课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段

课件24张PPT。 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段一、PCR的原理
二、PCR的反应过程
三、 PCR反应的实验操作
四、结果分析与评价一、PCR的原理（1、体内DNA的结构 ） T ADNA分子的-OH端为3/ ; 磷酸基团的末端为5/ 。一、PCR的原理（2、DNA体内复制相关知识）
DNA体内复制（示意）一、PCR的原理（3、 PCR的技术原理）时间（min）温度（℃）适温延伸高温变性低温复性重复1~3步30轮DNA双链单链变性（加热80-100℃ ）复性（缓慢冷却）利用DNA分子的热变性原理，通过控 制温度来控制双链的解旋与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。
体外DNA复制的条件： 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。
复制的方向：子链的5’ 端向 3’端延伸。PCR技术的原理总结二、PCR的反应过程 变性94oC5?引物15?引物2 5? 5?模板DNA25～30 次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。RT-PCRcDNA每个循环包括：变性 ——复性——延伸从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。PCR的反应过程总结体内DNA复制与PCR的技术区别：三、 PCR反应的实验操作（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备）
（2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液）
（3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合）
（4）将微量离心管放在离心机上（离心）
（5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应）四、结果分析与评价DNA 含量的测定：稀释→对照调零→
测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍注意事项：详见操作提示练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是
A 古生物学、刑侦破案、DNA序列测定
B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学
C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘
D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是
A 原理简单 B 原料易找
C TaqDNA聚合酶有耐热性
D 快速、高效、灵活、易于操作4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是
A 反复洗涤 B 不怕外源DNA污染
C 高压灭菌 D 在—20 ℃储存