微生物的实验室培养 同步练习
目标聚焦
1．知道培养基的种类、营养要素、配制原则
2．掌握消毒灭菌的原理和方法
3．尝试用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养
精例点拨
【例1】关微生物营养物质的叙述中，正确的是
A．是碳源的物质不可能同时是氮源B．凡碳源都提供能量
C．除水以外的无机物只提供无机盐D．无机氮源也能提供能量
【解析】不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D
【例２】培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是 ( )
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌
⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
【解析】培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案：A。
【例３】关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是 ( )
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯
C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置 -
【解析】制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒；牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸；待培养基冷却至50℃，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态；平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A。
【例４】为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制了如下表培养基配方：
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
伊红 Y
荚蓝
蒸馏水
PH
10g
5g
5g
2g
0．4g
0.065 g
100 mL
7．2
(1)该培养基所含的碳源有 ，其功能是 。
(2)该培养基所含的氮源有 ，其功能是 。
(3)该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是 。
(4)该细菌的同化作用类型是 。
(5)该培养基可用来鉴别哪种细菌?( )
A．霉菌 B．大肠杆菌
C．母菌 D．乳酸菌
【解析】对于异养型微生物来说，含C、H、O、N的物质，既是碳源，也是氮源。各类微生物的最适PH不同，酵母菌、霉菌适宜在偏酸(pH为4．5～6．0)环境中生长。伊红、美蓝是鉴别大肠杆菌的物质。答案，(1)乳糖、蔗糖、蛋白胨；主要用于构成细胞物质和代谢产物。(2)蛋白胨；主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。(3)水、无机盐。(4)异养型。(5)B。
【例５】．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
A．防止杂菌污染 B．消灭杂菌
C．培养基和发酵设备都必须灭菌 D．灭菌必须在接种前
【解析】灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。
答案：B
基础过关
1．关于微生物的营养，说法正确的是( )
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源
Ｂ．除水以外的无机物仅提供无机盐
C．凡是碳源都能提供能量
D．无机氮源也能提供能量
２．关于配置培养液的叙述正确的是
Ａ．制作固体培养基必须加入琼脂
Ｂ．发酵工程一般用半固体培养基
Ｃ．培养自生固氮菌不需要氮源
Ｄ．加入青霉素可得到放线菌
３．下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表
成分
千肉膏
蛋白胨
NaCl
H2O
含量
0．5g
1g
0．5g
100mL
其中的牛肉膏和蛋白胨能够提供 ( )
Ａ．碳源 B．生长因子
Ｃ．氮源 D．包括ABC
４．获得纯净培养物的关键是 ( )
Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基等进行灭菌
Ｂ．接种纯种细菌
Ｃ．适宜环境条件下培养
Ｄ．防止外来杂菌的入侵
５．下列操作与灭菌无关的是 ( )
Ａ．接种前用火焰灼烧接种环
Ｂ．接种前用酒精擦拭双手
Ｃ．将平板倒置，放入培养箱中培养
Ｄ．接种要在酒精灯的火焰旁完成
６．将接种后的培养基和一个未接种的培养良人37℃恒温箱的目的是 ( )
Ａ．对比观察培养基有没有被微生物利用
Ｂ．第比分析培养基上是否生有杂菌
Ｃ．没必要放入媒介中的培养基
Ｄ．为了下次接种是在使用
７．菌种保存应控制的条件是
①湿度 ②低温 ③烦躁 ④有光 ⑤隔绝空气 ⑥适当有氧
Ａ．①④⑥ Ｂ．②③⑥
Ｃ．①⑤⑥ Ｄ．②③⑤
８．外科手术器械和罐头食品的消毒，都要以能够杀死什么为标准？
Ａ．球菌 Ｂ．杆菌
Ｃ．螺旋菌 Ｄ．芽孢
９．有关平板划线的正确操作是
Ａ．是用已灭菌的接种环、培养皿、操作过程中不再杀菌
Ｂ．打开含菌种的试管需通过火燃灭菌取出菌种后要马上赛上棉塞
Ｃ．将沾有菌种的接种环迅速深入平板内，划三至五条平行线即可
Ｄ．最后将平版倒置放入培养箱中培养
10．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 ( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
Ｃ．适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
11．若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起，采用下列哪组培养基可将它们分离? ( )
A．加食盐的培养基和蛋白胨培养基
B．伊红一美蓝培养基和无氮培养基
C．加青霉素的培养基和液体培养基
D．斜面培养基和液体培养基
12．细菌培养实验中，在试管口加的棉塞，既要能防止杂菌的污染，又要保证通气良好。图中正确的棉塞位置是 ( )
13．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，还可能引起食物中毒。下述实验结束后的做法错误的是 ( )
A．对接种环进行灼烧处理
Ｂ．带菌培养基须经加热后才能倒掉
C．带菌培养基须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉
D．接种后双手须经肥皂洗净，再用75％的酒精棉球擦拭
14．下表所示为某微生物培养基配方，请分析回答：
成分
含量
NaNO3
3g
K2HPO4
1s
KCl
0.5g
MgS04·7H2O
0.5
FeSO4
0.01g
(CH2O)
30g
H20
100mL
青霉素
0.1万单位
(1)根据物理性质，该培养基属于培养基；根据用途划分则属于 ，培养基。
(2)根据培养基原料，所培养的微生物的代谢类型是 ，培养的微生物可能是 。
(3)该培养基中的碳源是 。
(4)如果要鉴别自来水中的大肠杆菌是否超标，至少要加入 。 和 ，除去 。
成分
牛肉膏
蛋白胨
NaCI
H2O
含量
0．5g
18
0．5g
100mL
15．下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表，据表回答相关问题：
蛋白胨在培养基中的主要作用是 。
(2)若用表中成分材料配制观察金黄色葡萄球菌菌落状况的培养基，还需要添加的成分是 。
(3)培养基配制好时，分装前应进行的工作程序是 。
(4)从配制培养基直至接种培养，所采用的预防杂菌感染的方法是 。
(5)对培养基进行搁置斜面处理的目的是
。
能力拓展
1．下表中给出某培养基的配方。请回答
牛肉膏
蛋白胨
NaCI
琼脂
Ｈ2Ｏ
0．5g
1g
0．5g
2g
100mL
(1)蛋白胨能提供的营养素有 等。琼脂的作用为 。
(2)在各种成分溶化分装前，必须进行的重要步骤是 。
(3)此培养基一般不适用于工业生产，工业生产常用 培养基。
(4)此培养基能培养的细菌的同化作用类型是 。
(5)若要分离出金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入 。
(6)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是 和 。
若在此培养基中加入 和 ，可直接鉴定大肠杆菌，其菌落特征是
。
2．某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答：
(1)对买回来的菌种进行扩大培养。首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料： 、 、 、
、 ，其中提供氮源的主要是
；提供碳源的主要物质是 ；
琼脂的作用是 ，他不提供营养。
(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的 。在烧杯中加入琼脂后要不停地 ，防止 。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，培养基体积约占试管长度的 。加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌，压力是 kPa，温度是 ，时间 。灭菌完毕后拔掉电源。待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基此试管应 。
(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入 。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排除后将锅密闭。
(5)从一支试管向另一支试管接种时，接种环要在酒精灯 (“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环 后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放人 ℃冰箱中保藏。
答案
基础过关
1．C 2.A 3．D 4．D 5．C 6．B 7．D 8．D 9．D
10．D 11．B 12．A 13．B
14．(1)液体 选择 (2)异养型 醋酸菌或霉菌 (3)(CH2O) (4)琼脂 伊红一美蓝青霉素
15．(1)提供氮源和生长因子 (2)琼脂(3)调 PH (4)灭菌 (5)接种时增加菌种与培养基的接触面积，利于微生物培养
能力拓展
1．(1)碳源 氮源 使培养基凝固 (2)调节PH (3)液体 (4)异养型 (5)高浓度的NaCl (6)平板划线法 稀释涂布平板法 伊红 美蓝 带金属光泽深紫色菌落
2．(1)牛肉膏 蛋白胨 水 无机盐 琼脂蛋白胨 牛肉膏 凝固剂 (2)比例 搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂 (3)1／3 高压蒸汽灭菌锅 100 121℃ 15—30min 废弃 (4)适量水 (5)外 冷却 4
《2.1微生物的实验室培养》问题解决--评价单
设计人：张生盛 审核人：白志梅 序号：4
班级： 组名： 姓名： 时间：2013._2_
一、选择题
1．下列哪项不是哺乳动物克隆实验的缺点 ( )
A．重构胚胎成功率低 B．流产率高 C．胎儿畸形率高 D．克隆后的胚胎着床率高
2．下列选项是科学家对自身克隆结果的预测及理由，其中正确的是 ( )
A．克隆产物是科学家，因为克隆是形成完全一样的产品
B．克隆产物是普通人，因为科学知识是后天获得的，而非遗传
C．只能克隆部分器官，不可能克隆完整的人，因为克隆技术有限
D．克隆产物与该科学家完全一样，因为遗传物质完全来自科学家
3．在进行器官移植时，如果发现患者细胞表面的蛋白质类物质与移植器官不同，则会引起排斥反应。所以最好选用( )的干细胞培育的器官。
A．患者本人 B．配偶 C．子女 D．父母
4．提供骨髓中造血干细胞不会对试管婴儿造成损伤，其原因是 ( )
A．造血干细胞具有高度分化的特性 B．造血干细胞无分裂能力
C．造血干细胞具有很强的再生能力 D．造血干细胞完成功能后不再发挥作用
5．所谓的“设计试管婴儿”比一般所说的试管婴儿要多一步骤，是哪一步 ( )
A．体外受精 B．胚胎移植 C．基因检测 D．细胞核移植
6．基因不是疾病的唯一决定者，哪项不是其原因 ( )
A．由遗传因素和环境共同决定 B．个别病症是由隐性基因控制
C．与良好的生活习惯有关 D．有许多种疾病是多基因病
7．下列关于基因检测疾病的叙述，错误的是 ( )
A．可以用测定基因表达产物一一蛋白质的方法达到基因检测的目的
B．生物芯片的广泛使用，使基因及其表达产物的检测更加快速简便
C．基因检测疾病带来的负面影响主要是基因歧视
D．基因检测疾病时，一次只能检测一种疾病，十分麻烦
8．2003年第九期(科学大观园)报道，世界第一匹克隆马一“普罗梅泰亚”于今年5月28日在意大利克雷莫纳市繁殖技术与家畜饲养实验室顺利诞生。“普罗梅泰亚”的诞生在科技界所引起的轰动不亚于当年克隆羊“多利”的出现。这主要是因为，这匹克隆马是世界上首例哺乳动物生下自己的克隆体。自体克隆马的顺利诞生预示的意义不包括下列哪一项 ( )
A．挽救狮虎通过杂交生产的狮虎兽
B．挽救大熊猫这一濒临灭绝的珍奇动物
C．保留和扩大某种哺乳动物种群中出现的具有优良性状的变异类型
D．使动物园中的雌长颈鹿在缺少配偶的情况下，繁殖后代
9．下列有关生物伦理的说法不正确的是（ ）
A．生命科学的发展必须接受生物伦理的规范和制约
B．实施生命科学研究必须遵循：自主、不伤害、善行和公正的原则
C．关注生物伦理问题，就是完全限制生命科学的发展
D．对于生物技术应科学地控制，合理地使用，使它的发展对人类最有益
10．下列说法中错误的是（ ）
A．克隆人的诞生在理论和技术上已成为可能 B．克隆人的流产率和畸形率会较高
C．基因身份证会给人类带来负面影响 D．试管婴儿技术不能控制婴儿的性别
11．2004年7月9日，法国议会投票通过了生物伦理法案，该法案从立法上禁止在法国进行生殖克隆和治疗性克隆。新法案明文禁止从事治疗性克隆研究的原因是（ ）
A．治疗性克隆带来严重后果 B．治疗性克隆的研究必然会过渡到生殖性克隆
C．治疗性克隆严重违反生物伦理 D．治疗性克隆就是生殖性克隆
12．下列属于基因检测技术的应用的是 （ ）
①侦查罪犯 ②预防遗传病 ③基因诊断遗传病 ④体外受精技术
A．①②③ B．①②④ C．②③④ D．①②③④
13．供体器官的短缺和排斥是器官移植的重要问题，而治疗性克隆能最终解决这些问题。下图是治疗性克隆的过程图解。
（1）正常情况下，去核的卵细胞取自于女性卵巢排卵后在输卵管中 期的卵母细胞。
（2）重组细胞发育的过程中，细胞开始分化发生在 期。
（3）治疔性克隆所用的技术名称是 ，要想获得基因型完全相同的两个胚胎，可采用
技术。
（4）已知患者是红绿色盲的女性，图中提供卵细胞的为完全正常的年轻女性。移植器官后，该患者所生育子代红绿色盲的情况是 。
14．据报载，深圳市发现一庞大的“眼耳肾综合症”家系：有资料可查的血缘人口总共45人，从曾祖父到曾孙一共4代，45人中总共有15人患有“眼耳肾综合症”，其中4人已因尿毒症去世。现存的11名患者均已出现一种或数种症状，其中年龄最小的只有7岁!研究人员调查还发现：一是该病临床表现为“重男轻女”，即：男性患者症状较重，女性患者症状较轻；二是女性患者多于男性患者：三是遗传倾向有明显的选择性，即：母亲患病可以遗传给女儿也可以遗传给儿子，而父亲患病则只遗传给女儿不遗传给儿子。
(1)“眼耳肾综合症”最可能的遗传方式是_________________，判断理由是_______________
___________________________________________________________________________。
(2)家族中的史性怀孕后，可以通过基因检测确定胎儿是否存在遗传性疾病，一旦检测获得了致病基因，可以采取措施终止妊娠，避免这个家庭再次生出有遗传病的孩子。你的主要依据是什么?
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________。
由于基因检测需要较高的技术，你能否从性别鉴定角度给予咨询指导? ___________________
________________________________________________________________________________。
自我评价 小组长评价 学科长评价
A.全会做的 A.掌握的 A.完善好的
B.粗心做错的 B.待掌握的 B.待完善的
C.全不会做的
《4.2关注生物技术的伦理问题》问题解决--评价单答案
1D 2B 3A 4C 5C 6B 7D 8A 9C 10D 11B 12A
13（1）MⅡ中 （2）囊胚 （3）核移植技术 胚胎分割 （4）男孩为红绿色盲，女孩不一定
14．(1)伴X显性遗传；该病的家系中患病率高，患者中女性多于男性，男性患者只遗传给女儿不遗传给儿子
(2)某个个体体细胞中只要含有显性基因，就能表现出显性性状,即患“眼耳肾综合症”。
当父母均正常时，不必担心后代会患病；当父亲患病时，若是女儿则应该终止妊娠；当母亲患病时，则应进行基因检测。
《4.2关注生物技术的伦理问题》问题解决--评价单答案
1D 2B 3A 4C 5C 6B 7D 8A 9C 10D 11B 12A
13（1）MⅡ中 （2）囊胚 （3）核移植技术 胚胎分割 （4）男孩为红绿色盲，女孩不一定
14．(1)伴X显性遗传；该病的家系中患病率高，患者中女性多于男性，男性患者只遗传给女儿不遗传给儿子
(2)某个个体体细胞中只要含有显性基因，就能表现出显性性状,即患“眼耳肾综合症”。
当父母均正常时，不必担心后代会患病；当父亲患病时，若是女儿则应该终止妊娠；当母亲患病时，则应进行基因检测。
《4.2关注生物技术的伦理问题》问题解决--评价单答案
1D 2B 3A 4C 5C 6B 7D 8A 9C 10D 11B 12A
13（1）MⅡ中 （2）囊胚 （3）核移植技术 胚胎分割 （4）男孩为红绿色盲，女孩不一定
14．(1)伴X显性遗传；该病的家系中患病率高，患者中女性多于男性，男性患者只遗传给女儿不遗传给儿子
(2)某个个体体细胞中只要含有显性基因，就能表现出显性性状,即患“眼耳肾综合症”。
当父母均正常时，不必担心后代会患病；当父亲患病时，若是女儿则应该终止妊娠；当母亲患病时，则应进行基因检测。
《4.2关注生物技术的伦理问题》问题解决--评价单答案
1D 2B 3A 4C 5C 6B 7D 8A 9C 10D 11B 12A
13（1）MⅡ中 （2）囊胚 （3）核移植技术 胚胎分割 （4）男孩为红绿色盲，女孩不一定
14．(1)伴X显性遗传；该病的家系中患病率高，患者中女性多于男性，男性患者只遗传给女儿不遗传给儿子
(2)某个个体体细胞中只要含有显性基因，就能表现出显性性状,即患“眼耳肾综合症”。
当父母均正常时，不必担心后代会患病；当父亲患病时，若是女儿则应该终止妊娠；当母亲患病时，则应进行基因检测。
课题1微生物的实验室培养
【课程目标】
了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。
【课题重点】
无菌技术的操作
【课题难点】
无菌技术的操作
基础知识
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
【补充2】培养基包括哪些营养成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。
二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：
1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。
2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。
2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？
〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？
〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止
实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和
两个阶段进行。
一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：
、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？
溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗倒平板的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？
二、纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。④将冷却的接种环伸入到 。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。
⑧将平板 培养。
〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？
最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
〖思考12〗系列稀释操作的注意事项是什么？
〖思考13〗涂布平板操作的步骤是什么？
结果分析与评价
1 培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？
2 在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？
3 培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？
〖思考14〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？
〖思考15〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？
六、课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。
◇◇知识拓展
3．消毒与灭菌的区别
消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。例如一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法，等等。
灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。例如各种高温灭菌措施等。
4．微生物的营养类型
异养微生物生命活动所需要的能源，主要靠有机物氧化分解释放能量，碳源是异养微生物的主要能源物质，碳源对异养微生物来说，不仅可为机体提供构成细胞物质，而且为机体提供完成整个生理活动所需能量。某些异养微生物也可以光能作为能源，例如红螺菌，在环境中没有有机物的条件下，它可以利用光能，把环境中的CO2合成为自身有机物；在有有机物存在的条件下，可以利用有机物进行生长，其代谢类型为兼性营养型细菌。依微生物生长所需碳源的性质以及所需能源，将微生物的营养类型归纳如下：
各类微生物所需碳源和能源的比较
在生产实践和社会生活中，我们可以利用某些微生物碳源的特殊性来解决环境污染、粮食危机等问题。我们可以利用某些细菌、放线菌、酵母菌以石油作为碳源的原理，消除石油污染。运用某些细菌可以分解、利用氰化物、酚等有毒物质的原理处理有毒物质。研究开发以纤维素、石油、CO2等作为碳源和能源的工业微生物，缓解粮食危机。
自养微生物和异养微生物类型的划分，主要依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一碳源，而不是决定于氮源。例如异养微生物最常用的氮源是无机氮源中的铵盐和硝酸盐。
【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。
【补充】培养基的配制原则：
①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。
③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
知识拓展题
为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制如下培养基：
成分
乳糖
蔗糖
磷酸氢钾
伊红Y
美蓝
蒸馏水
PH
含量
5g
5g
2g
0.4g
0.065g
1000g
7.2
（1）该培养基所含的碳源是-----------------，其功能是---------------------------。
（2）该培养基所含的氮源是-----------------，其功能是---------------------------。
（3）该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是---------------------------。
（4）该细菌在同化作用上的代谢类型是---------------
（5）该培养基用来鉴别的细菌是（ ）A霉菌 B大肠杆菌 C 酵母菌 D 乳酸菌
基础自测
一、选择题、
1．下列有关培养基的叙述正确的是……( )
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌
5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是…( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．再放在适宜条件下培养 D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
10．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是……………( )
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染
C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用
11关微生物营养物质的叙述中，正确的是
A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
12．作为自养生物唯一碳源的是（ ）
A糖类 B石油 C 二氧化碳 D 花生粉饼
13．大肠杆菌的代谢类型是（ ）
A 自养需氧 B异氧严格厌氧 C异养需氧 D 异养兼性厌氧
15．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）
A含碳有机物 B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质
16．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）
A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染
C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基
二、非选择题
20．19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。
(1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么?
(2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止
21．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?
22．在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
20(1)导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。(2)杂菌入侵，获得纯净的培养物。
21．不能 因空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
22．因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，
能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，这样最终就能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
参考答案
基础知识
一、1.营养物质 生长繁殖 液体 固体
2水.碳源 氮源 无机盐 PH 特殊营养物质 氧气
3维生素，酸性，中性或微碱性，无氧
〖思考1〗:C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。
二 （一）杂菌 1.空间 衣着 手，清洁和消毒 2.器皿 接种用具，培养基，灭菌 3. 酒精灯火焰 4.周围的物品
（二）1.略 巴氏消 酒精 2.略 灼烧 干热 高压蒸气
〖思考2〗:防止感染实验操作者 。
〖思考3〗避免妨碍热空气流通。
〖思考4〗有利于锅内温度升高，100k Pa，121℃，15～30，零，容器中的液体暴沸，
实验操作、
一1计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
思考5：防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
〖思考6〗糖 维生素 和 有机氮
2：50，锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开一条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置
〖思考7〗消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。
〖思考8〗防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
〖思考9〗不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
〖思考10〗增大接种面积，保持通气并防止杂菌感染。
答案。二、平板划线 .稀释涂布平板
1通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，①接种环，烧红。③，消灭试管口杂菌。
④菌液中取出一环菌种。⑥，伸入平板内划3～5条平行线，⑦，第一区划线末端开始向第二区域内，，第五区的划线与第一区划线，⑧，倒置放在培养箱中
〖思考11〗消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种；防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。
2不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，
①，9mL，灭菌。②，1。③，1
〖思考12〗操作中试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。整个操作过程中使用了1支移液
管
结果分析与评价
1对照，培养基灭菌不彻底。2呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。
〖思考14〗有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。
〖思考15〗临时保藏法和甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。
【例1】解析：此题考查学生对微生物的营养和能源的理解。对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D
启示：含C、H、o、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；无机物也可提供碳源、氮源和能源。
【例2】 解析：此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。 答案：C
启示：微生物培养过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，分别又有各种不同的方法。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
【例3】解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50℃，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A
启示：固体培养基的制作步骤是：“计算→称量→溶化→灭菌→倒平板” 顺序不能颠倒。并且在制作过程特别是倒平板时彻底做到“无菌”。
【例4】解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B
《2.1 微生物的实验室培养》问题导读--评价单
设计人：张生盛 审核人：白志梅 序号：4
班级： 组名： 姓名： 时间：2013._2_
学习要求：
1. 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术。
2. 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象。
3. 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。
教学重难点：
无菌技术的操作
导读流程：（请同学们充分阅读课本内容，回答以下问题。）
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为
培养基和 培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：
1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。
2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。
2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？
〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？
〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持
min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止
实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗倒平板的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？
二、纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。
④将冷却的接种环伸入到 。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。
⑧将平板 培养。
〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？
最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
六、课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。
知识小结：
若有疑惑，请大胆地与同学、老师广泛地沟通交流。
自我评价：（ ）A.完全理解 小组长评价：（ ）A.掌握到位
B.不太理解 B.掌握不太到位
学科长评价 ：( ) 优 良 中
《2.1 微生物的实验室培养》问题导读--评价单
设计人：张生盛 审核人：白志梅 序号：4
班级： 组名： 姓名： 时间：2013._2_
学习要求：
1. 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术。
2. 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象。
3. 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。
教学重难点：
无菌技术的操作
导读流程：（请同学们充分阅读课本内容，回答以下问题。）
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为
培养基和 培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？21世纪教育网
二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：[来源:21世纪教育网]
1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。
2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。
2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？
〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？
〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持
min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止
实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗倒平板的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？
二、纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。
④将冷却的接种环伸入到 。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。
⑧将平板 培养。
〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？
最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
六、课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。
知识小结：
若有疑惑，请大胆地与同学、老师广泛地沟通交流。
自我评价：（ ）A.完全理解 小组长评价：（ ）A.掌握到位
B.不太理解 B.掌握不太到位
学科长评价 ：( ) 优 良 中
