博湖县奇石中学2022-2023学年高二下学期生物期中考试
一、单选题（共20题，每小题2分，共40分）
1．科学家用灭活的病毒把骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞，灭活病毒的作用是（ ）
A．病毒比较小，可钻入细胞内
B．灭活的病毒已完全死亡，死亡的病毒可以让细胞聚集
C．灭活的病毒已失去感染活性，对各种动物细胞不造成破坏，但所保留的融合活性，使不同的细胞进行融合
D．灭活的病毒带有目的基因，通过融合可以让杂合细胞带有目的基因
2．细胞工程中,选择合适的生物材料是成功的关键。下列叙述错误的是( )
A.选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量的细胞
B.选择去核的卵母细胞作为核受体进行核移植可提高克隆动物的成功率
C.选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得有用的突变体
D.选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
3．中国科学院动物研究所将大熊猫的体细胞核放入兔子的去核卵母细胞之中，并使其成功发育成囊胚，标志着异种核质相容的问题得到解决，异种克隆大熊猫迈过了第一道“坎”；然后至关重要的是选择一种合适的”代孕母体”。下图是该研究的理论流程图。下列说法正确的是（ ）
A．步骤甲、乙分别是指大熊猫体细胞核移植、胚胎收集
B．诱导超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞
C．重组细胞发育成早期胚胎所需营养主要来源于营养液
D．步骤甲和步骤乙中的供体和受体需要同期发情处理
4．要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在（ ）
A．加入氮源和杀菌剂的培养基上 B．不含氮源和杀菌剂的培养基上
C．加入氮源，不加杀菌剂的培养基上 D．不加入氮源，加入杀菌剂的培养基上
5．下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是（ ）
A．在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
B．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
C．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D．划线结束后，灼烧接种环能杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
6．下列有关叙述错误的是( )
A．利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种
B．不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程
C．早期胚胎发育过程从原肠胚期细胞开始分化，此时细胞的全能性比囊胚期细胞低
D．体外受精过程包括精子的采集与获能、卵母细胞的采集与培养、体外受精
7．甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株。再将二者杂交后得到F1，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种，以下叙述正确的是（ ）
①将含有目的基因的运载体导入受体细胞
②通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定
③使用植物组织培养的方法培养F1花粉获得再生植株
④经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体
①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④
8．下列有关培养基的叙述，正确的是（ ）
A．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素
B．从微生物中分离硝化细菌时，培养基中可以不加碳源和氮源
C．牛肉膏蛋白胨培养基可用来直接培养细菌、病毒等微生物
D．琼脂是一种多糖，可为微生物生长提供碳源
9．在培育“番茄—马铃薯”杂种植株时,不必考虑( )
A.用酶解法去除细胞壁获得原生质体
B.选择灭活的病毒促进原生质体融合
C.用植物组织培养技术获得完整植株
D.对培育植株进行细胞染色体数目和形态鉴定
10．下列关于生物工程中相关酶的叙述,错误的是( )
A.限制酶可用于获取目的基因
B.纤维素酶可用于制备原生质体
C.DNA聚合酶可用于目的基因的表达
D.胰蛋白酶可用于获得单个动物细胞
11．在胚胎工程中，转基因动物培育、核移植等必须用到的两项技术是（ ）
①动物细胞培养 ②克隆 ③减数分裂 ④胚胎移植．
①② B．②③ C．①④ D．②④
12．下列关于动物体细胞核移植技术和克隆动物的叙述，正确的是( )
A．目前科学家可以用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体
B．动物体细胞核移植技术可有选择地繁殖某一性别的家畜
C．用于核移植的供体细胞一般都选用传代50代以内的细胞
D．用体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行100%的复制
13．关于微生物培养和数目统计的说法，错误的是（ ）
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围相同
C．不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间
D．每次统计菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果
14．研究人员利用植物体细胞杂交技术，将培育的野生猕猴桃的单倍体的细胞与栽培二倍体猕猴桃细胞的原生质体融合，获得了三倍体植株，为其种质改良开辟了新途径。下列说法错误的是（ ）
A．原生质体获得后需要在等渗培养液中进行培养
B．原生质体融合时可采用高Ca2+—高pH法进行诱导
C．三倍体植株的形成需经过脱分化和再分化等培养过程
D．单倍体与二倍体能进行基因交流，二者属于同一物种
15．下列有关倒平板操作的叙述,错误的是( )
A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上
B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C.将培养皿打开,培养皿盖倒放在桌子上
D.待平板冷却凝固后需要倒过来放置
16．单克隆抗体在生物工程和临床医学上有着极为重要的地位和巨大的应用。下列有关单克隆抗体技术及其应用的叙述，正确的是（ ）
A．该技术利用了细胞膜的流动性和基因重组等原理
B．将选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞直接用于生产单克隆抗体
C．利用抗原—抗体杂交技术可筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞
D．“生物导弹”中的单克隆抗体能特异性的结合抗原并杀死癌细胞
17．下列关于胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素能促使超数排卵
B．PEG能促进动物细胞融合，形成的杂种细胞经动物细胞培养后能得到新品种个体
C．卵细胞膜反应和透明带反应是防止多精入卵的两道屏障
D．移植胚胎能存活的原因是一定时间内早期胚胎在受体子宫中处于游离状态
18．人心肌细胞中的肌钙蛋白I(cTnI)在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。下列有关叙述错误的是( )
A．反复给小鼠注射cTnI的目的是让小鼠体内产生更多的抗体
B．人工诱导细胞融合获得甲常用的方法是灭活病毒诱导法
C．经检测、筛选后的丙，既能无限增殖又可分泌特异性抗体
D．抗cTnI单克隆抗体检测心肌损伤具有特异性强、灵敏度高的特点
19．如图表示高等动物的个体发育过程，下列说法正确的是（ ）
① ②
受精卵 桑葚胚 囊胚 原肠胚 幼体 性成熟的个体
A．图中①过程表示胚胎发育
B．受精卵形成囊胚的过程中进行卵裂，每个细胞的体积基本不变
C．高等哺乳动物胚胎发育中的细胞分化开始于囊胚期，终止于生命结束
D．原肠胚的细胞都是全能细胞
20．某环状DNA分子共含2 000个碱基，其中腺嘌呤占30%，用限制性内切核酸酶Bam HⅠ(识别序列为)完全切割该DNA分子后产生2个片段，则下列有关叙述中，正确的是( )
A．一个该DNA分子连续复制2次，共需游离的胞嘧啶脱氧核苷酸1 600个
B．向BamH Ⅰ的溶液中加入双缩脲试剂A液震荡后即出现紫色
C．一个该DNA分子含有2个BamH Ⅰ的识别序列
D．一个该DNA分子经BamH Ⅰ完全切割后产生的核酸片段，共含有8个游离的磷酸基团
二、非选择题（每空2分，共60分）
21.由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种，过程如图甲所示。请回答下列问题：
(1)图甲中，过程①需要的酶有____________________。为了筛选，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是________________________。
(2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是________________；该同学接种时所用菌液的浓度偏______。
(3)若在5个培养基平板上共接种稀释倍数为105的土壤样液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为13、156、462、178和191，则每毫升土壤样液中的酵母菌数量为________个。用此方法测定的酵母菌数量比实际活菌数量少，原因是_____________________________________________________________。
22．如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图中所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达（5′AOX1和3′AOX1(TT)分别是AOX1基因的启动子和终止子）。请分析回答下列问题：
(1)为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择______和______切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上____________________，这样设计的优点是__________________________________________________。
(2)酶切获取HBsAg基因后，需用____________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取____________。
(3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入________以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用________技术进行检测。
(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
23．安祖花、蝴蝶兰等洋花卉，过去主要靠进口，因其价格昂贵，难以走进寻常百姓家，近几年我国科技工作者采用植物组织培养技术，在温室大棚内生产出大量质优价廉的各种“洋花卉”，满足了市场需求。如图所示是蝴蝶兰芽尖通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗的培育过程。请回答下列问题：
(1)芽尖组织在接种到培养基之前，必须进行________处理，整个组织培养过程需________操作，并控制好各个时期的培养条件。
(2)要促使芽尖组织细胞分裂生长，培养基中应有________和____________两类植物激素。
(3)再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还必须给予光照，原因是____________________。
(4)从高度分化的芽尖组织繁殖出大量具有亲代优良性状的蝴蝶兰植株，充分证明了植物细胞具有________。
24．物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_______。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明___________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明___________博湖县奇石中学2022-2023学年高二下学期期中考试
注意事项：考生请填写姓名考号到相应位置
答案写在答题卡上
一、单选题（共30题，每小题2分）
1．科学家用灭活的病毒把骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞，灭活病毒的作用是（ ）
A．病毒比较小，可钻入细胞内
B．灭活的病毒已完全死亡，死亡的病毒可以让细胞聚集
C．灭活的病毒已失去感染活性，对各种动物细胞不造成破坏，但所保留的融合活性，使不同的细胞进行融合
D．灭活的病毒带有目的基因，通过融合可以让杂合细胞带有目的基因
答案C：
2．细胞工程中,选择合适的生物材料是成功的关键。下列叙述错误的是( )
A.选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量的细胞
B.选择去核的卵母细胞作为核受体进行核移植可提高克隆动物的成功率
C.选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得有用的突变体
D.选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
答案:A
3．中国科学院动物研究所将大熊猫的体细胞核放入兔子的去核卵母细胞之中，并使其成功发育成囊胚，标志着异种核质相容的问题得到解决，异种克隆大熊猫迈过了第一道“坎”；然后至关重要的是选择一种合适的”代孕母体”。下图是该研究的理论流程图。下列说法正确的是（ ）
A．步骤甲、乙分别是指大熊猫体细胞核移植、胚胎收集
B．诱导超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞
C．重组细胞发育成早期胚胎所需营养主要来源于营养液
D．步骤甲和步骤乙中的供体和受体需要同期发情处理
答案：B
4．要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在（ ）
A．加入氮源和杀菌剂的培养基上 B．不含氮源和杀菌剂的培养基上
C．加入氮源，不加杀菌剂的培养基上 D．不加入氮源，加入杀菌剂的培养基上
答案：B
5．下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是（ ）
A．在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
B．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
C．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D．划线结束后，灼烧接种环能杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
答案：A
6．下列有关叙述错误的是( )
A．利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种
B．不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程
C．早期胚胎发育过程从原肠胚期细胞开始分化，此时细胞的全能性比囊胚期细胞低
D．体外受精过程包括精子的采集与获能、卵母细胞的采集与培养、体外受精
答案：C
7．甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株。再将二者杂交后得到F1，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种，以下叙述正确的是（ ）
①将含有目的基因的运载体导入受体细胞
②通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定
③使用植物组织培养的方法培养F1花粉获得再生植株
④经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体
①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④
答案：A
8．下列有关培养基的叙述，正确的是（ ）
A．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素
B．从微生物中分离硝化细菌时，培养基中可以不加碳源和氮源
C．牛肉膏蛋白胨培养基可用来直接培养细菌、病毒等微生物
D．琼脂是一种多糖，可为微生物生长提供碳源
答案：A
9．在培育“番茄—马铃薯”杂种植株时,不必考虑( )
A.用酶解法去除细胞壁获得原生质体
B.选择灭活的病毒促进原生质体融合
C.用植物组织培养技术获得完整植株
D.对培育植株进行细胞染色体数目和形态鉴定
答案:B
10．下列关于生物工程中相关酶的叙述,错误的是( )
A.限制酶可用于获取目的基因
B.纤维素酶可用于制备原生质体
C.DNA聚合酶可用于目的基因的表达
D.胰蛋白酶可用于获得单个动物细胞
答案:C
11．在胚胎工程中，转基因动物培育、核移植等必须用到的两项技术是（ ）
①动物细胞培养 ②克隆 ③减数分裂 ④胚胎移植．
①② B．②③ C．①④ D．②④
答案：C
12．下列关于动物体细胞核移植技术和克隆动物的叙述，正确的是( )
A．目前科学家可以用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体
B．动物体细胞核移植技术可有选择地繁殖某一性别的家畜
C．用于核移植的供体细胞一般都选用传代50代以内的细胞
D．用体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行100%的复制
答案：B
13．关于微生物培养和数目统计的说法，错误的是（ ）
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围相同
C．不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间
D．每次统计菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果
答案：B
14．研究人员利用植物体细胞杂交技术，将培育的野生猕猴桃的单倍体的细胞与栽培二倍体猕猴桃细胞的原生质体融合，获得了三倍体植株，为其种质改良开辟了新途径。下列说法错误的是（ ）
A．原生质体获得后需要在等渗培养液中进行培养
B．原生质体融合时可采用高Ca2+—高pH法进行诱导
C．三倍体植株的形成需经过脱分化和再分化等培养过程
D．单倍体与二倍体能进行基因交流，二者属于同一物种
答案：D
15．下列有关倒平板操作的叙述,错误的是( )
A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上
B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C.将培养皿打开,培养皿盖倒放在桌子上
D.待平板冷却凝固后需要倒过来放置
答案:C
16．单克隆抗体在生物工程和临床医学上有着极为重要的地位和巨大的应用。下列有关单克隆抗体技术及其应用的叙述，正确的是（ ）
A．该技术利用了细胞膜的流动性和基因重组等原理
B．将选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞直接用于生产单克隆抗体
C．利用抗原—抗体杂交技术可筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞
D．“生物导弹”中的单克隆抗体能特异性的结合抗原并杀死癌细胞
答案：C
17．下列关于胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（ ）
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素能促使超数排卵
B．PEG能促进动物细胞融合，形成的杂种细胞经动物细胞培养后能得到新品种个体
C．卵细胞膜反应和透明带反应是防止多精入卵的两道屏障
D．移植胚胎能存活的原因是一定时间内早期胚胎在受体子宫中处于游离状态
答案：C
18．人心肌细胞中的肌钙蛋白I(cTnI)在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。下列有关叙述错误的是( )
A．反复给小鼠注射cTnI的目的是让小鼠体内产生更多的抗体
B．人工诱导细胞融合获得甲常用的方法是灭活病毒诱导法
C．经检测、筛选后的丙，既能无限增殖又可分泌特异性抗体
D．抗cTnI单克隆抗体检测心肌损伤具有特异性强、灵敏度高的特点
答案：A
19．如图表示高等动物的个体发育过程，下列说法正确的是（ ）
① ②
受精卵 桑葚胚 囊胚 原肠胚 幼体 性成熟的个体
A．图中①过程表示胚胎发育
B．受精卵形成囊胚的过程中进行卵裂，每个细胞的体积基本不变
C．高等哺乳动物胚胎发育中的细胞分化开始于囊胚期，终止于生命结束
D．原肠胚的细胞都是全能细胞
答案：C
20．某环状DNA分子共含2 000个碱基，其中腺嘌呤占30%，用限制性内切核酸酶Bam HⅠ(识别序列为)完全切割该DNA分子后产生2个片段，则下列有关叙述中，正确的是( )
A．一个该DNA分子连续复制2次，共需游离的胞嘧啶脱氧核苷酸1 600个
B．向BamH Ⅰ的溶液中加入双缩脲试剂A液震荡后即出现紫色
C．一个该DNA分子含有2个BamH Ⅰ的识别序列
D．一个该DNA分子经BamH Ⅰ完全切割后产生的核酸片段，共含有8个游离的磷酸基团
【答案】C
【解析】DNA分子共含2 000个碱基，其中腺嘌呤占30%，则胞嘧啶＝2 000×(1－30%×2)÷2＝400(个)，则一个DNA分子复制两次得到4个DNA分子，所以需要游离的胞嘧啶脱氧核苷酸400×3＝1 200(个)，A错误；BamHⅠ的溶液中含有酶，化学本质是蛋白质，加入双缩脲试剂A液无色，再加3～4滴双缩脲试剂B液成紫色，B错误；环状DNA分子被切成两个DNA分子片段说明，含有2个BamHⅠ的识别序列，C正确；两个DNA分子片段4个磷酸二酯键断裂，共有4个磷酸基团，D错误。
二、非选择题
21.由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种，过程如图甲所示。请回答下列问题：
(1)图甲中，过程①需要的酶有__________和__________。为了筛选，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是________________________。
(2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是________________；该同学接种时所用菌液的浓度偏______。
(3)若在5个培养基平板上共接种稀释倍数为105的土壤样液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为13、156、462、178和191，则每毫升土壤样液中的酵母菌数量为________个。用此方法测定的酵母菌数量比实际活菌数量少，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)图甲中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶；普通酵母菌利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌。②、③过程重复几次的目的是分离纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌。(2)由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法；图中菌落数比较多，说明该同学接种时所用菌液的浓度偏大。(3)在5个培养基平板上共接种稀释倍数为105的土壤样液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为13、156、462、178和191，一般取菌落数在30～300之间的平板，则每毫升土壤样液中的酵母菌数量为(156＋178＋191)÷3×105÷0.1＝1.75×108(个)。用此方法测定的酵母菌数量比实际活菌数量少，原因是一个菌落可以由一个或多个酵母菌形成。
答案：(1)限制性内切核酸酶 DNA连接酶 淀粉 分离纯化 (2)稀释涂布平板法 大 (3)1.75×108 一个菌落可以由一个或多个酵母菌形成
22．如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图中所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达[5′AOX1和3′AOX1(TT)分别是AOX1基因的启动子和终止子]。请分析回答下列问题：
(1)为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择______和______切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上____________________，这样设计的优点是
________________________________________________________________________。
(2)酶切获取HBsAg基因后，需用____________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取____________。
(3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入________以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用________技术进行检测。
(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
解析：(1)图中质粒含有SnaBⅠ、AvrⅡ、BglⅡ和SacⅠ限制酶切割位点，其中SacⅠ位于启动子上，Bgl Ⅱ位于终止子上。如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，只能用限制酶SnaBⅠ和AvrⅡ切割质粒，所以应在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ、AvrⅡ限制酶识别序列。这两种酶切割产生的黏性末端不同，这样可以避免质粒和目的基因自身环化，还可以防止目的基因和质粒反向连接。(2)获取目的基因后，需要用DNA连接酶将目的基因和载体连接形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒。(3)步骤3是要获取含有5′AOX1……3′AOX1段基因，应选用限制酶BglⅡ来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。(4)5′AOX1……3′AOX1段基因含有卡拉霉素抗性基因，因此在培养基中加入卡拉霉素以便筛选导入重组质粒的目的菌。检测目的基因是否转录可用PCR。(5)巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源，同时甲醇能诱导AOX1基因表达。所以转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
答案：(1)SnaBⅠ AvrⅡ 相应的限制酶识别序列 确保定向连接(避免质粒和目的基因自身环化及目的基因和质粒反向连接) (2)DNA连接酶 大量重组质粒 (3)BglⅡ (4)卡拉霉素 PCR (5)甲醇
23．安祖花、蝴蝶兰等洋花卉，过去主要靠进口，因其价格昂贵，难以走进寻常百姓家，近几年我国科技工作者采用植物组织培养技术，在温室大棚内生产出大量质优价廉的各种“洋花卉”，满足了市场需求。如图所示是蝴蝶兰芽尖通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗的培育过程。请回答下列问题：
(1)芽尖组织在接种到培养基之前，必须进行________处理，整个组织培养过程需________操作，并控制好各个时期的培养条件。
(2)要促使芽尖组织细胞分裂生长，培养基中应有________和____________两类植物激素。
(3)再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还必须给予光照，原因是____________________。
(4)从高度分化的芽尖组织繁殖出大量具有亲代优良性状的蝴蝶兰植株，充分证明了植物细胞具有________。
解析：(1)为预防微生物的感染，芽尖组织在接种到培养基之前，必须进行消毒处理，整个组织培养过程需在无菌条件下操作，并严格控制好各个时期的培养条件。(2)为促进芽尖组织细胞分裂生长，所使用的培养基中应有生长素和细胞分裂素两类植物激素。(3)再分化时，除必要的营养供应和激素调节外，还必须给予光照，原因是叶绿素的形成需要光照。(4)从高度分化的芽尖组织繁殖出大量具有亲代优良性状的蝴蝶兰植株，说明单个细胞也能发育成完整的生物体，充分证明了植物细胞具有全能性。
答案：(1)消毒 无菌 (2)生长素 细胞分裂素
(3)叶绿素的形成需要光照 (4)全能性
24．物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_______。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明___________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明___________
答案（1）W
（2）乙 乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W
（3）将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
（4）①缓冲液 ②缓冲液不能降解W 酶E与天然酶降解W的能力相近
