高中生物人教版（2019）选择性必修2-1.2血球计数板使用(共28张PPT)

(共28张PPT)
酿酒和做面包都要用到酵母菌，这些酵母菌可以用液体培养基（培养液）来培养。
那么如何估算酵母菌种群数量的变化？
培养液中酵母菌种群数量的变化
1.单细胞真核生物
2.兼性厌氧菌
3.出芽生殖
探究·实践：
1. 提出问题：
2. 作出假设：
3. 设计并进行实验：
培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
连续培养7天，每天用显微镜和血球计数板计数出酵母菌种群密度。（显微计数法）
酵母菌在开始一段时间呈“J”型增长，但随着时间的推移，由于资源和空间有限，将呈“S”型增长，并最终将全部死亡。
实验步骤
① 将10mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中；
② 将酵母菌接种入试管中的培养液中混合均匀；
③ 将试管在28℃条件下连续培养7d；
④ 每天取样计数酵母菌数量；
⑤ 分析结果，得出结论。
逐个计数很困难，采取抽样检测的方法。
每天同一时间计数
血球计数板使用
1、血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格。
一、血球计数板的原理和构造
2、方格网上刻有9个大方格。只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm其容积为0.1mm3。
计数室
计数室分为25中格（双线边）
每一中格又分为16小格
计数室是由___________个小格组成
25×16=400
3、计数室规格：
细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数
一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数
二、血球计数板的使用方法步骤
1．镜检计数室。在加样前先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行加样；
2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入（防止产生气泡）；充入细胞悬液的量不能太多，多余培养液需用滤纸吸去，盖玻片上的培养液也需用滤纸吸取。
3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。每一天要在同一时间计数。
1、若计数室内有水，则会导致计算出的浓度比实际偏小。
2、加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，这些做法的目的都是防止气泡产生，气泡的存在会导致计算出的浓度比实际偏小。
3、充入细胞悬液的量过多，会将盖玻片顶起，使得计算出的浓度比实际偏大。
4、如果先加酵母菌悬浮液，再盖盖玻片，会使加入的酵母菌溶液超过计数室体积，导致计算出的浓度比实际偏大。
5、如果盖玻片上的酵母菌溶液没有用滤纸吸去，会导致计算出的浓度比实际偏大。
6、吸取培养液前要轻轻振荡培养瓶几次，目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，以保证估算的准确性，减少误差。 若未震荡，而从底部吸取酵母菌溶液，会导致计算出的浓度比实际偏大；若未震荡，而从上部吸取酵母菌溶液，会导致计算出的浓度比实际偏小。
7、若一个小格中的酵母菌过多，难以数清，要将吸取的培养液进行稀释后，再计数（一般以一个小格中4-5个酵母菌为宜）
8、计数：相邻两边及其夹角上的个体。若四边四角均计入，会导致计算出的浓度比实际偏大。
9、待酵母菌沉降到底部再进行计数。对焦不准：会导致看清酵母菌，看不清格线，或者看清格线，看不清酵母菌，造成计数的误差。
10、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
11、一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2
N2=(n2-1+n2-2)/2 N=(N1+N2+N3) /3
N3=(n3-1+n3-2)/2
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
N2=(n2-1+n2-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n2-1
n2-2
N2=(n2-1+n2-2)/2
N3=(n3-1+n3-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n3-1
n3-2
N3=(n3-1+n3-2)/2
12、本实验不需要对照,实验前后互为对照。
13、需要平行重复实验,以提高实验数据的准确性;对每个样品可计数三次，再取平均值。
14、可使用两种方法分辨死细胞和活细胞：死细胞多集结成团；可以借助台盼蓝染色（死细胞呈蓝色，因为死细胞细胞膜失去选择透过性，台盼蓝可以进入细胞）
15、血球计数板使用后，用自来水浸泡和冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，也可用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。
例题
例1：用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 个。
稀释
2×108
解析 ：根据公式：5×400×10000×10＝2×108
例2：检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 ▲个／mL
解析 ：酵母细胞个数／1mL＝ 80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数＝n/ 80×400×10000×10＝5n×105
例3（2008江苏高考31．）
（4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是 _和 。
（5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是 。
摇匀培养液后再取样
培养后期的样液稀释后再计数
浸泡和冲洗
例4：（2009福建高考1 ）
下列对有关实验的叙述，正确的是 ( )
A.在观察洋葱细胞有丝分裂实验中，将已经解离、漂洗、染色的根尖置于载玻片上，轻轻盖上盖玻片后即可镜检
B.对酵母菌计数时，用吸管吸取培养液滴满血球计数板的计数室及其四周边缘，轻轻盖上盖玻片后即可镜检
C.在叶绿体色素提取实验中，研磨绿叶时应加一些有机溶剂，如无水乙醇等
D.检测试管中的梨汁是否有葡萄糖，可加入适量斐林试剂后，摇匀并观察颜色变化
C
1．（7分）酵母菌是探究细胞呼吸方式、种群数量变化的理想实验材料。血球计数板是酵母菌计数的常用工具。结合所学知识，回答下列问题：
（1）酵母菌与大肠杆菌相比，在结构上的主要区别是酵母菌具有 。
（2）酵母菌常被用来探究细胞呼吸的方式，是因为它
。
以核膜为界限的细胞核
在有氧和无氧条件下都能生存（属于兼性厌氧菌）
（3）血球计数板的计数室长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其中25×16型的血球计数板计数室以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。一般计数时选取的中方格位于计数室的 。下图1表示的是其中一个中方格的情况，对该中方格中的酵母菌进行计数的结果是 个。如果计数的几个中方格中的细胞平均数为20个，则1mL培养液中酵母菌的总数为 个。
四个角和中央的五个中方格
24
5×106
（4）某同学为探究温度对酵母菌种群数量变化的影响，得到上图2所示结果，由此并不能得出酵母菌的最适培养温度为25℃。为了确定培养酵母菌的最适温度，需要进一步实验，写出实验设计思路： 。
在25℃左右再设计以上的温度梯度
2.在生态学中，通常要从种群、群落、生态系统等三个层次开展研究。
⑴ 在“探究培养液中酵母菌数量的动态变化”实验中，用血球计数板进行抽样检测。下图是血球计数板放大图，第一次抽样检测结果是4个中方格中共有40个酵母菌，则每毫升菌液中含有酵母菌 个。所计算出的酵母菌是 （从以下选项中选择）。
A.活的菌数 B.死的菌数 C.总菌数 D.新增殖的菌
1.6×106
C
⑵“离离原上草，一岁一枯荣。野火烧不尽，春风吹又生。远芳侵古道，晴翠接荒城。”诗中可体现出群落的 现象。研究群落通常要研究其丰富度，探究土壤中小动物优势种的种类及丰富度，随机取样时常用的方法是 取样法。
⑶人工设计并制作生态缸，目的是观察这一人工微生态系统的稳定性。在构建时，是依据生态系统原理，在有限的空间内把生态系统具有的 进行组织。为了使其正常运转，在设计时一定要考虑 。
次生演替
取样器取样
基本成分
不同营养级生物之间的合适比例
16×25型的计数板 计数室含16中格，每个中方格含有25个小方格。一般取四角的四个中方格（100个小方格）计数 。
细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
补充：16x25型计数板