课件88张PPT。课题1 微生物的实验室培养专题2 :微生物的培养与应用微生物包括原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、基础知识： (一)微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．病毒：动物病毒、植物病毒、细菌病毒病毒 SARS冠状病毒、 禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖：常见的三种细菌典型形态
球菌、杆菌、弧菌原核生物：一藻二菌三体细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。
自养菌:
异养菌:
腐生菌、寄生菌光能自养型:光合细菌
化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌一、细菌 基本结构：
特殊结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等①细胞壁：肽聚糖；与细菌的致病能力有关；溶菌酶作用对象。②荚膜：细胞壁外多糖类物质——或称为粘液层；荚膜与致病菌的致病力有关。（如S型肺炎双球菌）③鞭毛：主要用于运动，数目多少不一。1.细菌的结构④纤毛：比鞭毛短、直、细，主要用于细菌之间的粘附或附着于宿主细胞。菌毛：数量少，参与细菌的接合，也是噬菌体入侵的受体。⑤质粒：环状DNA小分子，通过接合作用，质粒可以在不同细胞之间迁移，使质粒上的耐药性基因可以在细菌之间传播，质粒可用作基因工程的载体。⑥细胞膜、⑦拟核、⑧核糖体 3.细菌的生殖方式：2.细菌的形态：4.细菌的休眠体——芽孢杆菌、球菌、弧菌、
螺旋菌分裂生殖 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢——休眠体，不是繁殖体孢子——生殖细胞5.细菌的群体特征——由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体叫菌落。
菌落是鉴定菌种的重
要依据。菌落 菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。
·菌苔：固体培养基表面众多菌落连成一片，呈片状，这就是菌苔。
·平板：即培养平板，指盛有固体培养基的平皿
各种类型的细菌菌落二、放线菌1、结构：
单细胞原核
分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）如：链霉素、土霉素、四环素、
氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，
其中2/3是由放线菌产生的。应用:三、真菌（真核细胞）1.单细胞真菌——酵母菌：酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）三、真菌（真核细胞）2.丝状真菌——霉菌直立菌丝 营养菌丝腐生生活各种类型的霉菌菌落酵母菌和霉菌青霉3.大型真菌各种类型的放线菌菌落各种类型的酵母菌菌落 四大类微生物区分要点
菌落形态：
1.若菌落表面湿润
薄而小——细菌
厚而大——酵母菌
2.若菌落表面干燥
密而小——放线菌
松而大——霉菌 细菌：湿润，粘稠，易挑起
放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素
酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，
比细菌的菌落大而厚.
霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛
网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，
不易挑起。 不同微生物菌落的特点同类微生物的不同物种，菌落的特点也不相同。原生生物界：藻类、原生动物类、原生菌类草履虫微生物的种类有细胞结构没有细胞结构原核生物
（原核细胞构成）真核微生物
（真核细胞构成）真菌
原生生物病毒微生物的共同特点 （小、多、快、强、广）（1）体积小，面积大 （细胞以微米、纳米来计算）?
（2）吸收多，转化快
（3）生长旺，繁殖快 如大肠杆菌
（4）适应强，易变异 如感冒病毒
（5）分布广，种类多（二）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。按成分分
按功能分
按物理状态分?培养基类型合成培养基
天然培养基基本培养基
选择培养基
鉴别培养基固体培养基
液体培养基
半固体培养基分类： 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 A.合成培养基:天然培养基与合成培养基血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）
②多种金属离子；
③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原蛋白等。
⑤各种生长因子
⑥转移蛋白
⑦不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。————半合成培养基 天然培养基:有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
优点：营养成分丰富，培养效果好
缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染。B.天然培养基： A.鉴别培养基
利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如 伊红-美蓝培养基鉴别水中大肠杆菌(带金属光泽深紫色菌落）；又如：淀粉培养基可通过培养基上产生淀粉水解圈，鉴别产淀粉酶菌株 鉴别培养基与选择培养基B.选择培养基
在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于对所选择的细菌种类的生长。如：利用以纤维素或石蜡油为唯一碳源的选择培养基，可分离出分解纤维素或石蜡油的微生物。又如：加入青霉素、四环素或链霉素的选择培养基，可以抑制细菌和放线菌的生长，而将酵母菌和霉菌分离出来。 鉴别培养基与选择培养基 选择培养基加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:
分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加有机物的培养基:
分离自养型微生物A.液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基与液体培养基B固体培养基：菌落，菌苔B.半固体培养基：无动力 有动力(弥散)(是否运动) 培养基的用途液体培养基：
固体培养基：
半固体培养基：
天然培养基：
合成培养基：
选择培养基：
鉴别培养基：增菌、工业生产分离、鉴定、计数、保藏观察运动、分类、计数工业生产分类、鉴定分离出特定微生物鉴别不同种类的微生物培养基的成分
⑴各种培养基的共有成分
①水、②碳源、③氮源、 ④无机盐等营养物质。 ⑵不同微生物所需要的特殊成分
微生物生长对pH、特殊营养物质,以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) （三）无菌技术1.无菌技术的概念 无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。 （１）消毒定义：
利用较为温和的化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。
分为高程度消毒 、中程度消毒、低程度消毒三种方式。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 以强烈的化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min
或80 ℃ 下煮15min
3、化学药剂消毒法:用70%酒精、新
洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源
4、紫外线消毒
……(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌(2)灭菌的方法：2、干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：
100kPa、121 ℃下维持15-30min. 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。无菌技术微生物实验室培养的基本操作程序1、培养基的配制
2、器具、培养基的灭菌
3、倒平板
4、微生物接种
5、恒温箱中培养
6、菌种的保存1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。旁栏思考2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1．计算、称量
2．溶化
3．调pH： pH7.6
4．过滤：这一步可以省去。
5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装锥形瓶的量以不超过锥形瓶容积的一半为宜。
6．加塞
7．包扎操作
步骤 8．灭菌:
将100ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
9．倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.
10．无菌检查：
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
也可以避免空气中杂菌对培养基的污染.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌接种方法有：
平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术： 平板划线的操作方法
交叉划线法
连续划线法 51234平板划线的操作问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法把菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同稀释度
的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。在
稀释度大的菌液里,就会出现单个菌体形成的
菌落问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：甘油冷冻管藏法当培养基冷却至50 ℃左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。【典例解析】例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量答案：D 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：
（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
如不想浪费此培养基，可再加入 。自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。
（4）表中营养成分共有 类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。
（6）右表中各成分重量确定的原则是 。
（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分 。固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 课件89张PPT。课题1 微生物的实验室培养专题2 :微生物的培养与应用微生物包括哪五类：病毒
细菌
放线菌
真菌
原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 原核生物界 原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识细菌的外形与大小细菌：单细胞不分枝的原核微生物。
细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察图1-1 常见的三种细菌典型形态
A.球菌 B.杆菌 C.弧菌细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。细菌的构造图1-3 细菌的结构*细胞壁结构特点：坚韧且有弹性
细胞壁有哪些功能？
①固定细胞外形； ②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞； ④使细胞具有致病性及对
噬菌体的敏感性。伤寒杆菌细胞壁中含毒素芽孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异 放线菌1、结构：
单细胞原核
分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
链霉素、土霉素、四环素、
氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是
由放线菌产生的 应用:病毒的结构病毒 SARS病毒、 禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）2、病毒的增殖：真菌如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构酵母菌和霉菌青霉生殖直立菌丝 营养菌丝腐生生活孢子生殖细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。
自养菌（autotroph）
异养菌（heterotroph）
腐生菌
寄生菌 大部分病原菌
1.何为培养基？3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。阅读教材P14~15相关内容，回答以下问题： 2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？（一）培养基一、基础知识：（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。
（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。
（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容) 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 液体培养基表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔半固体培养基无动力 有动力(弥散)(是否运动？) 4.培养基的用途液体培养基：增菌
固体培养基：纯化，增菌
半固体培养基：动力检测，保种1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。（二）无菌技术1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 （１）消毒定义：
利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。① 煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
② 巴氏消毒法：70～75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min
③ 化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;用氯气消毒水源等
④ 紫外线消毒(1)消毒的方法3.常用的消毒与灭菌的方法①灼烧灭菌
②干热灭菌：160～170 ℃下加热1～2h。
③高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15～30min.(2)灭菌的方法 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 无菌技术1．关于微生物营养物质的叙述中，正确的是
A、是碳源的物质不可能同时是氮源
B、凡碳源都提供能量
C、除水以外的无机物只提供无机盐
D、无机氮源也能提供能量答案：D课堂练习2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
A、防止杂菌污染
B、消灭杂菌
C、培养基和发酵设备都必须灭菌
D、灭菌必须在接种前答案：B3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：
（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
如不想浪费此培养基，可再加入 。自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加（CH2O），
该培养基可用于培养 。
（4）表中营养成分共有 类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是 。
（6）右表中各成分重量确定的原则是 。
（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考3.微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌
2、培养基的配制
3、培养基的灭菌
4、倒平板
5、微生物接种
6、恒温箱中培养
7、菌种的保存四、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)1．计算、称量
2．溶化
3．调pH： pH7．6
4．过滤：这一步可以省去。
5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
6．加塞
7．包扎操作步骤8．灭菌:
将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。倒平板技术1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234倒平板技术12343.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~ 20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 9．倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.
10．无菌检查：
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌接种方法有：
平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法 1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：
移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处. 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存1.临时保藏：
接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。
2.长期保存：
甘油冷冻管藏法四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。本课题知识小结:课件42张PPT。专题2
微生物的培养与应用课题1
微生物的实验室培养㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：一.微生物基础知识1.细菌的形态细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）2.细菌的繁殖3.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态4.病毒的结构:由核酸和蛋白质构成。病毒的结构吸附注入合成释放组装5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五个阶段，即：
吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6.病毒的营养方式：寄生微生物需要的五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要的营养物质及功能1.碳源 2.氮源 3.生长因子 4.无机盐 5.水：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3等②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等①构成细胞物质和一些代谢产物
②异养微生物的能源⑴.概念⑵.来源：⑶.作用：1.微生物的碳源①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.来源：⑶.作用：3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。㈢.培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。1.培养基的类型和用途2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容)3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长back半固体培养基：(是否运动) 无动力有动力(弥散)固体培养基：菌落分离导入了目的基因的受体细胞几种选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基back血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）
②多种金属离子；
③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。
⑤各种生长因子
⑥转移蛋白
⑦不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。㈣.无菌技术1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。⑴消毒定义：
利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 ⑵灭菌的定义： 以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。
②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。
③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。
④紫外线消毒。⑴.消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法①灼烧灭菌
②干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。
③高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.⑵.灭菌的方法： 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
⑴培养细菌用的培养基与培养皿
⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管
⑶实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P15——16旁栏思考二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基1.计算
2.称量
3.溶化
4.灭菌:
将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。
5.倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。倒平板操作答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。㈡.纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物的接种的常用接种方法有：1.平板划线的操作方法平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.稀释涂布平板的操作方法答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？4.菌种的保存接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。3.微生物的恒温培养⑵.长期保存：甘油冷冻管藏法⑴.临时保藏：三.结果分析与评价 ㈠.培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
㈡.接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
㈢.是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。代谢类型光能无机营养(光能自养型)光能有机营养(光能异养型)化能无机营养(化能自养型)化能有机营养(化能异养型)光光无机物有机物无机物有机物无机物有机物二氧化碳二氧化碳及简单有机物二氧化碳有机物大多数已知细菌和全部真核微生物硝化细菌
氢细菌紫色非硫细菌蓝细菌
绿色硫细菌
藻类本课题知识小结:【典例解析】例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( )
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。D例2：下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( )
A.防止杂菌污染
B.消灭杂菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。B课件31张PPT。实验二 微生物的实验室培养营养条件----培养基人们按照微生物对营养物质的不同要求,配制出供其生长繁殖的营养基质.
培养基种类培养基的成分水
碳源
氮源
无机盐
生长因子其他条件配制培养基时还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的需求。
环境条件-----无菌技术----消毒煮沸消毒法、巴氏消毒法。
化学试剂消毒法：用酒精擦拭双手、氯气消毒水源等。
紫外线消毒法：紫外线照射接种室、接种箱或超净工作台。
无菌技术----灼烧灭菌将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属器具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底灭菌。
接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。
无菌技术----干热灭菌 将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2小时可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属器具等。
无菌技术----高压蒸汽灭菌 将灭菌物品放置高压蒸汽灭菌锅中，一般保持压力为100KPa、温度121℃条件下，维持15～30分钟。
思考---选择合适方法消毒或灭菌培养基和培养皿
玻棒、试管、烧瓶、吸管
实验者的双手
环境条件-----培养温度和时间纯化技术------菌落菌落：微生物在固体培养基表面生长可形成菌落。
单菌落：一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
获得单菌落就达到了纯化培养微生物的目的。
实验药品及器材 大肠杆菌菌液、液体培养基、固体培养基、酒精灯、70%酒精棉、高压灭菌锅、涂布器、接种环、恒温培养箱等。
配制培养基----液体培养基计算
称量
溶化（不加琼脂）
调pH
灭菌配制培养基----固体培养基计算
称量
溶化（添加琼脂）
调pH
灭菌
倒平板（50℃）
纯化大肠杆菌----平板划线法平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以得到单菌落。
纯化大肠杆菌----稀释涂布法稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。合适的稀释度菌液涂布后可在固体培养基上形成单菌落。
注意：取出涂布器时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器再灼烧灭菌。培养将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中,培养12小时和24小时后,分别观察并记录结果。
实验四 微生物数量的测定统计菌落数目估算样品中的活菌数量当稀释度足够高时，平板上的一个菌落来源于菌液中的一个活菌。
在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。
合适的稀释度测定土壤中细菌的数量，一般选用104、 105 和106倍的稀释液进行平板培养实验方法稀释涂布法
实验步骤土壤取样。
配制一系列梯度稀释土壤溶液
涂布在固体培养基上，按照不同微生物培养温度和时间进行培养。
统计菌落：每个梯度应多涂几个平板，取其平均值。并设置空白对照。
估算每克样品中的菌株数：
统计结果常常用菌落数目。所测得的菌落数目一般小于实际菌液中的活菌数。显微镜直接计数法：血球计数板法 统计结果：一般用活菌数表示。
滤膜法：测定饮用水中大肠杆菌的数目 已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红—美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈黑色。可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
实验结果及分析课件26张PPT。微生物的实验室培养 培养基的成分、配制、主要种类
及其应用 2．培养基的主要成分3.培养基的主要种类无菌技术1．灭菌和消毒微生物的纯化培养技术课件29张PPT。变酸？巴斯德法国，微生物学家失败的原因：发酵物中混入了杂菌课题1 微生物的实验室培养 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一.课题目标无菌技术的操作。二.课题重难点1.何为培养基？3.各种培养基的具体配方不同，但其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？自主学习: 2.按照物理形态、化学成分、用途分，培养基的种类有哪些？基础知识(一)培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(一)培养基1.概念：2.类型及应用：液体培养基
固体培养基据物理性质分天然培养基
合成培养基据化学成分分选择培养基
鉴别培养基据用途分2.类型及应用：(一)培养基常用于工业生产用于微生物的分离、鉴定、计数加琼脂常用于工业生产常用于分类、鉴定培养、分离出特定微生物鉴别不同种类的微生物在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成。液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长练习下列有关培养基的叙述正确的是（ ）
A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B.培养基只有两类：固体培养基和液体培养基
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌A要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（ ）
A.固体培养基
B.液体培养基
C.加入青霉素的培养基
D.加入高浓度食盐的培养基A练习碳源氮源无机盐 水(一)培养基3.营养要素还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基)牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml。
配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？(一)培养基3.营养要素：碳源、氮源、 磷酸盐和维生素氮源和维生素无机盐H、O对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源。即有些化合物作为营养要素成分时并非单一方面的作用。
并非所有微生物都需添加特殊营养物质碳源、氮源、生长因子的比较凡能提供所需碳元素的物质凡能提供所需氮元素的物质生长必不可少的微量有机物构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养生物的主要能源物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物酶、核酸等的组成成分分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物下列叙述错误的是（ ）
A.培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素
B.培养霉菌时需将培养基中的pH调至碱性
C.培养细菌时需将pH调至中性或微碱性
D.培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件B练习1、何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？
2、消毒和灭菌的区别？
3、常用的消毒方法有哪些？
4、常用的灭菌方法有哪些？
自主学习：(二)无菌技术1.获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵2.无菌技术包括：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；
用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；
为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。(二)无菌技术P15思考题练习下列操作与无菌技术无关的是（ ）
A.接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手
B.接种前用火焰烧灼接种针
C.培养基在50 ℃ 左右时搁置斜面
D.在酒精灯火焰旁边完成C消毒
使用较为温和的物理或化学方法，杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。3.消毒与灭菌灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭(1)定义1、煮沸消毒法:
100℃煮沸5-6min，日常生活中广泛应用
2、巴氏消毒法：
70-75 ℃煮30min或80℃煮15min，牛奶、啤酒等不宜进行高温消毒的
3、化学药剂消毒法:
75%酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等
4、紫外线消毒法：
用于接种室空气消毒
……(2)消毒的方法：3.消毒与灭菌1、灼烧灭菌：
用于微生物接种工具，如：接种环、接种针或其他金属用具等，及接种过程中试管口或锥形瓶口的灭菌
(3)灭菌的方法：3.消毒与灭菌2、干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
用于玻璃器皿、金属用具等能耐高温、需保持干燥的物品。
3、高压蒸气灭菌：
100kPa、121 ℃下维持
15-30min.
广泛用于培养基及多种器材、物品。(3)灭菌的方法：3.消毒与灭菌P16
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手答：（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考练习细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）
A.接种针、手、培养基
B.高压锅、手、接种针
C.培养基、手、接种针
D.培养基、手、高压锅C变形题培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（ ）
①化学消毒 ②灼烧灭菌
③干热灭菌 ④紫外线消毒
⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A. ⑤③②①④⑥ B. ①②③④⑤⑥
C. ⑥②③④①⑤ D. ③④②①⑥⑤A练习外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准（ ）
A.球菌 B.杆菌
C.弧菌 D.芽孢D练习微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（ ）
A.细菌的大小、形状、颜色
B.菌落的大小、形状、颜色
C.有无鞭毛
D.培养基的不同B关于微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ）
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量D练习规律：对异养微生物来说，含C、H、O、N的
化合物既是微生物的碳源，又是氮源；
有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；
无机物也可提供碳源、氮源和能源。课件21张PPT。到目前为止， 几十项诺贝尔生理或医学奖，化学奖 都与微生物学有关微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构：真核细胞细菌、蓝藻原核细胞有细胞结构课题1 微生物的实验室培养专题2 微生物的培养与应用1.提供营养和条件 2.防止污染一.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的：
碳源、氮源、能源。一.培养基：微生物生存的环境和营养物质2.特殊营养：维生素（如乳酸杆菌）、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：霉菌（pH调至酸性）细菌（pH调至中性或微碱性）厌氧生物需提供无氧条件。一.培养基：微生物生存的环境和营养物质4.培养基种类固体培养基液体培养基有无 凝固剂琼脂分离 鉴定工业 生产化学成分：物理性质：天然培养基 合成培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。5. 配制原则⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时接种环、接种针等 金属用具70~75℃、30min
80℃、15min100℃、5~6min较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，
100KPa、
121℃、15～30min二.无菌技术：防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手思考2.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程酒精灯旁操作超净工作台单个
或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、
颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三.菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，
防止瓶口的微生物污染培养基二.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6支试管，分别加入9ml无菌水101102103104105106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量 移液器⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂⑴平板划线法：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，
观察并记录三.菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：滴稀释菌液不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照
