(共65张PPT)
第一节 发酵工程的培养基
学习目标
素养要求
1.概述培养基的成分和类型。
2.掌握配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基的方法。
1.科学思维:简要说明选择培养基和鉴别培养基的主要
区别。
2.科学思维:通过体验培养基的制备方法,掌握微生物
培养的基本技能,感受科学研究的严谨性。
发酵工程的培养基
内容索引
网络构建
课时对点练
发酵工程的培养基
1.培养基的类型
(1)培养基:主要是指为人工培养微生物等而制备的,适合微生物等 、_____或积累代谢产物的营养基质。
(2)类型
教材梳理
预习新知 夯实基础
生长
繁殖
①按成分
组织
微生物
提取物
牛肉膏蛋白胨
取材
营养
配制
营养成分
重复性
①按成分
准确
蒸馏水
成分
含量
可重复性
繁琐
较高
琼脂
基础
特殊
2.基础培养基
(1)概念:各种培养基的配方虽然不同,但其成分一般都含有 、_____、_____和_______等最基本的物质,这些最基本的物质是大多数微生物对营养条件的 需求,提供这些基本需求的培养基就是基础培养基。
水
碳源
氮源
无机盐
基本
(2)培养基的成分
能量
蔗糖
淀
粉
蛋白质
核酸
铵盐
牛肉膏
蛋白胨
3.特殊培养基
(1)概念:以 为基础,可进一步配制具有 用途的培养基。
(2)选择培养基
①概念:是一种能将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中 出来的特殊培养基。
基础培养基
特殊
分离
纤维素
氮源
抑制或杀死
酚
放线菌
亚硫酸铋
细菌
放线菌
酵母菌
(3)鉴别培养基
①用于快速分类 不同类型微生物的特殊培养基,也可用于_______
产生某种代谢产物的微生物菌种。
②实例
a.在添加可溶性淀粉的培养基中,如果菌落周围形成淀粉 ,说明是能产生 的菌株。
b.在添加 的培养基中,如果培养基的颜色由 ,说明是产酸微生物。
鉴定
分离和
筛选
淀粉酶
水解圈
溴甲酚紫
紫色转为黄色
(4)加富培养基
①概念:也称 培养基,即在培养基中加入 某些微生物生长和繁殖所需的特殊物质,如血液、 、酵母浸膏、动植物 。
②实例:培养百日咳博德氏菌需要含有 成分的加富培养基。
③加富培养基与选择培养基的比较
a.加富培养基类似于 培养基。
b.采用加富培养基的目的,是 所需分离的微生物的数量,使其形成
,以分离出该种微生物。
c.采用选择培养基的目的,一般是 不需要的微生物生长和繁殖,而使所需要的微生物 ,再分离出所需微生物。
营养
有利于
血清
组织液
血液
选择
增加
生长优势
抑制
增殖
(5)常用培养基的配方
①牛肉膏蛋白胨培养基
a.应用:培养细菌。
b.配方:牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、 15~20 g、水1 000 mL。
②高氏Ⅰ号培养基
a.应用:分离和培养 。
b.配方:可溶性淀粉20 g、KNO31 g、NaCl 0.5 g、 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、 0.01 g、琼脂15~20 g、水1 000 mL。
琼脂
放线菌
K2HPO4·3H2O
FeSO4·7H2O
③配制培养基需要根据培养目的调节培养基的 。
④对培养基进行 是获得纯净的微生物培养物的前提。实验室一般用_______________进行灭菌。
4.配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基
(1)实验目的
学会配制培养基,如培养 的培养基。
(2)实验原理
酵母菌生长繁殖需要的营养物质有 、 、 和无机盐等。马铃薯葡萄糖琼脂培养基具有酵母菌生长所需的碳元素、氮元素和其他营养物质。
pH
灭菌
高压蒸汽灭菌锅
酵母菌
水
碳源
氮源
(3)实验步骤
过滤
加热
补水
5.5
污染
1/5
灭菌
自然倾斜
名称
高压蒸汽灭菌锅
100 kPa
121
(1)培养基中加入琼脂的目的是提供碳源( )
(2)所有微生物在培养时,培养基中都需加入氮源( )
(3)培养不同微生物的培养基成分完全一样( )
(4)以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基( )
(5)淀粉是一种能被所有微生物利用的碳源( )
(6)在选择培养基中滴加一定浓度的酚溶液可以抑制细菌的生长( )
判断正误
×
×
×
√
×
√
核心探讨
探讨点1:培养基的成分
试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点:
突破重难 强化素养
项目 自养型微生物 异养型微生物
碳源 等无机物 等有机物
氮源 等无机物 等有机物
CO2、NaHCO3
NH3、硝酸盐
糖类
牛肉膏、蛋白胨、酵母粉
1.培养基的成分及功能
核心归纳
营养要素 来源 功能
碳源(提供碳元素的物质) 无机碳源 CO2、NaHCO3等含碳无机物 ①构成微生物体的重要成分;
②有机碳既是碳源又是能源
有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等 氮源(提供氮元素的物质) 无机氮源 铵盐、硝酸盐等 将无机氮合成含氮的代谢产物
有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、豆饼粉、酵母粉等 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物
水 外界摄入 ①良好的溶剂;②维持生物大分子结构的稳定
无机盐 无机物 是微生物生长繁殖所需的,也是合成多种代谢产物所必需的
2.几种微生物的营养和能量来源
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 CO2 光能
硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物
大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物
1.关于微生物的营养,下列说法正确的是
A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源
B.凡是碳源都能提供能量
C.除水以外的无机物仅提供无机盐
D.无机氮源也可能提供能量
√
跟踪训练
1
2
解析 对一些微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物可以既是碳源,又是氮源,A错误;
CO2是光能自养型细菌的碳源,但不能提供能量,B错误;
除水以外的无机物种类繁多、功能多样,如CO2可作自养型微生物的碳源,C错误;
硝化细菌所利用的氮源是无机氮源——氨,同时氨的氧化过程也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源,D正确。
1
2
解析 自养型微生物可以利用无机碳源合成自身需要的营养物质,糖类是有机碳,能利用糖类的是异养型微生物,A错误;
石油中含有有机物,利用石油的微生物也是异养型微生物,B错误;
二氧化碳是无机碳,能利用无机碳的是自养型微生物,C正确;
花生粉饼中富含有机物,能利用花生粉饼的是异养型微生物,D错误。
2.能作为自养型微生物的碳源的是
A.糖类 B.石油
C.二氧化碳 D.花生粉饼
√
1
2
探讨点2:培养基的种类
1.微生物的培养离不开培养基,根据右面某微生物培养基的配方回答下列问题:
(1)该培养基的碳源、氮源分别是什么?
提示 碳源:C6H12O6;氮源:NaNO3。
(2)依据物理性质、用途划分,该培养基分别属于什么培养基?
提示 依据物理性质划分,该培养基属于液体培养基;依据用途划分,则属于选择培养基。
成分 含量
NaNO3 3 g
K2HPO4 1 g
KCl 0.5 g
MgSO4·7H2O 0.5 g
FeSO4 0.01 g
C6H12O6 30 g
H2O 1 000 mL
青霉素 0.1万单位
(3)用该培养基培养的微生物可能是什么?
提示 根据培养基的原料分析,所培养微生物的同化作用的类型是异养型,且培养基成分中有青霉素,所以培养的微生物可能是酵母菌或霉菌。
2.大肠杆菌的代谢产物(有机酸)能与伊红—亚甲蓝结合,从而形成深紫色,并带有金属光泽的菌落,据此配制的伊红—亚甲蓝培养基应为____培养基。
鉴别
1.培养基的种类
核心归纳
分类标准 培养基种类 培养基特点 作用
物理 性质 固体培养基 外观呈固态 微生物的分离、计数等
半固体培养基 容器放倒不致流出,剧烈振动则破散 观察微生物的运动、鉴定菌种等
液体培养基 呈液态 常用于工业生产
用 途 基础培养基 含水、碳源、氮源、无机盐等最基本物质 提供基本需求
特殊 培养基 选择 培养基 允许特定种类的微生物生长;抑制或杀死其他微生物 选择、分离
鉴别 培养基 根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴定、分离和筛选
加富 培养基 加入有利于某些微生物生长和繁殖所需的特殊物质 增加所需分离的微生物的数量
成分 来源 天然培养基 化学成分还不清楚 适用于工业化生产
合成培养基 化学成分及其含量明确 多用于研究和育种
2.几种选择培养基的设计
特性 主要用途 设计原理
加入青霉素、四环素 分离酵母菌或霉菌等真菌 青霉素能抑制细菌和放线菌生长,对真菌无作用
不加氮源 分离固氮微生物 固氮微生物能利用空气中的氮气
不加碳源 分离自养型微生物 自养型微生物能利用无机碳源
3.几种常用的鉴别培养基
名称 主要用途 主要化学物质 特征性变化
伊红—亚甲蓝琼脂培养基 鉴别大肠杆菌 伊红、亚甲蓝 出现带金属光泽的深紫色菌落
刚果红培养基 鉴别纤维素分解菌 刚果红、纤维素 纤维素被分解后出现透明圈
油脂培养基 鉴别产脂肪酶菌株 食用油、吐温、中性红指示剂 由淡红色变成深红色
淀粉培养基 鉴别产淀粉酶菌株 可溶性淀粉 淀粉被水解后出现淀粉水解圈
溴甲酚紫培养基 鉴别产酸微生物 溴甲酚紫 培养基颜色由紫色转为黄色
3.(2021·四川成都月考)如表所示为某培养基的配方,下列叙述错误的是
跟踪训练
3
4
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万单位
A.根据物理性质划分,该培养基属于液体培养基
B.该培养基不能用于培养大肠杆菌
C.根据培养基的配方可知,该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型
D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
√
解析 固体培养基和液体培养基的区别在于是否加入凝固剂(如琼脂),题表所示的培养基配方中没有琼脂,因此属于液体培养基,A正确、D错误;
加入青霉素会抑制大部分细菌的生长繁殖,B正确;
该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源,因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型,C正确。
3
4
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万单位
解析 加富培养基是通过增加所需分离的微生物的数量来达到分离该微生物的目的。
4.下列对各种培养基的分析和实际不相符的是
A.利用缺乏氮源的培养基,能分离出固氮微生物
B.在培养基中添加青霉素、四环素等,可以选择培养出酵母菌等真菌
C.产酸微生物能使添加了溴甲酚紫的培养基由紫色转为黄色
D.加富培养基和选择培养基都能抑制不需要的微生物的生长和繁殖
√
3
4
网络构建
课时对点练
题组一 培养基的成分及功能
1.不同培养基的具体配方不同,但一般都有
A.氮源、磷酸盐和维生素
B.氮源和维生素
C.水、碳源、氮源和无机盐
D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素
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对点训练
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解析 不同培养基具体配方不同,但是一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2.(2021·内蒙古赤峰二中高二下月考)下列关于培养基中微生物营养物质的描述,正确的是
A.所有碳源都能为微生物生长提供能源
B.蛋白胨可提供碳源、氮源
C.硝酸钾只能为微生物生长提供无机盐
D.营养物质越多,微生物生长繁殖越快
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解析 有机碳源能为异养微生物提供碳源和能源,无机碳源只能为自养微生物提供碳源,不能提供能源,A错误;
硝酸钾能为微生物生长提供无机盐和氮源等,C错误;
培养基中的营养物质需要控制一定的含量和比例,营养物质含量太多会导致培养基渗透压过高,从而抑制微生物的生长,D错误。
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3.硝化细菌(能利用化学能将无机物转化为有机物)和大肠杆菌的培养基及培养条件中,主要的差别是
A.碳源 B.琼脂
C.自来水 D.光照
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解析 硝化细菌是自养型生物,能利用无机碳源;大肠杆菌是异养型生物,只能利用有机碳源,因此二者的培养基及培养条件中最主要的差别是碳源。
4.下列关于培养基的说法正确的是
A.培养基是为微生物的生长、繁殖提供营养的基质
B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基
C.除水以外的无机物只能提供无机盐
D.无机氮源不可能提供能量
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解析 根据培养基物理性质的不同,可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基,在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基;除水以外的无机物如NH4HCO3,既可以是碳源,也可以是氮源,不仅仅提供无机盐;无机氮源有时也能提供能量,如NH3的氧化过程可以为硝化细菌的化能合成作用提供能量。
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题组二 培养基的类型
5.在微生物学中,能将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的特殊培养基称为
A.鉴别培养基 B.加富培养基
C.选择培养基 D.基础培养基
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解析 水是微生物必需的营养要素之一,培养基中必须含有水,D错误。
6.下列关于微生物培养基种类划分的叙述,错误的是
A.培养基按其物理性质可以分为液体培养基、固体培养基和半固体培
养基
B.培养基按其化学成分可以分为天然培养基、合成培养基
C.培养基按其用途可以分为基础培养基和特殊培养基
D.培养基按其营养构成可以分为含水培养基和无水培养基
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7.筛选是生物学中培养生物新类型常用的手段,下列做法不可能筛选成功的是
A.在无氮培养基上筛选圆褐固氮菌
B.在不含精氨酸的培养基中筛选能合成精氨酸的微生物
C.用含青霉素的培养基筛选酵母菌和霉菌
D.用不含碳源的培养基筛选根瘤菌
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解析 圆褐固氮菌能固氮,即固氮菌能利用空气中的氮气,A与题意不符;
只有能合成精氨酸的微生物才能在不含精氨酸的培养基上生长,因此用不含精氨酸的培养基能筛选出合成精氨酸的微生物,B与题意不符;
青霉素可抑制细菌细胞壁的形成,而对酵母菌和霉菌无抑制作用,显然用含青霉素的培养基可筛选酵母菌和霉菌,C与题意不符;
根瘤菌是异养型微生物,在不含碳源的培养基上不能生长,D符合题意。
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题组三 培养基的制备
8.在农田土壤表层自生固氮菌较多。用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养,可将自生固氮菌与其他细菌分开,该培养基无需加的是
A.葡萄糖 B.氯化钠
C.蛋白胨 D.蒸馏水
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解析 自生固氮微生物是一类能够独立进行固氮的微生物,培养基中可以不添加氮源,所以可将自生固氮菌与其他细菌分开。葡萄糖、氯化钠和蒸馏水中不含N元素,蛋白胨中含N元素,所以该培养基无需加的是蛋白胨。综上所述,A、B、D不符合题意,C符合题意。
9.下列有关微生物培养基的成分与配制过程的相关说法,错误的是
A.培养基的成分需根据培养微生物的目的进行适当调整
B.固体培养基与液体培养基相比,其中含有琼脂成分
C.对培养基进行灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提
D.配制培养基过程中应先进行高压蒸汽灭菌再调节pH
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10.下列关于配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基的叙述,错误的是
A.分装时注意不要污染试管口
B.配制培养基时,待其中琼脂溶化后需补足水至1 000 mL
C.制作斜面培养基时,倒入试管中的培养基高度约为试管高度的
D.应采用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌
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选择题11~12题为单选题,13~16题为多选题。
11.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长;在培养基中加入青霉素、四环素等可以抑制某些细菌或放线菌的生长;在培养基中加入10%的酚溶液可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出
①大肠杆菌 ②固氮细菌 ③霉菌 ④放线菌
A.②③④ B.①②③ C.①③④ D.只有③④
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综合强化
12.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是
A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、蒸馏水
B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水
C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、蒸馏水
D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水
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13.下表是某同学培养微生物时配制的培养基,关于此培养基的说法中,正确的是
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A.此培养基可用来培养自养型微生物
B.此表中的营养成分共有三类,即水、无机盐、氮源
C.表中各成分的含量按照所培养的微生物的营养需要来确定
D.若除去①,此培养基可用于培养大肠杆菌
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
√
√
√
解析 由表中成分可知,该培养基中未添加有机碳源,故此培养基可用来培养自养型微生物,A正确;
培养大肠杆菌还需要添加有机碳源,除去①之后,培养基中还缺少氮源,D错误。
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编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
14.下列关于四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述,正确的是
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项目 硝化细菌 乳酸菌 酵母菌 衣藻
能源 氧化NH3 分解乳酸 固定N2 利用光能
碳源 CO2 糖类 糖类 CO2
氮源 NH3 N2 N2
代谢类型 自养需氧型 异养需氧型 异养需氧型 自养需氧型
A.硝化细菌 B.乳酸菌
C.酵母菌 D.衣藻
√
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解析 硝化细菌能利用氮源NH3,且能利用氧化NH3释放的化学能进行化能合成作用合成有机物,属于自养需氧型微生物,A正确;
乳酸菌是异养厌氧型微生物,不能直接利用N2,且能量来源为糖类,B错误;
酵母菌不能固定N2,能分解糖类等有机物,其代谢类型为异养兼性厌氧型,C错误;
衣藻是低等植物,能利用光能进行光合作用制造有机物,属于自养需氧型微生物,D正确。
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15.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后,得到如图所示的两个菌落,培养平板经稀碘液处理,出现了以菌落为中心的透明圈。下列相关叙述正确的是
A.培养基中的淀粉也可为微生物提供氮源
B.两个菌落中的微生物为同一种微生物
C.两个菌落中的微生物均能将淀粉酶分泌至细胞外
D.透明圈直径与菌落直径的比值越大,说明该微生物分解淀粉的能力越大
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两个菌落的周围均有透明圈,说明两个菌落中的微生物都能分解淀粉,但不一定为同一种微生物,B错误;
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两个菌落的周围均有透明圈,说明两个菌落中的微生物均能产生淀粉酶并将淀粉酶分泌至细胞外,C正确;
透明圈是由于培养基中的淀粉被微生物产生的淀粉酶分解后而产生的,因此透明圈直径与菌落直径的比值越大,说明该微生物分解淀粉的能力越大,D正确。
解析 淀粉只含有C、H、O三种元素,因此培养基中的淀粉不能为微生物提供氮源,A错误;
16.下列有关以CO2为唯一碳源的自养型微生物营养的描述中,正确的是
A.该微生物一定是利用氮气作为氮源
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质
D.琼脂不是该微生物的营养要素之一
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解析 自养型微生物不能自生固氮,需要铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮素,A错误;
以CO2为唯一碳源的自养型微生物,二氧化碳不是该微生物的能源物质,B错误;
水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质,C正确;
琼脂是凝固剂,不是该微生物的营养要素之一,D正确。
17.牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用十分广泛的天然培养基,多数微生物能够在该培养基上生长。牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成如表所示。请回答下列有关问题:
物质 用量 物质 用量
牛肉膏 3 g 琼脂 20 g
蛋白胨 10 g 水 定容至1 000 mL
NaCl 5 g - -
(1)按物理状态划分,该培养基属于______培养基。上述培养基配方中提供碳源的物质是______________。在提供上述几种主要营养物质的基础上,
有时还需要加入维生素等特殊的营养物质,并要调节培养基的_____使之满足微生物生长的需要。
固体
牛肉膏、蛋白胨
pH
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(2)获得纯净的微生物培养物的前提是对培养基进行______。
(3)该培养基______(填“能”或“不能”)用于土壤中纤维素分解菌的筛选,原因是_____________________________________________________
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灭菌
不能
该培养基不含纤维素,且含有提供碳源的牛肉膏、蛋白胨,
大多数细菌均能在该培养基上生长
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18.为了检测饮用水中是否含有某种微生物,配制的培养基的配方如下,请分析回答下列问题(注:伊红—亚甲蓝是由两种染色剂组成的细胞染料):
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蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 伊红 亚甲蓝 蒸馏水
10 g 5 g 5 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
将培养基pH调至7.2 (1)该培养基所含碳源有_____________________,其功能是____________
____________________________________________。
乳糖、蔗糖、蛋白胨
构成微生物
体的重要成分,也是微生物生命活动的能量来源
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(2)该培养基所含氮源有________,其功能是________________________
__________________。
(3)该培养基除含碳源、氮源外,还有微生物需要的营养物质是________
______________。
(4)该细菌在同化作用上的代谢类型是_____型。
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蛋白胨
和核酸的主要元素
构成微生物细胞中蛋白质
水、无机
盐(或K2HPO4)
异养
解析 根据该培养基的配方分析可知,该培养基用乳糖和蔗糖作碳源,用于培养异养微生物。含C、H、O、N的蛋白胨既是碳源,又是氮源。培养微生物需碳源、氮源、水、无机盐等营养物质。
本课结束