课件21张PPT。动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段:动物细胞培养、 动物细胞核移植、
动物细胞融合、 单克隆抗体
动物细胞培养技术是其他动物细胞工
程技术的基础。动物细胞培养动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。过程:动物胚胎或幼龄动物的组织、器官21单个细胞3细胞悬浮液原代培养传代培养10—50代细胞株细胞系传代培养50代以后贴壁生长、接触抑制重新处理分瓶继续培养核型改变,获得不死性实现动物细胞培养的条件:1、无菌、无毒的环境
2、营养
3、温度和PH
4、气体环境:
(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、动物血清等。36.5+(-)0.5度, 7.2-7.4O2和CO2(95%空气和5% CO2 )细胞的全能性大量细胞植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品(病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体)
作为基因工程中的受体细胞
培养的动物细胞可以用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性
为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据
二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物胚胎细胞核移植;体细胞核移植(难度高)受体细胞:MⅡ期的卵母细胞或受精卵1、体细胞核移植的过程高产奶牛(供体)细胞核去核MⅡ期卵母细胞物理或化学方法激活注入重组胚胎移入受体母牛子宫生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛克隆动物的研究意义1.促进优良家蓄的繁殖
2.保护濒危动物
3.克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白
4.克隆器官作为供体,治疗人类疾病体细胞核移植技术存在的问题:许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷,如异常肥胖,脏器缺陷,免疫失调等。(二)动物细胞融合灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通形成杂种细胞(三)单克隆抗体 抗体动物体内刺激浆细胞
筛选单一效应B细胞产量低、纯度低、特异性差动物在免疫反应的过程中,体内产生的特异性抗体的种类可达百万种以上。单一抗体抗原注射分泌(B淋巴细胞) 设计方案:
一个B淋巴细胞:分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞适宜条件下 细胞培养B 、BB 、 B瘤 、 瘤瘤 、 瘤细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径,但不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中没有S途径,只有D途径,能不断分裂增值。用含氨基嘌呤的选择培养基培养,收集能增殖的细胞。 单克隆抗体制备过程抗原注射小鼠产生免疫反应产生抗体的B淋巴细胞(多种)体外培养
骨髓瘤细胞+细胞融合未融合细胞和多种融合细胞选择性培养基选择杂交瘤细胞克隆培养、抗体检测
杂交瘤细胞群分离所需杂交瘤细胞体外培养小鼠体内培养液腹水提取提取单克隆抗体单克隆抗体的应用:1、用于疾病的诊断、治疗和预防。2、用于制造生物导弹