技术，该技术是（
）
A．交联
B．包埋
C．沉淀
D．载体结合
10．（2019·江苏高考真题）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是
A．筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B．可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C．在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D．用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
11．（2019·江苏高考真题）下列关于加酶洗涤剂的叙述，错误的是
A．加酶洗衣粉中一般都含有酸性脂肪酶
B．用加酶洗涤剂能减少洗涤时间并节约用水
C．含纤维素酶洗涤剂可以洗涤印花棉织物
D．加酶洗衣粉中的蛋白酶是相对耐高温的
12．（2019·江苏高考真题）下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是
A．利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封发酵
B．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是纯种发酵
C．果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
D．毛霉主要通过产生脂肪酶、蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵
13．（2019·江苏高考真题）下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是
A．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近
B．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
C．预冷的乙醇可用来进一步纯化粗提的DNA
D．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
14．（2019·江苏高考真题）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是
A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
15．（2019·北京高考真题）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。
菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有关本实验的叙述，错误的是
A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D．H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
16．（2021·山东烟台市·高三三模）荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量，其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。下列叙述错误的是（
）
A．引物与探针均具有特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则
B．反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈负相关
C．Taq酶催化DNA合成的方向总是从子链的5′端到3′端
D．若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因转录水平
17．（2021·辽宁抚顺市·高三一模）下列关于“检测土壤中某种微生物总数”实验操作的叙述，错误的是（
）
A．一般选择距地表约3～8cm的土壤层进行取样
B．不同微生物均可取104、105、106倍的土壤稀释液进行接种操作
C．将实验组和对照组平板倒置，一般在适宜且恒温条件下培养3～4d
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300之间的实验组平板进行计数
18．（2021·山东烟台市·高三三模）普洱茶“渥堆”为普洱茶的发酵过程，是云南大叶种晒青毛茶经“潮水”（喷洒适量水分）后“渥堆”，在黑曲霉、青霉、根霉、酵母菌等微生物产生的胞外酶、代谢产生的热量和茶叶水分湿热作用的协同下，使茶叶发生了一系列的物理、化学变化，促成了普洱茶风味及良好品质的形成。下列相关叙述错误的是（
）
A．“潮水”的目的是增加茶叶含水率，为微生物的繁殖创造条件
B．“渥堆”过程容易闻到酒香，主要是酵母菌进行无氧呼吸的结果
C．“渥堆”过程中定期翻堆的目的只是为了降低堆子的温度
D．普洱回甘味觉，可能是因为微生物产生的纤维素酶能降解茶叶中的纤维，增加了茶叶中单糖、二糖的含量
19．（2021·山东淄博市·高三三模）微生物实验需要严格的无菌操作以防止污染，下列说法错误的是（
）
A．紫外线用于实验室空气及实验台表面的消毒
B．无菌技术可效地避免实验操作者自身被微生物感染
C．为防止DNA污染，PCR用水应来自加热煮沸的自来水
D．使用后的培养基在丢弃前需要灭菌处理
20．（2021·山东淄博市·高三三模）硝化细菌是化能自养菌，通过NH4+→NO2-→NO3-的氧化过程获取菌体生长繁殖所需的能量，在水产养殖中具有重要作用。下表是分离硝化细菌的培养基配方，下列说法错误的是（
）
(NH4)2SO4
0.5g
NaCl
0.3g
FeSO4
0.03g
MgSO4
0.03g
K2HPO4
0.75g
NaH2PO4
0.25g
Na2CO3
1g
琼脂
5%
定容
1000ml
A．(NH4)2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源
B．培养基中的Na2CO3是硝化细菌的主要碳源
C．K2HPO4和NaH2PO4能维持培养基的pH
D．硝化细菌能清除水体中的铵态氮及亚硝态氮
21．（2021·浙江绍兴市·高三二模）在大肠杆菌的培养与分离实验中，下列相关操作正确的是（ ）
A．实验中所需的棉花应使用脱脂棉，因为脱脂棉不易吸水，可以防止杂菌污染
B．在LB固体培养基配制过程中，可以用蒸馏水，不需要无菌水
C．灭菌后，通常将实验用具放入40~50℃烘箱中烘干以除去灭菌时的水分
D．LB固体培养基要用500g/cm2压力灭菌30分钟
22．（2021·山东泰安市·高三三模）餐厨垃圾中具有高效降解能力的微生物，可用于餐厨垃圾高效无害化处理，科研人员取一定量的餐厨样品，制备不同浓度的样品稀释液，并将样品接种于利用蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂配置培养基表面进行培养并分离。下列分析正确的是（
）
A．牛肉膏主要为微生物提供氮源
B．接种时需用力将菌种接种到培养基内
C．稀释样品获得单个菌落以便判断菌种类型
D．经过培养可筛选出高效降解能力的微生物
23．（2021·山东泰安市·高三三模）韩联社2021年4月3日消息，韩国“世界泡菜研究所”（WiKim）近日表示，制作泡菜（Kimchi）的材料——白菜、辣椒、大蒜含有的营养成分能调节人体抗氧系统，对减轻新冠病毒感染症状发挥积极作用。泡菜中萝卜硫素、蒜辣素、辣椒素、姜辣素等营养成分和发酵过程中产生的乳酸菌与人体的抗氧化系统Nrf2相互作用，消除由新冠病毒在体内产生的有害活性酸素。家庭中制作泡菜的方法：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水”，密封后置于温度适宜的地方。下列与此过程相关的叙述不正确的是（
）
A．用白酒擦拭泡菜坛的目的是消毒
B．加入“陈泡菜水”的作用是提供乳酸菌菌种
C．发酵过程中，乳酸菌与其他杂菌的竞争越来越强
D．若制作的泡菜咸而不酸，可能的原因是加入食盐过多，抑制了乳酸菌的发酵
24．（2021·湖北高三二模）不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1:50-1:100，在PCR反应的最初10-15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。下列相关说法错误的是（ ）
A．可以利用不对称PCR
来制备探针
B．复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物
C．用不对称PCR方法扩增目的基因时需知道基因的全部序列
D．因为双链DNA和单链DNA的分子量大小不同，可通过电泳方法将其分离
25．（2021·湖北高三二模）微生物实践和技术中常常涉及到颜色的变化，下列有关说法错误的是（ ）
A．葡萄酒呈红色是因为酵母菌发酵产物中产生了红色的副产物
B．DNA的粗提取实验中，以鸡血为原料，最终析出的白色丝状物即为DNA
C．可以用滤膜法来测定饮用水中的大肠杆菌的数目，在伊红美蓝培养基上的大肠杆菌菌落呈现黑色
D．在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料
26．（2021·湖北高三二模）下列关于微生物培养的说法错误的是（ ）
A．倒平板时，培养基倒入培养皿后要立即倒置放置
B．实验中锥形瓶、培养皿常用干热灭菌法灭菌
C．用记号笔标记培养皿中菌落时应标记在皿底
D．纯化培养时，培养皿应倒置培养在恒温培养箱中
27．（2021·天津滨海新区·高三三模）产脂肪酶细菌可用于含油废水处理。科研人员用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得产酶能力提高的菌株，具体流程如图。相关叙述正确的是（
）
A．步骤①取土壤样品溶于无菌水中制成菌悬液
B．步骤②的固体平板可以是以脂肪为唯一氮源的培养基
C．步骤②射线照射可引起细菌基因突变或染色体变异
D．步骤③透明圈越大的菌落，其脂肪酶活性一定越高
28．（2021·辽宁高三三模）以鲜山楂为主要原料酿制的山楂酒，将山楂的营养成分充分释放，更易被人体吸收，具防止疾病的功效和较高的保健价值，是一种天然健康的饮品。下图是探究果酒发酵的装置示意图，下列叙述错误的是（ ）
A．制作山楂酒时，先用清水冲洗1～2次，再去除霉烂部位和枝梗
B．制作果酒时如果适时打开阀a几秒钟，关闭阀b，会导致爆瓶
C．果酒发酵中通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸
D．d排气管通过一个长而弯曲的胶管，可防止空气中杂菌的污染
29．（2021·山东日照市·高三三模）养殖池中存在的有毒物质主要是氨和亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。研究人员从养殖池池泥中分离出硝化细菌并进行了计数。有关叙述正确的是（ ）
A．需配制一定浓度含氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基以分离硝化细菌
B．配制的培养基经高压蒸汽灭菌后通常还需要调节pH才能使用
C．涂布时，用涂布器沾取少量菌液并均匀地涂布在培养基的表面
D．使用涂布平板法统计得到的菌落数目往往比活菌的实际数目少
30．（2021·天津高三二模）在进行微生物数量测定时，下列情况会造成结果偏多的是（ ）
A．经过静置后，取培养液的上层进行直接计数
B．进行梯度稀释时，每支试管加入了过多的无菌水
C．利用显微镜直接计数时，滴加菌液后再盖盖玻片
D．平板上有不少菌落是两个细菌长成的菌落连在一起形成的
31．（2020·江苏高三二模）下列关于酵母细胞固定化的叙述，正确的是（ ）
A．酵母细胞一般采用物理吸附法或化学结合法进行固定
B．刚溶化好的海藻酸钠溶液要及时与已活化的酵母细胞混匀
C．制备海藻酸钠溶液时，开始用大火加热，然后用小火加热
D．固定化酵母细胞过程中CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉，形成稳定的凝胶珠
32．（2020·浙江高三一模）下列关于泡菜的制作和亚硝酸盐含量测定的叙述，正确的是（
）
A．将蔬菜用开水和白酒浸泡
1min
以加快发酵速度
B．在发酵过程中出现白膜可能是由于乳酸菌大量增殖而引起的
C．测定亚硝酸盐含量用波长为
550nm
的光是因为亚硝酸盐对该波长的光有最大的吸收率
D．若制作标准曲线时用的比色杯的光程比待测样品的比色杯光程大，则计算出的待测样品中亚硝酸盐的含量偏低
33．（2020·上海高三一模）硝化细菌（能利用化学能将无机物转化为有机物）和大肠杆菌的培养基及培养条件中，主要的差别是（ ）
A．碳源
B．琼脂
C．自来水
D．光照
34．（2020·江苏连云港市·高三一模）下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是（）
A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合
B．用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子
C．Taq酶是PCR仪扩增DNA分子时常用的一种耐高温的DNA连接酶
D．在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果
35．（2020·山东青岛市·高三三模）兴趣小组利用葡萄制作果酒和果醋。在该过程中发酵条件的控制至关重要，下列相关叙述正确的是（
）
A．葡萄汁要装满发酵瓶，造成无氧环境，有利于发酵
B．果酒发酵过程温度控制在30℃，果醋发酵过程温度控制在20℃
C．用带盖的瓶子进行发酵，每隔12h左右打开瓶盖一次，放出CO2
D．在果醋发酵过程中，要持续通过充气口充气，有利于醋酸菌的代谢
二、多选题
36．（2021·山东淄博市·高三三模）以苹果汁为原料，经酒精发酵、醋酸发酵可制得果醋。下列说法错误的是（
）
A．酒精发酵阶段和醋酸发酵阶段的适宜温度相同
B．酒精发酵阶段和醋酸发酵阶段均有大量气体产生
C．在醋酸发酵阶段醋酸杆菌将酒精转化为醋酸
D．在醋酸发酵阶段接种乳酸菌可提高醋酸的酸度
37．（2021·山东泰安市·高三三模）发酵工程最重要的工作是选择优良的单一菌种，消灭杂菌。筛选微生物的方法包括（
）
A．根据微生物对碳源需求的差别，使用含有不同碳源的培养基
B．根据微生物需要生长因子的种类，在培养基中增减不同的生长因子
C．根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸
D．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素
38．（2021·江苏盐城市·高三三模）有机磷农药（如对硫磷，俗你1605）一般都具有很强的毒性，且结构稳定难以清除，易在土壤、果蔬中残留，对人体造成潜在的危害。为了获得高效降解有机磷农药的微生物，研究人员设计了下图所示的实验方案。下列有关叙述正确的是（ ）
A．选取的土壤样品不需进行灭菌处理
B．该方案中的CNFM是选择培养基
C．平板培养的目的是为了加速微生物生长
D．根据检测结果，选出对硫磷浓度最低的锥形瓶内的微生物
39．（2020·山东淄博市·高三三模）某同学做“微生物的分离与培养”实验，所配制的培养基配方如下表所示，相关叙述错误的是（
）
葡萄糖
尿素
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
琼脂
10g
10g
14g
2．1g
0．2g
15g
A．该培养基为选择培养基，可用于分离尿素分解菌
B．若要对培养的微生物进行计数，接种时可采用稀释涂布平板法或平板划线法
C．对分离出的细菌进行鉴定时，可在培养基中加入刚果红，若pH升高，指示剂变红
D．利用该培养基分离得到的细菌能合成葡萄糖苷酶，将葡萄糖分解获取能量
40．（2020·山东滨州市·高三三模）下图是某生物兴趣小组用同一种培养基培养的酵母菌卡通形象菌落，有关说法正确的是（
）
A．培养酵母菌可以采用麦芽汁琼脂培养基
B．实现图中卡通形象菌落的接种方法是稀释涂布平板法
C．“乔治”和“佩奇”的颜色不同是因为两个平板中的酵母菌不同
D．图中卡通形象清晰完整，说明培养过程中无菌操作符合规范
三、综合题
41．（2021·河北高考真题）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。
回答下列问题：
（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是__________，萃取效率主要取决于萃取剂的__________。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷__________。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原因是____________________。
（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0．1mL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为__________个。
（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至__________性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是______________________________。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为__________。
（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌_________。（简要写出实验步骤和预期结果）
42．（2021·全国高考真题）PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题：
（1）若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_________（用数字序号表示）。
（2）操作③中使用的酶是_________，PCR
反应中的每次循环可分为变性、复性、________三步，其中复性的结果是_______
。
（3）为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与_______
特异性结合。
（4）PCR（多聚酶链式反应）技术是指_______。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。
43．（2021·广东高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。
回答下列问题：
（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为___________，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用___________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有___________等。（答出两种方法即可）
（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是___________。（答出两点即可）
（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中___________可能是高密度培养的限制因素。
（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌___________。
44．（2021·湖南高考真题）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即_________。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以_________为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于_________培养基。
（2）配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是_________。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_________。
（3）简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路_________。
（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。
菌株
秸秆总重(g)
秸秆残重(g)
秸秆失重（%）
纤维素降解率（%）
A
2.00
1.51
24.50
16.14
B
2.00
1.53
23.50
14.92
C
2.00
1.42
29.00
23.32
45．（2021·全国高考真题）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过实验比较了几种洗衣粉的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），实验结果见下表。
加酶洗衣粉A
加酶洗衣粉B
加酶洗衣粉C
无酶洗衣粉(对照)
血渍
+++
+
+++
+
油渍
+
+++
+++
+
根据实验结果回答下列问题：
（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是__________；加酶洗衣粉B中添加的酶是__________；加酶洗衣粉C中添加的酶是__________。
（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有__________，原因是___________。
（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的原因是___________。
（4）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指___________。固定化酶在生产实践中应用的优点是_________（答出1点即可）。
46．（2021·全国高考真题）工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。
回答下列问题：
（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的___________可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供___________。
（2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的_____、______能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和__________。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于___________（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。
（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于___________（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是___________。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是___________（答出1点即可）。
47．（2021·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。
（1）从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或________法，两种方法均能在固体培养基上形成________。对分离的菌株进行诱变、________和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。
（2）固定化菌株的制备流程如下；①将菌株与该公司研制的特定介质结合；②用蒸馏水去除________；③检验固定化菌株的________。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是________。
（3）对外，只提供固定化菌株有利于保护该公司的知识产权，推测其原因是________。
（二）三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。
（1）为保护三叶青的________多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用________技术，实现了三叶青的林下种植。
（2）依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达形成________和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA上rol系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成________，再分化形成毛状根。
（3）剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次________培养，培养基中添加抗生素的主要目的是________。最后取毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的________和温度，调节培养基成分中的________，获得大量毛状根，用于提取药用成分。
48．（2020·江苏高考真题）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR
I酶切为例）：
请据图回答问题：
（1）步骤I用的EcoR
I是一种__________酶，它通过识别特定的__________切割特定位点。
（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′-羟基与5′-磷酸间形成__________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。
（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________（从引物①②③④中选择，填编号）。
DNA序列（虚线处省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物
①5′-
AACTATGCGCTCATGA-3′
②5′-
GCAATGCGTAGCCTCT-3′
③5′-
AGAGGCTACGCATTGC-3′
④5′-
TCATGAGCGCATAGTT-3′
（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是_________________。
A．
5′-
AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′
B．
5′-
AATTCCATG-----------CTGAATT-3′
C．
5′-
GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．
5′-
TTGATACGO----------CGAGTAC-3′
49．（2020·江苏高考真题）产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是__________（填编号）。
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
（2）称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行__________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以__________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径__________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关研究，理由是__________。
50．（2020·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
（1）柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的__________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的__________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值__________的处理效果好。③对不同处理进行__________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
（2）加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成__________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已__________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径__________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的__________下降。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的__________。
（2）结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、__________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用__________的转基因方法。
（3）利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间__________，且不经历__________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
（4）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加__________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成__________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如_____（A．提高蔗糖浓度B．降低培养基浓度C．提高大量元素浓度D．不添加琼脂）。
51．（2020·全国高考真题）水果可以用来加工制作果汁、果酒和果醋等。回答下列问题：
（1）制作果汁时，可以使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、________（答出2种即可）。纤维素酶可以分解植物______________（填细胞膜或细胞壁）中的纤维素。
（2）用果胶酶处理果泥时，为了提高出汁率，需要控制反应的温度，原因是__________________。
（3）现有甲乙丙三种不同来源的果胶酶，某同学拟在果泥用量、温度、pH等所有条件都相同的前提下比较这三种酶的活性。通常，酶活性的高低可用_____________来表示。
（4）获得的果汁（如苹果汁）可以用来制作果酒或者果醋，制作果酒需要__________________菌，这一过程中也需要O2，O2的作用是__________________。制作果醋需要醋酸菌，醋酸菌属于_____________（填好氧或厌氧）细菌。
52．（2020·全国高考真题）研究人员从海底微生物中分离到一种在低温下有催化活性的α-淀粉酶A3，并对其进行了研究。回答下列问题：
（1）在以淀粉为底物测定A3酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是_________，也可采用斐林试剂检测________的增加。
（2）在A3的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS的作用是___________________和___________________。
（3）本实验中，研究人员在确定A3的最适pH时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是______________。
（4）在制备A3的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是___________________________
（答出1
点即可）。
53．（2020·全国高考真题）某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
回答下列问题：
（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_______________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_______________。甲、乙培养基均属于______________培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107
个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释________________倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是________________（答出1点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤________________。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即________________。
54．（2020·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与泡菜制作有关的问题：
（1）用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生_____，从而使成品泡菜口感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是_______。
（2）泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，会使______菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，会使______菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。
（3）从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行______，再用______的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有______，以便于观察是否产酸。
（4）自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加______。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经______处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有______（答出2点即可）。
（2）若要获得已知序列的抗病基因，可采用______或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用______，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中______，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。
（3）原生质体在培养过程中，只有重新形成______后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过______或器官发生的途径再生植株。
（2019·上海高考真题）2019
年
7
月，《上海市生活垃圾分类管理条例》施行，生活垃圾分类成为市民的日常生活方式，生活垃圾分类中的湿垃圾是指可被微生物降解的有机物。
55．下列属于湿垃圾的是______。
①剩余饭菜
②玻璃碎片
③植物落叶
④过期面包
⑤果皮果壳
56．湿垃圾降解后才能被植物利用，是因为根毛细胞难吸收
。
A．尿素
B．矿物质
C．H2O
D．大分子有机物
处理是垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解。下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。
57．培养基中加入碳源是____。根据上图，将菌液接种到培养基的方法是___。
58．据图，菌落①与菌落②周围透明圈的大小不同，原因可能是两个菌群
。
A．对碘液分解能力不同
B．分泌的淀粉酶活性不同
C．合成淀粉量不同
D．受淀粉抑制程度不同
59．对筛选到的菌落①与菌落②进行鉴定，发现①属于真菌，②属于细菌，两者的本质区别是
。
A．细胞膜的成分
B．有无细胞结构
C．核糖体的有无
D．有无完整核膜
60．若垃圾分类不当，在湿垃圾中混入了过期的抗生素或电池等，将不利于微生物分解，原因是
。
A．会抑制微生物生长
B．是微生物的生长因子
C．促进有机物的合成
D．为微生物提供碳源和氮源
61．（2019·海南高考真题）回答下列问题。
（1）玫瑰精油可用玫瑰花瓣为原料，采用水蒸气蒸馏法提取。水蒸气蒸馏法的原理是________________________。在进行蒸馏时，冷凝管的进水口比出水口___________（填“高”或“低”）。蒸馏收集到的乳浊液是玫瑰精油和水的混合物，要得到玫瑰精油，需要向乳浊液中加入NaCl，其目的是________________；得到的油层还需要加入无水Na2SO4，其目的是_______________。
（2）某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是________________________。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是________________________；在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，发酵液会变酸，可能的原因是__________________。
62．（2019·全国高考真题）回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_____________（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______（填“能够”或“不能”）生长，原因是____________。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板____________（填“倒置”或“正置”）。
（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________。
（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过____________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
63．（2019·全国高考真题）已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。
Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。
Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。
回答下列问题。
（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是___________。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物是_________。
（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_________，其原因是_________。
（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。
（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_________和_________。
64．（2019·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果胶和果胶酶有关的问题：
（1）通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为______。
（2）为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行______。
（3）在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使______。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入______。使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
（4）常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有______和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有______和______。
（二）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
（1）通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过______技术获得特异性探针，并将______中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。
（2）将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测______（A．质粒载体
B．转录产物
C．抗性基因
D．病原微生物）。
（3）植物细胞在培养过程中往往会发生______，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入______，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用______培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。
（4）用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是______。
65．（2019·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与微生物培养及应用有关的问题：
（1）对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从__________时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转人G6玻璃砂漏斗中，采用__________方式可较快地进行过滤灭菌。
（2）酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加__________的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是__________。
（3）为筛选胞外A–淀粉酶分泌型菌种，一般从__________（A果园树下
B肉类加工厂周围
C
米酒厂周围
D枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个__________比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取__________用于检测酶活性。
（二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题；
（1）该农业生态工程体现的生态工程原理主要是__________。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、__________、系统的有效贡献等三方面进行核算。
（2）若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的__________技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的__________技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。
（3）某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有____________________（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，__________，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中__________。
66．（2021·浙江高三三模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）请回答与农作物秸秆利用有关的问题：
（1）欲从土壤中分离高产秸秆纤维素酶的微生物，可将土壤溶液适度_________后接种于以_________为唯一碳源的培养基上，同时还应在培养基中添加适量的秸秆纤维素显色剂，目的是_________，选择有透明圈且_________的菌落进行保存并扩大培养。
（2）研究人员利用上述方法分离获得了甲、乙、丙三种微生物，为比较三种微生物产生的纤维素酶的活性大小，可将等量的三种酶与等量且足量的秸秆纤维素悬液混合，反应相同时间后，经_________获取其上清液，加入显色剂后测定其_________，比较测定的结果即可推断三种纤维素酶的活性大小。
（3）生产上常用农作物秸秆酸解产生的葡萄糖发酵生产燃料乙醇，生产过程一般无需严格灭菌，这是因为在厌氧、_________环境中，绝大多数微生物生长受到抑制。为使生产连续进行且获得相对纯净的燃料，可采用酵母细胞的_________技术。
（二）马铃薯易被致病疫霉感染而患晩疫病，非洲甜菊中的TLP基因可使其具有抗晩疫病能力，现利用基因工程和植物克隆技术培育抗病马铃薯新品种。请回答：
（1）为获得TLP基因，可从包含TLP基因的基因文库中通过核酸分子杂交或_________技术直接对基因文库中的DNA序列进行筛选，也可通过_________技术利用基因文库的表达产物进行筛选
（2）利用农杆菌将TLP基因导入受体细胞的一般方法是将消毒后的马铃薯叶片剪成小片，在_________溶液中浸泡后，取出、消毒并转移至添加_________的包含适当营养物质和植物生长调节剂配比的MS培养基上进行培养。把叶片剪成小片的主要目的有二，一是使叶片受伤，引起其释放酚类物质以利于_________进入受体细胞；二是剪成小片增大_________了，有利于提高转化效率。
（3）在实验室经多次筛选后获得的抗真菌组培苗需进一步锻炼后才能用于野外种植，炼苗过程中，需逐步降低环境_________并增加_________。
67．（2021·天津北辰区·高三一模）生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少。我国生活饮用水水质标准（GB5749—85）中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠杆菌群不得大于3个/L。某同学欲检测家中自来水中大肠杆菌含量，对自来水中大肠杆菌进行了培养、计数和鉴定。回答下列问题：
（1）该同学用涂布平板法检测大肠杆菌数：配制的培养基中含有蛋白膏、酵母膏、NaCl、H2O和X，其中蛋白胨可为大肠杆菌提供_______________________________和维生素，X是_________________。
（2）该同学用滤膜法检测大肠杆菌数，其大致流程为：先用滤膜过滤已知体积的待测水样，水样中的大肠杆菌留在滤膜上，其他杂质则被滤出，再将滤膜转移到培养基上培养并统计菌落数量。该方法所统计样品中含菌数往往偏低的原因是________________________________________。
（3）为了检测培养基灭菌是否彻底，需要设置对照，其做法是将灭菌的________（填“接种”或“未接种"）培养基放在恒温无菌箱中进行培养。取10mL自来水，稀释10倍后，取10ml稀释液进行过滤，将滤膜置于培养基上进行培养，获得了30个目的菌落，则每毫升自来水中含有目的菌__________个。
（4）下图表示培养和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列叙述错误的是（多选）__________。
A．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B．步骤②接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线
C．步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数
68．（2021·广东茂名市·高三三模）桉叶油富含黄酮类、三萜类等具有清热解毒，消炎杀菌，祛风除湿等功效，其化学性质与玫瑰精油相似。研究小组想尝试用微生物（霉菌）发酵的方法提取桉叶油。请回答下列问题。
（1）桉叶油具有挥发性强，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏等特点，故提取的方法可以用______。提取时应该选择______（填“新鲜”或“干燥”）的叶片，原因____________。
（2）用微生物发酵提取桉叶油的方法为：在粉碎的桉叶中，接种霉菌，于28-30℃培养3-4d，获得桉叶发酵物。其中，用平板划线法纯化霉菌，通常划线的工具是____________，其灭菌的方法是____________。某个平板共划线6个区域，则该过程中需要从试管中蘸取______次菌液。
（3）桉叶油具有消炎杀菌作用，在使用抗生素过程中，抗生素对细菌起到了定向选择的作用，使细菌的抗药性基因频率升高。桉叶油代替抗生素的优越性在于____________。
69．（2021·浙江绍兴市·高三二模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答果酒与果醋制作有关的问题：
（1）用干酵母作为发酵菌酿制果酒时，需先将适量干酵母放在小烧杯中，加入少量温水（<40℃）和一小撮蔗糖制成________，待其出现________，表明干酵母已活化。
（2）酵母菌在生长繁殖和进行发酵时，会产生少量尿素，尿素会与酒精反应生成有害物质，可用脲酶处理予以分解，但在实际生产过程中不宜直接将脲酶加入酒体中，原因有________（答出1点），可将脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固定化酶的方法称为________。
（3）用果酒酿制果醋时，发酵瓶中先装八分满的经________处理的锯末，然后加入含有醋杆菌的________使醋杆菌附着在锯末上，成为固定化醋杆菌。采用固定化醋杆菌而不是固定化酶进行醋酸发酵的主要原因是________。
（4）为进一步测定果醋中还原糖的含量，可以在发酵产物中加入还原糖显色剂，用光电比色法测定显色产物的光密度值，并将测定值与________比对，计算其含量。
（二）回答与转基因植物的培育和植物克隆有关的问题：
木瓜环斑病毒（PRV）是一种对木瓜危害极大的病毒，科学家通过基因工程技术将抗环斑病毒基因（PRSV）导入木瓜中表达出抗环斑病蛋白，从而获得抗环斑病的木瓜。
（1）构建重组DNA分子时，使用两种限制性核酸内切酶处理，优点是可防止目的基因和切割后的载体DNA自身环化及________。为使PRSV高效表达，需要对重组载体上目的基因相关的________序列进行修饰。
（2）获取活性强的农杆菌菌液，通过冰浴、离心、去上清液等相应处理，加入适量预冷的含15%甘油的________溶液，制成感受态农杆菌细胞。转化后的农杆菌要正常培养一段时间，才能置于含特定抗生素的培养基上筛选，正常培养一段时间的目的是________。优先选用木瓜________（受伤的/完好的）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养完成转化，促使其不断分裂形成愈伤组织。
（3）试管苗需锻炼后才可移栽至大田，移栽时需先洗去________以免栽后发霉。
（4）为了快速获得稳定遗传的抗环斑病木瓜，可选择________培养获得的细胞系作为受体细胞。
70．（2021·河北沧州市·高三三模）土壤中的难溶性磷酸盐积累会造成土壤板结，溶磷微生物能将难溶性磷酸盐转变成植物可吸收利用的磷酸盐。研究人员将采集到的土壤接种到含有难溶性磷酸盐及必需营养物质的培养基中，经过如图所示的系列分离纯化过程，最终筛选出了溶磷能力强的拜莱青霉菌。回答下列问题：
（1）培养基含有的营养物质有无机盐、____________。为筛选到溶磷能力强的拜莱青霉菌，培养基中还应加入链霉素（抗生素）以避免____________生长而带来的污染。
（2）实验过程中，振荡培养有利于物质充分利用，也能为目的菌的生长繁殖提供充足的_____________。培养若干天后，应选择培养瓶中难溶性磷酸盐含量______________的培养液，接入新的培养液中连续培养，该操作的目的是____________。
（3）将菌液接种到固体培养基上继续培养，以便于_____________。获得的菌种可采用____________的方法进行长期保存。
71．（2021·云南曲靖市·高三二模）餐饮行业会产生大量的废弃油脂，去除废弃油脂能有效的降低环境污染。为了获得高效分解脂肪的微生物，某生物兴趣小组从富含油脂的水体中分离获得了3种脂肪分解菌甲、乙、丙。回答下列问题：
（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水作为样本，采样约10g，立即装于试管内，此试管使用前需要经过__________处理。
（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行__________处理，然后吸取0．2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落__________等表观特征初步分类。
（3）上述步骤筛选出的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”为菌种繁殖提供__________。在该培养基还需要加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显__________降解圈的菌株，并且选颜色较_________（填“深”或“浅”）的为宜。
（4）对选出的分解脂肪能力强的脂肪分解菌进行纯化培养，若用稀释涂布平板法接种，涂布到培养基表面的菌液量不宜过多，否则会导致培养基表面菌体堆积而不能获得______；若要对该脂肪分解菌进行计数，不能用平板划线法接种，其原因是_____________________。
72．（2021·广东梅州市·高三一模）随着生物科学的发展，微生物的应用范围在生活中越来越广泛。例如∶微生物在酒类酿造、食品发酵、药物研发和污水处理等方面都扮演重要角色。请回答下列关于微生物的问题∶
（1）培养微生物的培养基的营养成分一般都有水、无机盐、____等。
此外，还要满足微生物生长对pH、温度、湿度、氧气及特殊营养物质的需求。灭菌后的培养基在平板倒好后，需要随机选取若干个平板先行培养一段时间
，这样做的目的是__________。
（2）滤膜法常用来检测饮用水中的大肠杆菌是否超标，这种测定方法的主要原理是大肠杆菌的代谢产物能与培养基中添加的伊红-美蓝反应，使菌落颜色呈___________。若要长时间保藏大肠杆菌，可采用的方法是___________。
（3）果醋已经成为我们日常生活中饭桌上的常用饮料，具有一定的保健功能。果醋在发酵过程中利用的菌种主要是_____，其能产生多种酶，通过_________技术将其制作成商品重复使用。
73．（2021·江苏南通市·高三三模）某同学为了探究新鲜的花园土中是否存在微生物，进行了如下实验：取灭菌后的锥形瓶，加入新鲜花园土。将50mL牛奶煮沸，倒入锥形瓶中，锥形瓶口用棉花团堵住，装置如图所示。每日观察牛奶的情况，共观察4天。请回答下列问题：
（1）该实验设计中还缺少对照实验，对照实验的设计应该是____________。牛奶在该实验中的作用是____________。
（2）用棉花团堵住锥形瓶的目的是____________；将牛奶进行煮沸的目的是____________，加入锥形瓶时要注意____________；实验中的操作都需要____________旁进行。
（3）实验结束后，测定对照组和实验组的牛奶的pH，最可能得到的结果是____________，原因是____________。
74．（2021·浙江绍兴市·高三二模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）苹果酒和苹果醋制作的实验流程如下图，
回答下列相关问题：
（1）放置一段时间的水果比新鲜水果要软，可能的原因是水果中__________酶能分解细胞壁，使水果细胞相互分离，
导致水果变软。在工业化生产中，
可采用__________技术，有利于该酶从果汁分离并实现反复利用。
（2）对野生酵母菌进行诱变后利用____________________的培养基，筛选得到具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，
可提高酒精发酵的效率。
（3）可通过测定酵母菌数量、发酵液密度和_______________等措施监控酒精发酵情况。发酵初期，
可采用__________培养法测定酵母菌的活菌数量；发酵中期，发酵液密度降低的原因是___________________________。
（4）发酵过程中常通过_____________________________来监控醋酸发酵情况。
（二）侏儒症是由于生长发育时期体内生长激素分泌过少导致的生长缓慢。为帮助特定人群实现个体增高，研究人员利用转基因山羊乳腺生物反应器生产生长激素，已经取得一定进展。请回答下列相关问题：
（1）通过分析生长激素的氨基酸序列，可人工合成编码生长激素的脱氧核苷酸序列，该序列_______（填“是”或“不是”）唯一的，利用PCR的方法对该序列进行扩增时使用Taq酶而不使用哺乳动物体内的DNA聚合酶，原因是Taq酶___________________。
（2）构建重组DNA分子时，要将改造后的生长激素基因与山羊乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起，目的是____________________________。然后将重组DNA分子导入山羊的__________________（填“受精卵”或“乳腺细胞”）中。相比细菌基因工程，以转胰岛素原基因动物的乳腺作为反应器来生产人胰岛素的优点有：乳腺细胞含有_____________________，可以将无活性的胰岛素原加工成有生物活性的胰岛素，表达的胰岛素随乳汁及时排出体外，便于提取纯化等。
（3）若选用早期囊胚做雌雄鉴别，则一般应选早期囊胚的_______________________进行性别鉴定，鉴别后的胚胎可做胚胎移植。
（4）如要在分子水平判断目的基因在受体细胞中是否表达，可检测细胞内是否含相应的__________或蛋白质分子，若检测后者可用_________________________技术获得特异性探针，与提取的蛋白质杂交。
75．（2021·重庆高三三模）随着人们生活质量的提高，餐饮含油脂废水的排放量大量增加，合理处置油脂废水也成为新的课题。已知芽孢杆菌中有多种分解油脂并产酸的菌种，科研人员欲采用下列流程筛选出能高效分解油脂的微生物。
菌种取样→分离培养→菌株的筛选→形态特征观察和生理生化反应鉴定，请回答下列问题：
（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水为样本，采样约0.2ml，立即装于试管内，此试管使用前需要经过________处理。
（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行________处理，然后吸取0.2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落___________________（至少答3点）等表观特征初步分类。
（3）上述步骤筛选的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”主要为菌种繁殖提供___________。在该培养基还需加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显_____________降解圈的菌株，并且选颜色较___________（填“深”或“浅”）的为宜。
（4）实际操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培养基中加入2-3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好，试分析原因_______________________。
76．（2021·广东珠海市·高三二模）一定浓度的抗生素会杀死细菌，但变异的细菌可能产生耐药性。某学校生物兴趣小组为探究抗生素对细菌的选择作用，做了以下实验。
（1）为获取大肠杆菌，将一定体积的土壤浸出液过滤后，将滤液均匀涂布在含有______________培养基上培养，挑选出呈______________色菌落即为大肠杆菌。
（2）获得大肠杆菌菌落后，需进行扩大培养，此时应选用
______________培养基。
（3）将大肠杆菌菌液均匀涂布在固体培养基上，并将平板划分为三个大小一致的区域，各放入一个经抗生素处理的相同圆纸片，在适宜条件下培养
2
天，观察结果（如图），统计透明圈的直径。
①为使实验更具有说服力，平板需增加一个区域，在该区域应放入一个______________。
②请说明圆纸片周围透明圈的大小与抗生素抑菌效果的关系：______________。
③挑取该平板上__________________（填“靠近透明圈”、“远离透明圈”或“任意位置”）的菌落，制成菌液重复上述实验，培养多代。
结果与结论：随着培养代数的增加______________，说明抗生素能定向选择耐药菌。
（4）使用后的培养基、圆纸片丢弃前需做_______________________________处理。
77．（2021·天津和平区·高三三模）水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA．
PVA
与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑。
（1）要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以_______________作为唯一碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。
（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用_________直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0．1
mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160
个，空白对照组平板上未出现菌落。则100
mL原菌液中有PVA分解菌_________个，
该方法的测量值与实际值相比一般会_________________（填“偏大”“偏小”或“相等”）。
（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入____________用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定_____________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。
78．（2021·江西高三二模）“分离”作为一种传统生物技术，在生产实践中具有广泛的运用，回答下列有关的问题：
（1）分离纯化微生物的方法很多，最常用的是__________法和稀释涂布法，后者还可以用来统计样品中活菌的数目，原理是_____________________，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
（2）筛选、鉴定纤维素分解菌一般用_____________法，该方法中我们可以根据培养基中是否产生__________筛选纤维素分解菌。
（3）分离不同种类的蛋白质常用凝胶色谱法，该方法是根据________________对蛋白质进行分离，利用血红蛋白作为分离样品的优点有____________________。
（4）从玫瑰花中提取玫瑰精油常用方法是水蒸气蒸馏法，原理是_________________，形成油水混合物，冷却后又重新分出油层和水层。
79．（2021·山东济宁市·高三二模）安莎霉素是一类主要由来源于海洋的稀有放线菌产生的次级代谢产物，具有较高的抗菌活性和药用价值。科研人员通常从深海采集淤泥样本，再分离、纯化并筛选出产安莎霉素的放线菌，其分离培养流程如下图。请分析回答下列问题：
（1）过程①的接种方法为______。
（2）统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致______。
（3）研究人员发现产安莎霉素的放线菌具有一个普遍的共性——氨基酸缺陷型。从筛选目的分析，基本培养基与完全培养基存在差异的成分是______。为了初步鉴定营养缺陷型放线菌菌株，科研人员进行了如下操作：
①用接种针挑取______（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全液体培养的离心管中，28℃振荡培养3～5天后，离心取沉淀物，用无菌水洗涤3次制成菌悬液。
②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化并冷却至50℃左右的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域，标记A、B、C、D、E。
③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。
组别
所含氨基酸
A
组氨酸
苏氨酸
谷氨酸
赖氨酸
亮氨酸
B
精氨酸
天冬氨酸
赖氨酸
甲硫氨酸
苯丙氨酸
C
酪氨酸
谷氨酸
赖氨酸
色氨酸
丙氨酸
D
甘氨酸
天冬氨酸
苏氨酸
色氨酸
丝氨酸
E
半胱氨酸
亮氨酸
苯丙氨酸
丙氨酸
丝氨酸
在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该氨基酸缺型菌株属于______缺陷型。
（4）科研人员分离、纯化出产安莎霉素的放线菌后，需要利用PCR技术大量扩增其DNA上的16SrRNA保守片段，然后通过DNA序列比对进行菌种亲源关系的鉴定。查找数据库发现该放线菌的16SrRNA目的基因片段及相应限制酶识别序列如下图所示：
限制酶
EcoRⅠ
BamHⅠ
Hind
Ⅲ
SacⅠ
识别序列和切割位点
G↓AATTCG
G↓ATCC
A↓AGCTT
GAGCT↓C
为了获得目的基因16SrRNA，需要使用的限制酶是______。得到目的基因以后就可以利用PCR技术对16SrRNA进行体外扩增，扩增目的基因的原理是______，此过程需要加入______催化。
80．（2021·内蒙古呼和浩特市·高三二模）三孢布拉氏霉为单细胞的霉菌，能产生β-胡萝卜素，可用于工业生产。回答下列问题：
（1）工业生产中发酵罐内的培养基属于______（填“液体”或“固体”）培养基，有利于营养物质与三孢布拉氏霉充分接触，菌丝体生长迅速。培养三孢布拉氏霉时需将培养基pH调至______（填“酸性”“中性”或“碱性”）。在接入菌种前，应对培养基进行______灭菌，以避免杂菌污染。
（2）三孢布拉氏霉含有β-胡萝卜素合成的关键酶——八氢番茄红素合成酶（PSY），可根据______（答出两点即可）等特性的差异借助电场将PSY与其他蛋白质分离。再采用______（答出两种方法）固定化PSY，应用于工业生产。
（3）在提取胡萝卜素的常用方法中，其提取的效率主要决于______，提取到的胡萝卜素粗品，在实验室中通常需通过______法进行鉴定。若观察到______则说明β-胡萝卜素提取成功。
81．（2021·黑龙江齐齐哈尔市·高三三模）山东山亭地处山区，有大面积的野生柿子林，柿子酒可润肺生津、清热健脾、软化血管，有益健康。利用野生柿子发酵制作柿子酒是一项值得发展的经济项目。用野生柿子制作果酒的工艺流程如下：
柿子原料→清洗→脱涩→晾干→破碎→调配→接种→发酵→分离→沉淀→过滤→陈酿
回答下列问题：
（1）清洗时，先冲洗后去梗的目的是________________。接种时，需先将酵母菌活化，活化是指_________________。
（2）制作柿子酒的过程中，发酵是关键环节，而发酵过程中果胶酶的用量直接影响果酒品质。下表为以野生火晶柿子为材料，在最适温度、最适pH条件下，进行的果胶酶用量对果酒品质影响的实验结果：
果胶酶添加量（mg/L）
酒精度（%）
风味指数
澄清效果
0
12.4
8.0
5.0
20
12.5
7.8
6.2
40
12.6
7.2
6.7
60
12.7
6.0
7.8
80
12.8
5.0
8.6
注：酒的风味指数越高，品质越佳。
①从表中数据可知，随着果胶酶添加量的增加，风味指数_________；果胶酶能使柿子酒澄清度提高的原因是_____________________。
②分析表中数据，综合评价果胶酶的适宜添加量应为______________左右。若要重复利用果胶酶，可对果胶酶适宜采用__________________法进行固定化。
（3）若要将柿子酒进一步制成柿子醋，所需要的环境条件改为_____________________。柿子酒发酵是否成功可通过尝、闻进行初步鉴定，还可用显微镜观察酵母菌，并用______________（试剂）检验酒精的存在与否。
82．（2021·四川泸州市·高三三模）传统发酵技术丰富了我们的餐桌文化，生物技术的广泛应用给人们的生活带来了深刻的变化。回答下列相关问题。
（1）在葡萄酒中加醋酸菌可以生产葡萄醋，在发酵前，需要加入一定量的纯净水对葡萄酒进行稀释，原因是____________________________________。
（2）用卷心菜发酵制作泡菜过程中，需要注意控制____________（至少答出两项），否则容易造成细菌大量繁殖，______的含量增加。
（3）从丁香中提取丁香精油时，可采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是丁香精油与玫瑰精油的化学性质相似，即丁香精油__________________，能随水蒸气同蒸馏；向蒸馏所得乳浊液中加入NaCl的目的是____________。
（4）鞣质是常见的中药成分，在植物中广泛分布，具有止血、杀菌等作用。它易溶于乙酸乙酯，从树皮中提取鞣质时常选用____________，用此方法提取鞣质时，应对原料进行____________处理。
83．（2021·云南昆明市·高三三模）阿维菌素是一种从链霉菌中提取的杀虫剂，具有广谱、高效、安全、低残留等特点，是目前农业害虫防治中较理想的农药品种之一。要从土壤样品中分离链霉菌并培育高产菌株，研究人员进行了相关实验。回答下列问题：
（1）获得土壤样品后，先进行______操作，获得不同稀释度的土壤稀释液。若要获得稀释倍数为101的稀释液，可将5g土壤样品放入______mL无菌水中。
（2）分别吸取0．1mL不同稀释倍数的稀释液，接种于选择培养基上，在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时进行计数，结果如表。
稀释倍数
菌落数
平板1
平板2
平板3
104倍
5
9
4
103倍
122
138
112
102倍
432
491
387
计算每克土壤样品中的链霉菌数量约为______个。
（3）分离得到的链霉菌用紫外线处理，获得某变异菌株后，将其接种在含葡萄糖的培养液中，葡萄糖进入细菌体内后，主要作用是______（答出1点即可）。培养一段时间后，将得到的菌丝破碎，加入甲苯进行水浴加热，之后过滤，再通过______装置浓缩除去______，得到阿维菌素结晶。
（4）经测定该变异菌株阿维菌素的产量是500μg/mL，根据实验结果______（填“能”或“不能”）确定其是否为高产阿维菌素的菌株，依据是______。
84．（2021·江西九江市·高三一模）胡萝卜素可治疗维生素A缺乏症，是常用的食品色素，具有使癌细胞恢复成正常细胞的作用。回答胡萝卜提取的相关问题:
（1）胡萝卜素可治疗夜盲症的原因是一分子的β－胡萝卜素能被氧化成两分子的_______。
（2）用萃取法提取胡萝卜素时，萃取的效率主要取决于_________，萃取过程应在加热瓶口安装____________，目的是_____________________。
（3）萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置，浓缩前还要进行过滤，其目的是_________________。
（4）对胡萝卜素粗品的鉴定采用__________________法，若___________，说明提取胡萝卜素的实验成功。
85．（2020·浙江高三一模）回答下列（一）（二）小题
（一）各式各样的奶制品如牛奶、奶酪、马奶酒等的生产与微生物的活动密切相关。
（1）市面上出售的牛奶通常用巴氏消毒法（80℃水浴，15min）处理，其原理为_____。通过涂布分离将接种的
3
个平板和
1
个未接种的平板放入恒温培养箱培养
48h，统计出
4
个平板上的菌落数分别是
57、53、55
和
9。根据这样的实验结果_____（填“能”或“不能”）判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标，原因是_____。
（2）奶酪是发酵的牛奶制品，蓝纹奶酪是成熟过程中内部生长蓝绿霉菌一类奶酪的总称。其制作所用的初级发酵剂为乳酸菌，初级发酵过程中不需要严格灭菌，原因是_________。制作中所用的二级发酵剂为娄地青霉，接种后需给奶酪穿刺扎孔，原因是_____。娄地青霉产生的蛋白酶可将奶酪中的蛋白质分解为_____，可增添奶酪的风味。
（3）马奶酒是利用马奶酿制的酒精含量较低的饮料。马奶中含有的糖类主要为乳糖，某些微生物将其水解为葡萄糖和半乳糖，酵母菌可利用这些水解产物发酵产生酒精。现研究野生型酵母菌和马奶酒酵母菌的发酵情况，其结果如下图所示：
马奶酒酵母菌在利用葡萄糖、半乳糖或产生酒精等方面的优势是_____。马奶酒酵母菌不同于野生型酵母菌的营养利用方式，使其种群数量快速增加，这一优势使马奶酒酵母菌更好地适应_____的生活环境。
（二）玉米是我国重要的粮食作物和饲料来源，低温会影响玉米的产量和品质。研究者将从微生物中获得的CSP（冷激蛋白）基因与玉米基因的
ubi
启动子相连后构建基因表达载体，并将其导入玉米细胞中，获得了具有低温耐受性的玉米植株，如图
1
所示。请回答：
（1）研究者提取玉米的
DNA，可利用_____________技术将ubi
启动子扩增出来。图
1
所示过程①
需_____的催化，获得的ubi-CSP
基因在构建基因表达载体时须插入到T-DNA
片段中的原因是_________
。
（2）过程②需要用_________处理农杆菌以利于重组
DNA
的导入。影响过程③的因素主要有_____________，一般来说只有处于细胞周期____（时期）的细胞才具有被转化的能力。为了减小农杆菌对愈伤组织再分化的影响，需要在培养基中添加_____________。
（3）研究者分别提取了野生型玉米及
5
株转基因玉米的染色体
DNA，用限制性核酸内切酶处理后进行电泳。电泳后的
DNA
与基因探针进行杂交，得到图
2
所示放射性检测结果，
该结果表明第_________株CSP
基因已整合到玉米染色体基因组。
86．（2020·贵州高三一模）从土壤中分离的苯酚分解菌可降解工业污水中的苯酚，净化水体。富集苯酚分解菌的培养基如图所示。请回答：
（1）该培养基中，微生物生长繁殖所需的碳源和氮源依次来自__________，培养基中的K2HPO4和KH2PO4在微生物的培养过程中所具有的作用是____________________（答出2点）。
（2）在苯酚分解菌的富集培养过程中，需将接种后的培养液在振荡器上做振荡处理，这种处理利于菌体的生长和繁殖，其原理是__________________；苯酚分解菌成为优势菌而其他微生物数量减少，原因是__________________。
（3）在分离苯酚分解菌时，除图中的化学成分外，在培养基中还需添加__________________。接种培养后，在平板上长出的菌落有大有小，一般应选择菌落较大的苯酚分解菌进行纯化培养。进行上述选择培养的理由是__________________。
（4）分解苯酚的关键酶是苯酚羟化酶，它是苯酚分解菌所产生的一种胞内酶。在用海藻酸钠固化苯酚分解菌时，若制作的凝胶珠呈“蝌蚪”状，出现“托尾”现象，此时应采取的改进措施是__________________。苯酚羟化酶的酶活力除受温度，pH和苯酚浓度的影响外，还受海藻酸钠浓度的影响。海藻酸钠浓度过高使苯酚羟化酶的酶活力下降，原因是__________________。
87．（2020·陕西榆林市·高三一模）人类利用微生物发酵制作果酒、果醋的历史源远流长。请回答下面相关问题。
（1）果酒发酵的菌种主要是酵母菌，与醋酸菌相比酵母菌属于_____生物。自然发酵中的菌种来自于附着在葡萄皮上的野生酵母菌，在发酵过程中_____（填“需要”或“不需要”）使用灭菌技术，这是因为_____。
（2）如图是某研究小组为果酒生产厂设计的发酵罐。为了能高效生产葡萄酒，先打开进气阀和出气阀通入空气，目的是_____。一段时间后关闭进、出气阀进行无氧发酵。为了防止发酵罐中压力过大，发酵中需要_____。
（3）研究小组中有成员建议将发酵中用到的菌种进行重复利用，这样可以降低生产成本。根据固定化技术，最好采用_____法固定酵母细胞。
（4）研究发现：经葡萄里面的糖分自然发酵而成的酒精，一般在10%~13%为最佳，发酵时的温度和时间会影响果酒发酵产生酒精的含量。为了找到适合生产的最佳发酵温度和时间。请你设计出探究的思路。_____。
88．（2020·广西高三二模）实时荧光RT-PCR（逆转录PCR）在诊断新型冠状病毒感染中发挥着关键作用，其具体的过程为：从样品中提取RNA→DNA→PCR扩增→荧光检测。请回答下列问题：
（1）RT-PCR的试剂盒包含Taq酶、引物、缓冲试剂等，除此之外，还应包含_______________酶。反应体系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是_____________________________。
（2）核酸检测样本多采集于咽、鼻，这些部位存在多种微生物，提取物中核酸种类可能有多种。但利用该“试剂盒”，通过PCR技术可专一性地对新型冠状病毒的核酸序列进行扩增，其原因是__________________________________。
（3）抗体疗法是针对新冠肺炎的临床试验疗法之一，新冠肺炎康复者的血清中可以分离出相应抗体，但这种从血清中分离抗体的方法存在____________________________的缺点。单克隆抗体技术为治疗新冠肺炎提供了一种可能的发展方向。在单克隆抗体制备过程中，需从已免疫的个体获得_______________细胞，但在实际生产中通常不会对该种细胞进行连续培养，主要原因是____________________________。
（4）单克隆抗体制备过程中，经选择性培养获得的杂交瘤细胞，还需进行____________________。单克隆抗体除作体外诊断试剂外，还可用于治疗疾病和____________________________。
89．（2020·广西高三二模）青蒿素为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，受热易分解。可以从青蒿的茎叶中提取得到，是治疗疟疾等疾病的药物，以下为青蒿素的提取流程，请回答下列问题：
（1）图示采用_______________法提取青蒿素，影响因素除萃取剂的性质和使用量，还有_______________（写出两点即可）。
（2）青蒿叶在粉碎前需要进行____________________________处理，不能用新鲜的叶片，原因是______________________________________________________________________。
（3）粉碎青蒿叶的目的是____________________________。在减压蒸馏之前，还要对萃取液进行过滤的原因是________________________________________________________。
（4）萃取液的浓缩采用的是减压蒸馏处理，目的是_________________________。
90．（2020·四川达州市·高三一模）某些微生物能产生耐高温的淀粉酶，此类酶在大规模工业生产中有很大的实用性，下图为研究者获取耐高温淀粉酶的过程：请回答问题：
（1）从热泉中能筛选到嗜热菌，原因是___________。图中“选择培养”
的目的是___________。与“选择培养”相比，Ⅰ号培养基还需要加入的另一种重要成分是_____________。
A．琼脂
B．葡萄糖
C．硝酸铵
D
碳酸氢钠
（2）a过程的接种方法是_____，与b过程的接种方法相比，该接种方法不仅能桃选出单菌落，还能_____________________。
（3）在耐高温淀粉酶运送到工业生产前，要对该酶的最佳温度范围进行测定。图中的曲线c表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温发下保温足够长的时间，再在酶活生最高的温度下测其残余酶活性，得到酶热稳定性曲线d。
①该酶使用的最佳温度范围是_______
°C，
理由是_____________________。
②采用固定化技术将耐高温淀粉酶固定后可多次利用。在固定该酶时，宜采用_______法。
91．（2020·陕西汉中市·高三一模）进行垃圾分类收集可以减少垃圾处理时间，降低处理成本。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于对湿垃圾（包括剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物）的处理。请分析回答：
（1）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理；对培养基灭菌的方法是_______________，操作者的双手需要进行清洗和_______。
（2）培养过程需要向培养基通入无菌空气并进行搅拌，目的是使菌体充分接触_________和_________，促进细菌生长繁殖。
（3）科研小组从生活垃圾中分离分解纤维素的微生物，需要将其接种到仅含有_________为唯一碳源的培养基进行培养，制作鉴别培养基选用__________染色，通过是否产生_________来筛选纤维素分解菌。要知道鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入_______指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现红色。
（4）纤维素酶是一种______酶，广泛存在于自然界的细菌、真菌和某些动物等生物体中；因此，卫生纸类垃圾可采用__________（选填“回收利用”“卫生填埋”“垃圾焚烧”或“堆肥”）方式，有效减少对环境的污染。
92．（2020·辽宁葫芦岛市·高三二模）硒是一种生命活动必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。
请回答下列问题：
（1）若②中出现________的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被富硒细菌还原。
（2）将细菌从②接种至③以及从④接种至⑤的方法分别是________和________。
（3）采用_________法分离纯化还原亚硒酸钠酶时，先从层析柱中洗脱出来的是相对分子质量________的蛋白质分子。
（4）研究人员筛选出一种具有较强富硒能力的菌株，现欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，请将下列实验补充完整：
①配制系列浓度梯度的亚硒酸钠___________(填“液体”或“固体”)培养基；
②向培养基中分别接种___________的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间；
③观察菌落生长情况，___________的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。
93．（2020·安徽马鞍山市·高三一模）尿素是一种重要的农业氮肥，但是并不能直接被农作物吸收。土壤中含大量微生物，其中就有尿素分解菌。某兴趣小组欲从土壤中分离该类细菌，并进行后续培养研究，设计了如下实验：
请回答有关问题：
（1）称取土壤、梯度稀释、接种微生物需要在火焰旁进行，其目的是___________。
（2）该兴趣小组设计了A、B两种培养基（成分见下表）：
葡萄糖
无机盐
尿素
琼脂
酚红溶液
水
培养基A
＋
＋
＋
＋
＋
＋
培养基B
＋
＋
＋
－
＋
＋
注：＋表示有，－表示无
据表分析，两种培养基的碳源是__________；培养基B可用于增菌培养，不能用于分离纯化，原因是________________。接种的微生物中是否含有尿素分解菌，可通过观察___________进行初步鉴定。
（3）加入培养基的无机盐含有KH2PO4及Na2HPO4，其作用是__________。配置好的培养基灭菌方法是_________________。
（4）若用平板划线法接种微生物，在培养基上共画了4个区域，则至少需要________次灼烧接种环。
94．（2020·安徽马鞍山市·高三三模）为筛选出能产生果胶酶的微生物，研究人员利用腐烂水果进行了下列操作：
腐烂水果取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→挑选菌落→复筛
回答下列问题：
（1）选择培养需制备以________为唯一碳源的培养基，此过程可以“浓缩”所需微生物，原因是_______________________________________________________________。
（2）选择培养后的菌液按一定比例加入_________中，进行系列梯度稀释。涂布培养一段时间后，选择单菌落数目适宜的培养皿，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），15min后，洗去培养基表面的刚果红溶液，挑选_________直径与菌落直径比值大的菌落。
（3）复筛时进行果胶酶
________测定，最终挑出果胶酶高产菌株。工业生产中，常利用液态发酵生产大量果胶酶，液态发酵的优点是____________________________。为使果胶酶能反复利用，经常采用________________方法固定。
95．（2020·天津和平区·高三一模）抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点。将若干编码抗菌肽（ABP）序列按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部，形成长度为4800bp
（1bp为一个碱基对）的重组质粒PLG339-nABP，相关过程如图所示。已知重组质粒中，每个编码ABP序列中都含有限制酶AccⅢ的一个切点，基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸（色氨酸是微生物生长必须的氨基酸）。
（1）质粒PLG339的基本单位是___________________。
（2）若PLG339—n
ABP经限制酶AccⅢ处理后，产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段，单个抗菌体（ABP）最多由______________个氨基酸构成（不考虑终止密码）。
（3）现有大肠杆菌和酵母菌两种菌群，可作为导入PLG339-nABP的受体细胞是_________________，理由是____________________________________。
（4）若选定的受体细胞为trpA基因缺陷型，则需采用两步法筛选含重组质粒的细胞。第一步筛选的固体培养基在营养成分上的要求是：含______________，不含色氨酸；第二步将第一步所得菌落接种到新的培养基上进行培养，该培养基中应添加_____________。通过对照，最终选出______________（能/不能）在第一步培养基上生长，而______________（能/不能）在第二步培养基上生长的菌落即为符合要求的成功导入重组质粒的细胞。
（5）在测试转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果时获得了如图所示的结果，据此可得出结论：ABP抑制效果与___________和_____________有关。
四、实验题
96．（2019·全国高考真题）物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌
一、单选题
1．（2021·浙江高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错误的是（ ）
A．将白萝卜切成小块
B．向容器中通入无菌空气
C．添加已经腌制过的泡菜汁
D．用沸水短时处理白萝卜块
2．（2020·海南高考真题）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（
）
A．羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料
B．提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的洗涤剂和食盐
C．预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D．在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色
3．（2020·北京高考真题）为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。
为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（
）
A．①+③
B．①+②
C．③+②
D．③+④
4．（2020·江苏高考真题）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（
）
A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
5．（2020·江苏高考真题）甲、乙两个实验小组分别进行了“酵母细胞固定化技术”的实验，结果如下图所示。出现乙组实验结果的原因可能为（
）
A．CaCl2溶液浓度过高
B．海藻酸钠溶液浓度过高
C．注射器滴加速度过慢
D．滴加时注射器出口浸入到CaCl2溶液中
6．（2020·江苏高考真题）某同学在线提交了在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋的实验报告，他的做法错误的是（
）
A．选择新鲜的葡萄略加冲洗，除去枝梗后榨汁
B．将玻璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁
C．酒精发酵期间，根据发酵进程适时拧松瓶盖放气
D．酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵
7．（2020·浙江高考真题）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（
）
A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
8．（2020·浙江高考真题）下列关于淀粉酶的叙述，错误的是
A．植物、动物和微生物能产生淀粉酶
B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高
C．枯草杆菌淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高
D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色
9．（2019·上海高考真题）下图表示利用β-糖苷酶时使用的一种酶的固定化技术，该技术是（
）
A．交联
B．包埋
C．沉淀
D．载体结合
10．（2019·江苏高考真题）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是
A．筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B．可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C．在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D．用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
11．（2019·江苏高考真题）下列关于加酶洗涤剂的叙述，错误的是
A．加酶洗衣粉中一般都含有酸性脂肪酶
B．用加酶洗涤剂能减少洗涤时间并节约用水
C．含纤维素酶洗涤剂可以洗涤印花棉织物
D．加酶洗衣粉中的蛋白酶是相对耐高温的
12．（2019·江苏高考真题）下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是
A．利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封发酵
B．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是纯种发酵
C．果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
D．毛霉主要通过产生脂肪酶、蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵
13．（2019·江苏高考真题）下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是
A．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近
B．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
C．预冷的乙醇可用来进一步纯化粗提的DNA
D．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
14．（2019·江苏高考真题）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是
A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
15．（2019·北京高考真题）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。
菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有关本实验的叙述，错误的是
A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D．H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
16．（2021·山东烟台市·高三三模）荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量，其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当Taq酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。下列叙述错误的是（
）
A．引物与探针均具有特异性，与模板结合时遵循碱基互补配对原则
B．反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈负相关
C．Taq酶催化DNA合成的方向总是从子链的5′端到3′端
D．若用cDNA作模板，上述技术也可检测某基因转录水平
17．（2021·辽宁抚顺市·高三一模）下列关于“检测土壤中某种微生物总数”实验操作的叙述，错误的是（
）
A．一般选择距地表约3～8cm的土壤层进行取样
B．不同微生物均可取104、105、106倍的土壤稀释液进行接种操作
C．将实验组和对照组平板倒置，一般在适宜且恒温条件下培养3～4d
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300之间的实验组平板进行计数
18．（2021·山东烟台市·高三三模）普洱茶“渥堆”为普洱茶的发酵过程，是云南大叶种晒青毛茶经“潮水”（喷洒适量水分）后“渥堆”，在黑曲霉、青霉、根霉、酵母菌等微生物产生的胞外酶、代谢产生的热量和茶叶水分湿热作用的协同下，使茶叶发生了一系列的物理、化学变化，促成了普洱茶风味及良好品质的形成。下列相关叙述错误的是（
）
A．“潮水”的目的是增加茶叶含水率，为微生物的繁殖创造条件
B．“渥堆”过程容易闻到酒香，主要是酵母菌进行无氧呼吸的结果
C．“渥堆”过程中定期翻堆的目的只是为了降低堆子的温度
D．普洱回甘味觉，可能是因为微生物产生的纤维素酶能降解茶叶中的纤维，增加了茶叶中单糖、二糖的含量
19．（2021·山东淄博市·高三三模）微生物实验需要严格的无菌操作以防止污染，下列说法错误的是（
）
A．紫外线用于实验室空气及实验台表面的消毒
B．无菌技术可效地避免实验操作者自身被微生物感染
C．为防止DNA污染，PCR用水应来自加热煮沸的自来水
D．使用后的培养基在丢弃前需要灭菌处理
20．（2021·山东淄博市·高三三模）硝化细菌是化能自养菌，通过NH4+→NO2-→NO3-的氧化过程获取菌体生长繁殖所需的能量，在水产养殖中具有重要作用。下表是分离硝化细菌的培养基配方，下列说法错误的是（
）
(NH4)2SO4
0.5g
NaCl
0.3g
FeSO4
0.03g
MgSO4
0.03g
K2HPO4
0.75g
NaH2PO4
0.25g
Na2CO3
1g
琼脂
5%
定容
1000ml
A．(NH4)2SO4可作为硝化细菌的氮源和能源
B．培养基中的Na2CO3是硝化细菌的主要碳源
C．K2HPO4和NaH2PO4能维持培养基的pH
D．硝化细菌能清除水体中的铵态氮及亚硝态氮
21．（2021·浙江绍兴市·高三二模）在大肠杆菌的培养与分离实验中，下列相关操作正确的是（ ）
A．实验中所需的棉花应使用脱脂棉，因为脱脂棉不易吸水，可以防止杂菌污染
B．在LB固体培养基配制过程中，可以用蒸馏水，不需要无菌水
C．灭菌后，通常将实验用具放入40~50℃烘箱中烘干以除去灭菌时的水分
D．LB固体培养基要用500g/cm2压力灭菌30分钟
22．（2021·山东泰安市·高三三模）餐厨垃圾中具有高效降解能力的微生物，可用于餐厨垃圾高效无害化处理，科研人员取一定量的餐厨样品，制备不同浓度的样品稀释液，并将样品接种于利用蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂配置培养基表面进行培养并分离。下列分析正确的是（
）
A．牛肉膏主要为微生物提供氮源
B．接种时需用力将菌种接种到培养基内
C．稀释样品获得单个菌落以便判断菌种类型
D．经过培养可筛选出高效降解能力的微生物
23．（2021·山东泰安市·高三三模）韩联社2021年4月3日消息，韩国“世界泡菜研究所”（WiKim）近日表示，制作泡菜（Kimchi）的材料——白菜、辣椒、大蒜含有的营养成分能调节人体抗氧系统，对减轻新冠病毒感染症状发挥积极作用。泡菜中萝卜硫素、蒜辣素、辣椒素、姜辣素等营养成分和发酵过程中产生的乳酸菌与人体的抗氧化系统Nrf2相互作用，消除由新冠病毒在体内产生的有害活性酸素。家庭中制作泡菜的方法：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水”，密封后置于温度适宜的地方。下列与此过程相关的叙述不正确的是（
）
A．用白酒擦拭泡菜坛的目的是消毒
B．加入“陈泡菜水”的作用是提供乳酸菌菌种
C．发酵过程中，乳酸菌与其他杂菌的竞争越来越强
D．若制作的泡菜咸而不酸，可能的原因是加入食盐过多，抑制了乳酸菌的发酵
24．（2021·湖北高三二模）不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1:50-1:100，在PCR反应的最初10-15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。下列相关说法错误的是（ ）
A．可以利用不对称PCR
来制备探针
B．复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物
C．用不对称PCR方法扩增目的基因时需知道基因的全部序列
D．因为双链DNA和单链DNA的分子量大小不同，可通过电泳方法将其分离
25．（2021·湖北高三二模）微生物实践和技术中常常涉及到颜色的变化，下列有关说法错误的是（ ）
A．葡萄酒呈红色是因为酵母菌发酵产物中产生了红色的副产物
B．DNA的粗提取实验中，以鸡血为原料，最终析出的白色丝状物即为DNA
C．可以用滤膜法来测定饮用水中的大肠杆菌的数目，在伊红美蓝培养基上的大肠杆菌菌落呈现黑色
D．在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料
26．（2021·湖北高三二模）下列关于微生物培养的说法错误的是（ ）
A．倒平板时，培养基倒入培养皿后要立即倒置放置
B．实验中锥形瓶、培养皿常用干热灭菌法灭菌
C．用记号笔标记培养皿中菌落时应标记在皿底
D．纯化培养时，培养皿应倒置培养在恒温培养箱中
27．（2021·天津滨海新区·高三三模）产脂肪酶细菌可用于含油废水处理。科研人员用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得产酶能力提高的菌株，具体流程如图。相关叙述正确的是（
）
A．步骤①取土壤样品溶于无菌水中制成菌悬液
B．步骤②的固体平板可以是以脂肪为唯一氮源的培养基
C．步骤②射线照射可引起细菌基因突变或染色体变异
D．步骤③透明圈越大的菌落，其脂肪酶活性一定越高
28．（2021·辽宁高三三模）以鲜山楂为主要原料酿制的山楂酒，将山楂的营养成分充分释放，更易被人体吸收，具防止疾病的功效和较高的保健价值，是一种天然健康的饮品。下图是探究果酒发酵的装置示意图，下列叙述错误的是（ ）
A．制作山楂酒时，先用清水冲洗1～2次，再去除霉烂部位和枝梗
B．制作果酒时如果适时打开阀a几秒钟，关闭阀b，会导致爆瓶
C．果酒发酵中通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸
D．d排气管通过一个长而弯曲的胶管，可防止空气中杂菌的污染
29．（2021·山东日照市·高三三模）养殖池中存在的有毒物质主要是氨和亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。研究人员从养殖池池泥中分离出硝化细菌并进行了计数。有关叙述正确的是（ ）
A．需配制一定浓度含氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基以分离硝化细菌
B．配制的培养基经高压蒸汽灭菌后通常还需要调节pH才能使用
C．涂布时，用涂布器沾取少量菌液并均匀地涂布在培养基的表面
D．使用涂布平板法统计得到的菌落数目往往比活菌的实际数目少
30．（2021·天津高三二模）在进行微生物数量测定时，下列情况会造成结果偏多的是（ ）
A．经过静置后，取培养液的上层进行直接计数
B．进行梯度稀释时，每支试管加入了过多的无菌水
C．利用显微镜直接计数时，滴加菌液后再盖盖玻片
D．平板上有不少菌落是两个细菌长成的菌落连在一起形成的
31．（2020·江苏高三二模）下列关于酵母细胞固定化的叙述，正确的是（ ）
A．酵母细胞一般采用物理吸附法或化学结合法进行固定
B．刚溶化好的海藻酸钠溶液要及时与已活化的酵母细胞混匀
C．制备海藻酸钠溶液时，开始用大火加热，然后用小火加热
D．固定化酵母细胞过程中CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉，形成稳定的凝胶珠
32．（2020·浙江高三一模）下列关于泡菜的制作和亚硝酸盐含量测定的叙述，正确的是（
）
A．将蔬菜用开水和白酒浸泡
1min
以加快发酵速度
B．在发酵过程中出现白膜可能是由于乳酸菌大量增殖而引起的
C．测定亚硝酸盐含量用波长为
550nm
的光是因为亚硝酸盐对该波长的光有最大的吸收率
D．若制作标准曲线时用的比色杯的光程比待测样品的比色杯光程大，则计算出的待测样品中亚硝酸盐的含量偏低
33．（2020·上海高三一模）硝化细菌（能利用化学能将无机物转化为有机物）和大肠杆菌的培养基及培养条件中，主要的差别是（ ）
A．碳源
B．琼脂
C．自来水
D．光照
34．（2020·江苏连云港市·高三一模）下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正确的是（）
A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合
B．用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因需消耗4个水分子
C．Taq酶是PCR仪扩增DNA分子时常用的一种耐高温的DNA连接酶
D．在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果
35．（2020·山东青岛市·高三三模）兴趣小组利用葡萄制作果酒和果醋。在该过程中发酵条件的控制至关重要，下列相关叙述正确的是（
）
A．葡萄汁要装满发酵瓶，造成无氧环境，有利于发酵
B．果酒发酵过程温度控制在30℃，果醋发酵过程温度控制在20℃
C．用带盖的瓶子进行发酵，每隔12h左右打开瓶盖一次，放出CO2
D．在果醋发酵过程中，要持续通过充气口充气，有利于醋酸菌的代谢
二、多选题
36．（2021·山东淄博市·高三三模）以苹果汁为原料，经酒精发酵、醋酸发酵可制得果醋。下列说法错误的是（
）
A．酒精发酵阶段和醋酸发酵阶段的适宜温度相同
B．酒精发酵阶段和醋酸发酵阶段均有大量气体产生
C．在醋酸发酵阶段醋酸杆菌将酒精转化为醋酸
D．在醋酸发酵阶段接种乳酸菌可提高醋酸的酸度
37．（2021·山东泰安市·高三三模）发酵工程最重要的工作是选择优良的单一菌种，消灭杂菌。筛选微生物的方法包括（
）
A．根据微生物对碳源需求的差别，使用含有不同碳源的培养基
B．根据微生物需要生长因子的种类，在培养基中增减不同的生长因子
C．根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸
D．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素
38．（2021·江苏盐城市·高三三模）有机磷农药（如对硫磷，俗你1605）一般都具有很强的毒性，且结构稳定难以清除，易在土壤、果蔬中残留，对人体造成潜在的危害。为了获得高效降解有机磷农药的微生物，研究人员设计了下图所示的实验方案。下列有关叙述正确的是（ ）
A．选取的土壤样品不需进行灭菌处理
B．该方案中的CNFM是选择培养基
C．平板培养的目的是为了加速微生物生长
D．根据检测结果，选出对硫磷浓度最低的锥形瓶内的微生物
39．（2020·山东淄博市·高三三模）某同学做“微生物的分离与培养”实验，所配制的培养基配方如下表所示，相关叙述错误的是（
）
葡萄糖
尿素
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
琼脂
10g
10g
14g
2．1g
0．2g
15g
A．该培养基为选择培养基，可用于分离尿素分解菌
B．若要对培养的微生物进行计数，接种时可采用稀释涂布平板法或平板划线法
C．对分离出的细菌进行鉴定时，可在培养基中加入刚果红，若pH升高，指示剂变红
D．利用该培养基分离得到的细菌能合成葡萄糖苷酶，将葡萄糖分解获取能量
40．（2020·山东滨州市·高三三模）下图是某生物兴趣小组用同一种培养基培养的酵母菌卡通形象菌落，有关说法正确的是（
）
A．培养酵母菌可以采用麦芽汁琼脂培养基
B．实现图中卡通形象菌落的接种方法是稀释涂布平板法
C．“乔治”和“佩奇”的颜色不同是因为两个平板中的酵母菌不同
D．图中卡通形象清晰完整，说明培养过程中无菌操作符合规范
三、综合题
41．（2021·河北高考真题）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。
回答下列问题：
（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是__________，萃取效率主要取决于萃取剂的__________。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷__________。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原因是____________________。
（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0．1mL稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为__________个。
（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至__________性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是______________________________。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为__________。
（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌_________。（简要写出实验步骤和预期结果）
42．（2021·全国高考真题）PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题：
（1）若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_________（用数字序号表示）。
（2）操作③中使用的酶是_________，PCR
反应中的每次循环可分为变性、复性、________三步，其中复性的结果是_______
。
（3）为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与_______
特异性结合。
（4）PCR（多聚酶链式反应）技术是指_______。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。
43．（2021·广东高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。
回答下列问题：
（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为___________，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用___________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有___________等。（答出两种方法即可）
（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是___________。（答出两点即可）
（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中___________可能是高密度培养的限制因素。
（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌___________。
44．（2021·湖南高考真题）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即_________。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以_________为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于_________培养基。
（2）配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是_________。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_________。
（3）简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路_________。
（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。
菌株
秸秆总重(g)
秸秆残重(g)
秸秆失重（%）
纤维素降解率（%）
A
2.00
1.51
24.50
16.14
B
2.00
1.53
23.50
14.92
C
2.00
1.42
29.00
23.32
45．（2021·全国高考真题）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过实验比较了几种洗衣粉的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），实验结果见下表。
加酶洗衣粉A
加酶洗衣粉B
加酶洗衣粉C
无酶洗衣粉(对照)
血渍
+++
+
+++
+
油渍
+
+++
+++
+
根据实验结果回答下列问题：
（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是__________；加酶洗衣粉B中添加的酶是__________；加酶洗衣粉C中添加的酶是__________。
（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有__________，原因是___________。
（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的原因是___________。
（4）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指___________。固定化酶在生产实践中应用的优点是_________（答出1点即可）。
46．（2021·全国高考真题）工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。
回答下列问题：
（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的___________可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供___________。
（2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的_____、______能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和__________。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于___________（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。
（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于___________（填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是___________。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是___________（答出1点即可）。
47．（2021·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。
（1）从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或________法，两种方法均能在固体培养基上形成________。对分离的菌株进行诱变、________和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。
（2）固定化菌株的制备流程如下；①将菌株与该公司研制的特定介质结合；②用蒸馏水去除________；③检验固定化菌株的________。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是________。
（3）对外，只提供固定化菌株有利于保护该公司的知识产权，推测其原因是________。
（二）三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。
（1）为保护三叶青的________多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用________技术，实现了三叶青的林下种植。
（2）依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达形成________和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA上rol系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成________，再分化形成毛状根。
（3）剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次________培养，培养基中添加抗生素的主要目的是________。最后取毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的________和温度，调节培养基成分中的________，获得大量毛状根，用于提取药用成分。
48．（2020·江苏高考真题）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR
I酶切为例）：
请据图回答问题：
（1）步骤I用的EcoR
I是一种__________酶，它通过识别特定的__________切割特定位点。
（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′-羟基与5′-磷酸间形成__________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。
（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________（从引物①②③④中选择，填编号）。
DNA序列（虚线处省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物
①5′-
AACTATGCGCTCATGA-3′
②5′-
GCAATGCGTAGCCTCT-3′
③5′-
AGAGGCTACGCATTGC-3′
④5′-
TCATGAGCGCATAGTT-3′
（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是_________________。
A．
5′-
AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′
B．
5′-
AATTCCATG-----------CTGAATT-3′
C．
5′-
GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．
5′-
TTGATACGO----------CGAGTAC-3′
49．（2020·江苏高考真题）产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是__________（填编号）。
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
（2）称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行__________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以__________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径__________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关研究，理由是__________。
50．（2020·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
（1）柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的__________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的__________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值__________的处理效果好。③对不同处理进行__________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
（2）加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成__________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已__________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径__________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的__________下降。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的__________。
（2）结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、__________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用__________的转基因方法。
（3）利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间__________，且不经历__________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
（4）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加__________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成__________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如_____（A．提高蔗糖浓度B．降低培养基浓度C．提高大量元素浓度D．不添加琼脂）。
51．（2020·全国高考真题）水果可以用来加工制作果汁、果酒和果醋等。回答下列问题：
（1）制作果汁时，可以使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、________（答出2种即可）。纤维素酶可以分解植物______________（填细胞膜或细胞壁）中的纤维素。
（2）用果胶酶处理果泥时，为了提高出汁率，需要控制反应的温度，原因是__________________。
（3）现有甲乙丙三种不同来源的果胶酶，某同学拟在果泥用量、温度、pH等所有条件都相同的前提下比较这三种酶的活性。通常，酶活性的高低可用_____________来表示。
（4）获得的果汁（如苹果汁）可以用来制作果酒或者果醋，制作果酒需要__________________菌，这一过程中也需要O2，O2的作用是__________________。制作果醋需要醋酸菌，醋酸菌属于_____________（填好氧或厌氧）细菌。
52．（2020·全国高考真题）研究人员从海底微生物中分离到一种在低温下有催化活性的α-淀粉酶A3，并对其进行了研究。回答下列问题：
（1）在以淀粉为底物测定A3酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是_________，也可采用斐林试剂检测________的增加。
（2）在A3的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS的作用是___________________和___________________。
（3）本实验中，研究人员在确定A3的最适pH时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是______________。
（4）在制备A3的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是___________________________
（答出1
点即可）。
53．（2020·全国高考真题）某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
回答下列问题：
（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_______________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_______________。甲、乙培养基均属于______________培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107
个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释________________倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是________________（答出1点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤________________。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即________________。
54．（2020·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与泡菜制作有关的问题：
（1）用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生_____，从而使成品泡菜口感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是_______。
（2）泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，会使______菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，会使______菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。
（3）从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行______，再用______的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有______，以便于观察是否产酸。
（4）自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加______。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经______处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有______（答出2点即可）。
（2）若要获得已知序列的抗病基因，可采用______或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用______，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中______，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。
（3）原生质体在培养过程中，只有重新形成______后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过______或器官发生的途径再生植株。
（2019·上海高考真题）2019
年
7
月，《上海市生活垃圾分类管理条例》施行，生活垃圾分类成为市民的日常生活方式，生活垃圾分类中的湿垃圾是指可被微生物降解的有机物。
55．下列属于湿垃圾的是______。
①剩余饭菜
②玻璃碎片
③植物落叶
④过期面包
⑤果皮果壳
56．湿垃圾降解后才能被植物利用，是因为根毛细胞难吸收
。
A．尿素
B．矿物质
C．H2O
D．大分子有机物
处理是垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解。下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。
57．培养基中加入碳源是____。根据上图，将菌液接种到培养基的方法是___。
58．据图，菌落①与菌落②周围透明圈的大小不同，原因可能是两个菌群
。
A．对碘液分解能力不同
B．分泌的淀粉酶活性不同
C．合成淀粉量不同
D．受淀粉抑制程度不同
59．对筛选到的菌落①与菌落②进行鉴定，发现①属于真菌，②属于细菌，两者的本质区别是
。
A．细胞膜的成分
B．有无细胞结构
C．核糖体的有无
D．有无完整核膜
60．若垃圾分类不当，在湿垃圾中混入了过期的抗生素或电池等，将不利于微生物分解，原因是
。
A．会抑制微生物生长
B．是微生物的生长因子
C．促进有机物的合成
D．为微生物提供碳源和氮源
61．（2019·海南高考真题）回答下列问题。
（1）玫瑰精油可用玫瑰花瓣为原料，采用水蒸气蒸馏法提取。水蒸气蒸馏法的原理是________________________。在进行蒸馏时，冷凝管的进水口比出水口___________（填“高”或“低”）。蒸馏收集到的乳浊液是玫瑰精油和水的混合物，要得到玫瑰精油，需要向乳浊液中加入NaCl，其目的是________________；得到的油层还需要加入无水Na2SO4，其目的是_______________。
（2）某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是________________________。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是________________________；在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，发酵液会变酸，可能的原因是__________________。
62．（2019·全国高考真题）回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_____________（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______（填“能够”或“不能”）生长，原因是____________。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板____________（填“倒置”或“正置”）。
（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________。
（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过____________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
63．（2019·全国高考真题）已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。
Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。
Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。
回答下列问题。
（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是___________。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物是_________。
（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_________，其原因是_________。
（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。
（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_________和_________。
64．（2019·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果胶和果胶酶有关的问题：
（1）通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为______。
（2）为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行______。
（3）在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使______。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入______。使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
（4）常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有______和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有______和______。
（二）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
（1）通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过______技术获得特异性探针，并将______中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。
（2）将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测______（A．质粒载体
B．转录产物
C．抗性基因
D．病原微生物）。
（3）植物细胞在培养过程中往往会发生______，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入______，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用______培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。
（4）用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是______。
65．（2019·浙江高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与微生物培养及应用有关的问题：
（1）对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从__________时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转人G6玻璃砂漏斗中，采用__________方式可较快地进行过滤灭菌。
（2）酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加__________的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是__________。
（3）为筛选胞外A–淀粉酶分泌型菌种，一般从__________（A果园树下
B肉类加工厂周围
C
米酒厂周围
D枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个__________比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取__________用于检测酶活性。
（二）某农业生态工程示意图如下，回答下列问题；
（1）该农业生态工程体现的生态工程原理主要是__________。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、__________、系统的有效贡献等三方面进行核算。
（2）若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的__________技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的__________技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。
（3）某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有____________________（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，__________，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中__________。
66．（2021·浙江高三三模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）请回答与农作物秸秆利用有关的问题：
（1）欲从土壤中分离高产秸秆纤维素酶的微生物，可将土壤溶液适度_________后接种于以_________为唯一碳源的培养基上，同时还应在培养基中添加适量的秸秆纤维素显色剂，目的是_________，选择有透明圈且_________的菌落进行保存并扩大培养。
（2）研究人员利用上述方法分离获得了甲、乙、丙三种微生物，为比较三种微生物产生的纤维素酶的活性大小，可将等量的三种酶与等量且足量的秸秆纤维素悬液混合，反应相同时间后，经_________获取其上清液，加入显色剂后测定其_________，比较测定的结果即可推断三种纤维素酶的活性大小。
（3）生产上常用农作物秸秆酸解产生的葡萄糖发酵生产燃料乙醇，生产过程一般无需严格灭菌，这是因为在厌氧、_________环境中，绝大多数微生物生长受到抑制。为使生产连续进行且获得相对纯净的燃料，可采用酵母细胞的_________技术。
（二）马铃薯易被致病疫霉感染而患晩疫病，非洲甜菊中的TLP基因可使其具有抗晩疫病能力，现利用基因工程和植物克隆技术培育抗病马铃薯新品种。请回答：
（1）为获得TLP基因，可从包含TLP基因的基因文库中通过核酸分子杂交或_________技术直接对基因文库中的DNA序列进行筛选，也可通过_________技术利用基因文库的表达产物进行筛选
（2）利用农杆菌将TLP基因导入受体细胞的一般方法是将消毒后的马铃薯叶片剪成小片，在_________溶液中浸泡后，取出、消毒并转移至添加_________的包含适当营养物质和植物生长调节剂配比的MS培养基上进行培养。把叶片剪成小片的主要目的有二，一是使叶片受伤，引起其释放酚类物质以利于_________进入受体细胞；二是剪成小片增大_________了，有利于提高转化效率。
（3）在实验室经多次筛选后获得的抗真菌组培苗需进一步锻炼后才能用于野外种植，炼苗过程中，需逐步降低环境_________并增加_________。
67．（2021·天津北辰区·高三一模）生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少。我国生活饮用水水质标准（GB5749—85）中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠杆菌群不得大于3个/L。某同学欲检测家中自来水中大肠杆菌含量，对自来水中大肠杆菌进行了培养、计数和鉴定。回答下列问题：
（1）该同学用涂布平板法检测大肠杆菌数：配制的培养基中含有蛋白膏、酵母膏、NaCl、H2O和X，其中蛋白胨可为大肠杆菌提供_______________________________和维生素，X是_________________。
（2）该同学用滤膜法检测大肠杆菌数，其大致流程为：先用滤膜过滤已知体积的待测水样，水样中的大肠杆菌留在滤膜上，其他杂质则被滤出，再将滤膜转移到培养基上培养并统计菌落数量。该方法所统计样品中含菌数往往偏低的原因是________________________________________。
（3）为了检测培养基灭菌是否彻底，需要设置对照，其做法是将灭菌的________（填“接种”或“未接种"）培养基放在恒温无菌箱中进行培养。取10mL自来水，稀释10倍后，取10ml稀释液进行过滤，将滤膜置于培养基上进行培养，获得了30个目的菌落，则每毫升自来水中含有目的菌__________个。
（4）下图表示培养和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列叙述错误的是（多选）__________。
A．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B．步骤②接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线
C．步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数
68．（2021·广东茂名市·高三三模）桉叶油富含黄酮类、三萜类等具有清热解毒，消炎杀菌，祛风除湿等功效，其化学性质与玫瑰精油相似。研究小组想尝试用微生物（霉菌）发酵的方法提取桉叶油。请回答下列问题。
（1）桉叶油具有挥发性强，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏等特点，故提取的方法可以用______。提取时应该选择______（填“新鲜”或“干燥”）的叶片，原因____________。
（2）用微生物发酵提取桉叶油的方法为：在粉碎的桉叶中，接种霉菌，于28-30℃培养3-4d，获得桉叶发酵物。其中，用平板划线法纯化霉菌，通常划线的工具是____________，其灭菌的方法是____________。某个平板共划线6个区域，则该过程中需要从试管中蘸取______次菌液。
（3）桉叶油具有消炎杀菌作用，在使用抗生素过程中，抗生素对细菌起到了定向选择的作用，使细菌的抗药性基因频率升高。桉叶油代替抗生素的优越性在于____________。
69．（2021·浙江绍兴市·高三二模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答果酒与果醋制作有关的问题：
（1）用干酵母作为发酵菌酿制果酒时，需先将适量干酵母放在小烧杯中，加入少量温水（<40℃）和一小撮蔗糖制成________，待其出现________，表明干酵母已活化。
（2）酵母菌在生长繁殖和进行发酵时，会产生少量尿素，尿素会与酒精反应生成有害物质，可用脲酶处理予以分解，但在实际生产过程中不宜直接将脲酶加入酒体中，原因有________（答出1点），可将脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固定化酶的方法称为________。
（3）用果酒酿制果醋时，发酵瓶中先装八分满的经________处理的锯末，然后加入含有醋杆菌的________使醋杆菌附着在锯末上，成为固定化醋杆菌。采用固定化醋杆菌而不是固定化酶进行醋酸发酵的主要原因是________。
（4）为进一步测定果醋中还原糖的含量，可以在发酵产物中加入还原糖显色剂，用光电比色法测定显色产物的光密度值，并将测定值与________比对，计算其含量。
（二）回答与转基因植物的培育和植物克隆有关的问题：
木瓜环斑病毒（PRV）是一种对木瓜危害极大的病毒，科学家通过基因工程技术将抗环斑病毒基因（PRSV）导入木瓜中表达出抗环斑病蛋白，从而获得抗环斑病的木瓜。
（1）构建重组DNA分子时，使用两种限制性核酸内切酶处理，优点是可防止目的基因和切割后的载体DNA自身环化及________。为使PRSV高效表达，需要对重组载体上目的基因相关的________序列进行修饰。
（2）获取活性强的农杆菌菌液，通过冰浴、离心、去上清液等相应处理，加入适量预冷的含15%甘油的________溶液，制成感受态农杆菌细胞。转化后的农杆菌要正常培养一段时间，才能置于含特定抗生素的培养基上筛选，正常培养一段时间的目的是________。优先选用木瓜________（受伤的/完好的）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养完成转化，促使其不断分裂形成愈伤组织。
（3）试管苗需锻炼后才可移栽至大田，移栽时需先洗去________以免栽后发霉。
（4）为了快速获得稳定遗传的抗环斑病木瓜，可选择________培养获得的细胞系作为受体细胞。
70．（2021·河北沧州市·高三三模）土壤中的难溶性磷酸盐积累会造成土壤板结，溶磷微生物能将难溶性磷酸盐转变成植物可吸收利用的磷酸盐。研究人员将采集到的土壤接种到含有难溶性磷酸盐及必需营养物质的培养基中，经过如图所示的系列分离纯化过程，最终筛选出了溶磷能力强的拜莱青霉菌。回答下列问题：
（1）培养基含有的营养物质有无机盐、____________。为筛选到溶磷能力强的拜莱青霉菌，培养基中还应加入链霉素（抗生素）以避免____________生长而带来的污染。
（2）实验过程中，振荡培养有利于物质充分利用，也能为目的菌的生长繁殖提供充足的_____________。培养若干天后，应选择培养瓶中难溶性磷酸盐含量______________的培养液，接入新的培养液中连续培养，该操作的目的是____________。
（3）将菌液接种到固体培养基上继续培养，以便于_____________。获得的菌种可采用____________的方法进行长期保存。
71．（2021·云南曲靖市·高三二模）餐饮行业会产生大量的废弃油脂，去除废弃油脂能有效的降低环境污染。为了获得高效分解脂肪的微生物，某生物兴趣小组从富含油脂的水体中分离获得了3种脂肪分解菌甲、乙、丙。回答下列问题：
（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水作为样本，采样约10g，立即装于试管内，此试管使用前需要经过__________处理。
（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行__________处理，然后吸取0．2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落__________等表观特征初步分类。
（3）上述步骤筛选出的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”为菌种繁殖提供__________。在该培养基还需要加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显__________降解圈的菌株，并且选颜色较_________（填“深”或“浅”）的为宜。
（4）对选出的分解脂肪能力强的脂肪分解菌进行纯化培养，若用稀释涂布平板法接种，涂布到培养基表面的菌液量不宜过多，否则会导致培养基表面菌体堆积而不能获得______；若要对该脂肪分解菌进行计数，不能用平板划线法接种，其原因是_____________________。
72．（2021·广东梅州市·高三一模）随着生物科学的发展，微生物的应用范围在生活中越来越广泛。例如∶微生物在酒类酿造、食品发酵、药物研发和污水处理等方面都扮演重要角色。请回答下列关于微生物的问题∶
（1）培养微生物的培养基的营养成分一般都有水、无机盐、____等。
此外，还要满足微生物生长对pH、温度、湿度、氧气及特殊营养物质的需求。灭菌后的培养基在平板倒好后，需要随机选取若干个平板先行培养一段时间
，这样做的目的是__________。
（2）滤膜法常用来检测饮用水中的大肠杆菌是否超标，这种测定方法的主要原理是大肠杆菌的代谢产物能与培养基中添加的伊红-美蓝反应，使菌落颜色呈___________。若要长时间保藏大肠杆菌，可采用的方法是___________。
（3）果醋已经成为我们日常生活中饭桌上的常用饮料，具有一定的保健功能。果醋在发酵过程中利用的菌种主要是_____，其能产生多种酶，通过_________技术将其制作成商品重复使用。
73．（2021·江苏南通市·高三三模）某同学为了探究新鲜的花园土中是否存在微生物，进行了如下实验：取灭菌后的锥形瓶，加入新鲜花园土。将50mL牛奶煮沸，倒入锥形瓶中，锥形瓶口用棉花团堵住，装置如图所示。每日观察牛奶的情况，共观察4天。请回答下列问题：
（1）该实验设计中还缺少对照实验，对照实验的设计应该是____________。牛奶在该实验中的作用是____________。
（2）用棉花团堵住锥形瓶的目的是____________；将牛奶进行煮沸的目的是____________，加入锥形瓶时要注意____________；实验中的操作都需要____________旁进行。
（3）实验结束后，测定对照组和实验组的牛奶的pH，最可能得到的结果是____________，原因是____________。
74．（2021·浙江绍兴市·高三二模）回答下列（一）、（二）小题：
（一）苹果酒和苹果醋制作的实验流程如下图，
回答下列相关问题：
（1）放置一段时间的水果比新鲜水果要软，可能的原因是水果中__________酶能分解细胞壁，使水果细胞相互分离，
导致水果变软。在工业化生产中，
可采用__________技术，有利于该酶从果汁分离并实现反复利用。
（2）对野生酵母菌进行诱变后利用____________________的培养基，筛选得到具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，
可提高酒精发酵的效率。
（3）可通过测定酵母菌数量、发酵液密度和_______________等措施监控酒精发酵情况。发酵初期，
可采用__________培养法测定酵母菌的活菌数量；发酵中期，发酵液密度降低的原因是___________________________。
（4）发酵过程中常通过_____________________________来监控醋酸发酵情况。
（二）侏儒症是由于生长发育时期体内生长激素分泌过少导致的生长缓慢。为帮助特定人群实现个体增高，研究人员利用转基因山羊乳腺生物反应器生产生长激素，已经取得一定进展。请回答下列相关问题：
（1）通过分析生长激素的氨基酸序列，可人工合成编码生长激素的脱氧核苷酸序列，该序列_______（填“是”或“不是”）唯一的，利用PCR的方法对该序列进行扩增时使用Taq酶而不使用哺乳动物体内的DNA聚合酶，原因是Taq酶___________________。
（2）构建重组DNA分子时，要将改造后的生长激素基因与山羊乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起，目的是____________________________。然后将重组DNA分子导入山羊的__________________（填“受精卵”或“乳腺细胞”）中。相比细菌基因工程，以转胰岛素原基因动物的乳腺作为反应器来生产人胰岛素的优点有：乳腺细胞含有_____________________，可以将无活性的胰岛素原加工成有生物活性的胰岛素，表达的胰岛素随乳汁及时排出体外，便于提取纯化等。
（3）若选用早期囊胚做雌雄鉴别，则一般应选早期囊胚的_______________________进行性别鉴定，鉴别后的胚胎可做胚胎移植。
（4）如要在分子水平判断目的基因在受体细胞中是否表达，可检测细胞内是否含相应的__________或蛋白质分子，若检测后者可用_________________________技术获得特异性探针，与提取的蛋白质杂交。
75．（2021·重庆高三三模）随着人们生活质量的提高，餐饮含油脂废水的排放量大量增加，合理处置油脂废水也成为新的课题。已知芽孢杆菌中有多种分解油脂并产酸的菌种，科研人员欲采用下列流程筛选出能高效分解油脂的微生物。
菌种取样→分离培养→菌株的筛选→形态特征观察和生理生化反应鉴定，请回答下列问题：
（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水为样本，采样约0.2ml，立即装于试管内，此试管使用前需要经过________处理。
（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行________处理，然后吸取0.2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落___________________（至少答3点）等表观特征初步分类。
（3）上述步骤筛选的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”主要为菌种繁殖提供___________。在该培养基还需加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显_____________降解圈的菌株，并且选颜色较___________（填“深”或“浅”）的为宜。
（4）实际操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培养基中加入2-3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好，试分析原因_______________________。
76．（2021·广东珠海市·高三二模）一定浓度的抗生素会杀死细菌，但变异的细菌可能产生耐药性。某学校生物兴趣小组为探究抗生素对细菌的选择作用，做了以下实验。
（1）为获取大肠杆菌，将一定体积的土壤浸出液过滤后，将滤液均匀涂布在含有______________培养基上培养，挑选出呈______________色菌落即为大肠杆菌。
（2）获得大肠杆菌菌落后，需进行扩大培养，此时应选用
______________培养基。
（3）将大肠杆菌菌液均匀涂布在固体培养基上，并将平板划分为三个大小一致的区域，各放入一个经抗生素处理的相同圆纸片，在适宜条件下培养
2
天，观察结果（如图），统计透明圈的直径。
①为使实验更具有说服力，平板需增加一个区域，在该区域应放入一个______________。
②请说明圆纸片周围透明圈的大小与抗生素抑菌效果的关系：______________。
③挑取该平板上__________________（填“靠近透明圈”、“远离透明圈”或“任意位置”）的菌落，制成菌液重复上述实验，培养多代。
结果与结论：随着培养代数的增加______________，说明抗生素能定向选择耐药菌。
（4）使用后的培养基、圆纸片丢弃前需做_______________________________处理。
77．（2021·天津和平区·高三三模）水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA．
PVA
与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑。
（1）要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以_______________作为唯一碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。
（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用_________直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0．1
mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160
个，空白对照组平板上未出现菌落。则100
mL原菌液中有PVA分解菌_________个，
该方法的测量值与实际值相比一般会_________________（填“偏大”“偏小”或“相等”）。
（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入____________用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定_____________来确定不同菌株降解PVA能力的大小。
78．（2021·江西高三二模）“分离”作为一种传统生物技术，在生产实践中具有广泛的运用，回答下列有关的问题：
（1）分离纯化微生物的方法很多，最常用的是__________法和稀释涂布法，后者还可以用来统计样品中活菌的数目，原理是_____________________，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
（2）筛选、鉴定纤维素分解菌一般用_____________法，该方法中我们可以根据培养基中是否产生__________筛选纤维素分解菌。
（3）分离不同种类的蛋白质常用凝胶色谱法，该方法是根据________________对蛋白质进行分离，利用血红蛋白作为分离样品的优点有____________________。
（4）从玫瑰花中提取玫瑰精油常用方法是水蒸气蒸馏法，原理是_________________，形成油水混合物，冷却后又重新分出油层和水层。
79．（2021·山东济宁市·高三二模）安莎霉素是一类主要由来源于海洋的稀有放线菌产生的次级代谢产物，具有较高的抗菌活性和药用价值。科研人员通常从深海采集淤泥样本，再分离、纯化并筛选出产安莎霉素的放线菌，其分离培养流程如下图。请分析回答下列问题：
（1）过程①的接种方法为______。
（2）统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致______。
（3）研究人员发现产安莎霉素的放线菌具有一个普遍的共性——氨基酸缺陷型。从筛选目的分析，基本培养基与完全培养基存在差异的成分是______。为了初步鉴定营养缺陷型放线菌菌株，科研人员进行了如下操作：
①用接种针挑取______（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全液体培养的离心管中，28℃振荡培养3～5天后，离心取沉淀物，用无菌水洗涤3次制成菌悬液。
②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化并冷却至50℃左右的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域，标记A、B、C、D、E。
③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。
组别
所含氨基酸
A
组氨酸
苏氨酸
谷氨酸
赖氨酸
亮氨酸
B
精氨酸
天冬氨酸
赖氨酸
甲硫氨酸
苯丙氨酸
C
酪氨酸
谷氨酸
赖氨酸
色氨酸
丙氨酸
D
甘氨酸
天冬氨酸
苏氨酸
色氨酸
丝氨酸
E
半胱氨酸
亮氨酸
苯丙氨酸
丙氨酸
丝氨酸
在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该氨基酸缺型菌株属于______缺陷型。
（4）科研人员分离、纯化出产安莎霉素的放线菌后，需要利用PCR技术大量扩增其DNA上的16SrRNA保守片段，然后通过DNA序列比对进行菌种亲源关系的鉴定。查找数据库发现该放线菌的16SrRNA目的基因片段及相应限制酶识别序列如下图所示：
限制酶
EcoRⅠ
BamHⅠ
Hind
Ⅲ
SacⅠ
识别序列和切割位点
G↓AATTCG
G↓ATCC
A↓AGCTT
GAGCT↓C
为了获得目的基因16SrRNA，需要使用的限制酶是______。得到目的基因以后就可以利用PCR技术对16SrRNA进行体外扩增，扩增目的基因的原理是______，此过程需要加入______催化。
80．（2021·内蒙古呼和浩特市·高三二模）三孢布拉氏霉为单细胞的霉菌，能产生β-胡萝卜素，可用于工业生产。回答下列问题：
（1）工业生产中发酵罐内的培养基属于______（填“液体”或“固体”）培养基，有利于营养物质与三孢布拉氏霉充分接触，菌丝体生长迅速。培养三孢布拉氏霉时需将培养基pH调至______（填“酸性”“中性”或“碱性”）。在接入菌种前，应对培养基进行______灭菌，以避免杂菌污染。
（2）三孢布拉氏霉含有β-胡萝卜素合成的关键酶——八氢番茄红素合成酶（PSY），可根据______（答出两点即可）等特性的差异借助电场将PSY与其他蛋白质分离。再采用______（答出两种方法）固定化PSY，应用于工业生产。
（3）在提取胡萝卜素的常用方法中，其提取的效率主要决于______，提取到的胡萝卜素粗品，在实验室中通常需通过______法进行鉴定。若观察到______则说明β-胡萝卜素提取成功。
81．（2021·黑龙江齐齐哈尔市·高三三模）山东山亭地处山区，有大面积的野生柿子林，柿子酒可润肺生津、清热健脾、软化血管，有益健康。利用野生柿子发酵制作柿子酒是一项值得发展的经济项目。用野生柿子制作果酒的工艺流程如下：
柿子原料→清洗→脱涩→晾干→破碎→调配→接种→发酵→分离→沉淀→过滤→陈酿
回答下列问题：
（1）清洗时，先冲洗后去梗的目的是________________。接种时，需先将酵母菌活化，活化是指_________________。
（2）制作柿子酒的过程中，发酵是关键环节，而发酵过程中果胶酶的用量直接影响果酒品质。下表为以野生火晶柿子为材料，在最适温度、最适pH条件下，进行的果胶酶用量对果酒品质影响的实验结果：
果胶酶添加量（mg/L）
酒精度（%）
风味指数
澄清效果
0
12.4
8.0
5.0
20
12.5
7.8
6.2
40
12.6
7.2
6.7
60
12.7
6.0
7.8
80
12.8
5.0
8.6
注：酒的风味指数越高，品质越佳。
①从表中数据可知，随着果胶酶添加量的增加，风味指数_________；果胶酶能使柿子酒澄清度提高的原因是_____________________。
②分析表中数据，综合评价果胶酶的适宜添加量应为______________左右。若要重复利用果胶酶，可对果胶酶适宜采用__________________法进行固定化。
（3）若要将柿子酒进一步制成柿子醋，所需要的环境条件改为_____________________。柿子酒发酵是否成功可通过尝、闻进行初步鉴定，还可用显微镜观察酵母菌，并用______________（试剂）检验酒精的存在与否。
82．（2021·四川泸州市·高三三模）传统发酵技术丰富了我们的餐桌文化，生物技术的广泛应用给人们的生活带来了深刻的变化。回答下列相关问题。
（1）在葡萄酒中加醋酸菌可以生产葡萄醋，在发酵前，需要加入一定量的纯净水对葡萄酒进行稀释，原因是____________________________________。
（2）用卷心菜发酵制作泡菜过程中，需要注意控制____________（至少答出两项），否则容易造成细菌大量繁殖，______的含量增加。
（3）从丁香中提取丁香精油时，可采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是丁香精油与玫瑰精油的化学性质相似，即丁香精油__________________，能随水蒸气同蒸馏；向蒸馏所得乳浊液中加入NaCl的目的是____________。
（4）鞣质是常见的中药成分，在植物中广泛分布，具有止血、杀菌等作用。它易溶于乙酸乙酯，从树皮中提取鞣质时常选用____________，用此方法提取鞣质时，应对原料进行____________处理。
83．（2021·云南昆明市·高三三模）阿维菌素是一种从链霉菌中提取的杀虫剂，具有广谱、高效、安全、低残留等特点，是目前农业害虫防治中较理想的农药品种之一。要从土壤样品中分离链霉菌并培育高产菌株，研究人员进行了相关实验。回答下列问题：
（1）获得土壤样品后，先进行______操作，获得不同稀释度的土壤稀释液。若要获得稀释倍数为101的稀释液，可将5g土壤样品放入______mL无菌水中。
（2）分别吸取0．1mL不同稀释倍数的稀释液，接种于选择培养基上，在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时进行计数，结果如表。
稀释倍数
菌落数
平板1
平板2
平板3
104倍
5
9
4
103倍
122
138
112
102倍
432
491
387
计算每克土壤样品中的链霉菌数量约为______个。
（3）分离得到的链霉菌用紫外线处理，获得某变异菌株后，将其接种在含葡萄糖的培养液中，葡萄糖进入细菌体内后，主要作用是______（答出1点即可）。培养一段时间后，将得到的菌丝破碎，加入甲苯进行水浴加热，之后过滤，再通过______装置浓缩除去______，得到阿维菌素结晶。
（4）经测定该变异菌株阿维菌素的产量是500μg/mL，根据实验结果______（填“能”或“不能”）确定其是否为高产阿维菌素的菌株，依据是______。
84．（2021·江西九江市·高三一模）胡萝卜素可治疗维生素A缺乏症，是常用的食品色素，具有使癌细胞恢复成正常细胞的作用。回答胡萝卜提取的相关问题:
（1）胡萝卜素可治疗夜盲症的原因是一分子的β－胡萝卜素能被氧化成两分子的_______。
（2）用萃取法提取胡萝卜素时，萃取的效率主要取决于_________，萃取过程应在加热瓶口安装____________，目的是_____________________。
（3）萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置，浓缩前还要进行过滤，其目的是_________________。
（4）对胡萝卜素粗品的鉴定采用__________________法，若___________，说明提取胡萝卜素的实验成功。
85．（2020·浙江高三一模）回答下列（一）（二）小题
（一）各式各样的奶制品如牛奶、奶酪、马奶酒等的生产与微生物的活动密切相关。
（1）市面上出售的牛奶通常用巴氏消毒法（80℃水浴，15min）处理，其原理为_____。通过涂布分离将接种的
3
个平板和
1
个未接种的平板放入恒温培养箱培养
48h，统计出
4
个平板上的菌落数分别是
57、53、55
和
9。根据这样的实验结果_____（填“能”或“不能”）判断该兴趣小组消毒后的牛奶细菌超标，原因是_____。
（2）奶酪是发酵的牛奶制品，蓝纹奶酪是成熟过程中内部生长蓝绿霉菌一类奶酪的总称。其制作所用的初级发酵剂为乳酸菌，初级发酵过程中不需要严格灭菌，原因是_________。制作中所用的二级发酵剂为娄地青霉，接种后需给奶酪穿刺扎孔，原因是_____。娄地青霉产生的蛋白酶可将奶酪中的蛋白质分解为_____，可增添奶酪的风味。
（3）马奶酒是利用马奶酿制的酒精含量较低的饮料。马奶中含有的糖类主要为乳糖，某些微生物将其水解为葡萄糖和半乳糖，酵母菌可利用这些水解产物发酵产生酒精。现研究野生型酵母菌和马奶酒酵母菌的发酵情况，其结果如下图所示：
马奶酒酵母菌在利用葡萄糖、半乳糖或产生酒精等方面的优势是_____。马奶酒酵母菌不同于野生型酵母菌的营养利用方式，使其种群数量快速增加，这一优势使马奶酒酵母菌更好地适应_____的生活环境。
（二）玉米是我国重要的粮食作物和饲料来源，低温会影响玉米的产量和品质。研究者将从微生物中获得的CSP（冷激蛋白）基因与玉米基因的
ubi
启动子相连后构建基因表达载体，并将其导入玉米细胞中，获得了具有低温耐受性的玉米植株，如图
1
所示。请回答：
（1）研究者提取玉米的
DNA，可利用_____________技术将ubi
启动子扩增出来。图
1
所示过程①
需_____的催化，获得的ubi-CSP
基因在构建基因表达载体时须插入到T-DNA
片段中的原因是_________
。
（2）过程②需要用_________处理农杆菌以利于重组
DNA
的导入。影响过程③的因素主要有_____________，一般来说只有处于细胞周期____（时期）的细胞才具有被转化的能力。为了减小农杆菌对愈伤组织再分化的影响，需要在培养基中添加_____________。
（3）研究者分别提取了野生型玉米及
5
株转基因玉米的染色体
DNA，用限制性核酸内切酶处理后进行电泳。电泳后的
DNA
与基因探针进行杂交，得到图
2
所示放射性检测结果，
该结果表明第_________株CSP
基因已整合到玉米染色体基因组。
86．（2020·贵州高三一模）从土壤中分离的苯酚分解菌可降解工业污水中的苯酚，净化水体。富集苯酚分解菌的培养基如图所示。请回答：
（1）该培养基中，微生物生长繁殖所需的碳源和氮源依次来自__________，培养基中的K2HPO4和KH2PO4在微生物的培养过程中所具有的作用是____________________（答出2点）。
（2）在苯酚分解菌的富集培养过程中，需将接种后的培养液在振荡器上做振荡处理，这种处理利于菌体的生长和繁殖，其原理是__________________；苯酚分解菌成为优势菌而其他微生物数量减少，原因是__________________。
（3）在分离苯酚分解菌时，除图中的化学成分外，在培养基中还需添加__________________。接种培养后，在平板上长出的菌落有大有小，一般应选择菌落较大的苯酚分解菌进行纯化培养。进行上述选择培养的理由是__________________。
（4）分解苯酚的关键酶是苯酚羟化酶，它是苯酚分解菌所产生的一种胞内酶。在用海藻酸钠固化苯酚分解菌时，若制作的凝胶珠呈“蝌蚪”状，出现“托尾”现象，此时应采取的改进措施是__________________。苯酚羟化酶的酶活力除受温度，pH和苯酚浓度的影响外，还受海藻酸钠浓度的影响。海藻酸钠浓度过高使苯酚羟化酶的酶活力下降，原因是__________________。
87．（2020·陕西榆林市·高三一模）人类利用微生物发酵制作果酒、果醋的历史源远流长。请回答下面相关问题。
（1）果酒发酵的菌种主要是酵母菌，与醋酸菌相比酵母菌属于_____生物。自然发酵中的菌种来自于附着在葡萄皮上的野生酵母菌，在发酵过程中_____（填“需要”或“不需要”）使用灭菌技术，这是因为_____。
（2）如图是某研究小组为果酒生产厂设计的发酵罐。为了能高效生产葡萄酒，先打开进气阀和出气阀通入空气，目的是_____。一段时间后关闭进、出气阀进行无氧发酵。为了防止发酵罐中压力过大，发酵中需要_____。
（3）研究小组中有成员建议将发酵中用到的菌种进行重复利用，这样可以降低生产成本。根据固定化技术，最好采用_____法固定酵母细胞。
（4）研究发现：经葡萄里面的糖分自然发酵而成的酒精，一般在10%~13%为最佳，发酵时的温度和时间会影响果酒发酵产生酒精的含量。为了找到适合生产的最佳发酵温度和时间。请你设计出探究的思路。_____。
88．（2020·广西高三二模）实时荧光RT-PCR（逆转录PCR）在诊断新型冠状病毒感染中发挥着关键作用，其具体的过程为：从样品中提取RNA→DNA→PCR扩增→荧光检测。请回答下列问题：
（1）RT-PCR的试剂盒包含Taq酶、引物、缓冲试剂等，除此之外，还应包含_______________酶。反应体系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是_____________________________。
（2）核酸检测样本多采集于咽、鼻，这些部位存在多种微生物，提取物中核酸种类可能有多种。但利用该“试剂盒”，通过PCR技术可专一性地对新型冠状病毒的核酸序列进行扩增，其原因是__________________________________。
（3）抗体疗法是针对新冠肺炎的临床试验疗法之一，新冠肺炎康复者的血清中可以分离出相应抗体，但这种从血清中分离抗体的方法存在____________________________的缺点。单克隆抗体技术为治疗新冠肺炎提供了一种可能的发展方向。在单克隆抗体制备过程中，需从已免疫的个体获得_______________细胞，但在实际生产中通常不会对该种细胞进行连续培养，主要原因是____________________________。
（4）单克隆抗体制备过程中，经选择性培养获得的杂交瘤细胞，还需进行____________________。单克隆抗体除作体外诊断试剂外，还可用于治疗疾病和____________________________。
89．（2020·广西高三二模）青蒿素为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，受热易分解。可以从青蒿的茎叶中提取得到，是治疗疟疾等疾病的药物，以下为青蒿素的提取流程，请回答下列问题：
（1）图示采用_______________法提取青蒿素，影响因素除萃取剂的性质和使用量，还有_______________（写出两点即可）。
（2）青蒿叶在粉碎前需要进行____________________________处理，不能用新鲜的叶片，原因是______________________________________________________________________。
（3）粉碎青蒿叶的目的是____________________________。在减压蒸馏之前，还要对萃取液进行过滤的原因是________________________________________________________。
（4）萃取液的浓缩采用的是减压蒸馏处理，目的是_________________________。
90．（2020·四川达州市·高三一模）某些微生物能产生耐高温的淀粉酶，此类酶在大规模工业生产中有很大的实用性，下图为研究者获取耐高温淀粉酶的过程：请回答问题：
（1）从热泉中能筛选到嗜热菌，原因是___________。图中“选择培养”
的目的是___________。与“选择培养”相比，Ⅰ号培养基还需要加入的另一种重要成分是_____________。
A．琼脂
B．葡萄糖
C．硝酸铵
D
碳酸氢钠
（2）a过程的接种方法是_____，与b过程的接种方法相比，该接种方法不仅能桃选出单菌落，还能_____________________。
（3）在耐高温淀粉酶运送到工业生产前，要对该酶的最佳温度范围进行测定。图中的曲线c表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温发下保温足够长的时间，再在酶活生最高的温度下测其残余酶活性，得到酶热稳定性曲线d。
①该酶使用的最佳温度范围是_______
°C，
理由是_____________________。
②采用固定化技术将耐高温淀粉酶固定后可多次利用。在固定该酶时，宜采用_______法。
91．（2020·陕西汉中市·高三一模）进行垃圾分类收集可以减少垃圾处理时间，降低处理成本。科研小组欲分离及培养若干种微生物用于对湿垃圾（包括剩菜剩饭、骨头、菜根菜叶、果皮等食品类废物）的处理。请分析回答：
（1）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理；对培养基灭菌的方法是_______________，操作者的双手需要进行清洗和_______。
（2）培养过程需要向培养基通入无菌空气并进行搅拌，目的是使菌体充分接触_________和_________，促进细菌生长繁殖。
（3）科研小组从生活垃圾中分离分解纤维素的微生物，需要将其接种到仅含有_________为唯一碳源的培养基进行培养，制作鉴别培养基选用__________染色，通过是否产生_________来筛选纤维素分解菌。要知道鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入_______指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现红色。
（4）纤维素酶是一种______酶，广泛存在于自然界的细菌、真菌和某些动物等生物体中；因此，卫生纸类垃圾可采用__________（选填“回收利用”“卫生填埋”“垃圾焚烧”或“堆肥”）方式，有效减少对环境的污染。
92．（2020·辽宁葫芦岛市·高三二模）硒是一种生命活动必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。
请回答下列问题：
（1）若②中出现________的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被富硒细菌还原。
（2）将细菌从②接种至③以及从④接种至⑤的方法分别是________和________。
（3）采用_________法分离纯化还原亚硒酸钠酶时，先从层析柱中洗脱出来的是相对分子质量________的蛋白质分子。
（4）研究人员筛选出一种具有较强富硒能力的菌株，现欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，请将下列实验补充完整：
①配制系列浓度梯度的亚硒酸钠___________(填“液体”或“固体”)培养基；
②向培养基中分别接种___________的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间；
③观察菌落生长情况，___________的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。
93．（2020·安徽马鞍山市·高三一模）尿素是一种重要的农业氮肥，但是并不能直接被农作物吸收。土壤中含大量微生物，其中就有尿素分解菌。某兴趣小组欲从土壤中分离该类细菌，并进行后续培养研究，设计了如下实验：
请回答有关问题：
（1）称取土壤、梯度稀释、接种微生物需要在火焰旁进行，其目的是___________。
（2）该兴趣小组设计了A、B两种培养基（成分见下表）：
葡萄糖
无机盐
尿素
琼脂
酚红溶液
水
培养基A
＋
＋
＋
＋
＋
＋
培养基B
＋
＋
＋
－
＋
＋
注：＋表示有，－表示无
据表分析，两种培养基的碳源是__________；培养基B可用于增菌培养，不能用于分离纯化，原因是________________。接种的微生物中是否含有尿素分解菌，可通过观察___________进行初步鉴定。
（3）加入培养基的无机盐含有KH2PO4及Na2HPO4，其作用是__________。配置好的培养基灭菌方法是_________________。
（4）若用平板划线法接种微生物，在培养基上共画了4个区域，则至少需要________次灼烧接种环。
94．（2020·安徽马鞍山市·高三三模）为筛选出能产生果胶酶的微生物，研究人员利用腐烂水果进行了下列操作：
腐烂水果取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→挑选菌落→复筛
回答下列问题：
（1）选择培养需制备以________为唯一碳源的培养基，此过程可以“浓缩”所需微生物，原因是_______________________________________________________________。
（2）选择培养后的菌液按一定比例加入_________中，进行系列梯度稀释。涂布培养一段时间后，选择单菌落数目适宜的培养皿，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），15min后，洗去培养基表面的刚果红溶液，挑选_________直径与菌落直径比值大的菌落。
（3）复筛时进行果胶酶
________测定，最终挑出果胶酶高产菌株。工业生产中，常利用液态发酵生产大量果胶酶，液态发酵的优点是____________________________。为使果胶酶能反复利用，经常采用________________方法固定。
95．（2020·天津和平区·高三一模）抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点。将若干编码抗菌肽（ABP）序列按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部，形成长度为4800bp
（1bp为一个碱基对）的重组质粒PLG339-nABP，相关过程如图所示。已知重组质粒中，每个编码ABP序列中都含有限制酶AccⅢ的一个切点，基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸（色氨酸是微生物生长必须的氨基酸）。
（1）质粒PLG339的基本单位是___________________。
（2）若PLG339—n
ABP经限制酶AccⅢ处理后，产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段，单个抗菌体（ABP）最多由______________个氨基酸构成（不考虑终止密码）。
（3）现有大肠杆菌和酵母菌两种菌群，可作为导入PLG339-nABP的受体细胞是_________________，理由是____________________________________。
（4）若选定的受体细胞为trpA基因缺陷型，则需采用两步法筛选含重组质粒的细胞。第一步筛选的固体培养基在营养成分上的要求是：含______________，不含色氨酸；第二步将第一步所得菌落接种到新的培养基上进行培养，该培养基中应添加_____________。通过对照，最终选出______________（能/不能）在第一步培养基上生长，而______________（能/不能）在第二步培养基上生长的菌落即为符合要求的成功导入重组质粒的细胞。
（5）在测试转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果时获得了如图所示的结果，据此可得出结论：ABP抑制效果与___________和_____________有关。
四、实验题
96．（2019·全国高考真题）物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌
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