高中生物苏教版（2019）选择性必修3 生物技术与工程 第一章 第二节　第1课时　发酵工程的灭菌方法和传代的无菌技术（68张PPT）

(共68张PPT)
第1课时　发酵工程的灭菌方法、灭菌
设备、无菌操作器具及微生
物接种和传代的无菌技术
1.掌握不同物品的灭菌方法。
2.概述发酵工程的灭菌设备和无菌操作器具并掌握其正
确使用方法。
3.概述微生物接种的方法和传代的无菌技术。
学习目标
1.生命观念：理解防止杂菌污染对成功获得培养物及确
保操作者本身安全的重要性。
2.科学思维：利用无菌技术进行斜面接种和培养酵母菌。
素养要求
内容索引
网络构建
课时对点练
一、发酵工程的灭菌方法
二、发酵工程的灭菌设备及无菌操作器具
三、微生物接种和传代的无菌技术
一、发酵工程的灭菌方法
1.无菌技术：是发酵工程的重要技术之一，是指在操作过程中，保持物品与操作区域的 状态并不被 污染的技术，其核心是 。
2.灭菌方法
(1)化学试剂灭菌法
①概念：一些化学试剂如甲醛、 、高锰酸钾，能破坏微生物的______或细胞结构，具有杀菌作用，可以用作灭菌剂。采用灭菌剂灭菌的方法称为化学试剂灭菌法。
②缺点：灭菌剂可能会与培养基的一些成分发生作用，因此一般不能用于 的灭菌。
教材梳理
预习新知　夯实基础
无菌
微生物
灭菌
氯
蛋白质
培养基
(2)射线灭菌法
①概念：利用 等产生的 进行灭菌的方法。
②实例：波长为 的紫外线、 射线和γ射线等都具有灭菌
作用。
③应用：紫外线的穿透能力 ，一般用于 的灭菌。
(3)干热灭菌法
①常用方法： 灭菌法和 法。
②应用：干热空气灭菌主要用于要求 的实验器具(如培养皿、
和移液管)的灭菌；火焰灼烧法常用于 等操作过程。
紫外线
高能粒子
200～300 nm
X
弱
表面和空气
干热空气
火焰灼烧
保持干燥
接种针
接种
(4)湿热灭菌法
①概念：利用 进行灭菌的方法。
②条件：温度 ℃、气压约 kPa的条件下维持15～20 min。
③优点
a.蒸汽穿透力 ，蒸汽与较低温的物体表面接触凝结为水时可放出_____能量，吸收了蒸汽水分和热量的菌体蛋白质易 ；
b.相同温度下湿热灭菌比干热灭菌 。
饱和蒸汽
121
100
大
大量
变性
更有效
(5)过滤除菌法
①概念：通过 阻留微生物从而达到除菌目的的方法。
②应用
a.在工业生产上制备 ，用于好氧微生物的发酵；
b.在产品提取过程中，也可以利用过滤除菌法处理料液，以获得_____
产品。
过滤
无菌空气
无菌
(1)灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提(　　)
(2)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用干热灭菌法进行灭菌(　　)
(3)分批灭菌的过程包括升温、保温和冷却三个阶段，灭菌主要是在升温过程中实现的(　　)
判断正误
√
×
×
核心探讨
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。请据此概念完成下面表格。
突破重难　强化素养
比较项目 消毒 灭菌
作用强度 较为_____ _____的物理或化学方法
作用对象 操作空间、操作者双手等 接种环、移液管、培养基等
作用结果 _____杀死所有微生物(如细菌_____) 能杀死物体内外的_____微生物，包括_____和孢子
常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法等 干热灭菌法、湿热灭菌法等
温和
强烈
不能
芽孢
所有
芽孢
核心归纳
消毒和灭菌的主要方法和应用范围
项目 主要方法 应用范围
巴氏消毒法 62～65 ℃消毒30 min或80～90 ℃处理30 s～1 min 牛奶、啤酒、果酒和酱油等液体
煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6分钟 家庭餐具等生活用品
化学试剂 灭菌法 用适宜浓度的甲醛、氯、高锰酸钾等灭菌剂灭菌 皮肤、伤口、空气、手术器械、塑料等
射线灭菌 波长为200～300 nm的紫外线、X射线、γ射线等 一般用于表面和空气的灭菌
干热 灭菌法 干热空气灭菌：140～160 ℃，2～3 h 培养皿、接种针、移液管等
火焰灼烧法 接种等操作过程
湿热 灭菌法 采用饱和蒸汽进行灭菌：121 ℃，100 kPa，维持15～20 min 培养基及多种器材、物品
过滤 除菌法 采用过滤装置除去微生物 空气、料液，及在高温下不稳定的物质
典题应用
1.下列关于无菌技术的描述错误的是
A.甲醛、高锰酸钾等，能破坏微生物的蛋白质或细胞结构，具有杀菌
作用
B.工业生产中制备无菌空气常用过滤除菌法
C.紫外线穿透能力强能杀死一定空间中所有微生物
D.对培养基灭菌，常采用湿热灭菌法
及时反馈　知识落实
√
解析　紫外线穿透能力弱，一般用于表面和空气的灭菌。
2.高压蒸汽、酒精擦拭、火焰灼烧三种处理方法分别适用于哪些材料(或用具)的杀菌处理
A.接种环、培养基、超净工作台
B.接种环、操作者的双手、培养基
C.培养基、操作者的双手、接种环
D.接种环、超净工作台、培养基
√
二、发酵工程的灭菌设备及无菌操作器具
1.发酵工程的灭菌设备
(1)电热鼓风干燥箱
①结构：具有双层金属壁、中间有 石棉板的箱体，顶端或背面有
，下底夹层装有供通电 的电炉丝。
②应用：常用于 的玻璃器皿(如 、离心管、移液管)、 用具(如镊子、手术刀)和其他耐高温的物品(如菌种保藏采用的沙土管、石蜡油、碳酸钙)的灭菌。
③优点：使灭菌器皿保持 。
教材梳理
预习新知　夯实基础
隔热
调气阀
加热
空
培养皿
金属
干燥
④缺点：带有 或 的物品、液体及固体 一般不能采用电热鼓风干燥箱干热灭菌。
⑤菌体蛋白质的变性温度与含水量的关系
a.细菌、酵母菌及霉菌的营养细胞，含水量 ，需在 条件下，加热10 min才可使其蛋白质变性而达到杀菌效果；
b.放线菌及霉菌孢子含水量 ，在80～90 ℃条件下，加热30 min方可杀菌；
c.细菌芽孢含水量 ，蛋白质变性温度较 。
胶皮
塑料
培养基
较高
50～60 ℃
较少
低
高
⑥彻底灭菌的标准及灭菌条件
标准：以能否杀死 作为彻底灭菌的标准。
灭菌条件：温度提高到 ℃，加热2～3 h。
⑦注意事项
a.不得将易腐、 、易爆物品放入箱内干燥灭菌；
b.干燥箱在工作时，必须将 开关打开；
c.箱内应经常保持 。
细菌的芽孢
160
易燃
风机
清洁
(2)高压蒸汽灭菌锅
①应用：采用高压蒸汽灭菌锅进行 灭菌。
②灭菌原理：在一个密闭的锅内，水的 随蒸汽压力的增高而 ，加压的同时提高蒸汽的 ，使锅内的待灭菌物品在一定压力和温度等条件下，杀死其中 微生物的营养体及其 。
③类型：有 高压蒸汽灭菌锅和 高压蒸汽灭菌锅两类。
④注意事项：操作人员必须在现场规范操作，严格控制 维持灭菌时的 。锅内压力过高不仅培养基的 会被破坏，而且高压锅超过耐压范围后可能会发生 ，造成伤人事故。
湿热
沸点
上升
温度
所有
芽孢
手动式
全自动
热源
压力
成分
爆炸
⑤使用步骤
水位标记线
排气阀
冷空气
103 kPa
121
“0”
温度
(3)空气除菌设备
①空气除菌原因：通常在空气中含有灰尘颗粒和各种 ，在阴雨天气或环境污染比较严重的情况下，空气中会悬浮大量的微生物。这些微生物一旦进入营养丰富的培养基中，会很快繁殖，影响 过程。
②空气除菌方法：常采用 的方法，即让含菌空气通过无菌干燥的过滤介质，以 空气中所含微生物。
杂菌
发酵
空气过滤除菌
阻截
2.发酵工程的无菌操作器具
(1)接种器具
①接种：在 条件下将微生物转入 的操作过程。
②常用接种器具包括玻璃涂布器、 、接种环等。
③应用：玻璃涂布器常用于 接种，接种针用于 接种，接种环用于 接种或在平板培养基上 接种。
无菌
培养基
接种针
平板稀释涂布
穿刺
斜面
划线
(2)转移器具
①移液管的应用：一般用于转移部分 培养物、 微生物或
化学试剂。
②刻度移液管：具有 的直形玻璃管，在需要控制试剂 时使用。
③使用要点
a.以拇指及中指捏住管颈标线 的地方，将移液管插入待取溶液液面下约1 cm。
b.移液管不应伸入太多，以免管尖外壁粘有 溶液；也不应伸入太少，以免液面下降后而 。
液体
系列稀释
分装
刻度
加入量
以上
过多
吸空
④操作步骤
液面
1 cm
下端外壁
垂直
缓缓
下端
顺壁
⑤微量取液器
a.应用：取液量 时(如0.1 mL)使用。
b.类型：分为固定容量的和 容量的两种。
(3)超净工作台
①概念：超净工作台是一种经过 净化而形成高洁净操作环境的设备。
②净化原理：是利用工作台内 的杀菌作用，并通过___________过滤确保工作台内空气的无菌、无污染。
③注意事项：超净工作台开机杀菌30 min后，需先关掉 ，约_______后方可使用。
④优点：操作方便。
很少
可调
空气
紫外线灯
空气过滤器
紫外线灯
10 min
(1)菌体蛋白质的变性温度与含水量相关，一般来说含水量越低，变性温度越高(　　)
(2)一般以能否杀死细菌的芽孢作为彻底灭菌的标准(　　)
(3)使用高压蒸汽灭菌锅时，为充分利用空间，装得越满越好(　　)
(4)当高压蒸汽灭菌锅的压力表指针降至“0”点时，即可出锅(　　)
(5)制备氨基酸、抗生素等的发酵过程，所需的微生物对空气无菌的要求较低(　　)
(6)将移液管移入准备接受溶液的容器时，为避免污染，移液管不能接触器壁(　　)
判断正误
√
√
×
×
×
×
核心探讨
1.培养基灭菌为什么采用高压蒸汽灭菌而不采用干热灭菌？
突破重难　强化素养
提示　干热灭菌箱内的高温会导致培养基的水分散失，而高压蒸汽锅内的湿度较大，不会导致培养基的水分散失。
2.如何制备一瓶无菌水？
提示　对一瓶有菌水进行高压蒸汽灭菌处理。
3.某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是什么？
提示　未将锅内冷空气排尽。
4.某同学从高压蒸汽灭菌锅内拿出培养基后发现，培养基已经溅满了锥形瓶的瓶壁，最可能的原因是什么？
提示　高压蒸汽灭菌锅的压力表指针还未降至“0”点，就提前打开了高压蒸汽灭菌锅。
核心归纳
高压蒸汽灭菌锅的使用及注意事项
(1)首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，水量达到水位标记线即可。
(2)放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。
(3)加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。拧紧固定螺栓，注意要对称地旋紧锅盖四周的固定螺栓，使固定螺栓松紧一致，不漏气。
(4)加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排出锅内的冷空气。等冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持压力。
(5)到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到“0”点时，打开排气阀，旋开固定螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。
典题应用
3.下列关于发酵工程的灭菌设备和无菌操作器具的叙述错误的是
A.杀死霉菌孢子所需的温度比霉菌的营养细胞高
B.在高压蒸汽灭菌锅内的压力没有降到“0”点前不能打开高压蒸汽灭菌
锅的锅盖
C.空气过滤除菌法能杀死空气中的微生物
D.臭氧分子有很强的杀菌作用，但也对操作人员的健康有害
及时反馈　知识落实
√
4.右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，其中甲、乙、丙依次是指
A.安全阀、排气阀、压力表
B.排气阀、安全阀、压力表
C.安全阀、排气阀、温度表
D.排气阀、安全阀、温度表
√
三、微生物接种和传代的无菌技术
1.菌种的传代和保存要考虑菌种的 、 特性，尽量让菌种在人工创造的条件下， 细胞的代谢水平，使细胞基本处于 状态，即微生物的生长繁殖受到抑制但又不至于 。
2.菌种保存的重要条件： 。
3.穿刺接种和斜面接种
(1)厌氧微生物接触氧气会受到抑制、损伤甚至死亡，常采用 接种。
(2) 是常用的菌种传代和低温下保存菌种的方法。
教材梳理
预习新知　夯实基础
生理
生化
降低
休眠
死亡
低温、干燥、真空
穿刺
斜面接种
4.斜面接种和培养酵母菌
准备接种→接种环 →试管口 →挑取菌体→ →培养
5.菌种保存
(1)步骤：挑选典型菌落→接种在斜面培养基上→培养使其 生长→试管用牛皮纸包扎→置于 左右的冰箱中保存(目的：减缓培养基的____
，延长 )。
(2)每隔2～3个月 接种一次，再继续保存。
灭菌
灭菌
接种
充分
4 ℃
水分
蒸发
保存时间
重新
(1)低温、干燥、高氧是菌种保存的重要条件(　　)
(2)厌氧微生物常采用穿刺接种的方法将其保护在培养基中(　　)
(3)将含有新鲜菌种的试管放在－4 ℃的冰箱中保存有利于延长保存时间
(　　)
判断正误
×
√
×
核心探讨
1.下图接种方法分别是什么？
突破重难　强化素养
提示　图1是穿刺接种、图2是斜面接种。
2.在斜面接种和培养酵母菌的过程中有哪些无菌操作的步骤？
提示　(1)将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次；
(2)将试管口通过火焰2～3次；
(3)抽出接种环时，带菌部分不要触及管壁；
(4)将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管。
核心归纳
斜面接种和培养酵母菌的操作步骤及其目的或分析说明
顺序 接种操作步骤 目的或分析说明
① 将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次 将接种环灭菌，避免污染菌种
② 迅速将试管口通过火焰2～3次 灼烧灭菌，防止试管口上的微生物污染培养基
③ 将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位 使接种环冷却，避免杀死菌种
④ 抽出接种环时，带菌部位不要触及管壁或通过火焰 防止菌种沾于管壁；防止菌种被杀死
⑤ 在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线，但不要将培养基的表面划破 初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准
⑥ 将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管 防止杂菌污染
⑦ 将接种过菌种的试管，放在恒温箱(28 ℃)中培养24 h 培养酵母菌，观察接种和培养的结果
典题应用
5.下列关于斜面接种和培养酵母菌的叙述，错误的是
A.接种环灭菌时，只需将其环端进行灭菌
B.接种时，应在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线
C.挑取菌体时应先将接种环的环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的
培养基部位使其冷却
D.将菌种置于4 ℃左右的冰箱中保藏即有利于减缓培养基的水分蒸发，
又有利于延长保存时间
及时反馈　知识落实
√
6.下列关于微生物接种和传代的无菌技术的叙述，错误的是
A.菌种的传代和保存要考虑菌种的生理、生化特性
B.低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物生长和代谢
的作用
C.破伤风芽孢杆菌可在培养基深处的厌氧环境下生长
D.在培养基斜面上接种时应由上部向底部轻轻划“Z”型折线
√
解析　接种时在斜面上应由底部向上轻轻划“Z”型折线。
网络构建
课时对点练
题组一　发酵工程的灭菌方法
1.将配制好的培养基进行灭菌应用
A.过滤除菌法 B.湿热灭菌法
C.干热灭菌法 D.煮沸灭菌法
√
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对点训练
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2.下列有关微生物培养无菌技术的叙述，正确的是
A.无菌技术的唯一目的是防止实验室的培养物被外来微生物污染
B.消毒和灭菌的原理是完全不同的
C.人体皮肤最好采用紫外线进行消毒
D.培养皿的灭菌可用干热灭菌法
√
解析　无菌技术可防止实验室的培养物被外来微生物污染，还可避免操作者自身被病原微生物感染，A错误；
消毒和灭菌均是通过理化手段，使微生物的蛋白质、核酸等变性，从而失去生命活性，B错误；
紫外线可诱发皮肤细胞癌变，人体皮肤不可采用紫外线进行消毒，C错误。
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3.下列关于相关材料和器具进行消毒或灭菌方法的选择，错误的是
A.接种环——酒精消毒
B.空气——过滤除菌法
C.牛奶——巴氏消毒法
D.玻璃器皿——干热灭菌法
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4.下列有关消毒与灭菌的说法，正确的是
①日常生活中经常用到的消毒方法是煮沸消毒法　②对接种室、接种箱或超净工作台要使用巴氏消毒法进行消毒　③实验操作者的双手使用酒精进行灭菌，以杀死所有微生物　④接种环、接种针等金属用具在接种等操作过程中常使用火焰灼烧法进行灭菌　⑤培养基常使用湿热灭菌法进行灭菌
A.①②③ B.③④⑤
C.①②③④⑤ D.①④⑤
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题组二　发酵工程的灭菌设备和无菌操作器具
5.下列关于灭菌设备的使用错误的是
A.不得将易腐、易燃、易爆物品放入电热鼓风干燥箱内干燥灭菌
B.使用高压蒸汽灭菌锅时，操作人员应严格控制热源维持灭菌时的压力
C.在高压蒸汽灭菌锅内的压力没有降到“0”点前不能打开锅盖
D.在使用高压蒸汽灭菌锅时，一旦加热就不能打开排气阀
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解析　加热后，须打开排气阀，排出锅内残留的冷空气。
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6.高压蒸汽灭菌的操作顺序应该是
①加水　②排冷气　③装置灭菌物品　④约103 kPa下灭菌　⑤加盖
⑥ 0 kPa下排气，打开灭菌锅
A.①③⑤②④⑥ B.②③⑤①⑥④
C.①②④⑤③⑥ D.②⑤①⑥④③
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题组三　微生物接种和传代的无菌技术
7.接种是微生物培养和微生物选择的必要步骤之一。下列关于接种的叙述中，不正确的是
A.接种通常在酒精灯火焰附近进行
B.接种之前要对接种环进行灼烧灭菌
C.接种指无菌条件下将微生物接入培养基的操作
D.接种时接种环要将培养基的表面划破
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解析　接种时接种环不能划破培养基的表面，故D错误。
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解析　将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌只是无菌技术的一个方面，不代表无菌技术的全部，A项错误；
接种纯种细菌是获得纯净培养物的前提，B项错误；
接种方法和培养条件不能防止杂菌的污染，C项错误；
防止外来杂菌的入侵是获得纯净培养物的关键，D项正确。
8.在微生物的实验室培养过程中，获得纯净培养物的关键是
A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
B.接种纯种细菌
C.在适宜条件下培养
D.防止外来杂菌的入侵
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9.下列关于微生物接种和传代的描述，错误的是
A.抽出接种环时，其带菌部位不要触及管壁或通过火焰，以免被杂菌污
染或被杀死
B.用斜面培养基保存菌种通常每隔2～3个月重新接种一次
C.休眠状态即微生物的生长繁殖受抑制但又不至于死亡
D.穿刺接种用到的接种器具是接种环
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解析　接种针用于穿刺接种，接种环用于斜面接种或划线接种。
10.在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序是
①用一只手的拇指和其他四指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上保持水平状态　②在火焰附近用握有接种环的手的小拇指、无名指、中指和掌心拔去两支试管上的试管塞，并迅速将试管口通过火焰2～3次　③将接种环伸入菌种管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少许菌体，立即将接种环抽出　④手拿接种环，在酒精灯火焰上来回灼烧多次　⑤在火焰旁迅速将沾有菌体的接种环伸到斜面培养基的底部然后向上轻轻划“Z”型折线　⑥抽出接种环，将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管
A.①②③④⑤⑥ B.①④②③⑤⑥
C.①②③④⑥⑤ D.②①③④⑤⑥
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选择题11～12题为单选题，13～15题为多选题。
11.细菌培养基常在121 ℃压力锅中灭菌，如果只是在100 ℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活
A.大肠杆菌 B.一种青霉菌
C.枯草芽孢杆菌 D.沙门氏菌
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综合强化
12.下列有关无菌技术的说法，正确的是
A.无菌技术的关键是杀灭实验室中的所有的微生物
B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌
C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期
保存
D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌
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解析　无菌技术的关键是防止杂菌的污染，A错误；
培养微生物的培养基一般用湿热灭菌法灭菌，微生物的接种工具，如接种针、接种环或其他金属用具一般要进行干热灭菌，B错误；
无菌技术中，若处理对象为液体，可以用湿热灭菌法灭菌，D错误。
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13.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法正确的是
A.对接种环进行灼烧处理
B.带菌培养基必须经湿热灭菌后才能倒掉
C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D.接种后双手必须经肥皂洗净，再用体积分数为70%的酒精棉球擦拭
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解析　带菌培养基必须经湿热灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，C项错误。
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14.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述正确的是
A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒
B.接种环等金属用具，可在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌
C.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防
止被微生物感染
D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境
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解析　接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰部位灼烧灭菌，B错误。
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15.微生物的实验室培养，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列无菌操作中，正确的是
A.对实验用的培养基，常采用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌
B.对培养皿、接种环和移液管等，用干热灭菌法进行灭菌
C.对操作者的双手、衣着以及操作空间等，采用紫外线进行消毒
D.对试管口、锥形瓶口等部位，通过火焰灼烧进行灭菌
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16.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：
(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方如下：
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牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 蒸馏水
3.0 g 10.0 g 5.0 g 20.0 g 定容至1 000 mL
其中提供氮源的是_______________；提供碳源的主要物质是________。
牛肉膏、蛋白胨
牛肉膏
(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的_____，在烧杯中加入琼脂后要不停地______，防止__________
_____________。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_______________中灭菌，压力103 kPa，温度_______，时间___________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到“0”点时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应______。
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比例
搅拌
引起烧杯破裂
琼脂糊底
高压蒸汽灭菌锅
121 ℃
15～20 min
废弃
(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向外层锅内倒入_______。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。
(5)从一支试管向另一支试管接种时应注意，接种环要在酒精灯____(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环_____后挑取菌体，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入___℃冰箱中保藏。
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适量水
外
冷却
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17.(2018·全国Ⅱ，37改编)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_____(填“可以”或“不可以”)放入密闭容器如电热鼓风干燥箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是________________________________________。
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可以
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能______
__________。工业生产上一般利用__________法大量地制备无菌空气。
(4)水厂供应的自来水通常是经过______(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。
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破坏
DNA结构
过滤除菌
氯气
未将锅内冷空气排尽
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