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广西南宁市三十六中2021-2022学年高二下学期期中生物试卷
一、单选题
1．（2022高二下·南宁期中）下列有关果酒制作的叙述，错误的是（ ）
A．葡萄酒自然发酵过程中起主要作用的微生物最终来自于土壤
B．葡萄酒自然发酵过程的初期也需要有氧气
C．葡萄酒自然发酵的过程中，起作用的微生物不止有酵母菌一种
D．葡萄酒自然发酵的过程中，酒的风味形成只与葡萄糖分解成酒精有关
2．（2022高二下·南宁期中）醋酸菌是酿制果醋时起主要作用的菌种。下列有关说法正确的是（ ）
A．醋酸菌是一种好养性微生物，氧气在其线粒体内膜上被利用
B．醋酸菌细胞内能实现糖分→酒精→乙醛→醋酸的转化过程
C．醋酸菌对氧气含量特别敏感，在深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡
D．一般而言，在四川盆地，春季比夏季更适合醋酸菌的生长
3．（2022高二下·南宁期中）下列关于腐乳发酵的说法中，错误的是（ ）
A．豆腐发酵中起主要作用的微生物，具有成形的细胞核和各种细胞器
B．食用的腐乳表面的“皮”，主要是长在豆腐块表面的霉菌菌丝
C．制作好的腐乳中含有各种小分子的肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等，形成了其独特的风味
D．在实验室进行腐乳发酵时，若豆腐块表面出现黄色、油腻状，说明发酵成功了
4．（2022高二下·南宁期中）以下是腐乳制作的实验流程，请判断下列叙述正确的是（ ）
让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制
A．加盐是为了促进毛霉的生长
B．加料酒主要是为了灭菌，避免腐败变质
C．若前期发酵温度过低，腐乳的“皮”不易形成
D．加盐腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量
5．（2022高二下·南宁期中）酒变酸后表面的菌膜、腐乳外部致密的“皮”、泡菜坛表面的白膜分别是（ ）
A．酵母菌、乳酸菌、醋酸菌 B．醋酸菌、毛霉菌丝、酵母菌
C．醋酸菌、毛霉菌丝、毛霉菌 D．醋酸菌、毛霉菌丝、乳酸菌
6．（2022高二下·南宁期中）中国酸菜的制作历史悠久，不仅口感好，而且对人体有益。下列说法正确的是（ ）
A．真空包装的酸菜“胀袋”是因为乳酸菌大量繁殖导致
B．腌制过程中，酸菜坛中有机物的含量和种类都会增加
C．腌制酸菜配制的盐水入坛前要煮沸，以防止杂菌污染
D．酸菜腌制的时间越长，其口味越好，营养价值也越高
7．（2022高二下·南宁期中）下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是（ ）
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．将培养基灭菌后必须马上倒平板，以免培养基凝固
D．将倒完平板后，将平板立即倒过来放置，以免冷凝水落入污染培养基
8．（2021高二下·达州期末）细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部 位的杂菌 （ ）
A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
9．（2022高二下·南宁期中）下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图，据图分析正确的是（ ）
A．2号试管的稀释倍数为102倍
B．一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板培养
C．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落数一定为5号试管的10倍
D．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个
10．（2022高二下·南宁期中）关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述正确的是（ ）
A．培养基应以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的
B．测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数法
C．对10mL土样稀释106倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个
D．应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度
11．（2022高二下·南宁期中）已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用以下三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌，下列说法错误的是（ ）
培养基 组分
Ⅰ 牛肉膏(适量)、蛋白胨(适量)、X(15 g/L)
Ⅱ 氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)
Ⅲ 氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)
A．Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的有机物是蛋白胨
B．Ⅱ、Ⅲ号培养基中，为微生物提供碳源的有机物是X
C．在Ⅱ号培养基中，加入一定量的琼脂后可制成固体培养基
D．Ⅲ号接种培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会降低
12．（2022高二下·南宁期中）在分离分解尿素的细菌的实验时，有一个同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学从同样的稀释度下只筛选出大约50个菌落，造成这种差异的原因不可能是（ ）
A．培养基被污染 B．土壤样品不同
C．没有设置对照 D．由于操作失误
13．（2022高二下·南宁期中）蒸熟的苹果具有很好的止泻作用，这是因为苹果中果胶的“立场”不太坚定，未经加热的生果胶可软化大便，与膳食纤维共同起着通便的作用，而煮过的果胶则摇身一变，不仅具有吸收细菌和毒素的作用，而且还有收敛、止泻的功效。下列有关果胶的叙述，不正确的是（ ）
A．果胶是植物细胞壁和胞间层的主要成分之一
B．果胶是一种高分子化合物，可被果胶酶分解
C．果胶在果汁加工中，影响果汁的出汁率和澄清度
D．酵母菌也可产生果胶酶，因其细胞壁中含有果胶
14．（2022高二下·南宁期中）如图表示在最适温度条件下探究果胶酶用量的实验结果，叙述正确的是（ ）
A．在 BC 段限制反应速率的因素是温度、pH 或酶催化反应的时间等
B．在 AB 段增加酶的用量或反应物的浓度，可以明显加快反应速率
C．增加酶的用量，反应速率没有增加可能是苹果泥用量少导致的
D．在该实验给定的条件下，果胶酶的最佳用量是 C 点对应的值
15．（2022高二下·南宁期中）下列关于探究不同加酶洗衣粉对某种污渍洗涤效果的实验，叙述错误的是（ ）
A．探讨含有蛋白酶洗衣粉的洗涤效果不能选择丝绸作为洗涤材料
B．洗涤材料应该选择固定大小的新布料以保证科学实验的严谨
C．实验的观察指标可以是相同洗涤时间内不同污渍的残留程度
D．污渍的污染程度可以通过滴加在洗涤材料上污染物的量来控制
16．（2022高二下·南宁期中）为了使牛仔裤呈现“穿旧”效果，在工业洗衣机中用酶洗代替传统的浮石擦洗，是目前重要的生产手段（工艺流程见下图），下列叙述中错误的是（ ）
A．温度、pH等条件，会影响牛仔裤的“穿旧”效果
B．上述工艺中，不可选用包埋法固定化纤维素酶
C．上述工艺中，仿旧颜色的深浅由使用的染料量控制
D．上述工艺中，纤维素酶的作用机理与其在洗衣粉中去污的机理相似
17．（2022高二下·南宁期中）蛋白质的提取和分离是蛋白质研究的重要技术，以下叙述正确的是（ ）
A．实验过程中可采用透析法将蛋白质与其他小分子杂质分离
B．可选择猪、牛、羊、蛙等动物的血液为材料分离血红蛋白
C．实验操作流程依次为粗分离、样品处理、纯化、纯度鉴定
D．根据蛋白质的相对分子质量大小，可通过电泳分离蛋白质
18．（2022高二下·南宁期中）如图表示对某蛋白质溶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果（相似于纸层析法分离色素），下列相关叙述不正确的是（ ）
A．蛋白质上某些基团解离后可使蛋白质带电，电场中带电的蛋白质分子（或多肽）会向着与其所带电荷相反的电极移动
B．电泳结果表明溶液中蛋白质可能有两种，但也可能只有一种
C．蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度基本取决于其分子量大小
D．蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度完全取决于其所带净电荷多少
19．（2022高二下·南宁期中）玫瑰精油素有“液体黄金”之称，下面是提取玫瑰精油的实验流程图，请据图分析不正确的是（ ）
A．提取玫瑰精油的方法是水蒸气蒸馏法
B．①和②操作要求分别加入氯化钠和无水硫酸钠
C．③操作是萃取，以除去固体硫酸钠
D．该实验流程也可用于从薄荷叶中提取薄荷油
20．（2022高二下·南宁期中）如图是利用水中蒸馏法提取玫瑰精油的装置。下列有关该装置的描述，错误的是（ ）
A．该装置在安装时需要先固定热源酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意蒸馏瓶与热源的距离
B．该装置的安装，一般按照自下而上、从左到右的顺序
C．图中冷凝管的进水口、出水口接错，进水口应在下，出水口应在上
D．将温度计固定在蒸馏瓶头上，固定的位置如图所示，使温度计水银球略高于液面
二、综合题
21．（2022高二下·南宁期中）棉籽饼作动物饲料时，其所含棉酚（元素组成为 C、H、O）对动物有毒害作用。某科技小组配制培养基（成分为：棉酚0.25 g、(NH4)2SO45.0 g、其他无机盐适量、琼脂2%、蒸馏水）欲从棉花秸秆中分离棉酚分解菌，以对棉籽饼进行脱毒。回答下列问题：
（1）此培养基中(NH4)2SO4能为微生物提供的主要营养为 ；按功能分该培养基属于 培养基。
（2）用平板划线法分离棉酚分解菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有 （答出一点）。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的是 。
（3）采用稀释涂布平板法接种后，菌落数随培养时间的延长而发生变化，因此需每隔24h统计一次菌落数，选择 的记录数据作为结果。在37 ℃下培养48 h，若培养基上出现形状、大小、隆起程度和颜色不同的菌落，可判断培养基上有多种细菌，这里判断依据是在一定的培养条件下，同种微生物表现出 。
（4）在某次分离棉酚分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一位同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种差异产生的原因可能是 (答出1点即可)。
22．（2022高二下·南宁期中）如表所示甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，图丙所示为相关分离过程，回答下列问题：
KH2PO4 1.4 g 纤维素粉 5.0 g
Na2HPO4 2.1 g NaNO3 1.0 g
MgSO4·7H2O 0.2 g Na2HPO4 1.2 g
葡萄糖 10.0 g KH2PO4 0.9 g
尿素 1.0 g MgSO4·7H2O 0.5 g
琼脂 15.0 g KCl 0.5 g
酵母膏 0.5 g
水解酪素 0.5 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000 mL
甲 乙
注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到。
（1）从功能上看，甲培养基属于 。从物理性质上看，甲培养基属于 。其中提供氮源的物质是 。
（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落是否都能分解纤维素？ 。如果培养基中加入 可以筛选出具有分解纤维素能力的菌株，同时透明圈越 (填“大”或“小”)，表示该菌分解纤维素的能力越强。
（3）为了计数微生物的数量，图丙采用 法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用 法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果 (填“大”或“小”)。
（4）用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目 (填“少”或“多”)，原因是 。
（5）一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1 mL土壤稀释液④，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则1 mL原土壤样液①中微生物数量约为 。
23．（2022高二下·南宁期中）蛋白质对生命活动来说是不可缺少的，人们要研究蛋白质，就得从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置。请回答下列问题：
（1）根据图甲可知，这是采用 法对血红蛋白进行分离的过程，此方法是根据蛋白质 的不同来分离蛋白质的。在对甲图所示的凝胶柱进行装填时，一定要装填均匀，不能有气泡存在，因为气泡会 。
（2）图乙表示对分离出的血红蛋白进行 的过程，此操作的目的是 。
（3）图丙为向色谱柱中加样的过程。操作先后顺序应为 （用图中数字和“→”表示）。
（4）经过丙图所示的操作，连接好缓冲液洗脱瓶，并以较为恒定的流速缓慢加入缓冲液。如果能看到凝胶色谱柱中的红色区带 ，说明色谱柱制作成功。在对蛋白质进行分离纯化后，还需要对得到的蛋白质进行分子量的测定，我们通常使用的是 的方法，这种方法中，蛋白质的迁移率完全取决于 。
24．（2022高二下·南宁期中）胡萝卜素是一种常用的备用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得。薰衣草精油气味芳香，能够清热解毒，清洁皮肤，祛斑美白，深受女性朋友的喜爱，研究还发现薰衣草精油有抑菌作用。请回答下列问题：
（1）薰衣草精油化学性质稳定，不溶于水，易挥发。根据以上特点，可用 法提取薰衣草精油，其原理是 。
（2）科研人员探究薰衣草精油抑菌实验时，以滴加等体积精油小圆形滤纸片为中心的透明圈的大小来比较薰衣草精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，如下表所示。
薰衣草精油对两种细菌活性影响的测定
浓度（μg/disc） 0.5 1 2.5
大肠杆菌抑菌圈直径（mm） 6.72 6.93 8.66
金黄色葡萄球菌抑菌圈直径（mm） 5.8 6.21 6.95
由表数据可知，薰衣草精油对 抑菌效果更好，且表中数据能否得知薰衣草精油对大肠杆菌抑菌效果的最佳浓度？ 。
（3）探究薰衣草精油抑菌实验时所用的培养基需要用 法进行灭菌，灭菌结束后，切断电源，等自然冷却到压力表为0时，再打开排气阀。
（4）从植物中提取胡萝卜素常用的方法是 ，其效率主要取决于 。下图是胡萝卜素粗品鉴定装置示意图。该鉴定方法的名称是 法。在图乙的胡萝卜素层析结果示意图中，A，B，C，D四点中，属于提取样品的样点是 。
答案解析部分
1．【答案】D
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】A、葡萄酒自然发酵的微生物主要来源于葡萄皮上的野生酵母菌，最终来自于土壤，A正确；
B、葡萄酒自然发酵过程的初期也需要有氧气，使酵母菌进行有氧呼吸，生长、增殖，B正确；
C、葡萄酒自然发酵的过程中，起作用的微生物主要是酵母菌，还有其他杂菌，C正确；
D、葡萄酒自然发酵的过程中，酒的风味形成与酵母菌菌种、葡萄品种以及葡萄糖分解成酒精有关，D错误。
故答案为：D。
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2．【答案】C
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】A、醋酸菌属于原核生物，其细胞内没有线粒体，A错误；
B、醋酸菌是一种好氧型微生物，不能将葡萄糖分解为酒精，B错误；
C、醋酸菌是一种好氧型微生物，对氧气含量特别敏感，在深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡，C正确；
D、醋酸菌生长的适温度是30～35℃，所以在四川盆地，夏季比春季更适合醋酸菌的生长，D错误。
故答案为：C。
【分析】醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
3．【答案】D
【考点】腐乳的制作
【解析】【解答】A、豆腐发酵中起主要作用的微生物是毛霉，属于真核生物，其细胞中具有成形的细胞核和各种细胞器，A正确；
B、食用的腐乳表面的“皮”，主要是毛霉长在豆腐块表面的匍匐菌丝，B正确；
C、制作好的腐乳中含有各种小分子的肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等，形成了其独特的风味，C正确；
D、在实验室进行腐乳发酵时，若豆腐块表面出现黄色、油腻状，说明盐量太少，没有抑制其他微生物的生长，D错误。
故答案为：D。
【分析】腐乳的制作原理：（1）腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异样需氧型。（2）毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪分解成甘油和脂肪酸。
4．【答案】C
【考点】腐乳的制作
【解析】【解答】A、加盐能抑制微生物的生长，避免腐乳腐败变质，还能析出豆腐中的水分，使腐乳成形，A错误；
B、加料酒能抑制微生物的生长，不能达到灭菌的目的，料酒还能使腐乳具有独特的香味，B错误；
C、腐乳制备的温度是15-18℃，前期发酵温度过低，不适宜毛霉生长，则腐乳“皮”不易形成，C正确；
D、将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，应逐层加盐，近瓶口处需铺厚一点，防止杂菌污染，因此腐乳装瓶时每层豆腐块均需要加盐但添加的盐量一般由下到上逐层增加，D错误。
故答案为：C。
【分析】1、原理：(1)腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异养需氧型。(2)毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。
2、 需要注意的问题：(1)腐乳制作所需豆腐的含水量及意义；豆腐含水量以70%为宜。毛霉为异养需氧型真菌，若含水量过高，影响毛霉的有氧呼吸，豆腐不宜成块；若含水量过少，则不利于毛霉的生长，毛霉的代谢也离不开水。(2)配制卤汤时酒量的控制：加酒的目的之一是杀死微生物。如果过少，达不到杀死微生物的目的，导致豆腐腐败；若过多，不但杀死了微生物，而且会因酒精度过高抑制了酶的活性，从而影响腐乳的成熟，同时还会因酒精含量过高而影响腐乳的风味。一般应控制在12%左右。
5．【答案】B
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】在氧气充足的条件下，能将乙醇转化成醋酸，变酸酸的酒表面的一层菌膜，主要与醋酸菌有关；腐乳表面一层致密的皮是由毛霉的匍匐菌丝形成的；泡菜坛液面的一层白膜，主要是产膜酵母繁殖的结果。
故答案为：B。
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2、醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
6．【答案】C
【考点】泡菜的制作
【解析】【解答】A、真空包装的酸菜“胀袋”是因为杂菌污染，导致产生气体，气压变大，A错误；
B、腌制过程中，酸菜坛中有机物被分解，产生大量中间产物，所以有机物的种类增加，但有机物的含量会减少，B错误；
C、腌制酸菜配制的盐水入坛前要煮沸，以防止杂菌污染，同时也能除氧，C正确；
D、酸菜制作过程中会产生亚硝酸盐，因此并不是腌制时间越长，口感越好，营养价值越高，D错误。
故答案为：C。
【分析】泡菜的制作原理是微生物的发酵在食品的制作而成。制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜呈现一种特殊的风味，还不改变菜的品质。
7．【答案】B
【考点】培养基概述及其分类
【解析】【解答】A、操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A错误；
B、部分牛肉膏粘附在称量纸上，将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，保证称量的牛肉膏均进入培养基，B正确；
C、将培养基灭菌后，应冷却到50℃时倒平板，C错误；
D、倒完平板后，待培养基凝固后，将平板倒过来放置，以免冷凝水落入污染培养基，D错误。
故答案为：B。
【分析】制作牛肉膏蛋白胨固体培养基应尽量避免杂菌污染，一般步骤为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，将培养基灭菌后，应冷却到50%时倒平板，温度太高容易烫手，温度太低培养基会凝固。
8．【答案】C
【考点】微生物的分离和培养；灭菌技术
【解析】【解答】ABCD、高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环、接种针等金属用具。ABD错误，C正确。故答案为：C。
【分析】灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽胞。常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
9．【答案】D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】【解答】A、2号试管的稀释倍数为103倍，A错误；
B、测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养，B错误；
C、4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍，C错误；
D、5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为（169+176+165）÷3÷0.1×105×100÷10=1.7×109个，D正确。
故答案为：D。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
10．【答案】D
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】A、从土壤中分离分解尿素的细菌，培养基应以尿素为唯一氮源，尿素分解菌为异养型，利用的是有机碳源，硝化细菌是自养型，以二氧化碳为碳源，二氧化碳为无机物，A错误；
B、测定土壤样品中的活菌数目，常用稀释涂布平板法，B错误；
C、对10mL土样稀释106倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为[(234＋276)÷2]÷0.1×106×10＝2.55×1010个，C错误；
D、分离微生物时，需要设置不接种的培养基与实验组一起培养做空白对照，以排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度，D正确。
故答案为：D。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
11．【答案】A
【考点】培养基对微生物的选择作用
【解析】【解答】A、Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的有机物不只是蛋白胨，牛肉膏也可以，A错误；
B、Ⅱ、Ⅲ号培养基中，只有有机物X，且其中含有C、H两种元素，因此X能为微生物提供碳源，B正确；
C、琼脂是凝固剂，因此，在Ⅱ号培养基中，加入一定量的琼脂后可制成固体培养基，C正确；
D、Ⅲ号培养基中只有X这一种有机物，因此能筛选出降解X的微生物，随着培养时间的延长，X物质含量减少，且出现其他中间产物，因此，接种培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会降低，D正确。
故答案为：A。
【分析】1、培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质。营养物质归纳为碳源、氨源、生长因子、无机盐和水。培养基按物理性质可分为固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基；固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等；根据用途分为选择培养基、鉴别培养基。
2、选择培养原理：（1）利用营养缺陷选择培养基进行的选择培养：不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物，无氮培养基分离自生固氮微生物；（2）利用微生物(目的菌）对某种营养物质的特殊需求，使该营养物质成为某类微生物的唯一供给者：石油作为唯一碳源的培养基分离出能消除石油污染的微生物，尿素为唯一氮源的培养基分离分解尿素的微生物；（3）在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质抑制部分微生物生长或利于部分微生物生长：加入青霉素等抗生素分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长，加入高浓度的食盐分离耐高温的微生物；（4）利用培养条件进行的选择培养：在高温环境中培养分离耐高温的微生物，将培养基pH调至较低水平分离耐酸的微生物，在无氧环境中培养分离厌氧微生物和兼性厌氧微生物。
12．【答案】C
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】A、若该同学所用的培养基被污染，则可能导致获得的菌落远大于其他同学，A正确；
B、若该同学所用的土样不同，则可能导致获得的菌落远大于其他同学，B正确；
C、没有设置对照，不会影响该同学 培养的菌落数，即不设置对照不会造成该同学的结果与其他同学的结果的差异，C错误；
D、若该同学操作失误，则可能会因为被污染而导致获得的菌落远大于其他同学，D正确。
故答案为：C。
【分析】生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一变量原则和控制无关变量原则。某同学的实验结果可能是培养基污染造成的，还可能是某同学实验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的，关键是设法排除影响结果的因素。
13．【答案】D
【考点】果胶酶的活性测定
【解析】【解答】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，A正确；
B、根据以上分析可知，果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，果胶酶能够分解果胶形成可溶性半乳糖醛酸，B正确；
C、果胶在果汁加工中，影响果汁的出汁率和澄清度，C正确；
D、酵母菌虽然有细胞壁，但其细胞壁中不含果胶成分，D错误。
故答案为：D。
【分析】果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，它包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶.产生果胶酶的生物有植物、霉菌、酵母菌和细菌等.果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，也是果汁变得澄清。
14．【答案】C
【考点】酶活力测定的一般原理和方法
【解析】【解答】A、该实验已经是在最适温度下测得的，在 BC 段限制反应速率的因素不会是温度，A错误；
B、在AB 段限制反应速率的因素是酶的用量，增加酶的用量可以加快酶促反应速率，但增加反应物浓度不可以，B错误；
C、增加酶的用量，反应速率没有增加可能是苹果泥用量少导致的，C正确；
D、在该实验给定的条件下，果胶酶的最佳用量是 B 点对应的值，D错误。
故答案为：C。
【分析】酶
（1）酶是由活细胞产生的具有催化活性的有机物，其中大部分是蛋白质、少量是RNA。
（2）酶催化作用的实质：降低化学反应的活化能，在反应前后本身性质不会发生改变。
（3）酶的特性：①高效性：酶的催化效率大约是无机催化剂的107-1013倍。②专一性：每一种酶只能催化一种或者一类化学反应。③酶的作用条件较温和：在最适宜的温度和pH条件下，酶的活性最高；温度和pH偏高或偏低，酶的活性都会明显降低。
（4）酶的变性：过酸、过碱或温度过高，会使酶的空间结构遭到破坏，使酶永久失活；低温使酶活性明显下降，但在适宜温度下其活性可以恢复。
15．【答案】C
【考点】加酶洗衣粉的洗涤效果及其影响因素
【解析】【解答】A、丝绸作为洗涤材料主要成分是蛋白质，故探讨含有蛋白酶洗衣粉的洗涤效果不能选择丝绸作为洗涤材料，A正确；
B、做实验，无关变量保持相同且适宜，故洗涤材料应该选择固定大小的新布料以保证科学实验的严谨性，B正确；
C、本实验的自变量是洗衣粉的种类，污渍属于无关变量，应该是相同的，实验的观察指标可以是相同洗涤时间内相同污渍的残留程度，C错误；
D、污渍的污染程度要保持一致，这可以通过滴加在布料上的污染物的量来控制，D正确。
故答案为：C。
【分析】加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
16．【答案】C
【考点】纤维素分解菌的分离；加酶洗衣粉的洗涤效果及其影响因素
【解析】【解答】A、温度、pH等条件会影响酶的活性，改变温度、酸碱度和处理时间会影响酶作用的结果，进而会影响牛仔裤的“穿旧”效果，A正确；
B、由于纤维素酶较小，不能用包埋法固定化酶，B正确；
C、上述工艺中，仿旧颜色的深浅由纤维素酶的作用效果和使用的染料量共同决定，C错误；
D、纤维素酶在仿旧中的作用机理是适当分解布料中的纤维素成分，洗衣粉中添加纤维素酶的作用机理是适当分解布料中的纤维素成分使织物膨松有利于去污，即纤维素酶均是起催化作用，二者作用机理相似，D正确。
故答案为：C。
【分析】1、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
2、纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即C酶、CX酶、葡萄糖苷酶，其中葡萄糖糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖；刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过观察是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基。
17．【答案】A
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】A、蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中的小分子物质则可以透过半透膜，因此可以将蛋白质和溶液中的小分子物质分离，A正确；
B、蛋白质的提取和分离实验可以以猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液为材料分离血红蛋白，而不用蛙的，因为血红蛋白存在于红细胞内，哺乳动物的成熟红细胞不含细胞核及众多细胞器，易分离，B错误；
C、实验操作流程依次为：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定，C错误；
D、凝胶色谱法分离蛋白质的原理是不同蛋白质的相对分子质量不同，在凝胶柱中移动的速度不同 ，从而将分子质量较大的蛋白质分子除去，D错误。
故答案为：A。
【分析】1、蛋白质的提取与分离的原理是根据蛋白质的理化性质，即蛋白质的形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等的干差万别，由此提取和分离各种蛋白质。凝胶色谱法的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
2、蛋白质的提取与分离的步骤为：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析（3）纯化：调节缓冲液面一加入蛋白质样品→调节缓冲液面一洗脱一收集分装蛋白质（4）纯度鉴定一SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
18．【答案】D
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】A、蛋白质的氨基与羧基可发生解离，使其带正电或负电，带电的蛋白质分子（或多肽）会向着与其所带电荷相反的电极移动，A正确；
B、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳会使蛋白质水解成肽链，故结果所示可能只有一种蛋白质（有两种肽链），也可能是两种蛋白质，B正确；
C、蛋白质在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速度由其分子大小决定，C正确；
D、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳所加的SDS可完全掩盖蛋白质本身所带电荷，故其移动速度与本身所带电荷无关，D错误。
故答案为：D。
【分析】凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。某蛋白质溶液进行SDS-聚丙烯酰胶凝胶电泳的结果有两条带，说明溶液中可能有两种蛋白质，但也可能只有一种（蛋白质水解成两条肽链）。
19．【答案】C
【考点】芳香油的提取
【解析】【解答】A、玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏，故提取玫瑰精油的方法是水蒸气蒸馏法，A正确；
B、①是加入氯化钠出现油水分层，②是加入无水硫酸钠吸水，B正确；
C、③是过滤，C错误；
D、薄荷油与玫瑰精油相同，该实验流程也可用于从薄荷叶中提取薄荷油，D正确。
故答案为：C。
【分析】植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
20．【答案】D
【考点】芳香油的提取
【解析】【解答】A、该装置在安装时需要先固定热源——酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意其离热源的距离，A正确；
B、蒸馏装置的安装一般都按自下而上、从左到右的顺序，B正确；
C、图中冷凝管进水口、出水口接错，冷凝管进水口在下，出水口在上，与水蒸气流向相反，C正确；
D、温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上，D错误。
故答案为：D。
【分析】植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
21．【答案】（1）氮源和无机盐；选择
（2）接种环灼烧后没有冷却就开始划线、划线未从第一区域末端开始（未接触到第一区域末端）；检测培养基灭菌是否合格
（3）菌落数目稳定时；稳定的菌落特征
（4）所取材料不同、培养基污染、操作失误、取样前未摇匀样液
【考点】微生物的分离和培养
【解析】【解答】(1)根据(NH4)2SO4的化学式可知，里面含有氮元素和无机离子，因此(NH4)2SO4能为微生物提供氮源和无机盐。此培养基具有选择功能，理由是以棉酚作为唯一碳源，只有棉酚分解菌才能在此培养基上生长，因此按功能分该培养基属于选择培养基。
(2)在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做可以将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却划线，或者是未从第一区域末端开始。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的检测培养基灭菌是否彻底，即检测培养基灭菌是否合格。
(3)为了防止培养时间不足，导致遗漏菌落数目，采用稀释涂布平板法接种后，选择菌落数目稳定时记录数据作为结果。不同的细菌在培养基上的菌落特征是不同的，有的菌落表面光滑黏稠，有的粗糙干燥，有的易挑起等，因此可依据同种微生物表现出的稳定的菌落特征来判断出菌落上有多种细菌。
(4)两位同学筛选出的菌落个数差异较大，可能是因为所取的材料不同，也可能是培养基污染、操作失误、取样前未摇匀样液等实验操作问题造成的差异。
【分析】1、培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质。营养物质归纳为碳源、氨源、生长因子、无机盐和水。培养基按物理性质可分为固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基；固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等；根据用途分为选择培养基、鉴别培养基。
2、平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞；③将试管口通过火焰；④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞；⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿；⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连；⑧将平板倒置放入培养箱中培养。稀释涂布平板操作的步骤：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；②取少量菌液，滴加到培养基表面；③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s；④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
3、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
22．【答案】（1）选择培养基；固体培养基；尿素
（2）不一定；刚果红；大
（3）稀释涂布平板；显微镜直接计数（或血球计数板计数）；小
（4）小；因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（5）2.5×105
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】（1）培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。其中氮源一般是含氮的化合物，根据甲培养基的配方，甲培养基中提供氮源的物质是尿素。从功能上看，甲培养基属于选择培养基。从物理性质上看，甲培养基属于固体培养基。
（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落不一定都能分解纤维素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源等。如果在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，就可以通过是否产生透明圈来筛选出具有分解纤维素能力的菌株；同时透明圈越大，表示该菌分解纤维素的能力越强。
（3）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数。除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数（或血球计数板计数）也是测定微生物数量的常用方法。所以，图丙采用了稀释涂布法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用显微镜直接计数法进行计数（能计活的和死的细胞）。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果小。
（4）稀释涂布法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（5）由于整个过程涉及3次稀释，每次稀释倍数为50/10=5倍，所以利用平板菌落计数法的计算公式估算原土壤样液中的微生物数：（180+155+176+129）/4÷0.1×5×5×5=2.0×105个。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
23．【答案】（1）凝胶色谱法；相对分子量大小；搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序（降低分离效果）
（2）透析；除去样品中分子量较小的杂质
（3）④→①→②→③
（4）均匀一致地移动；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；蛋白质分子的大小
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】(1)根据图甲所示可知，这是采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离的过程，此方法是根据蛋白质的相对分子量大小不同来分离蛋白质的；在对甲图所示的凝胶柱进行装填时，一定要装填均匀，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。
(2)图乙表示对分离出的血红蛋白进行透析的过程，此操作的目的是除去样品中分子量较小的杂质。
(3)进行凝胶色谱操作加样时，加样前，应打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，然后用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不可破坏凝胶面，正确的加样顺序是④→①→②→③。
(4)经过丙图所示的操作，连接好缓冲液洗脱瓶，并以较为恒定的流速缓慢加入缓冲液，如果能看到凝胶色谱柱中的红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功；在对蛋白质进行分离纯化后，还需要对得到的蛋白质进行分子量的测定，通常使用的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，这种方法中，SDS带有大量的负电荷，因此蛋白质的迁移率完全取决于蛋白质分子的大小。
【分析】蛋白质分离与提纯：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。
24．【答案】（1）水蒸气蒸馏（或蒸馏）；利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层
（2）大肠杆菌；不能
（3）高压蒸汽灭菌
（4）萃取；萃取剂的性质和使用量；纸层析；B和C
【考点】芳香油的提取；胡萝卜素的提取
【解析】【解答】(1)薰衣草精油化学性质稳定，不溶于水，易挥发，适宜用水蒸气蒸馏法进行提取，其原理是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层，然后再用分液漏斗将这两层分开。
(2)根据表格分析，不同浓度的薰衣草精油作用下，都是大肠杆菌抑菌圈直径较大，说明薰衣草精油对大肠杆菌的抑菌效果更好；表格数据显示，在实验浓度范围内，薰衣草精油浓度为2.5时对大肠杆菌抑菌效果最好，但是不一定是抑菌的最佳浓度。
(3)培养微生物的培养基需保持一定的湿度，一般用高压蒸汽灭菌法灭菌。
(4)胡萝卜素不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂，常用的提取方法是萃取，萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。因此，萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥。鉴定胡萝卜素常用的方法是纸层析法。图乙A，B，C，D 4点中，AD层析后只出现一个点，说明属于标准样品，B和C层析后出现两个点，说明含有杂质，属于提取样品。
【分析】1、植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
2、胡萝卜素是橘黄色的结晶，属于脂溶性物质，其化学性质比较稳定，沸点高且不溶于水，常用石油醚作为溶剂，因此可用萃取法提取胡萝卜素。也就是让胡萝卜素溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后，获得胡萝卜素。操作的一般流程是：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。胡萝卜素萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响，因温度过高和时间过长都会导致胡萝卜素分解，在加热干燥过程中，应该控制好温度和时间，因为温度太高、干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。提取的胡萝卜素可通过纸层析法进行鉴定，在鉴定过程中需要用标准样品对照，以便确定提取的胡萝卜素的纯度。
3、胡萝卜素的粗品鉴定：纸层析法（石油醚易挥发，注意层析容器要密封）
（1）制作层析滤纸：滤纸条预先干燥处理，滤纸筒的竖直边缘不能接触；层析液不能超过基线；
（2）点样：点样时快速细致、样点圆点尽量细小；
（3）层析；
（4）观察：如果提取到的胡萝卜素含杂质，则层析后在滤纸上出现多个不同高度的色素点样。
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广西南宁市三十六中2021-2022学年高二下学期期中生物试卷
一、单选题
1．（2022高二下·南宁期中）下列有关果酒制作的叙述，错误的是（ ）
A．葡萄酒自然发酵过程中起主要作用的微生物最终来自于土壤
B．葡萄酒自然发酵过程的初期也需要有氧气
C．葡萄酒自然发酵的过程中，起作用的微生物不止有酵母菌一种
D．葡萄酒自然发酵的过程中，酒的风味形成只与葡萄糖分解成酒精有关
【答案】D
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】A、葡萄酒自然发酵的微生物主要来源于葡萄皮上的野生酵母菌，最终来自于土壤，A正确；
B、葡萄酒自然发酵过程的初期也需要有氧气，使酵母菌进行有氧呼吸，生长、增殖，B正确；
C、葡萄酒自然发酵的过程中，起作用的微生物主要是酵母菌，还有其他杂菌，C正确；
D、葡萄酒自然发酵的过程中，酒的风味形成与酵母菌菌种、葡萄品种以及葡萄糖分解成酒精有关，D错误。
故答案为：D。
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2．（2022高二下·南宁期中）醋酸菌是酿制果醋时起主要作用的菌种。下列有关说法正确的是（ ）
A．醋酸菌是一种好养性微生物，氧气在其线粒体内膜上被利用
B．醋酸菌细胞内能实现糖分→酒精→乙醛→醋酸的转化过程
C．醋酸菌对氧气含量特别敏感，在深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡
D．一般而言，在四川盆地，春季比夏季更适合醋酸菌的生长
【答案】C
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】A、醋酸菌属于原核生物，其细胞内没有线粒体，A错误；
B、醋酸菌是一种好氧型微生物，不能将葡萄糖分解为酒精，B错误；
C、醋酸菌是一种好氧型微生物，对氧气含量特别敏感，在深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡，C正确；
D、醋酸菌生长的适温度是30～35℃，所以在四川盆地，夏季比春季更适合醋酸菌的生长，D错误。
故答案为：C。
【分析】醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
3．（2022高二下·南宁期中）下列关于腐乳发酵的说法中，错误的是（ ）
A．豆腐发酵中起主要作用的微生物，具有成形的细胞核和各种细胞器
B．食用的腐乳表面的“皮”，主要是长在豆腐块表面的霉菌菌丝
C．制作好的腐乳中含有各种小分子的肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等，形成了其独特的风味
D．在实验室进行腐乳发酵时，若豆腐块表面出现黄色、油腻状，说明发酵成功了
【答案】D
【考点】腐乳的制作
【解析】【解答】A、豆腐发酵中起主要作用的微生物是毛霉，属于真核生物，其细胞中具有成形的细胞核和各种细胞器，A正确；
B、食用的腐乳表面的“皮”，主要是毛霉长在豆腐块表面的匍匐菌丝，B正确；
C、制作好的腐乳中含有各种小分子的肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等，形成了其独特的风味，C正确；
D、在实验室进行腐乳发酵时，若豆腐块表面出现黄色、油腻状，说明盐量太少，没有抑制其他微生物的生长，D错误。
故答案为：D。
【分析】腐乳的制作原理：（1）腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异样需氧型。（2）毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪分解成甘油和脂肪酸。
4．（2022高二下·南宁期中）以下是腐乳制作的实验流程，请判断下列叙述正确的是（ ）
让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制
A．加盐是为了促进毛霉的生长
B．加料酒主要是为了灭菌，避免腐败变质
C．若前期发酵温度过低，腐乳的“皮”不易形成
D．加盐腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量
【答案】C
【考点】腐乳的制作
【解析】【解答】A、加盐能抑制微生物的生长，避免腐乳腐败变质，还能析出豆腐中的水分，使腐乳成形，A错误；
B、加料酒能抑制微生物的生长，不能达到灭菌的目的，料酒还能使腐乳具有独特的香味，B错误；
C、腐乳制备的温度是15-18℃，前期发酵温度过低，不适宜毛霉生长，则腐乳“皮”不易形成，C正确；
D、将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，应逐层加盐，近瓶口处需铺厚一点，防止杂菌污染，因此腐乳装瓶时每层豆腐块均需要加盐但添加的盐量一般由下到上逐层增加，D错误。
故答案为：C。
【分析】1、原理：(1)腐乳的发酵在多种微生物的协同作用下进行，其中起主要作用的是毛霉，它是一种丝状真菌，新陈代谢类型是异养需氧型。(2)毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。
2、 需要注意的问题：(1)腐乳制作所需豆腐的含水量及意义；豆腐含水量以70%为宜。毛霉为异养需氧型真菌，若含水量过高，影响毛霉的有氧呼吸，豆腐不宜成块；若含水量过少，则不利于毛霉的生长，毛霉的代谢也离不开水。(2)配制卤汤时酒量的控制：加酒的目的之一是杀死微生物。如果过少，达不到杀死微生物的目的，导致豆腐腐败；若过多，不但杀死了微生物，而且会因酒精度过高抑制了酶的活性，从而影响腐乳的成熟，同时还会因酒精含量过高而影响腐乳的风味。一般应控制在12%左右。
5．（2022高二下·南宁期中）酒变酸后表面的菌膜、腐乳外部致密的“皮”、泡菜坛表面的白膜分别是（ ）
A．酵母菌、乳酸菌、醋酸菌 B．醋酸菌、毛霉菌丝、酵母菌
C．醋酸菌、毛霉菌丝、毛霉菌 D．醋酸菌、毛霉菌丝、乳酸菌
【答案】B
【考点】果酒果醋的制作
【解析】【解答】在氧气充足的条件下，能将乙醇转化成醋酸，变酸酸的酒表面的一层菌膜，主要与醋酸菌有关；腐乳表面一层致密的皮是由毛霉的匍匐菌丝形成的；泡菜坛液面的一层白膜，主要是产膜酵母繁殖的结果。
故答案为：B。
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2、醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30~35℃。
6．（2022高二下·南宁期中）中国酸菜的制作历史悠久，不仅口感好，而且对人体有益。下列说法正确的是（ ）
A．真空包装的酸菜“胀袋”是因为乳酸菌大量繁殖导致
B．腌制过程中，酸菜坛中有机物的含量和种类都会增加
C．腌制酸菜配制的盐水入坛前要煮沸，以防止杂菌污染
D．酸菜腌制的时间越长，其口味越好，营养价值也越高
【答案】C
【考点】泡菜的制作
【解析】【解答】A、真空包装的酸菜“胀袋”是因为杂菌污染，导致产生气体，气压变大，A错误；
B、腌制过程中，酸菜坛中有机物被分解，产生大量中间产物，所以有机物的种类增加，但有机物的含量会减少，B错误；
C、腌制酸菜配制的盐水入坛前要煮沸，以防止杂菌污染，同时也能除氧，C正确；
D、酸菜制作过程中会产生亚硝酸盐，因此并不是腌制时间越长，口感越好，营养价值越高，D错误。
故答案为：C。
【分析】泡菜的制作原理是微生物的发酵在食品的制作而成。制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜呈现一种特殊的风味，还不改变菜的品质。
7．（2022高二下·南宁期中）下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是（ ）
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．将培养基灭菌后必须马上倒平板，以免培养基凝固
D．将倒完平板后，将平板立即倒过来放置，以免冷凝水落入污染培养基
【答案】B
【考点】培养基概述及其分类
【解析】【解答】A、操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A错误；
B、部分牛肉膏粘附在称量纸上，将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，保证称量的牛肉膏均进入培养基，B正确；
C、将培养基灭菌后，应冷却到50℃时倒平板，C错误；
D、倒完平板后，待培养基凝固后，将平板倒过来放置，以免冷凝水落入污染培养基，D错误。
故答案为：B。
【分析】制作牛肉膏蛋白胨固体培养基应尽量避免杂菌污染，一般步骤为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，将培养基灭菌后，应冷却到50%时倒平板，温度太高容易烫手，温度太低培养基会凝固。
8．（2021高二下·达州期末）细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部 位的杂菌 （ ）
A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
【答案】C
【考点】微生物的分离和培养；灭菌技术
【解析】【解答】ABCD、高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环、接种针等金属用具。ABD错误，C正确。故答案为：C。
【分析】灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的芽胞。常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
9．（2022高二下·南宁期中）下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图，据图分析正确的是（ ）
A．2号试管的稀释倍数为102倍
B．一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板培养
C．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落数一定为5号试管的10倍
D．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个
【答案】D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】【解答】A、2号试管的稀释倍数为103倍，A错误；
B、测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养，B错误；
C、4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍，C错误；
D、5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为（169+176+165）÷3÷0.1×105×100÷10=1.7×109个，D正确。
故答案为：D。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
10．（2022高二下·南宁期中）关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述正确的是（ ）
A．培养基应以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的
B．测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数法
C．对10mL土样稀释106倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个
D．应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度
【答案】D
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】A、从土壤中分离分解尿素的细菌，培养基应以尿素为唯一氮源，尿素分解菌为异养型，利用的是有机碳源，硝化细菌是自养型，以二氧化碳为碳源，二氧化碳为无机物，A错误；
B、测定土壤样品中的活菌数目，常用稀释涂布平板法，B错误；
C、对10mL土样稀释106倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为[(234＋276)÷2]÷0.1×106×10＝2.55×1010个，C错误；
D、分离微生物时，需要设置不接种的培养基与实验组一起培养做空白对照，以排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度，D正确。
故答案为：D。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
11．（2022高二下·南宁期中）已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用以下三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌，下列说法错误的是（ ）
培养基 组分
Ⅰ 牛肉膏(适量)、蛋白胨(适量)、X(15 g/L)
Ⅱ 氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)
Ⅲ 氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)
A．Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的有机物是蛋白胨
B．Ⅱ、Ⅲ号培养基中，为微生物提供碳源的有机物是X
C．在Ⅱ号培养基中，加入一定量的琼脂后可制成固体培养基
D．Ⅲ号接种培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会降低
【答案】A
【考点】培养基对微生物的选择作用
【解析】【解答】A、Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的有机物不只是蛋白胨，牛肉膏也可以，A错误；
B、Ⅱ、Ⅲ号培养基中，只有有机物X，且其中含有C、H两种元素，因此X能为微生物提供碳源，B正确；
C、琼脂是凝固剂，因此，在Ⅱ号培养基中，加入一定量的琼脂后可制成固体培养基，C正确；
D、Ⅲ号培养基中只有X这一种有机物，因此能筛选出降解X的微生物，随着培养时间的延长，X物质含量减少，且出现其他中间产物，因此，接种培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会降低，D正确。
故答案为：A。
【分析】1、培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质。营养物质归纳为碳源、氨源、生长因子、无机盐和水。培养基按物理性质可分为固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基；固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等；根据用途分为选择培养基、鉴别培养基。
2、选择培养原理：（1）利用营养缺陷选择培养基进行的选择培养：不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物，无氮培养基分离自生固氮微生物；（2）利用微生物(目的菌）对某种营养物质的特殊需求，使该营养物质成为某类微生物的唯一供给者：石油作为唯一碳源的培养基分离出能消除石油污染的微生物，尿素为唯一氮源的培养基分离分解尿素的微生物；（3）在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质抑制部分微生物生长或利于部分微生物生长：加入青霉素等抗生素分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长，加入高浓度的食盐分离耐高温的微生物；（4）利用培养条件进行的选择培养：在高温环境中培养分离耐高温的微生物，将培养基pH调至较低水平分离耐酸的微生物，在无氧环境中培养分离厌氧微生物和兼性厌氧微生物。
12．（2022高二下·南宁期中）在分离分解尿素的细菌的实验时，有一个同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学从同样的稀释度下只筛选出大约50个菌落，造成这种差异的原因不可能是（ ）
A．培养基被污染 B．土壤样品不同
C．没有设置对照 D．由于操作失误
【答案】C
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】A、若该同学所用的培养基被污染，则可能导致获得的菌落远大于其他同学，A正确；
B、若该同学所用的土样不同，则可能导致获得的菌落远大于其他同学，B正确；
C、没有设置对照，不会影响该同学 培养的菌落数，即不设置对照不会造成该同学的结果与其他同学的结果的差异，C错误；
D、若该同学操作失误，则可能会因为被污染而导致获得的菌落远大于其他同学，D正确。
故答案为：C。
【分析】生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一变量原则和控制无关变量原则。某同学的实验结果可能是培养基污染造成的，还可能是某同学实验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的，关键是设法排除影响结果的因素。
13．（2022高二下·南宁期中）蒸熟的苹果具有很好的止泻作用，这是因为苹果中果胶的“立场”不太坚定，未经加热的生果胶可软化大便，与膳食纤维共同起着通便的作用，而煮过的果胶则摇身一变，不仅具有吸收细菌和毒素的作用，而且还有收敛、止泻的功效。下列有关果胶的叙述，不正确的是（ ）
A．果胶是植物细胞壁和胞间层的主要成分之一
B．果胶是一种高分子化合物，可被果胶酶分解
C．果胶在果汁加工中，影响果汁的出汁率和澄清度
D．酵母菌也可产生果胶酶，因其细胞壁中含有果胶
【答案】D
【考点】果胶酶的活性测定
【解析】【解答】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，A正确；
B、根据以上分析可知，果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，果胶酶能够分解果胶形成可溶性半乳糖醛酸，B正确；
C、果胶在果汁加工中，影响果汁的出汁率和澄清度，C正确；
D、酵母菌虽然有细胞壁，但其细胞壁中不含果胶成分，D错误。
故答案为：D。
【分析】果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，它包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶.产生果胶酶的生物有植物、霉菌、酵母菌和细菌等.果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，也是果汁变得澄清。
14．（2022高二下·南宁期中）如图表示在最适温度条件下探究果胶酶用量的实验结果，叙述正确的是（ ）
A．在 BC 段限制反应速率的因素是温度、pH 或酶催化反应的时间等
B．在 AB 段增加酶的用量或反应物的浓度，可以明显加快反应速率
C．增加酶的用量，反应速率没有增加可能是苹果泥用量少导致的
D．在该实验给定的条件下，果胶酶的最佳用量是 C 点对应的值
【答案】C
【考点】酶活力测定的一般原理和方法
【解析】【解答】A、该实验已经是在最适温度下测得的，在 BC 段限制反应速率的因素不会是温度，A错误；
B、在AB 段限制反应速率的因素是酶的用量，增加酶的用量可以加快酶促反应速率，但增加反应物浓度不可以，B错误；
C、增加酶的用量，反应速率没有增加可能是苹果泥用量少导致的，C正确；
D、在该实验给定的条件下，果胶酶的最佳用量是 B 点对应的值，D错误。
故答案为：C。
【分析】酶
（1）酶是由活细胞产生的具有催化活性的有机物，其中大部分是蛋白质、少量是RNA。
（2）酶催化作用的实质：降低化学反应的活化能，在反应前后本身性质不会发生改变。
（3）酶的特性：①高效性：酶的催化效率大约是无机催化剂的107-1013倍。②专一性：每一种酶只能催化一种或者一类化学反应。③酶的作用条件较温和：在最适宜的温度和pH条件下，酶的活性最高；温度和pH偏高或偏低，酶的活性都会明显降低。
（4）酶的变性：过酸、过碱或温度过高，会使酶的空间结构遭到破坏，使酶永久失活；低温使酶活性明显下降，但在适宜温度下其活性可以恢复。
15．（2022高二下·南宁期中）下列关于探究不同加酶洗衣粉对某种污渍洗涤效果的实验，叙述错误的是（ ）
A．探讨含有蛋白酶洗衣粉的洗涤效果不能选择丝绸作为洗涤材料
B．洗涤材料应该选择固定大小的新布料以保证科学实验的严谨
C．实验的观察指标可以是相同洗涤时间内不同污渍的残留程度
D．污渍的污染程度可以通过滴加在洗涤材料上污染物的量来控制
【答案】C
【考点】加酶洗衣粉的洗涤效果及其影响因素
【解析】【解答】A、丝绸作为洗涤材料主要成分是蛋白质，故探讨含有蛋白酶洗衣粉的洗涤效果不能选择丝绸作为洗涤材料，A正确；
B、做实验，无关变量保持相同且适宜，故洗涤材料应该选择固定大小的新布料以保证科学实验的严谨性，B正确；
C、本实验的自变量是洗衣粉的种类，污渍属于无关变量，应该是相同的，实验的观察指标可以是相同洗涤时间内相同污渍的残留程度，C错误；
D、污渍的污染程度要保持一致，这可以通过滴加在布料上的污染物的量来控制，D正确。
故答案为：C。
【分析】加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
16．（2022高二下·南宁期中）为了使牛仔裤呈现“穿旧”效果，在工业洗衣机中用酶洗代替传统的浮石擦洗，是目前重要的生产手段（工艺流程见下图），下列叙述中错误的是（ ）
A．温度、pH等条件，会影响牛仔裤的“穿旧”效果
B．上述工艺中，不可选用包埋法固定化纤维素酶
C．上述工艺中，仿旧颜色的深浅由使用的染料量控制
D．上述工艺中，纤维素酶的作用机理与其在洗衣粉中去污的机理相似
【答案】C
【考点】纤维素分解菌的分离；加酶洗衣粉的洗涤效果及其影响因素
【解析】【解答】A、温度、pH等条件会影响酶的活性，改变温度、酸碱度和处理时间会影响酶作用的结果，进而会影响牛仔裤的“穿旧”效果，A正确；
B、由于纤维素酶较小，不能用包埋法固定化酶，B正确；
C、上述工艺中，仿旧颜色的深浅由纤维素酶的作用效果和使用的染料量共同决定，C错误；
D、纤维素酶在仿旧中的作用机理是适当分解布料中的纤维素成分，洗衣粉中添加纤维素酶的作用机理是适当分解布料中的纤维素成分使织物膨松有利于去污，即纤维素酶均是起催化作用，二者作用机理相似，D正确。
故答案为：C。
【分析】1、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
2、纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即C酶、CX酶、葡萄糖苷酶，其中葡萄糖糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖；刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过观察是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基。
17．（2022高二下·南宁期中）蛋白质的提取和分离是蛋白质研究的重要技术，以下叙述正确的是（ ）
A．实验过程中可采用透析法将蛋白质与其他小分子杂质分离
B．可选择猪、牛、羊、蛙等动物的血液为材料分离血红蛋白
C．实验操作流程依次为粗分离、样品处理、纯化、纯度鉴定
D．根据蛋白质的相对分子质量大小，可通过电泳分离蛋白质
【答案】A
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】A、蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中的小分子物质则可以透过半透膜，因此可以将蛋白质和溶液中的小分子物质分离，A正确；
B、蛋白质的提取和分离实验可以以猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液为材料分离血红蛋白，而不用蛙的，因为血红蛋白存在于红细胞内，哺乳动物的成熟红细胞不含细胞核及众多细胞器，易分离，B错误；
C、实验操作流程依次为：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定，C错误；
D、凝胶色谱法分离蛋白质的原理是不同蛋白质的相对分子质量不同，在凝胶柱中移动的速度不同 ，从而将分子质量较大的蛋白质分子除去，D错误。
故答案为：A。
【分析】1、蛋白质的提取与分离的原理是根据蛋白质的理化性质，即蛋白质的形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等的干差万别，由此提取和分离各种蛋白质。凝胶色谱法的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
2、蛋白质的提取与分离的步骤为：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析（3）纯化：调节缓冲液面一加入蛋白质样品→调节缓冲液面一洗脱一收集分装蛋白质（4）纯度鉴定一SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
18．（2022高二下·南宁期中）如图表示对某蛋白质溶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果（相似于纸层析法分离色素），下列相关叙述不正确的是（ ）
A．蛋白质上某些基团解离后可使蛋白质带电，电场中带电的蛋白质分子（或多肽）会向着与其所带电荷相反的电极移动
B．电泳结果表明溶液中蛋白质可能有两种，但也可能只有一种
C．蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度基本取决于其分子量大小
D．蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度完全取决于其所带净电荷多少
【答案】D
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】A、蛋白质的氨基与羧基可发生解离，使其带正电或负电，带电的蛋白质分子（或多肽）会向着与其所带电荷相反的电极移动，A正确；
B、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳会使蛋白质水解成肽链，故结果所示可能只有一种蛋白质（有两种肽链），也可能是两种蛋白质，B正确；
C、蛋白质在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速度由其分子大小决定，C正确；
D、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳所加的SDS可完全掩盖蛋白质本身所带电荷，故其移动速度与本身所带电荷无关，D错误。
故答案为：D。
【分析】凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。某蛋白质溶液进行SDS-聚丙烯酰胶凝胶电泳的结果有两条带，说明溶液中可能有两种蛋白质，但也可能只有一种（蛋白质水解成两条肽链）。
19．（2022高二下·南宁期中）玫瑰精油素有“液体黄金”之称，下面是提取玫瑰精油的实验流程图，请据图分析不正确的是（ ）
A．提取玫瑰精油的方法是水蒸气蒸馏法
B．①和②操作要求分别加入氯化钠和无水硫酸钠
C．③操作是萃取，以除去固体硫酸钠
D．该实验流程也可用于从薄荷叶中提取薄荷油
【答案】C
【考点】芳香油的提取
【解析】【解答】A、玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏，故提取玫瑰精油的方法是水蒸气蒸馏法，A正确；
B、①是加入氯化钠出现油水分层，②是加入无水硫酸钠吸水，B正确；
C、③是过滤，C错误；
D、薄荷油与玫瑰精油相同，该实验流程也可用于从薄荷叶中提取薄荷油，D正确。
故答案为：C。
【分析】植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
20．（2022高二下·南宁期中）如图是利用水中蒸馏法提取玫瑰精油的装置。下列有关该装置的描述，错误的是（ ）
A．该装置在安装时需要先固定热源酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意蒸馏瓶与热源的距离
B．该装置的安装，一般按照自下而上、从左到右的顺序
C．图中冷凝管的进水口、出水口接错，进水口应在下，出水口应在上
D．将温度计固定在蒸馏瓶头上，固定的位置如图所示，使温度计水银球略高于液面
【答案】D
【考点】芳香油的提取
【解析】【解答】A、该装置在安装时需要先固定热源——酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意其离热源的距离，A正确；
B、蒸馏装置的安装一般都按自下而上、从左到右的顺序，B正确；
C、图中冷凝管进水口、出水口接错，冷凝管进水口在下，出水口在上，与水蒸气流向相反，C正确；
D、温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上，D错误。
故答案为：D。
【分析】植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
二、综合题
21．（2022高二下·南宁期中）棉籽饼作动物饲料时，其所含棉酚（元素组成为 C、H、O）对动物有毒害作用。某科技小组配制培养基（成分为：棉酚0.25 g、(NH4)2SO45.0 g、其他无机盐适量、琼脂2%、蒸馏水）欲从棉花秸秆中分离棉酚分解菌，以对棉籽饼进行脱毒。回答下列问题：
（1）此培养基中(NH4)2SO4能为微生物提供的主要营养为 ；按功能分该培养基属于 培养基。
（2）用平板划线法分离棉酚分解菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有 （答出一点）。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的是 。
（3）采用稀释涂布平板法接种后，菌落数随培养时间的延长而发生变化，因此需每隔24h统计一次菌落数，选择 的记录数据作为结果。在37 ℃下培养48 h，若培养基上出现形状、大小、隆起程度和颜色不同的菌落，可判断培养基上有多种细菌，这里判断依据是在一定的培养条件下，同种微生物表现出 。
（4）在某次分离棉酚分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一位同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种差异产生的原因可能是 (答出1点即可)。
【答案】（1）氮源和无机盐；选择
（2）接种环灼烧后没有冷却就开始划线、划线未从第一区域末端开始（未接触到第一区域末端）；检测培养基灭菌是否合格
（3）菌落数目稳定时；稳定的菌落特征
（4）所取材料不同、培养基污染、操作失误、取样前未摇匀样液
【考点】微生物的分离和培养
【解析】【解答】(1)根据(NH4)2SO4的化学式可知，里面含有氮元素和无机离子，因此(NH4)2SO4能为微生物提供氮源和无机盐。此培养基具有选择功能，理由是以棉酚作为唯一碳源，只有棉酚分解菌才能在此培养基上生长，因此按功能分该培养基属于选择培养基。
(2)在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做可以将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却划线，或者是未从第一区域末端开始。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的检测培养基灭菌是否彻底，即检测培养基灭菌是否合格。
(3)为了防止培养时间不足，导致遗漏菌落数目，采用稀释涂布平板法接种后，选择菌落数目稳定时记录数据作为结果。不同的细菌在培养基上的菌落特征是不同的，有的菌落表面光滑黏稠，有的粗糙干燥，有的易挑起等，因此可依据同种微生物表现出的稳定的菌落特征来判断出菌落上有多种细菌。
(4)两位同学筛选出的菌落个数差异较大，可能是因为所取的材料不同，也可能是培养基污染、操作失误、取样前未摇匀样液等实验操作问题造成的差异。
【分析】1、培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质。营养物质归纳为碳源、氨源、生长因子、无机盐和水。培养基按物理性质可分为固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基；固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等；根据用途分为选择培养基、鉴别培养基。
2、平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞；③将试管口通过火焰；④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞；⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿；⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连；⑧将平板倒置放入培养箱中培养。稀释涂布平板操作的步骤：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；②取少量菌液，滴加到培养基表面；③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s；④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
3、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
22．（2022高二下·南宁期中）如表所示甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，图丙所示为相关分离过程，回答下列问题：
KH2PO4 1.4 g 纤维素粉 5.0 g
Na2HPO4 2.1 g NaNO3 1.0 g
MgSO4·7H2O 0.2 g Na2HPO4 1.2 g
葡萄糖 10.0 g KH2PO4 0.9 g
尿素 1.0 g MgSO4·7H2O 0.5 g
琼脂 15.0 g KCl 0.5 g
酵母膏 0.5 g
水解酪素 0.5 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000 mL
甲 乙
注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到。
（1）从功能上看，甲培养基属于 。从物理性质上看，甲培养基属于 。其中提供氮源的物质是 。
（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落是否都能分解纤维素？ 。如果培养基中加入 可以筛选出具有分解纤维素能力的菌株，同时透明圈越 (填“大”或“小”)，表示该菌分解纤维素的能力越强。
（3）为了计数微生物的数量，图丙采用 法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用 法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果 (填“大”或“小”)。
（4）用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目 (填“少”或“多”)，原因是 。
（5）一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1 mL土壤稀释液④，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则1 mL原土壤样液①中微生物数量约为 。
【答案】（1）选择培养基；固体培养基；尿素
（2）不一定；刚果红；大
（3）稀释涂布平板；显微镜直接计数（或血球计数板计数）；小
（4）小；因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（5）2.5×105
【考点】尿素分解菌的分离与计数
【解析】【解答】（1）培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。其中氮源一般是含氮的化合物，根据甲培养基的配方，甲培养基中提供氮源的物质是尿素。从功能上看，甲培养基属于选择培养基。从物理性质上看，甲培养基属于固体培养基。
（2）如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落不一定都能分解纤维素，有可能利用水解酪素等能提供碳源，也有可能纤维素被分解后产生的糖类等也可为其它微生物生长提供碳源等。如果在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，就可以通过是否产生透明圈来筛选出具有分解纤维素能力的菌株；同时透明圈越大，表示该菌分解纤维素的能力越强。
（3）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数。除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数（或血球计数板计数）也是测定微生物数量的常用方法。所以，图丙采用了稀释涂布法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用显微镜直接计数法进行计数（能计活的和死的细胞）。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果小。
（4）稀释涂布法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（5）由于整个过程涉及3次稀释，每次稀释倍数为50/10=5倍，所以利用平板菌落计数法的计算公式估算原土壤样液中的微生物数：（180+155+176+129）/4÷0.1×5×5×5=2.0×105个。
【分析】1、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氮，氮会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氨源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
（1）该培养基配方中的氨源除了尿素外，还有蛋白胨，因此尿素不是唯一氨源，不能分离出尿素分解菌。
（2）为了防止杂菌污染，接种前需要对培养基进行灭菌。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。
（3）纯化细菌时，如菌液浓度过高，则培养基中菌落可能连成一片，需要对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数），以避免此种现象出现。
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将菌种接种在回体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
2、统计菌落数目的方法∶(1)显微镜直接计数法①原理∶利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法∶用计数板计数；③缺点∶不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法）①原理∶当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作∶a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数= ( c+V )×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积( mL ) ，M代表稀释倍数。
23．（2022高二下·南宁期中）蛋白质对生命活动来说是不可缺少的，人们要研究蛋白质，就得从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置。请回答下列问题：
（1）根据图甲可知，这是采用 法对血红蛋白进行分离的过程，此方法是根据蛋白质 的不同来分离蛋白质的。在对甲图所示的凝胶柱进行装填时，一定要装填均匀，不能有气泡存在，因为气泡会 。
（2）图乙表示对分离出的血红蛋白进行 的过程，此操作的目的是 。
（3）图丙为向色谱柱中加样的过程。操作先后顺序应为 （用图中数字和“→”表示）。
（4）经过丙图所示的操作，连接好缓冲液洗脱瓶，并以较为恒定的流速缓慢加入缓冲液。如果能看到凝胶色谱柱中的红色区带 ，说明色谱柱制作成功。在对蛋白质进行分离纯化后，还需要对得到的蛋白质进行分子量的测定，我们通常使用的是 的方法，这种方法中，蛋白质的迁移率完全取决于 。
【答案】（1）凝胶色谱法；相对分子量大小；搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序（降低分离效果）
（2）透析；除去样品中分子量较小的杂质
（3）④→①→②→③
（4）均匀一致地移动；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；蛋白质分子的大小
【考点】蛋白质的提取和分离
【解析】【解答】(1)根据图甲所示可知，这是采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离的过程，此方法是根据蛋白质的相对分子量大小不同来分离蛋白质的；在对甲图所示的凝胶柱进行装填时，一定要装填均匀，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。
(2)图乙表示对分离出的血红蛋白进行透析的过程，此操作的目的是除去样品中分子量较小的杂质。
(3)进行凝胶色谱操作加样时，加样前，应打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，然后用吸管小心地将1 mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不可破坏凝胶面，正确的加样顺序是④→①→②→③。
(4)经过丙图所示的操作，连接好缓冲液洗脱瓶，并以较为恒定的流速缓慢加入缓冲液，如果能看到凝胶色谱柱中的红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功；在对蛋白质进行分离纯化后，还需要对得到的蛋白质进行分子量的测定，通常使用的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，这种方法中，SDS带有大量的负电荷，因此蛋白质的迁移率完全取决于蛋白质分子的大小。
【分析】蛋白质分离与提纯：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。
24．（2022高二下·南宁期中）胡萝卜素是一种常用的备用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得。薰衣草精油气味芳香，能够清热解毒，清洁皮肤，祛斑美白，深受女性朋友的喜爱，研究还发现薰衣草精油有抑菌作用。请回答下列问题：
（1）薰衣草精油化学性质稳定，不溶于水，易挥发。根据以上特点，可用 法提取薰衣草精油，其原理是 。
（2）科研人员探究薰衣草精油抑菌实验时，以滴加等体积精油小圆形滤纸片为中心的透明圈的大小来比较薰衣草精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，如下表所示。
薰衣草精油对两种细菌活性影响的测定
浓度（μg/disc） 0.5 1 2.5
大肠杆菌抑菌圈直径（mm） 6.72 6.93 8.66
金黄色葡萄球菌抑菌圈直径（mm） 5.8 6.21 6.95
由表数据可知，薰衣草精油对 抑菌效果更好，且表中数据能否得知薰衣草精油对大肠杆菌抑菌效果的最佳浓度？ 。
（3）探究薰衣草精油抑菌实验时所用的培养基需要用 法进行灭菌，灭菌结束后，切断电源，等自然冷却到压力表为0时，再打开排气阀。
（4）从植物中提取胡萝卜素常用的方法是 ，其效率主要取决于 。下图是胡萝卜素粗品鉴定装置示意图。该鉴定方法的名称是 法。在图乙的胡萝卜素层析结果示意图中，A，B，C，D四点中，属于提取样品的样点是 。
【答案】（1）水蒸气蒸馏（或蒸馏）；利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层
（2）大肠杆菌；不能
（3）高压蒸汽灭菌
（4）萃取；萃取剂的性质和使用量；纸层析；B和C
【考点】芳香油的提取；胡萝卜素的提取
【解析】【解答】(1)薰衣草精油化学性质稳定，不溶于水，易挥发，适宜用水蒸气蒸馏法进行提取，其原理是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层，然后再用分液漏斗将这两层分开。
(2)根据表格分析，不同浓度的薰衣草精油作用下，都是大肠杆菌抑菌圈直径较大，说明薰衣草精油对大肠杆菌的抑菌效果更好；表格数据显示，在实验浓度范围内，薰衣草精油浓度为2.5时对大肠杆菌抑菌效果最好，但是不一定是抑菌的最佳浓度。
(3)培养微生物的培养基需保持一定的湿度，一般用高压蒸汽灭菌法灭菌。
(4)胡萝卜素不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂，常用的提取方法是萃取，萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。因此，萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥。鉴定胡萝卜素常用的方法是纸层析法。图乙A，B，C，D 4点中，AD层析后只出现一个点，说明属于标准样品，B和C层析后出现两个点，说明含有杂质，属于提取样品。
【分析】1、植物芳香油的蒸馏提取过程：浸泡、加热蒸馏、乳浊液的分离。植物芳香油的主要成分：主要包括类化合物及其衍生物。橘皮精油的主要成分：柠檬烯。植物芳香油的提取方法：蒸馏法、压榨法和萃取等。
（1）蒸馏法：芳香油具有挥发性。把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油，这种提取方法叫蒸馏法。根据蒸馏过程中原料放置的位置的标准，将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。
（2）萃取法：这种方法需要将新鲜的香花等植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，是芳香油充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油。
（3）压榨法：在橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫压榨法。
2、胡萝卜素是橘黄色的结晶，属于脂溶性物质，其化学性质比较稳定，沸点高且不溶于水，常用石油醚作为溶剂，因此可用萃取法提取胡萝卜素。也就是让胡萝卜素溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后，获得胡萝卜素。操作的一般流程是：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。胡萝卜素萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响，因温度过高和时间过长都会导致胡萝卜素分解，在加热干燥过程中，应该控制好温度和时间，因为温度太高、干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。提取的胡萝卜素可通过纸层析法进行鉴定，在鉴定过程中需要用标准样品对照，以便确定提取的胡萝卜素的纯度。
3、胡萝卜素的粗品鉴定：纸层析法（石油醚易挥发，注意层析容器要密封）
（1）制作层析滤纸：滤纸条预先干燥处理，滤纸筒的竖直边缘不能接触；层析液不能超过基线；
（2）点样：点样时快速细致、样点圆点尽量细小；
（3）层析；
（4）观察：如果提取到的胡萝卜素含杂质，则层析后在滤纸上出现多个不同高度的色素点样。
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