【三年高考】2012-2014年全国高考生物真题汇编：（人教版）选修3专题2《细胞工程》
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| 名称 | 【三年高考】2012-2014年全国高考生物真题汇编：（人教版）选修3专题2《细胞工程》 |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 397.5KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（新课程标准） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2014-07-03 11:03:53 | ||
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文档简介
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全国高考生物试题分章整理
2014年
专题2细胞工程
（浙江卷）3.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是
A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
【答案】B
【解析】连续细胞系的细胞其核型已发生改变 ( http: / / www.21cnjy.com )；一个祖细胞培养形成的细胞群才为一个克隆；未经克隆化培养的细胞系细胞可能是不同细胞分裂形成的，其性状可能不同。
（课标Ⅰ卷）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（ ( http: / / www.21cnjy.com )X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。21cnjy.com
( http: / / www.21cnjy.com )
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
回答下列问题：
（1）制备融合所需的B淋巴 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是 。
（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除 ( http: / / www.21cnjy.com )含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。21教育名师原创作品
（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。
【答案】（1）四 Y Y小鼠的抗体效价最高
（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
（3）1 100
（4）不能无限增殖
【解析】（1）据图分析，第四次注射 ( http: / / www.21cnjy.com )后X、Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到16000以上，小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适用于制备单克隆抗体。
（2）融合体系中除了未融合的细胞和 ( http: / / www.21cnjy.com )杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞和B淋巴细胞的自身融合产物，由于细胞膜具有流动性，且诱导之后的细胞融合不具有特异性，故体系中会出现多种类型的细胞。
（3）杂交瘤细胞形成后，小鼠的免疫B淋巴细胞 ( http: / / www.21cnjy.com )核与其骨髓瘤细胞核会融合形成一个细胞核。小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条）和骨髓瘤细胞（染色体数目60条）融合后，染色体可达100条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后，仍然不是能恶性增殖的细胞，同时正常细胞的分裂次数是有限的。
（江苏卷）29.（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：
（1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为 。
（2）在愈伤组织悬浮培养时 ( http: / / www.21cnjy.com )，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有 ；培养液中蔗糖的作用是 、 。
( http: / / www.21cnjy.com )
（3）多倍体愈伤组织细胞 ( http: / / www.21cnjy.com )产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经 处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和 酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是 、 。
（4）为了更好地获得次生代谢产物，生产 ( http: / / www.21cnjy.com )中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有 （填序号）。
①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 ②必须在光照条件下培养
③培养过程中需通空气 ④固定化后植物细胞生长会变慢
【答案】（9分）
（1）脱分化
（2）蔗糖浓度下降，pH降低 提供能源 调节渗透压
（3）秋水仙素（低温） 果胶 经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期 经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期
（4）①③④
【解析】本题考查的是植物组织培养、染色体变异及细胞固定化。
（1）外植体在人工、无菌条件下，经脱分化可形成愈伤组织。
（2）由图蔗糖浓度下降，可知外植体离体 ( http: / / www.21cnjy.com )培养过程中需要消耗蔗糖，12天后蔗糖浓度变化不大；pH下降会影响酶的活性，愈伤组织细胞对物质的合成小于分解，细胞干重下降。植物组织培养过程中，蔗糖既能维持一定的渗透压，又能提供植物细胞生命活动必须的营养物质（能量）。
（3）一定浓度的秋水仙素或低温都可 ( http: / / www.21cnjy.com )抑制纺锤体的形成，使子染色体不能移向两极，从而使细胞中染色体数目加倍。植物细胞间的成分主要是纤维素和果胶，可通过纤维素酶、果胶酶破坏细胞间的物质，从而使愈伤组织细胞分离。在培养过程中，各个细胞所处时期不同，在用秋水仙素或低温处理后，一定时间内不同时期细胞分裂次数不同，从而会出现染色体为2n、4n、8n等的细胞，4n的细胞在有丝分裂后期着丝点分裂染色体数目加倍至8n；8n的细胞在有丝分裂中期能清晰看出8n条染色体。
（4）为了更好地获得次生代谢产物，应选用 ( http: / / www.21cnjy.com )生长旺盛的愈伤组织。愈伤组织不能进行光合作用，因此要通入无菌空气确保其正常的生命活动。细胞的固定通常使用包埋法，由于包埋材料的影响，营养物质和氧气的扩散都受到一定的限制，所以固定化细胞生长速度慢。
（广东卷）29（16分）铁皮石斛是我 ( http: / / www.21cnjy.com )国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
( http: / / www.21cnjy.com )
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：
( http: / / www.21cnjy.com )
⑴选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称 。
⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在 ， ， 。
⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但 ( http: / / www.21cnjy.com )会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题：www-2-1-cnjy-com
①ABA的浓度梯度设置和添加方 ( http: / / www.21cnjy.com )式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基 后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。
③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培 ( http: / / www.21cnjy.com )养时间：当某3个样品（重复样）的 时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成 ( http: / / www.21cnjy.com )PLBs（2分）； 细胞的脱分化（2分） （2）生长起始快（2分）， 快速生长时间较长（2分）； PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）； ②75（2分）； ③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分）【版权所有：21教育】
【解析】【解析】（1）新生营 ( http: / / www.21cnjy.com )养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。
2013年
专题2细胞工程
（2013全国卷大纲版） 2.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同 学优高考网
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
【答案】B
【解析】植物组织培养不需要用胰蛋白酶，B错误。
【试题点评】本题考察学生对细胞工程技术的了解，难度较低。
（2013重庆卷）5.某兴趣小组拟用组 ( http: / / www.21cnjy.com )织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是
A．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害
B．在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞
C．出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控
D．生根时，培养基通常应含α—萘乙酸等生长素类调节剂
【答案】B
【解析】消毒剂的使用既要杀死表面微生物 ( http: / / www.21cnjy.com )，有防止伤害组织细胞，影响组织培养，A项正确；植物细胞融合是指经纤维素酶和果胶酶处理后得到的原生质体的诱导融合，带有细胞壁的愈伤组织细胞不能诱导融合形成染色体加倍的细胞，B项错误；出芽和生根都是细胞再分化的结果，其实质是基因的选择性表达，C项正确；α—萘乙酸为生长素类似物，可诱导愈伤组织生根，D项正确。21·cn·jy·com
【试题评价】本题考查植物组织培养相关知识 ( http: / / www.21cnjy.com )和考生的理解能力，涉及外植体的消毒、植物体细胞杂交、细胞分化及植物生长调节剂对组织培养的影响等内容，较易得分。
（2013浙江卷）6．实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误的是
A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D．丁过程得到的细胞具有异质性
案：C
解析：A进行细胞培养前需要对细胞进行消毒，A ( http: / / www.21cnjy.com )正确；B进行培养的组织细胞用胰蛋白酶消化分散成单个细胞，B正确；C丙过程属于原代培养，细胞的核型稳定，C错误；D丁过程属于传代培养，期间部分细胞会出现异质性，D正确；
（2013重庆卷）2．题2图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是
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A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
【答案】D
【解析】①是获得已经免疫的B细胞，A ( http: / / www.21cnjy.com )项错误；胰蛋白酶使得组织块分散为单个细胞，B项错误；③同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④经筛选后获得能够获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D项正确。2·1·c·n·j·y
【试题评价】本题考查单克隆抗体制备流程相关只是和考生的识图能力，属理解层次，较易得分。
（2013江苏卷）11. 某种极具观赏 ( http: / / www.21cnjy.com )价值的兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，可应用多种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用的是 21*cnjy*com
A. 利用茎段扦插诱导生根技术快速育苗
B. 采用花粉粒组织培养获得单倍体苗
C. 采集幼芽嫁接到合适的其他种类植物体上
D. 采用幼叶、茎尖等部位的组织进行组织培养
【答案】B
【解析】茎段扦插、幼芽嫁接、植物组织培养 ( http: / / www.21cnjy.com )都是无性繁殖，可以大量快速得到与原有性状相同的个体，A、C、D均可选用；采用花粉粒离体培养可获得单倍体幼苗，但由于花粉粒为雄配子，发育来的单倍体植株会发生性状分离，不能保持亲代的优良性状，B错误。
【试题评价】此题考查无性繁殖及单倍体植株的特点，难度适中。
（2013上海卷）9．在工业化大量培养植物试管苗的过程中，一般进行如下操作，则正确的操作顺序是B
①诱导形成芽 ②取合适外植体 ③诱导形成愈伤组织
④诱导形成未分化状态的细胞 ⑤诱导形成根
A．②①③④⑤ B．②④③①⑤ C．②③④①⑤ D．②⑤①④③
（2013新课标卷II）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。21*cnjy*com
回答下列问题：
（1）为了培养该新型药用植物，可取 ( http: / / www.21cnjy.com )甲和乙的叶片，先用______酶和____酶去除细胞壁，获得具有活力的________，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成_______组织，然后经过_______形成完整的杂种植株。这种培养技术称为________。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体 ( http: / / www.21cnjy.com )是指_______。假设甲和乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是__________。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的__________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。www.21-cn-jy.com
【答案】：
（1）纤维素酶 果胶酶 原生质体 愈伤 再分化（或分化） 植物体细胞杂交
（2）体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体 在减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常 【来源：21cnj*y.co*m】
（3）胚状体、不定芽、顶芽、腋芽
【解析】：本题考查植物体细胞杂交。（1 ( http: / / www.21cnjy.com )）为了培养新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用纤维素酶和果胶酶处理，获得具有活力的原生质体A、B，再用化学诱导剂聚乙二醇诱导融合形成杂种细胞，进一步培养形成愈伤组织，经过再分化形成根、芽，长成完整植株，以上获得杂种植株的方法叫植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍。（2）植物A、B体细胞杂交形成的杂种植株是四倍体，且该杂种植株减数分裂能形成正常配子，理论上是可育的；但如果将甲和乙有性杂交形成的二倍体，减数分裂由于不存在同源染色体无法联会，无法形成正常配子，不可育。（3）在植物组织培养至胚状体阶段，可包裹上人工种皮制备人工种子。
（2013天津卷）9.（15 ( http: / / www.21cnjy.com ) 分）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
( http: / / www.21cnjy.com )
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是 。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要 ( http: / / www.21cnjy.com )加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪 ( http: / / www.21cnjy.com )取再生植株和 植株的根尖，通过 、 、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DN ( http: / / www.21cnjy.com )A 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中一定是杂种植株的有 。
( http: / / www.21cnjy.com )
（6）对杂种植株进行 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
【答案】（1）纤维素酶和果胶酶
（2）叶绿体
（3）保持原生质体完整性细胞壁
（4）双亲（或花椰菜和黑芥） 解离漂洗
（5）1、2、4 （6）黑腐病菌
【解析】
（1）过程①表示原生质体的制备，要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁
（2）用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体没有细胞壁的保 ( http: / / www.21cnjy.com )护，需要加入适宜浓度的甘露醇以保证渗透压的稳定，以避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性；原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞，进而形成愈伤组织。21世纪教育网版权所有
（4）分析再生植株染色体变异类型 ( http: / / www.21cnjy.com )，需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞中的染色体制片观察进行比较，制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。
（5）根据图谱，花椰菜含有碱基对为300 ( http: / / www.21cnjy.com )和600 的DNA 片段，黑芥还有碱基对为1000、1300 和1500 的片段，再生植株3,只含有长度为300 和600 的片段，与花椰菜一致，1、2、4 既含有花椰菜DNA 片段，又含有黑芥DNA 片段，为杂种植株。
（6）对杂种植株接种黑腐病菌，能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。
【试题评价】本题以抗黑腐病花椰菜的培育 ( http: / / www.21cnjy.com )为信息载体，综合考查了植物细胞工程、细胞分裂装片的制作观察、PCR 图谱的识别等相关内容，同时也考查了考生识图获取信息的能力，具有一定难度。
（2013山东卷）35、（8分）【生物——现代生物科技专题】
科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：
( http: / / www.21cnjy.com )
（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其 ( http: / / www.21cnjy.com )进行的初次培养称为 ，培养的细胞在贴壁成长至充链满培养皿底时停止分裂，这种现象称为
（2）图中2—细胞胚胎可用人工方 ( http: / / www.21cnjy.com )法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为 ，也可从灰鼠体内取出卵子，通过 后进行早期胚胎培养获得。
（3）图中重组囊胚通过 技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用 方法保存。
（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的 ( http: / / www.21cnjy.com ) 分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向 后用于疾病的细胞治疗。21·世纪*教育网
【答案】（1）原代培养 接触抑制
（2）冲卵 体外受精 （3）胚胎移植 冷冻（或低温）
（4）内细胞团细胞 诱导分化
【解析】（1）原代培养指将动物组织 ( http: / / www.21cnjy.com )用酶处理成单个细胞后进行的初次培养。接触抑制指贴壁的细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止裂增殖的现象。
（2）将早期胚胎从母牛子宫中冲洗出来的方法叫冲卵。
（3）暂不进行胚胎移植的胚胎可放入—196℃的液氮中冷冻保存。
（4）胚胎干细胞简称ES或EK细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞，是由早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞。iPS与ES细胞一样，可通过诱导定向分化修补某些功能异常的细胞来治疗疾病。
（2013海南卷）31.【生物——选修3：现代生物科技专题】（15分）
单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-Ⅰ）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体可快速检测HSV-Ⅰ。【出处：21教育名师】
回答下列问题：
（1）在制备抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体的 ( http: / / www.21cnjy.com )过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-Ⅰ蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了 反应，再从小鼠的 中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是 。
（2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 中使其增殖，再从 中提取、纯化获得。
（3）通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-Ⅰ蛋白，其原因是该抗体具有 和 等特性。
【解析】（1）由题意可知 ( http: / / www.21cnjy.com )，单纯疱疹病毒Ⅰ型可引起水泡性口炎，病毒蛋白HSV-Ⅰ可以作为一种抗原刺激机体通过免疫反应产生特异性抗体。在单克隆抗体的制备过程中，首先应注射纯化的HSV-Ⅰ蛋白作为抗原，一段时间后对小鼠血清进行检测，如果抗HSV-Ⅰ蛋白的抗体检测为阳性，说明小鼠体内通过体液免疫产生了特异性抗体。此时可以从小鼠的免疫器官中，如脾脏、骨髓、淋巴结等部位获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，经过筛选检测获得能稳定的产生特异性抗体的杂交瘤细胞。已免疫的B淋巴细胞具有产生特异性抗体的特点，而骨髓瘤细胞能无限增殖，因此获得的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产生特异性抗体（抗HSV-Ⅰ蛋白的抗体）的特点。
（2）获得大量单克隆抗体途径有两种 ( http: / / www.21cnjy.com )：体外培养和体内培养。体外培养即通过动物细胞培养技术获得大量的杂交瘤细胞，进而产生大量的单克隆抗体；体内培养即将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后从小鼠的腹水中提取、纯化单克隆抗体。
（3）单克隆抗体是通过细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞融合技术单一的B淋巴细胞核杂交瘤细胞融合而获得的，因此融合后的细胞只能产生一种特异性抗体，所制备的单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高的特点。【来源：21·世纪·教育·网】
【试题点评】本题以疱疹病毒为素材切入，综合考查了学生对单克隆抗体的制备原理、过程及其特点的理解。旨在考查学生的理解和应用能力。
2012年
细胞工程
（2012广东卷）2.培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是]
A.组织培养 B.细胞杂交 C.显微注射 D.核移植
【答案】Ａ
【解析】草莓植株分生区的细胞含病毒的量比较少，可以利用植物组织培养技术培养出脱毒幼苗。
（2012浙江卷）31．（12分）请根据以下提供的实验材料，完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，并预测实验结果。21教育网
实验材料：培养液、正常体细胞、癌细胞、W、胰蛋白酶。
（要求与说明：答题时不考虑加入W后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力，只进行原代培养且培养条件适宜）2-1-c-n-j-y
（1）实验思路：
①取培养瓶若干个，分组如下：
＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
每组设置若干个重复样品。
②各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后，各取其中的几个样品，加入＿＿＿＿，摇匀，在显微镜下用血细胞计数板分别计数并记录细胞数。
③重复②若干次。
④＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）预测实验结果（用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示）：
【答案】（1）①A组：培养液中加入体细胞。 B组：培养液中加入体细胞，加入W。
C组：培养液中加入癌细胞。D组：培养液中加入癌细胞，加入W。
②胰蛋白酶
④统计并分析所得数据。
（2） ( http: / / www.21cnjy.com )
【命题透析】本题以实验设计的形式，综合考查了必修和选修的相关内容。
【思路点拨】（1）本实验的目的是： ( http: / / www.21cnjy.com )完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，有两个自变量：是否加入生物制剂W、动物细胞的种类。
（2）设计时应遵循单一变量及对照实验原则，进行重复实验可减少误差并使实验结果更为准确可靠，故分组时应分4组分别进行实验。
（3）胰蛋白酶用来分解组织细胞间的蛋白质，使组织细胞相互分散开来，有利于细胞的分裂。
（4）绘制曲线时，应注意横纵坐标及各组合的最终高度。
（2012江苏卷）22．下列事实能体现细胞全能性的是
A．棉花根尖细胞经诱导形成幼苗
B．单细胞的DNA在体外大量扩增
C．动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体
D．小鼠体细胞经诱导培育成小鼠
答案： AD
解析：证明细胞全能性的实例必须满 ( http: / / www.21cnjy.com )足的三个条件：起点：高度分化的细胞；终点：形成完整的个体；外部条件：离体、营养物质等。B为分子克隆，C为细胞克隆。
（2012江苏卷）31．（1）2, ( http: / / www.21cnjy.com )4－D常用于籼稻愈伤组织的诱导， 对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需＿＿＿＿＿＿（填“升高”、“保持”或“降低”）2,4－D的浓度。
（2）当籼稻愈伤组织在只含 ( http: / / www.21cnjy.com )有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但继续出芽，通常在培养基中添加＿＿＿＿＿＿，以促进幼苗形成。
（3）研究中用显微镜可以观察到的现象是＿＿＿＿＿＿（填下列序号）。
①绿色芽点细胞排列松散
②刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离
③胚状体细胞中有叶绿体
④分化的愈伤组织的各细胞的形态大小一致
（4）经组织培养筛选获得的籼稻 ( http: / / www.21cnjy.com )叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，叶绿素总量不变。某同学用＿＿＿＿＿＿（填序号：①绿色②红色③蓝紫色④黄色）光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧差异不大。若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第＿＿＿＿＿条色素带（自上而下）窄于对照组。
（5）胚乳（3n）由一个精子与两个极核受精发 ( http: / / www.21cnjy.com )育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时晚年除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的＿＿＿＿＿＿，还可避免再生苗中混有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
答案：
31．（1）降低 （2）适量的生长素 （3）③ （4）①④ 4 （5）增殖与分化 二倍体幼苗
解析：⑴2，4-D常用于植物愈伤组织 ( http: / / www.21cnjy.com )的诱导和生长，但它趋向于抑制植物形态的发生，当愈伤组织再分化形成新的植株个体时，要减小2，4-D抑制植物形太发生的作用。所
以在配制分化培养基时需降低2，4-D的浓度。
⑵根据题意，此时已经出现 ( http: / / www.21cnjy.com )具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽。由于生长素有促进再分化过程中芽的生长，所以在培养基中添加适量的生长素，以促进幼苗形成。
⑶绿色芽点细胞为分生区细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞，排列紧密；刚融合的杂种细胞没有细胞壁，不可能发生质壁分离；愈伤组织细胞排列疏松无规则；再分化产生胚状体，需要光照刺激，会促进叶绿体的形成，可在光学显微镜下观察到叶绿体。
⑷色素具有不同的吸收光谱，叶绿素a、 ( http: / / www.21cnjy.com )b主要吸收的是红光和蓝紫光。而对绿光和黄光吸收很少。在本题中，通过光合放氧速率反映出二者光合作用强度的大小，自变量是叶绿素a、b比例上的差异。从结果来看，二者放氧速率差异不大，而突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照。说明该同学用的光不是红色和蓝紫色。所以是绿色和黄色。通过纸层析法分离色素时，叶绿素a、b分布于第3、4条（自上而下）。因为突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，所以会发现突变体第4条色素带窄于对照组。
⑸利用胚乳诱导愈伤组织，由于胚中含有植 ( http: / / www.21cnjy.com )物激素，会影响愈伤组织的增殖和分化，所以需适时剔除胚。因为胚是由受精卵发育而来的，是二倍体。剔除胚也可以避免再生苗中混有二倍体幼苗。
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全国高考生物试题分章整理
2014年
专题2细胞工程
（浙江卷）3.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是
A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
【答案】B
【解析】连续细胞系的细胞其核型已发生改变 ( http: / / www.21cnjy.com )；一个祖细胞培养形成的细胞群才为一个克隆；未经克隆化培养的细胞系细胞可能是不同细胞分裂形成的，其性状可能不同。
（课标Ⅰ卷）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（ ( http: / / www.21cnjy.com )X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。21cnjy.com
( http: / / www.21cnjy.com )
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
回答下列问题：
（1）制备融合所需的B淋巴 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是 。
（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除 ( http: / / www.21cnjy.com )含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。21教育名师原创作品
（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。
【答案】（1）四 Y Y小鼠的抗体效价最高
（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
（3）1 100
（4）不能无限增殖
【解析】（1）据图分析，第四次注射 ( http: / / www.21cnjy.com )后X、Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到16000以上，小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适用于制备单克隆抗体。
（2）融合体系中除了未融合的细胞和 ( http: / / www.21cnjy.com )杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞和B淋巴细胞的自身融合产物，由于细胞膜具有流动性，且诱导之后的细胞融合不具有特异性，故体系中会出现多种类型的细胞。
（3）杂交瘤细胞形成后，小鼠的免疫B淋巴细胞 ( http: / / www.21cnjy.com )核与其骨髓瘤细胞核会融合形成一个细胞核。小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条）和骨髓瘤细胞（染色体数目60条）融合后，染色体可达100条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后，仍然不是能恶性增殖的细胞，同时正常细胞的分裂次数是有限的。
（江苏卷）29.（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：
（1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为 。
（2）在愈伤组织悬浮培养时 ( http: / / www.21cnjy.com )，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有 ；培养液中蔗糖的作用是 、 。
( http: / / www.21cnjy.com )
（3）多倍体愈伤组织细胞 ( http: / / www.21cnjy.com )产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经 处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和 酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是 、 。
（4）为了更好地获得次生代谢产物，生产 ( http: / / www.21cnjy.com )中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有 （填序号）。
①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 ②必须在光照条件下培养
③培养过程中需通空气 ④固定化后植物细胞生长会变慢
【答案】（9分）
（1）脱分化
（2）蔗糖浓度下降，pH降低 提供能源 调节渗透压
（3）秋水仙素（低温） 果胶 经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期 经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期
（4）①③④
【解析】本题考查的是植物组织培养、染色体变异及细胞固定化。
（1）外植体在人工、无菌条件下，经脱分化可形成愈伤组织。
（2）由图蔗糖浓度下降，可知外植体离体 ( http: / / www.21cnjy.com )培养过程中需要消耗蔗糖，12天后蔗糖浓度变化不大；pH下降会影响酶的活性，愈伤组织细胞对物质的合成小于分解，细胞干重下降。植物组织培养过程中，蔗糖既能维持一定的渗透压，又能提供植物细胞生命活动必须的营养物质（能量）。
（3）一定浓度的秋水仙素或低温都可 ( http: / / www.21cnjy.com )抑制纺锤体的形成，使子染色体不能移向两极，从而使细胞中染色体数目加倍。植物细胞间的成分主要是纤维素和果胶，可通过纤维素酶、果胶酶破坏细胞间的物质，从而使愈伤组织细胞分离。在培养过程中，各个细胞所处时期不同，在用秋水仙素或低温处理后，一定时间内不同时期细胞分裂次数不同，从而会出现染色体为2n、4n、8n等的细胞，4n的细胞在有丝分裂后期着丝点分裂染色体数目加倍至8n；8n的细胞在有丝分裂中期能清晰看出8n条染色体。
（4）为了更好地获得次生代谢产物，应选用 ( http: / / www.21cnjy.com )生长旺盛的愈伤组织。愈伤组织不能进行光合作用，因此要通入无菌空气确保其正常的生命活动。细胞的固定通常使用包埋法，由于包埋材料的影响，营养物质和氧气的扩散都受到一定的限制，所以固定化细胞生长速度慢。
（广东卷）29（16分）铁皮石斛是我 ( http: / / www.21cnjy.com )国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
( http: / / www.21cnjy.com )
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：
( http: / / www.21cnjy.com )
⑴选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称 。
⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在 ， ， 。
⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但 ( http: / / www.21cnjy.com )会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题：www-2-1-cnjy-com
①ABA的浓度梯度设置和添加方 ( http: / / www.21cnjy.com )式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基 后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。
③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培 ( http: / / www.21cnjy.com )养时间：当某3个样品（重复样）的 时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成 ( http: / / www.21cnjy.com )PLBs（2分）； 细胞的脱分化（2分） （2）生长起始快（2分）， 快速生长时间较长（2分）； PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）； ②75（2分）； ③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分）【版权所有：21教育】
【解析】【解析】（1）新生营 ( http: / / www.21cnjy.com )养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。
2013年
专题2细胞工程
（2013全国卷大纲版） 2.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同 学优高考网
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
【答案】B
【解析】植物组织培养不需要用胰蛋白酶，B错误。
【试题点评】本题考察学生对细胞工程技术的了解，难度较低。
（2013重庆卷）5.某兴趣小组拟用组 ( http: / / www.21cnjy.com )织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是
A．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害
B．在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞
C．出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控
D．生根时，培养基通常应含α—萘乙酸等生长素类调节剂
【答案】B
【解析】消毒剂的使用既要杀死表面微生物 ( http: / / www.21cnjy.com )，有防止伤害组织细胞，影响组织培养，A项正确；植物细胞融合是指经纤维素酶和果胶酶处理后得到的原生质体的诱导融合，带有细胞壁的愈伤组织细胞不能诱导融合形成染色体加倍的细胞，B项错误；出芽和生根都是细胞再分化的结果，其实质是基因的选择性表达，C项正确；α—萘乙酸为生长素类似物，可诱导愈伤组织生根，D项正确。21·cn·jy·com
【试题评价】本题考查植物组织培养相关知识 ( http: / / www.21cnjy.com )和考生的理解能力，涉及外植体的消毒、植物体细胞杂交、细胞分化及植物生长调节剂对组织培养的影响等内容，较易得分。
（2013浙江卷）6．实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误的是
A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D．丁过程得到的细胞具有异质性
案：C
解析：A进行细胞培养前需要对细胞进行消毒，A ( http: / / www.21cnjy.com )正确；B进行培养的组织细胞用胰蛋白酶消化分散成单个细胞，B正确；C丙过程属于原代培养，细胞的核型稳定，C错误；D丁过程属于传代培养，期间部分细胞会出现异质性，D正确；
（2013重庆卷）2．题2图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是
HYPERLINK "http://www.21cnjy.com" INCLUDEPICTURE "E:\\..\\My Documents\\Tencent Files\\308728810\\Image\\FH9~XFLVKVLY}NS%LJS1W@R.jpg" \* MERGEFORMAT
A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
【答案】D
【解析】①是获得已经免疫的B细胞，A ( http: / / www.21cnjy.com )项错误；胰蛋白酶使得组织块分散为单个细胞，B项错误；③同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④经筛选后获得能够获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D项正确。2·1·c·n·j·y
【试题评价】本题考查单克隆抗体制备流程相关只是和考生的识图能力，属理解层次，较易得分。
（2013江苏卷）11. 某种极具观赏 ( http: / / www.21cnjy.com )价值的兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，可应用多种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用的是 21*cnjy*com
A. 利用茎段扦插诱导生根技术快速育苗
B. 采用花粉粒组织培养获得单倍体苗
C. 采集幼芽嫁接到合适的其他种类植物体上
D. 采用幼叶、茎尖等部位的组织进行组织培养
【答案】B
【解析】茎段扦插、幼芽嫁接、植物组织培养 ( http: / / www.21cnjy.com )都是无性繁殖，可以大量快速得到与原有性状相同的个体，A、C、D均可选用；采用花粉粒离体培养可获得单倍体幼苗，但由于花粉粒为雄配子，发育来的单倍体植株会发生性状分离，不能保持亲代的优良性状，B错误。
【试题评价】此题考查无性繁殖及单倍体植株的特点，难度适中。
（2013上海卷）9．在工业化大量培养植物试管苗的过程中，一般进行如下操作，则正确的操作顺序是B
①诱导形成芽 ②取合适外植体 ③诱导形成愈伤组织
④诱导形成未分化状态的细胞 ⑤诱导形成根
A．②①③④⑤ B．②④③①⑤ C．②③④①⑤ D．②⑤①④③
（2013新课标卷II）40.[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。21*cnjy*com
回答下列问题：
（1）为了培养该新型药用植物，可取 ( http: / / www.21cnjy.com )甲和乙的叶片，先用______酶和____酶去除细胞壁，获得具有活力的________，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成_______组织，然后经过_______形成完整的杂种植株。这种培养技术称为________。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体 ( http: / / www.21cnjy.com )是指_______。假设甲和乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是__________。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的__________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。www.21-cn-jy.com
【答案】：
（1）纤维素酶 果胶酶 原生质体 愈伤 再分化（或分化） 植物体细胞杂交
（2）体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体 在减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常 【来源：21cnj*y.co*m】
（3）胚状体、不定芽、顶芽、腋芽
【解析】：本题考查植物体细胞杂交。（1 ( http: / / www.21cnjy.com )）为了培养新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用纤维素酶和果胶酶处理，获得具有活力的原生质体A、B，再用化学诱导剂聚乙二醇诱导融合形成杂种细胞，进一步培养形成愈伤组织，经过再分化形成根、芽，长成完整植株，以上获得杂种植株的方法叫植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍。（2）植物A、B体细胞杂交形成的杂种植株是四倍体，且该杂种植株减数分裂能形成正常配子，理论上是可育的；但如果将甲和乙有性杂交形成的二倍体，减数分裂由于不存在同源染色体无法联会，无法形成正常配子，不可育。（3）在植物组织培养至胚状体阶段，可包裹上人工种皮制备人工种子。
（2013天津卷）9.（15 ( http: / / www.21cnjy.com ) 分）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
( http: / / www.21cnjy.com )
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是 。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要 ( http: / / www.21cnjy.com )加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪 ( http: / / www.21cnjy.com )取再生植株和 植株的根尖，通过 、 、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DN ( http: / / www.21cnjy.com )A 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中一定是杂种植株的有 。
( http: / / www.21cnjy.com )
（6）对杂种植株进行 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
【答案】（1）纤维素酶和果胶酶
（2）叶绿体
（3）保持原生质体完整性细胞壁
（4）双亲（或花椰菜和黑芥） 解离漂洗
（5）1、2、4 （6）黑腐病菌
【解析】
（1）过程①表示原生质体的制备，要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁
（2）用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉 ( http: / / www.21cnjy.com )细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体没有细胞壁的保 ( http: / / www.21cnjy.com )护，需要加入适宜浓度的甘露醇以保证渗透压的稳定，以避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性；原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞，进而形成愈伤组织。21世纪教育网版权所有
（4）分析再生植株染色体变异类型 ( http: / / www.21cnjy.com )，需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞中的染色体制片观察进行比较，制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。
（5）根据图谱，花椰菜含有碱基对为300 ( http: / / www.21cnjy.com )和600 的DNA 片段，黑芥还有碱基对为1000、1300 和1500 的片段，再生植株3,只含有长度为300 和600 的片段，与花椰菜一致，1、2、4 既含有花椰菜DNA 片段，又含有黑芥DNA 片段，为杂种植株。
（6）对杂种植株接种黑腐病菌，能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。
【试题评价】本题以抗黑腐病花椰菜的培育 ( http: / / www.21cnjy.com )为信息载体，综合考查了植物细胞工程、细胞分裂装片的制作观察、PCR 图谱的识别等相关内容，同时也考查了考生识图获取信息的能力，具有一定难度。
（2013山东卷）35、（8分）【生物——现代生物科技专题】
科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠，流程如下：
( http: / / www.21cnjy.com )
（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其 ( http: / / www.21cnjy.com )进行的初次培养称为 ，培养的细胞在贴壁成长至充链满培养皿底时停止分裂，这种现象称为
（2）图中2—细胞胚胎可用人工方 ( http: / / www.21cnjy.com )法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为 ，也可从灰鼠体内取出卵子，通过 后进行早期胚胎培养获得。
（3）图中重组囊胚通过 技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用 方法保存。
（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的 ( http: / / www.21cnjy.com ) 分离培养获得，iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向 后用于疾病的细胞治疗。21·世纪*教育网
【答案】（1）原代培养 接触抑制
（2）冲卵 体外受精 （3）胚胎移植 冷冻（或低温）
（4）内细胞团细胞 诱导分化
【解析】（1）原代培养指将动物组织 ( http: / / www.21cnjy.com )用酶处理成单个细胞后进行的初次培养。接触抑制指贴壁的细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止裂增殖的现象。
（2）将早期胚胎从母牛子宫中冲洗出来的方法叫冲卵。
（3）暂不进行胚胎移植的胚胎可放入—196℃的液氮中冷冻保存。
（4）胚胎干细胞简称ES或EK细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞，是由早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞。iPS与ES细胞一样，可通过诱导定向分化修补某些功能异常的细胞来治疗疾病。
（2013海南卷）31.【生物——选修3：现代生物科技专题】（15分）
单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-Ⅰ）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体可快速检测HSV-Ⅰ。【出处：21教育名师】
回答下列问题：
（1）在制备抗HSV-Ⅰ的单克隆抗体的 ( http: / / www.21cnjy.com )过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-Ⅰ蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了 反应，再从小鼠的 中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是 。
（2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 中使其增殖，再从 中提取、纯化获得。
（3）通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-Ⅰ蛋白，其原因是该抗体具有 和 等特性。
【解析】（1）由题意可知 ( http: / / www.21cnjy.com )，单纯疱疹病毒Ⅰ型可引起水泡性口炎，病毒蛋白HSV-Ⅰ可以作为一种抗原刺激机体通过免疫反应产生特异性抗体。在单克隆抗体的制备过程中，首先应注射纯化的HSV-Ⅰ蛋白作为抗原，一段时间后对小鼠血清进行检测，如果抗HSV-Ⅰ蛋白的抗体检测为阳性，说明小鼠体内通过体液免疫产生了特异性抗体。此时可以从小鼠的免疫器官中，如脾脏、骨髓、淋巴结等部位获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，经过筛选检测获得能稳定的产生特异性抗体的杂交瘤细胞。已免疫的B淋巴细胞具有产生特异性抗体的特点，而骨髓瘤细胞能无限增殖，因此获得的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产生特异性抗体（抗HSV-Ⅰ蛋白的抗体）的特点。
（2）获得大量单克隆抗体途径有两种 ( http: / / www.21cnjy.com )：体外培养和体内培养。体外培养即通过动物细胞培养技术获得大量的杂交瘤细胞，进而产生大量的单克隆抗体；体内培养即将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后从小鼠的腹水中提取、纯化单克隆抗体。
（3）单克隆抗体是通过细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞融合技术单一的B淋巴细胞核杂交瘤细胞融合而获得的，因此融合后的细胞只能产生一种特异性抗体，所制备的单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高的特点。【来源：21·世纪·教育·网】
【试题点评】本题以疱疹病毒为素材切入，综合考查了学生对单克隆抗体的制备原理、过程及其特点的理解。旨在考查学生的理解和应用能力。
2012年
细胞工程
（2012广东卷）2.培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是]
A.组织培养 B.细胞杂交 C.显微注射 D.核移植
【答案】Ａ
【解析】草莓植株分生区的细胞含病毒的量比较少，可以利用植物组织培养技术培养出脱毒幼苗。
（2012浙江卷）31．（12分）请根据以下提供的实验材料，完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，并预测实验结果。21教育网
实验材料：培养液、正常体细胞、癌细胞、W、胰蛋白酶。
（要求与说明：答题时不考虑加入W后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力，只进行原代培养且培养条件适宜）2-1-c-n-j-y
（1）实验思路：
①取培养瓶若干个，分组如下：
＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
每组设置若干个重复样品。
②各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后，各取其中的几个样品，加入＿＿＿＿，摇匀，在显微镜下用血细胞计数板分别计数并记录细胞数。
③重复②若干次。
④＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）预测实验结果（用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示）：
【答案】（1）①A组：培养液中加入体细胞。 B组：培养液中加入体细胞，加入W。
C组：培养液中加入癌细胞。D组：培养液中加入癌细胞，加入W。
②胰蛋白酶
④统计并分析所得数据。
（2） ( http: / / www.21cnjy.com )
【命题透析】本题以实验设计的形式，综合考查了必修和选修的相关内容。
【思路点拨】（1）本实验的目的是： ( http: / / www.21cnjy.com )完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路，有两个自变量：是否加入生物制剂W、动物细胞的种类。
（2）设计时应遵循单一变量及对照实验原则，进行重复实验可减少误差并使实验结果更为准确可靠，故分组时应分4组分别进行实验。
（3）胰蛋白酶用来分解组织细胞间的蛋白质，使组织细胞相互分散开来，有利于细胞的分裂。
（4）绘制曲线时，应注意横纵坐标及各组合的最终高度。
（2012江苏卷）22．下列事实能体现细胞全能性的是
A．棉花根尖细胞经诱导形成幼苗
B．单细胞的DNA在体外大量扩增
C．动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体
D．小鼠体细胞经诱导培育成小鼠
答案： AD
解析：证明细胞全能性的实例必须满 ( http: / / www.21cnjy.com )足的三个条件：起点：高度分化的细胞；终点：形成完整的个体；外部条件：离体、营养物质等。B为分子克隆，C为细胞克隆。
（2012江苏卷）31．（1）2, ( http: / / www.21cnjy.com )4－D常用于籼稻愈伤组织的诱导， 对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需＿＿＿＿＿＿（填“升高”、“保持”或“降低”）2,4－D的浓度。
（2）当籼稻愈伤组织在只含 ( http: / / www.21cnjy.com )有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但继续出芽，通常在培养基中添加＿＿＿＿＿＿，以促进幼苗形成。
（3）研究中用显微镜可以观察到的现象是＿＿＿＿＿＿（填下列序号）。
①绿色芽点细胞排列松散
②刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离
③胚状体细胞中有叶绿体
④分化的愈伤组织的各细胞的形态大小一致
（4）经组织培养筛选获得的籼稻 ( http: / / www.21cnjy.com )叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，叶绿素总量不变。某同学用＿＿＿＿＿＿（填序号：①绿色②红色③蓝紫色④黄色）光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧差异不大。若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第＿＿＿＿＿条色素带（自上而下）窄于对照组。
（5）胚乳（3n）由一个精子与两个极核受精发 ( http: / / www.21cnjy.com )育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时晚年除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的＿＿＿＿＿＿，还可避免再生苗中混有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
答案：
31．（1）降低 （2）适量的生长素 （3）③ （4）①④ 4 （5）增殖与分化 二倍体幼苗
解析：⑴2，4-D常用于植物愈伤组织 ( http: / / www.21cnjy.com )的诱导和生长，但它趋向于抑制植物形态的发生，当愈伤组织再分化形成新的植株个体时，要减小2，4-D抑制植物形太发生的作用。所
以在配制分化培养基时需降低2，4-D的浓度。
⑵根据题意，此时已经出现 ( http: / / www.21cnjy.com )具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽。由于生长素有促进再分化过程中芽的生长，所以在培养基中添加适量的生长素，以促进幼苗形成。
⑶绿色芽点细胞为分生区细 ( http: / / www.21cnjy.com )胞，排列紧密；刚融合的杂种细胞没有细胞壁，不可能发生质壁分离；愈伤组织细胞排列疏松无规则；再分化产生胚状体，需要光照刺激，会促进叶绿体的形成，可在光学显微镜下观察到叶绿体。
⑷色素具有不同的吸收光谱，叶绿素a、 ( http: / / www.21cnjy.com )b主要吸收的是红光和蓝紫光。而对绿光和黄光吸收很少。在本题中，通过光合放氧速率反映出二者光合作用强度的大小，自变量是叶绿素a、b比例上的差异。从结果来看，二者放氧速率差异不大，而突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照。说明该同学用的光不是红色和蓝紫色。所以是绿色和黄色。通过纸层析法分离色素时，叶绿素a、b分布于第3、4条（自上而下）。因为突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，所以会发现突变体第4条色素带窄于对照组。
⑸利用胚乳诱导愈伤组织，由于胚中含有植 ( http: / / www.21cnjy.com )物激素，会影响愈伤组织的增殖和分化，所以需适时剔除胚。因为胚是由受精卵发育而来的，是二倍体。剔除胚也可以避免再生苗中混有二倍体幼苗。
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