山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中考试生物学试题（含答案）
文档属性
| 名称 | 山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中考试生物学试题（含答案） |  | |
| 格式 | doc | ||
| 文件大小 | 1.2MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2023-05-07 10:02:21 | ||
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文档简介
沂水县2022-2023学年高二下学期期中考试
生物
2023.4
注意事项：
1．本试卷分第I卷选择题页和第II卷非选择题页。满分100分。答题时间100分钟。
2．请将第Ⅰ卷题目的答案选出后用2B铅笔涂在答题卡对应题目的代号上；第Ⅱ卷用黑色签字笔将正确答案答在答题纸对应的位置上，答在试卷上作废。
第Ⅰ卷
一、选择题（本题共15小题，每小题2分，共30分，每小题只有一个选项符合题目要求）
1．泡菜的制作有记载为“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内（纳）瓮中。其洗菜盐水，澄取清者，泻著瓮中，令没菜把即止”，意思是制作极咸的盐水，用盐水洗过的菜放入菜坛中，再把洗过菜的澄清盐水倒入菜坛中，直至淹没菜为止。下列说法错误的是（ ）
A．泡菜坛盖边注水并在发酵的过程中不断补充，可以提供无氧发酵环境
B．发酵过程中加入一些已经腌制过的泡菜汁可以缩短发酵时间
C．应用细菌计数板对泡菜汁中乳酸菌进行计数，应该先盖盖玻片再滴加样液
D．发酵过程中，亚硝酸盐含量随发酵时间延长越积越多，应尽量少食泡菜
2．啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量；故在菌种活化的过程中，需定时取样、检测酵母的生长状况。若某次取样品1mL加入到99mL无菌水中进行稀释后，经台盼蓝染色（体积忽略不计），在25×16型血细胞计数板上计数5个中格中的细胞数为144个。下列有关说法正确的是（ ）
A．糖化后的麦汁煮沸过程是严格的灭菌过程
B．用赤霉素处理大麦种子不能省略制麦环节
C．样品中酵母细胞的密度为7．2×108个细胞/mL
D．糖化采用的温度越高，淀粉水解速度越快
3．某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述错误的是（ ）
A．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15~30min
B．不食用组的培养基上也会有菌落出现
C．在固体培养基X上用涂布器接种细菌
D．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性
4．处理生活垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解，下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列相关叙述错误的是（ ）
A．稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目
B．由于菌种对碘的分解能力不同，所以菌落①与菌落②产生透明圈的大小不同
C．该实验中菌种溶液接种到培养基上，常用的接种工具是灭菌处理过的涂布器
D．培养基中唯一的碳源是淀粉，在培养基中生长的微生物一般为异养微生物
5．微生物蛋白又称单细胞蛋白，它是利用工农业废料及石油废料等人工发酵培养的微生物菌体，科学家们一直尝试利用发酵技术生产的微生物蛋白来替代传统肉类，以期开发一条环保、健康、可持续的肉类生产途径。下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物蛋白不仅含有丰富的蛋白质，还含有糖类、脂质等物质
B．利用发酵技术生产微生物蛋白所用的菌种通常是单一菌种
C．可采用过滤、沉淀等方法将微生物蛋白与发酵液分离
D．发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可利用微生物发酵来生产
6．滁菊为菊科多年生草本植物，长期营养繁殖易造成病毒积累，导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，结果见下表；右图是对不同试管苗进行RT-PCR（逆转录PCR）后的电泳示意图（引物根据CVB的基因序列设计）。（ ）
脱毒方法 样本存活数 脱除CSVd率 脱除CVB率
茎尖分生组织培养 77 20.78 44.16
热处理结合茎尖培养 71 36.62 63.38
病毒唑结合茎尖培养 71 46.48 49.30
下列相关叙述正确的是
A．RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、DNA聚合酶
B．热处理、病毒唑处理后，试管苗存活率下降
C．试管苗2、5尚未脱毒成功，3、4已脱去CSVd和CVB病毒
D．只脱除CSVd病毒时，可选择热处理结合茎尖分生组织培养
7．黑胫病对甘蓝型油菜的危害十分严重，黑芥能抗黑胫病，两者不能直接杂交。为解决该问题，科研人员通过下图所示过程获得抗病品系。培育过程中通过紫外线照射使黑芥部分染色体结构被破坏，据图分析，下列相关叙述错误的是（ ）
A．最终获得的抗病植株具有完整的甘蓝型油菜和黑芥的遗传信息
B．过程①可使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
C．过程③获得的愈伤组织细胞在显微镜下无法观察到来自黑芥苗叶肉细胞的叶绿体
D．可借助PCR技术、黑腐病菌接种实验对杂种植株进行鉴定
8．植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，相关叙述错误的是（ ）
A．可以通过植物细胞培养获得酚类、萜类等植物生长非必需的次生代谢产物
B．植物顶端分生组织附近的病毒很少，甚至无病毒，因此为了获得脱毒苗常常利用茎尖进行植物组织培养
C．细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高单个细胞中次生代谢物的含量
D．快速繁殖花卉的过程中，诱导愈伤组织期间一般不需要光照，此时细胞代谢类型为异养需氧型
9．T4溶菌酶来源于T4噬菌体，是重要的工业用酶。T4溶菌酶（A0）在温度较高时易失去活性，科学家利用一定的技术使T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸。在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键。获得了耐热性高的T4溶菌酶（A1）。下列叙述正确的是（ ）
A．检测A1活性时先将A1与底物混合，再置于高温环境
B．T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程，自然界中的酶都可通过蛋白质工程进行改造
C．氨基酸替换和二硫键的形成需要通过改造基因实现
D．蛋白质工程与中心法则的流动方向一致，即DNA→mRNA→蛋白质
10．“嵌合体”是指由两个或两个以上具有不同遗传物质的细胞系形成的综合体。某大学利用人类诱导多能干细胞培育出类脑组织，植入小鼠的大脑体感皮层中，成功培育出能进行人类某些活动的“嵌合体小鼠”。这对于了解人脑发育过程，探究神经系统退行性疾病有巨大突破。下列相关叙述错误的是（ ）
A．该实验成功的技术基础是动物细胞培养和动物细胞融合
B．嵌合体幼鼠的一个细胞中只含有人或小鼠的基因
C．诱导多能干细胞可以由成体的成纤维细胞、B细胞诱导转化而来
D．“嵌合体小鼠”的培育成功表明已分化的动物细胞可重新分化为其他细胞
11．科学家将能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体与药物结合，制成了抗体一药物偶联物（ADC），实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，ADC的作用机理如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．ADC进入细胞的过程依赖膜的选择透过性
B．制备ADC中的抗体应用了体细胞核移植、动物细胞培养等技术
C．ADC中药物的作用是通过诱发肿瘤细胞坏死而杀伤肿瘤细胞
D．可以将ADC中的药物换成放射性同位素，标记单克隆抗体进行靶向放疗
12．普通番茄细胞中多聚半乳糖醛酸酶基因（PG基因）控制合成的多聚半乳糖醛酸酶，能使番茄细胞壁破坏而不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，使抗PG基因合成的mRNA与PG基因合成的mRNA相结合，从而培育出抗软化的转基因番茄。下列叙述错误的是（ ）
A．PG基因与抗PG基因的区别是基因中的碱基序列不同
B．抗PG基因能阻止PG基因表达的翻译过程，使细胞不能合成PG
C．常用显微注射法将抗PG基因表达载体导入番茄体细胞
D．为了避免转基因植物花粉污染周围植物，可将抗PG基因整合到叶绿体DNA上
13．生物技术在给人带来福音和便利的同时，对人类社会的安全性也产生了一定的影响。下列有关生物技术的安全性与伦理问题叙述正确的是（ ）
A．转基因技术是提高生物多样性的一种重要手段
B．转基因抗虫植株可以减少农药的使用，因此对环境不会造成任何影响
C．转基因技术可用来减少酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
D．生殖性克隆和治疗性克隆的结果本质是相同的，都会面临伦理问题
14．解偶联蛋白1（UCP1）具有消除线粒体内膜两侧的H*浓度差，减少ATP合成、增加产热的功能。我国科学家应用CRISPR/Cas9技术将猪的UCP1基因置换成小鼠的UCP1基因，并使鼠UCP1基因在猪的白色脂肪组织中特异性表达，获得脂肪沉积少的“瘦肉猪”。下图是“瘦肉猪”的主要培育过程，相关叙述错误的是（ ）
A．应用CRISPR/Cas9技术育种的主要原理是基因重组
B．过程b进行有限稀释培养的目的是获得阳性单克隆细胞系
C．过程d的受体细胞最好是去核的猪卵母细胞
D．过程e要对代孕猪进行同期发情处理，并选择发育正常的原肠胚植入代孕猪输卵管
15．下列关于DNA粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与电泳鉴定实验的叙述，错误的是（ ）
A．将鸡的成熟红细胞置于清水中，红细胞涨破后将DNA释放出来
B．DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质
C．将提取到的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，在沸水浴条件下可用二苯胺试剂鉴定
D．DNA分子构象不影响DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移速率
二、选择题（本题共5小题，共15分，每小题有一个或多个选项符合题目要求）
16．某种野生型细菌能够在基本培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某些代谢物，而不能在基本培养基上生长。科研人员利用菌株A和菌株B在基本培养基上培养进行了如下两个实验。实验一结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别置于U型管的两侧，中间由过滤器隔开。过滤器允许培养液自由流通，但细菌细胞不能通过。经几小时培养后，将菌液A、B分别涂布于基本培养基上，结果如图2。下列叙述错误的是（ ）
A．各组实验所用的培养基均需灭菌处理，灭菌后立即倒平板
B．实验二证明菌株A、B相互为对方提供了必需的代谢物
C．菌株A、B可能通过接触发生了遗传物质的重新组合
D．培养菌株A、B的培养基一般需将pH调至酸性
17．第四代试管婴儿技术是卵浆置换技术。该技术首先要取得女性的卵细胞核，再将其移植入优质的去核卵细胞内，使两者重组成活力较强的卵细胞，此卵细胞经体外受精形成胚胎后移植入母体子宫。下列相关叙述错误的是（ ）
A．该技术可以适用于卵子活力差、质量不佳的不孕女性
B．应用该技术培育来的婴儿，其染色体来自父亲和母亲
C．该技术可能会引起社会伦理道德方面的质疑和争议
D．应用该技术能提高不孕女性的受孕率，平衡性别比例
18，为探究Bcl-2相关抗凋亡蛋白3（BAG3）在细胞自噬中的作用，科研人员计划从质粒A中获取BAG3基因，将其接入质粒pGEX-4T1，然后在宿主细胞内表达目标蛋白，用于后续研究（如图1所示），BAG3的基因序列如图2所示。由于BAG3基因两侧没有合适的酶切位点，并确定内部不含有EcoRI，Xho1限制酶的识别序列。在设计引物时，需将引物与限制酶的识别序列相连，以便将目的基因与载体相连。设计出的引物是（ ）
A．引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3'
B．引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3'
C．引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3'
D．引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3'
19．某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶以及基因编辑技术增加了两个父系基因组印记控制区域的甲基化，以及母系控制区域的5个去甲基化，再将一个极体注入经修饰的卵母细胞，然后经早期胚胎培养后进行胚胎移植，成功培育出可育的孤雌小鼠，部分过程如下图所示。相关叙述错误的是（ ）
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
20．常用不对称PCR来制备单链DNA分子探针。不对称PCR中使用的一对引物的量不相等，其中少的称为限制性引物，多的称为非限制性引物，开始扩增出的是双链DNA，后来扩增出了单链DNA。图中，α链为所需的DNA分子探针，已知图示DNA有m个，前10次循环的产物为双链DNA，后10次循环的产物是单链DNA，下列有关此过程的说法正确的是（ ）
A．DNA聚合酶从引物的5'端开始连接脱氧核苷酸
B．引物Ⅰ是非限制性引物，引物N是限制性引物
C．此过程需要非限制性引物个数为（11×2110-1）m
D．此过程最终获得所需单链探针个数为10m×210
第Ⅱ卷
三、非选择题（本题共5小题，共55分）
21．（9分）土壤中的磷大部分以难被植物吸收利用的无效态（如磷酸钙等难溶态，在水中呈白色沉淀）存在，溶磷菌能够把无效态的磷转化为可被直接利用的可溶性磷。科研人员开展了相关研究，请回答下列问题：
（1）取10克土壤样品，依次配备稀释倍数为103、104、105的土壤稀释液，分别取0.1ml涂布于含难溶磷的固体培养基上培养2d。待菌落长出后挑取透明溶磷圈和菌落生长直径比值___________（填写“大”或“小”）的单菌落，于基础培养基上采用___________法进行多次分离纯化。用稀释涂布平板法对溶磷菌计数时，若每毫升菌液中细菌细胞数为1×1010个，每个平板上涂布0.2mL，且每个平板上长出的菌落数约200个，则溶磷菌的菌液稀释___________倍。
（2）将分离获得的溶磷菌分别配制成菌悬液，接入已灭菌的含难溶磷液体培养基中，对照组的培养基接种___________，每天取样测定溶磷量和pH变化情况，实验组结果如图。
①结果表明目的菌分解难溶磷的能力呈现___________的趋势。
②根据培养液的pH变化情况，可对目的菌的解磷原理作出的推测是___________。
（3）获得目的菌后，还可以采取___________的育种措施，进一步提高其耐寒、耐盐的能力。请预期该溶磷菌在农业生产方面可能的应用___________。
22．（9分）紫草是一种重要的药用植物，其根部富含红色的萘醌类次生代谢产物——紫草宁及其衍生物。它们具有抗菌、消炎、活血、诱导癌细胞凋亡和抑制I型HIV等功效，同时也是一种天然染料。科研人员利用紫草新生的营养芽为外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中进行悬浮培养，以获得更多的紫草宁。回答下列问题：
（1）选取新生的营养芽作为外植体的原因是_________________________________。诱导植物原生质体融合常用的化学方法有_________________________________。
（2）下图表示在发酵培养中接种细胞密度与细胞收获量、紫草宁含有率（培养14天）关系的实验结果：
注：紫草宁含有率是指紫草宁质量/细胞收获量
根据实验结果可推测当接种细胞密度超过6g．dry wt．/L时，细胞内紫草宁合成会___________，从而导致紫草宁含有率的下降。根据图中数据，在发酵培养中选择接种细胞密度为6g．dry wt．/L而不是接种细胞密度为4g．dry wt．/L的原因是______________________。在发酵培养过程中，培养基的成分组成、浓度，也会影响到紫草宁含有率。在培养过程中，需震荡培养的目的是______________________。
（3）研究者设计实验进一步探讨激素诱导愈伤组织分化生芽的机制。研究发现在愈伤组织生芽过程中，细胞分裂素（CK）通过A基因和W基因起作用。为探讨A基因与W基因的关系，将A基因功能缺失突变体（突变体a）和野生型的愈伤组织分别置于CK与生长素比例高的（高CK）培养基中诱导生芽，在此过程中测定W基因的表达量如右图，分析图中结果可得出的结论是：野生型的W基因表达量与高CK诱导时间的关系是随着高CK诱导时间的延长，______________________；在高CK诱导下A基因与W基因的关系是______________________。
23．（12分）双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。
（一）长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图甲是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图乙是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：
（1）与植物体细胞杂交相比，图甲中过程②特有的诱导融合的方法是___________过程，过程②选用的骨髓瘤细胞没有接触抑制的现象，主要原因是___________，该瘤细胞___________（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。在细胞培养过程中除了提供营养物质外，还需向培养基中添加___________，并将其置于___________的气体环境的培养箱中进行培养。
（2）为选出能产生专一抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞·mL-1，将细胞稀释液滴入多孔培养板中，使多孔培养板每孔中有___________个细胞，然后筛选出专一抗体检测呈___________（选填“阳性”或“阴性”）的细胞进行克隆化培养，该克隆化培养细胞具有的特点为___________。图甲方框内需要经过___________次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。
（二）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMA×CD28，诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如下图2。
制备过程为：先将___________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的___________细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于___________而产生多种抗体，因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
24．（12分）PCR技术的实用性和极强的生命力其使成为生物科学研究的一种重要方法，极大地推动了分子生物学以及生物技术产业的发展。下面是两个具体实验中的PCR技术应用，请根据资料回答下列问题：
（1）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物，如图所示：
①PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中，PCRI应选择图1中引物___________，大量扩增突变产物AD则应选择引物___________，重叠延伸时不需要引物的原因___________。
②重叠延伸PCR通过___________实现定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是___________。
③若正常基因可被限制酶DpnI识别并切割，特定位点突变后的基因不能被DpnI识别，请设计实验思路鉴定上述过程获得的突变产物AD是否为突变基因：___________。
（2）反向PCR可用于扩增未知序列，其原理如下图所示。下图链状DNA分子内侧是已知序列，外侧为未知序列。
①不直接在图2中DNA分子的两端设计引物并进行扩增，原因是___________。
②图3中环状DNA进行PCR的过程中，沿引物A延伸子链的延伸方向是___________（填“顺时针”或“逆时针”），PCR产物___________（填“含有”或“不含”）EcoRI的酶切位点。
25．（13分）以下是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料：
资料1：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒[5'AOXI和3'AOXI（TT）分别是基因AOXI的启动子和终止子]用作载体，其与目的基因HBsAg形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。
注意HBsAg基因中的白色箭头表示转录的方向
资料2：限制酶酶切位点
限制酶 SnaBI AvrII SacI Bg1II
识别序 列及酶 切位点
（1）用PCR技术扩增HBsAg基因时所需TaqDNA聚合酶需要___________激活。此过程中需要添加引物的原因是_____________________________________________________________________________。
（2）为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，设计引物时需要在引物的___________端添加相应限制酶的识别序列，则在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是___________、___________，这样设计的优点是___________。
（3）酶切获取HBsAg基因后，需用___________（填"EcoliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，构建重组质粒的目的是___________。
（4）若用限制酶SnaBI，BglII联合酶切pPIC9K质粒，获得的DNA片段的长度分别是36kb，25kb，65kb；用限制酶BglII、AvrII联合酶切pPIC9K质粒，得到的DNA片段的长度分别是36kb，36kb、54kb；已知HBsAg基因长度是52kb。步骤3中应选用限制酶___________来切割重组质粒以获得重组DNA，切割后的重组DNA的长度是___________。
沂水县2022-2023学年高二下学期期中考试
生物参考答案及评分标准
2023.4
一、选择题（本题共15小题，每小题2分，共30分，每小题只有一个选项符合题目要求）
1．D 2．C 3．D 4．B 5．D 6．B 7．A 8．C 9．C
10．A 11．D 12．C 13．C 14．D 15．D
二、选择题：本题共5小题，每小题有一个或多个选项符合题目要求。
16．ABD 17．D 18．AD 19．CD 20．CD
三、非选择题：本题共5小题。
21．（除标注外每空1分，共9分）（1）大 平板划线 104
（2）等量灭活的菌悬液（或等量无菌水） ①先升高后降低 ②溶磷菌通过产生酸性代谢产物分解难溶性磷
（3）诱变育种（或基因工程） 将溶磷菌制成生物肥料促进植物对磷元素的吸收（2分）
22．（除标注外每空1分，共9分） （1）细胞分化程度低，容易诱导形成愈伤组织 聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法
（2）受到抑制或减慢 两种接种细胞密度下紫草宁的含有率相同，但接种细胞密度为6g．dry wt．/L时，细胞收获量多（2分） 保证氧气供应充足，使细胞与培养液充分接触（2分）
（3）野生型的W基因表达量显著升高 在高CK诱导下A基因促进W基因表达
23．（每空1分，共12分）（-）（1）灭活的病毒诱导 细胞膜表面的糖蛋白减少 不能 动物血清 95%的空气、5%的CO2
（2）一（或者最多一个） 阳性 既能无限增殖，又能产生特异性抗体 2
（二）PSMA、CD28 骨髓瘤 L链和H链的随机组合
24．（除标注外每空1分，共12分）（1）①a和b a和d 可以分别以AB上链和CD下链为引物进行延伸 ②在引物b和c上引入突变（2分） 引物b和引物c可以互补配对，导致引物失效（2分）
③用限制酶DpnI分别处理正常基因和上述过程获得的突变产物AD，然后进行电泳；若上述过程获得的突变产物AD的电泳条带只有一条且大于正常基因的电泳条带，则为突变基因。（2分）
（2）DNA两端序列未知，无法设计引物 逆时针 含有
25．（除标注外每空1分，共13分）（1）Mg2+ DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸（2分）
（2）5` TACGTA CCTAGG 避免目的基因反向接入质粒（保证目的基因定向接入质粒）（2分）
（3）T4DNA连接酶 让目的基因在受体细胞中稳定存在和遗传，并使目的基因能够表达和发挥作用（2分）
（4）BglII 131kb
生物
2023.4
注意事项：
1．本试卷分第I卷选择题页和第II卷非选择题页。满分100分。答题时间100分钟。
2．请将第Ⅰ卷题目的答案选出后用2B铅笔涂在答题卡对应题目的代号上；第Ⅱ卷用黑色签字笔将正确答案答在答题纸对应的位置上，答在试卷上作废。
第Ⅰ卷
一、选择题（本题共15小题，每小题2分，共30分，每小题只有一个选项符合题目要求）
1．泡菜的制作有记载为“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内（纳）瓮中。其洗菜盐水，澄取清者，泻著瓮中，令没菜把即止”，意思是制作极咸的盐水，用盐水洗过的菜放入菜坛中，再把洗过菜的澄清盐水倒入菜坛中，直至淹没菜为止。下列说法错误的是（ ）
A．泡菜坛盖边注水并在发酵的过程中不断补充，可以提供无氧发酵环境
B．发酵过程中加入一些已经腌制过的泡菜汁可以缩短发酵时间
C．应用细菌计数板对泡菜汁中乳酸菌进行计数，应该先盖盖玻片再滴加样液
D．发酵过程中，亚硝酸盐含量随发酵时间延长越积越多，应尽量少食泡菜
2．啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量；故在菌种活化的过程中，需定时取样、检测酵母的生长状况。若某次取样品1mL加入到99mL无菌水中进行稀释后，经台盼蓝染色（体积忽略不计），在25×16型血细胞计数板上计数5个中格中的细胞数为144个。下列有关说法正确的是（ ）
A．糖化后的麦汁煮沸过程是严格的灭菌过程
B．用赤霉素处理大麦种子不能省略制麦环节
C．样品中酵母细胞的密度为7．2×108个细胞/mL
D．糖化采用的温度越高，淀粉水解速度越快
3．某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述错误的是（ ）
A．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15~30min
B．不食用组的培养基上也会有菌落出现
C．在固体培养基X上用涂布器接种细菌
D．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性
4．处理生活垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解，下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列相关叙述错误的是（ ）
A．稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目
B．由于菌种对碘的分解能力不同，所以菌落①与菌落②产生透明圈的大小不同
C．该实验中菌种溶液接种到培养基上，常用的接种工具是灭菌处理过的涂布器
D．培养基中唯一的碳源是淀粉，在培养基中生长的微生物一般为异养微生物
5．微生物蛋白又称单细胞蛋白，它是利用工农业废料及石油废料等人工发酵培养的微生物菌体，科学家们一直尝试利用发酵技术生产的微生物蛋白来替代传统肉类，以期开发一条环保、健康、可持续的肉类生产途径。下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物蛋白不仅含有丰富的蛋白质，还含有糖类、脂质等物质
B．利用发酵技术生产微生物蛋白所用的菌种通常是单一菌种
C．可采用过滤、沉淀等方法将微生物蛋白与发酵液分离
D．发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可利用微生物发酵来生产
6．滁菊为菊科多年生草本植物，长期营养繁殖易造成病毒积累，导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，结果见下表；右图是对不同试管苗进行RT-PCR（逆转录PCR）后的电泳示意图（引物根据CVB的基因序列设计）。（ ）
脱毒方法 样本存活数 脱除CSVd率 脱除CVB率
茎尖分生组织培养 77 20.78 44.16
热处理结合茎尖培养 71 36.62 63.38
病毒唑结合茎尖培养 71 46.48 49.30
下列相关叙述正确的是
A．RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、DNA聚合酶
B．热处理、病毒唑处理后，试管苗存活率下降
C．试管苗2、5尚未脱毒成功，3、4已脱去CSVd和CVB病毒
D．只脱除CSVd病毒时，可选择热处理结合茎尖分生组织培养
7．黑胫病对甘蓝型油菜的危害十分严重，黑芥能抗黑胫病，两者不能直接杂交。为解决该问题，科研人员通过下图所示过程获得抗病品系。培育过程中通过紫外线照射使黑芥部分染色体结构被破坏，据图分析，下列相关叙述错误的是（ ）
A．最终获得的抗病植株具有完整的甘蓝型油菜和黑芥的遗传信息
B．过程①可使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
C．过程③获得的愈伤组织细胞在显微镜下无法观察到来自黑芥苗叶肉细胞的叶绿体
D．可借助PCR技术、黑腐病菌接种实验对杂种植株进行鉴定
8．植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，相关叙述错误的是（ ）
A．可以通过植物细胞培养获得酚类、萜类等植物生长非必需的次生代谢产物
B．植物顶端分生组织附近的病毒很少，甚至无病毒，因此为了获得脱毒苗常常利用茎尖进行植物组织培养
C．细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞生长的培养条件，提高单个细胞中次生代谢物的含量
D．快速繁殖花卉的过程中，诱导愈伤组织期间一般不需要光照，此时细胞代谢类型为异养需氧型
9．T4溶菌酶来源于T4噬菌体，是重要的工业用酶。T4溶菌酶（A0）在温度较高时易失去活性，科学家利用一定的技术使T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸。在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键。获得了耐热性高的T4溶菌酶（A1）。下列叙述正确的是（ ）
A．检测A1活性时先将A1与底物混合，再置于高温环境
B．T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程，自然界中的酶都可通过蛋白质工程进行改造
C．氨基酸替换和二硫键的形成需要通过改造基因实现
D．蛋白质工程与中心法则的流动方向一致，即DNA→mRNA→蛋白质
10．“嵌合体”是指由两个或两个以上具有不同遗传物质的细胞系形成的综合体。某大学利用人类诱导多能干细胞培育出类脑组织，植入小鼠的大脑体感皮层中，成功培育出能进行人类某些活动的“嵌合体小鼠”。这对于了解人脑发育过程，探究神经系统退行性疾病有巨大突破。下列相关叙述错误的是（ ）
A．该实验成功的技术基础是动物细胞培养和动物细胞融合
B．嵌合体幼鼠的一个细胞中只含有人或小鼠的基因
C．诱导多能干细胞可以由成体的成纤维细胞、B细胞诱导转化而来
D．“嵌合体小鼠”的培育成功表明已分化的动物细胞可重新分化为其他细胞
11．科学家将能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体与药物结合，制成了抗体一药物偶联物（ADC），实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，ADC的作用机理如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．ADC进入细胞的过程依赖膜的选择透过性
B．制备ADC中的抗体应用了体细胞核移植、动物细胞培养等技术
C．ADC中药物的作用是通过诱发肿瘤细胞坏死而杀伤肿瘤细胞
D．可以将ADC中的药物换成放射性同位素，标记单克隆抗体进行靶向放疗
12．普通番茄细胞中多聚半乳糖醛酸酶基因（PG基因）控制合成的多聚半乳糖醛酸酶，能使番茄细胞壁破坏而不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，使抗PG基因合成的mRNA与PG基因合成的mRNA相结合，从而培育出抗软化的转基因番茄。下列叙述错误的是（ ）
A．PG基因与抗PG基因的区别是基因中的碱基序列不同
B．抗PG基因能阻止PG基因表达的翻译过程，使细胞不能合成PG
C．常用显微注射法将抗PG基因表达载体导入番茄体细胞
D．为了避免转基因植物花粉污染周围植物，可将抗PG基因整合到叶绿体DNA上
13．生物技术在给人带来福音和便利的同时，对人类社会的安全性也产生了一定的影响。下列有关生物技术的安全性与伦理问题叙述正确的是（ ）
A．转基因技术是提高生物多样性的一种重要手段
B．转基因抗虫植株可以减少农药的使用，因此对环境不会造成任何影响
C．转基因技术可用来减少酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
D．生殖性克隆和治疗性克隆的结果本质是相同的，都会面临伦理问题
14．解偶联蛋白1（UCP1）具有消除线粒体内膜两侧的H*浓度差，减少ATP合成、增加产热的功能。我国科学家应用CRISPR/Cas9技术将猪的UCP1基因置换成小鼠的UCP1基因，并使鼠UCP1基因在猪的白色脂肪组织中特异性表达，获得脂肪沉积少的“瘦肉猪”。下图是“瘦肉猪”的主要培育过程，相关叙述错误的是（ ）
A．应用CRISPR/Cas9技术育种的主要原理是基因重组
B．过程b进行有限稀释培养的目的是获得阳性单克隆细胞系
C．过程d的受体细胞最好是去核的猪卵母细胞
D．过程e要对代孕猪进行同期发情处理，并选择发育正常的原肠胚植入代孕猪输卵管
15．下列关于DNA粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与电泳鉴定实验的叙述，错误的是（ ）
A．将鸡的成熟红细胞置于清水中，红细胞涨破后将DNA释放出来
B．DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质
C．将提取到的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，在沸水浴条件下可用二苯胺试剂鉴定
D．DNA分子构象不影响DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移速率
二、选择题（本题共5小题，共15分，每小题有一个或多个选项符合题目要求）
16．某种野生型细菌能够在基本培养基中生长，突变菌株A和突变菌株B由于不能自己合成某些代谢物，而不能在基本培养基上生长。科研人员利用菌株A和菌株B在基本培养基上培养进行了如下两个实验。实验一结果如图1；实验二：将菌株A和菌株B分别置于U型管的两侧，中间由过滤器隔开。过滤器允许培养液自由流通，但细菌细胞不能通过。经几小时培养后，将菌液A、B分别涂布于基本培养基上，结果如图2。下列叙述错误的是（ ）
A．各组实验所用的培养基均需灭菌处理，灭菌后立即倒平板
B．实验二证明菌株A、B相互为对方提供了必需的代谢物
C．菌株A、B可能通过接触发生了遗传物质的重新组合
D．培养菌株A、B的培养基一般需将pH调至酸性
17．第四代试管婴儿技术是卵浆置换技术。该技术首先要取得女性的卵细胞核，再将其移植入优质的去核卵细胞内，使两者重组成活力较强的卵细胞，此卵细胞经体外受精形成胚胎后移植入母体子宫。下列相关叙述错误的是（ ）
A．该技术可以适用于卵子活力差、质量不佳的不孕女性
B．应用该技术培育来的婴儿，其染色体来自父亲和母亲
C．该技术可能会引起社会伦理道德方面的质疑和争议
D．应用该技术能提高不孕女性的受孕率，平衡性别比例
18，为探究Bcl-2相关抗凋亡蛋白3（BAG3）在细胞自噬中的作用，科研人员计划从质粒A中获取BAG3基因，将其接入质粒pGEX-4T1，然后在宿主细胞内表达目标蛋白，用于后续研究（如图1所示），BAG3的基因序列如图2所示。由于BAG3基因两侧没有合适的酶切位点，并确定内部不含有EcoRI，Xho1限制酶的识别序列。在设计引物时，需将引物与限制酶的识别序列相连，以便将目的基因与载体相连。设计出的引物是（ ）
A．引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3'
B．引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3'
C．引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3'
D．引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3'
19．某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶以及基因编辑技术增加了两个父系基因组印记控制区域的甲基化，以及母系控制区域的5个去甲基化，再将一个极体注入经修饰的卵母细胞，然后经早期胚胎培养后进行胚胎移植，成功培育出可育的孤雌小鼠，部分过程如下图所示。相关叙述错误的是（ ）
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
20．常用不对称PCR来制备单链DNA分子探针。不对称PCR中使用的一对引物的量不相等，其中少的称为限制性引物，多的称为非限制性引物，开始扩增出的是双链DNA，后来扩增出了单链DNA。图中，α链为所需的DNA分子探针，已知图示DNA有m个，前10次循环的产物为双链DNA，后10次循环的产物是单链DNA，下列有关此过程的说法正确的是（ ）
A．DNA聚合酶从引物的5'端开始连接脱氧核苷酸
B．引物Ⅰ是非限制性引物，引物N是限制性引物
C．此过程需要非限制性引物个数为（11×2110-1）m
D．此过程最终获得所需单链探针个数为10m×210
第Ⅱ卷
三、非选择题（本题共5小题，共55分）
21．（9分）土壤中的磷大部分以难被植物吸收利用的无效态（如磷酸钙等难溶态，在水中呈白色沉淀）存在，溶磷菌能够把无效态的磷转化为可被直接利用的可溶性磷。科研人员开展了相关研究，请回答下列问题：
（1）取10克土壤样品，依次配备稀释倍数为103、104、105的土壤稀释液，分别取0.1ml涂布于含难溶磷的固体培养基上培养2d。待菌落长出后挑取透明溶磷圈和菌落生长直径比值___________（填写“大”或“小”）的单菌落，于基础培养基上采用___________法进行多次分离纯化。用稀释涂布平板法对溶磷菌计数时，若每毫升菌液中细菌细胞数为1×1010个，每个平板上涂布0.2mL，且每个平板上长出的菌落数约200个，则溶磷菌的菌液稀释___________倍。
（2）将分离获得的溶磷菌分别配制成菌悬液，接入已灭菌的含难溶磷液体培养基中，对照组的培养基接种___________，每天取样测定溶磷量和pH变化情况，实验组结果如图。
①结果表明目的菌分解难溶磷的能力呈现___________的趋势。
②根据培养液的pH变化情况，可对目的菌的解磷原理作出的推测是___________。
（3）获得目的菌后，还可以采取___________的育种措施，进一步提高其耐寒、耐盐的能力。请预期该溶磷菌在农业生产方面可能的应用___________。
22．（9分）紫草是一种重要的药用植物，其根部富含红色的萘醌类次生代谢产物——紫草宁及其衍生物。它们具有抗菌、消炎、活血、诱导癌细胞凋亡和抑制I型HIV等功效，同时也是一种天然染料。科研人员利用紫草新生的营养芽为外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中进行悬浮培养，以获得更多的紫草宁。回答下列问题：
（1）选取新生的营养芽作为外植体的原因是_________________________________。诱导植物原生质体融合常用的化学方法有_________________________________。
（2）下图表示在发酵培养中接种细胞密度与细胞收获量、紫草宁含有率（培养14天）关系的实验结果：
注：紫草宁含有率是指紫草宁质量/细胞收获量
根据实验结果可推测当接种细胞密度超过6g．dry wt．/L时，细胞内紫草宁合成会___________，从而导致紫草宁含有率的下降。根据图中数据，在发酵培养中选择接种细胞密度为6g．dry wt．/L而不是接种细胞密度为4g．dry wt．/L的原因是______________________。在发酵培养过程中，培养基的成分组成、浓度，也会影响到紫草宁含有率。在培养过程中，需震荡培养的目的是______________________。
（3）研究者设计实验进一步探讨激素诱导愈伤组织分化生芽的机制。研究发现在愈伤组织生芽过程中，细胞分裂素（CK）通过A基因和W基因起作用。为探讨A基因与W基因的关系，将A基因功能缺失突变体（突变体a）和野生型的愈伤组织分别置于CK与生长素比例高的（高CK）培养基中诱导生芽，在此过程中测定W基因的表达量如右图，分析图中结果可得出的结论是：野生型的W基因表达量与高CK诱导时间的关系是随着高CK诱导时间的延长，______________________；在高CK诱导下A基因与W基因的关系是______________________。
23．（12分）双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。
（一）长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图甲是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图乙是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：
（1）与植物体细胞杂交相比，图甲中过程②特有的诱导融合的方法是___________过程，过程②选用的骨髓瘤细胞没有接触抑制的现象，主要原因是___________，该瘤细胞___________（选填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。在细胞培养过程中除了提供营养物质外，还需向培养基中添加___________，并将其置于___________的气体环境的培养箱中进行培养。
（2）为选出能产生专一抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞·mL-1，将细胞稀释液滴入多孔培养板中，使多孔培养板每孔中有___________个细胞，然后筛选出专一抗体检测呈___________（选填“阳性”或“阴性”）的细胞进行克隆化培养，该克隆化培养细胞具有的特点为___________。图甲方框内需要经过___________次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。
（二）CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMA×CD28，诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如下图2。
制备过程为：先将___________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的___________细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于___________而产生多种抗体，因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。
24．（12分）PCR技术的实用性和极强的生命力其使成为生物科学研究的一种重要方法，极大地推动了分子生物学以及生物技术产业的发展。下面是两个具体实验中的PCR技术应用，请根据资料回答下列问题：
（1）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物，如图所示：
①PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中，PCRI应选择图1中引物___________，大量扩增突变产物AD则应选择引物___________，重叠延伸时不需要引物的原因___________。
②重叠延伸PCR通过___________实现定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是___________。
③若正常基因可被限制酶DpnI识别并切割，特定位点突变后的基因不能被DpnI识别，请设计实验思路鉴定上述过程获得的突变产物AD是否为突变基因：___________。
（2）反向PCR可用于扩增未知序列，其原理如下图所示。下图链状DNA分子内侧是已知序列，外侧为未知序列。
①不直接在图2中DNA分子的两端设计引物并进行扩增，原因是___________。
②图3中环状DNA进行PCR的过程中，沿引物A延伸子链的延伸方向是___________（填“顺时针”或“逆时针”），PCR产物___________（填“含有”或“不含”）EcoRI的酶切位点。
25．（13分）以下是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料：
资料1：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒[5'AOXI和3'AOXI（TT）分别是基因AOXI的启动子和终止子]用作载体，其与目的基因HBsAg形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。
注意HBsAg基因中的白色箭头表示转录的方向
资料2：限制酶酶切位点
限制酶 SnaBI AvrII SacI Bg1II
识别序 列及酶 切位点
（1）用PCR技术扩增HBsAg基因时所需TaqDNA聚合酶需要___________激活。此过程中需要添加引物的原因是_____________________________________________________________________________。
（2）为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，设计引物时需要在引物的___________端添加相应限制酶的识别序列，则在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是___________、___________，这样设计的优点是___________。
（3）酶切获取HBsAg基因后，需用___________（填"EcoliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，构建重组质粒的目的是___________。
（4）若用限制酶SnaBI，BglII联合酶切pPIC9K质粒，获得的DNA片段的长度分别是36kb，25kb，65kb；用限制酶BglII、AvrII联合酶切pPIC9K质粒，得到的DNA片段的长度分别是36kb，36kb、54kb；已知HBsAg基因长度是52kb。步骤3中应选用限制酶___________来切割重组质粒以获得重组DNA，切割后的重组DNA的长度是___________。
沂水县2022-2023学年高二下学期期中考试
生物参考答案及评分标准
2023.4
一、选择题（本题共15小题，每小题2分，共30分，每小题只有一个选项符合题目要求）
1．D 2．C 3．D 4．B 5．D 6．B 7．A 8．C 9．C
10．A 11．D 12．C 13．C 14．D 15．D
二、选择题：本题共5小题，每小题有一个或多个选项符合题目要求。
16．ABD 17．D 18．AD 19．CD 20．CD
三、非选择题：本题共5小题。
21．（除标注外每空1分，共9分）（1）大 平板划线 104
（2）等量灭活的菌悬液（或等量无菌水） ①先升高后降低 ②溶磷菌通过产生酸性代谢产物分解难溶性磷
（3）诱变育种（或基因工程） 将溶磷菌制成生物肥料促进植物对磷元素的吸收（2分）
22．（除标注外每空1分，共9分） （1）细胞分化程度低，容易诱导形成愈伤组织 聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法
（2）受到抑制或减慢 两种接种细胞密度下紫草宁的含有率相同，但接种细胞密度为6g．dry wt．/L时，细胞收获量多（2分） 保证氧气供应充足，使细胞与培养液充分接触（2分）
（3）野生型的W基因表达量显著升高 在高CK诱导下A基因促进W基因表达
23．（每空1分，共12分）（-）（1）灭活的病毒诱导 细胞膜表面的糖蛋白减少 不能 动物血清 95%的空气、5%的CO2
（2）一（或者最多一个） 阳性 既能无限增殖，又能产生特异性抗体 2
（二）PSMA、CD28 骨髓瘤 L链和H链的随机组合
24．（除标注外每空1分，共12分）（1）①a和b a和d 可以分别以AB上链和CD下链为引物进行延伸 ②在引物b和c上引入突变（2分） 引物b和引物c可以互补配对，导致引物失效（2分）
③用限制酶DpnI分别处理正常基因和上述过程获得的突变产物AD，然后进行电泳；若上述过程获得的突变产物AD的电泳条带只有一条且大于正常基因的电泳条带，则为突变基因。（2分）
（2）DNA两端序列未知，无法设计引物 逆时针 含有
25．（除标注外每空1分，共13分）（1）Mg2+ DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸（2分）
（2）5` TACGTA CCTAGG 避免目的基因反向接入质粒（保证目的基因定向接入质粒）（2分）
（3）T4DNA连接酶 让目的基因在受体细胞中稳定存在和遗传，并使目的基因能够表达和发挥作用（2分）
（4）BglII 131kb
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