微生物的实验室培养导读单

《2.1 微生物的实验室培养》问题导读--评价单
班级： 组名： 姓名： 时间：2013._2_
学习要求：
1. 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术。
2. 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象。
3. 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。
教学重难点：
无菌技术的操作
导读流程：（请同学们充分阅读课本内容，回答以下问题。）
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为
培养基和 培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：
1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。
2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。
2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？
〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？
〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持
min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止
实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗倒平板的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？
二、纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。
④将冷却的接种环伸入到 。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。
⑧将平板 培养。
〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？
最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
　系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
六、课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。
知识小结：
若有疑惑，请大胆地与同学、老师广泛地沟通交流。
自我评价：（ ）A.完全理解 小组长评价：（ ）A.掌握到位
B.不太理解 B.掌握不太到位
学科长评价 ：( ) 优 良 中