高二生物月考参考答案
1．【答案】A
【必备知识】动物体细胞核移植技术和克隆动物；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】结合分析可知，克隆动物一般是指将动物体细胞核移植到去核卵母细胞中培育成的新个体，该
技术主要是利用了动物细胞核的全能性。
2．【答案】D
【必备知识】动物体细胞核移植技术和克隆动物；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、在体细胞核移植过程中，普遍使用显微操作法去除卵母细胞的细胞核以及与之同时产生的极
体，A正确；BC、由于体细胞分化程度高，恢复分裂能力难度大，因此体细胞核移植难度高于胚胎细
胞核移植，非人灵长类动物的体细胞核移植难度较大， BC正确；D、克隆动物所利用的细胞核可以
是体细胞或胚胎细胞的细胞核，D错误。
3．【答案】C
【必备知识】体内受精；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】在哺乳动物体内受精过程中，当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子
已经完成了受精，这是判断卵子是否受精的重要标志。C正确。
4．【答案】A
【必备知识】胚胎发育；胚胎干细胞技术；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、人造卵子是干细胞定向诱导分化成原始生殖细胞，再经过细胞培养成功培育出的，A错误；
B、培养人造卵子需要加入血清等成分并提供无菌无毒的环境，B正确；C、胚胎在桑葚胚之前，每个
细胞都具有全能性，C正确；D、人造卵子技术为女性无法产生正常卵细胞的不育问题的家庭带来了
福音，但也存在伦理隐患，D正确。
5．【答案】D
【必备知识】胚胎的体外培养；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、受精卵细胞核中的遗传物质一半来自精子，一半来自卵细胞，细胞质遗传物质主要来自卵细
胞，A错误；B、a是囊胚，b是原肠胚，B错误；C、受精卵发育为桑葚胚的过程是在透明带内完成
的，桑葚胚继续分裂变为囊胚，囊胚进一步分裂，导致透明带破裂，这一过程称为孵化，孵化后进入
b阶段，C错误；D、②过程为卵裂期，其特点是细胞的数量在不断增加，但细胞的体积在不断减小，
D正确。
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6．【答案】B
【必备知识】DNA重组技术的基本工具；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、E.coliDNA 连接酶只能将具有互补黏性末端的 DNA片段之间连接，A错误；BC、DNA连接
酶催化具有相同黏性末端的 DNA片段之间形成磷酸二酯键，B正确，C错误；D、将单个的脱氧核苷
酸连接到 DNA片段上的是 DNA聚合酶，DNA连接酶连接的是两个 DNA片段，D错误。
7．【答案】B
【必备知识】DNA重组技术的基本工具；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、限制酶识别序列越短，则该序列在 DNA中出现的几率就越大，A错误；B、-CATG↓-和
-G↓GATCC-序列被限制酶切出的黏性末端碱基数相同，都是 4个，B正确；C、用不同的限制酶处理
含目的基因的片段和质粒，也可能形成相同的黏性末端，再用 DNA连接酶也可能形成重组质粒，C
错误；D、用限制酶从一个 DNA分子中部获取一个目的基因时，需要切开两个切口，断裂 4个磷酸二
酯键，D错误。
8．【答案】B
【必备知识】PCR扩增的原理与过程；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、在凝胶中 DNA分子的迁移速率主要和 DNA分子的大小、构象等有关，一般 DNA分子越大，
迁移越慢，A正确；B、耐高温的 DNA聚合酶只能从引物的 3′端开始连接脱氧核苷酸，B错误；C、
反应过程中的每一轮循环依次包括变性（将双链 DNA解聚为单链）、复性（引物与模板链结合）、延
伸（合成新的 DNA链）三步，C正确；D、PCR扩增产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来进行鉴定，根
据不同 DNA分子迁移的结果进行鉴别，D正确。
9．【答案】C
【必备知识】基因工程综合；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
【详解】A、由于人肝细胞中胰岛素基因不能表达，所以无法利用肝细胞 mRNA反转录获得胰岛素基因，
A错误；B、表达载体的复制启动于复制原点，胰岛素基因的转录启动于启动子，B错误；C、抗生素
基因是标记基因，作用是检测受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有胰岛素基因的受体细胞筛选
出来，C正确；D、基因表达载体组成至少包括目的基因、标记基因、启动子、终止子，还有复制原
点等，D错误；
10．【答案】C
【必备知识】蛋白质工程原理及操作流程；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】1
高二生物月考 答案第 2页，共 6页
【详解】A、蛋白质工程通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，
A正确；B、蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有
的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）→表达（转录和翻译）→形成预期功能的蛋白
质，B正确；C、蛋白质工程是在基因水平上改造蛋白质的，直接操作对象不是蛋白质，C错误；D、
蛋白质工程是以基因工程为基础延伸出来的第二代基因工程，包含多学科的综合科技工程领域，D正
确。
11．【答案】A
【必备知识】体内受精；胚胎发育；
【关键能力】获取信息能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】A、在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的透明带会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进
入透明带。然后，精子入卵。精子入卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵
内，A错误；B、精子入卵后，尾部脱离，原有的核膜破裂并形成一个新的核膜，最后形成一个比原
来精子的核还大的核，叫作雄原核。与此同时，精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二
极体后，形成雌原核。为得到只含精子染色体的胚胎干细胞需在核融合前剔除卵子的雌原核，B正确；
C、聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织，内细胞团的细胞具有全能性，
所以单倍体胚胎干细胞可以来自小鼠囊胚期的内细胞团细胞，C正确；D、Y染色体比 X染色体短小，
所以 Y染色体上的基因相对较少，可能缺少支持单倍体胚胎干细胞存活的基因，D正确。
12．【答案】B
【必备知识】DNA的粗提取及鉴定的方法；DNA重组技术的基本工具；
【关键能力】实验探究能力
【核心素养】科学探究
【难度】2
【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用这个特性将 DNA与蛋白质
分离，A正确；B、在提取白色丝状物时用玻璃棒轻轻单向搅拌更有利于获得结构完整的 DNA，B错
误；C、DNA带负电，电泳鉴定 DNA利用了 DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理，
C正确；D、因为质粒的本质是环状的 DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ处理后电泳只有一条条带，可能是该质粒上
有一个切割位点，也可能没有切割位点，但限制酶 III切割后有 2个条带，故一定有限制酶Ⅲ的切割位
点，D正确。
13．【答案】C
【必备知识】动物体细胞核移植技术和克隆动物；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】A、动物细胞核移植获得克隆动物所依据的原理是动物细胞核具有全能性，A正确；B、克隆猴
细胞核基因型与核供体细胞完全一致，细胞质基因来源于受体细胞，B正确；C、体细胞核移植需用
取自新鲜卵巢的卵母细胞培养到减数第二次分裂的中期，再做受体细胞，C错误；D、克隆动物可大
量繁殖，可弥补实验捞猴繁殖周期长、单胎数量少的不足，D正确。
14．【答案】AD
【必备知识】动物体细胞核移植技术和克隆动物；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
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【难度】2
【详解】A、供体细胞注入卵母细胞透明带内后，还需要电融合法诱导才能使供体细胞进入卵母细胞形成
重构胚，A错误；B、微型注射针将供体细胞的细胞核吸出可能会破坏细胞核，而透明带下注射法是
直接将供体细胞注入去核卵母细胞透明带内，对供体细胞核和卵母细胞的损伤更小，B正确；C、使
用电刺激、蛋白酶合成抑制剂等方法可以激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，C正确；D、“中
中”和“华华”是由透明带下注射法形成的，核 DNA均来自供体细胞，但质 DNA来自去核卵母细胞和
供体细胞，D错误。
15．【答案】BD
【必备知识】动物的体外受精；胚胎移植技术；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】2
【详解】A、体外受精时，精子在雌性动物的阴道内获能，体外受精前精子需要专门的培养液中获能，A
错误；B、进行①胚胎分割属于无性生殖，故分割后获得的 2个健康胚胎的遗传性状相同，B正确；C、
可从早期囊胚（b）中的内细胞团细胞获得胚胎干细胞，C错误；D、进行②胚胎移植时能否成功，与
供体和受体的生理状态有关，D正确。
16．【答案】BC
【必备知识】目的基因的检测与鉴定；蛋白质工程原理及操作流程；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】A、上述过程应先预期该蛋白质功能，然后再设计其三维结构，A错误；B、从根本上说，基因
中的碱基序列决定蛋白质中氨基酸种类和排序，因此应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，
B正确；C、细胞合成热稳定性高的甘露葡萄糖酶的过程包括转录和翻译两个过程，这两个过程都遵
循中心法则，C正确；D、若要检测细胞是否合成热稳定性高的甘露葡萄糖酶，可以利用抗原—抗体
杂交技术进行检测，D错误。
17．【答案】BD
【必备知识】PCR扩增的原理与过程；基因表达载体的构建；
【关键能力】分析能力
【核心素养】科学思维
【难度】3
【详解】A、农杆菌在自然条件下主要侵染双子叶植物和裸子植物，A错误；B、扩增循环 n次，得到 2n
个 DNA分子，共有 2n+1条单链，只有最初的两条母链不需要引物，共需要 2n+1-2个引物，B正确；C、
耐高温的 DNA聚合酶可在引物的 3'端延伸子链，利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列，
C错误；D、不同的 DNA分子或 DNA区段具有特异性，将扩增出的未知序列与水稻基因组序列比对
可确定 T-DNA的插入位置，D正确。
18．【答案】ACD
【必备知识】基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定；基因工程的操
作程序综合；
【关键能力】析图能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】A、设计引物 1的 5′端序列，要同时能通过双酶切以正确方向插入质粒，需要包含 BamHⅠ的识别
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序列，A错误；B、设计引物 1的 5′端序列，应考虑将编码起始密码子的序列由原核生物偏好的 GTG
转变为真核生物偏好的 ATG，以便目的基因在酵母细胞中更好的表达，B正确；C、结合题意可知，
本过程中重组质粒以不能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体，然后在缺乏尿嘧啶的选择培养基上，不能合
成尿嘧啶的酿酒酵母菌株不能生存，导入重组质粒的酸酒酵母菌株因为获得了尿嘘啶合成酶基因而可
以正常生存，从而起到筛选作用，C错误；D、结合题意可知，酵母工程菌培育成功的标志是产生乳
酸，D错误。
19．(12分，每空 2分)
【答案】(1)（限制酶）HindⅢ、DNA连接酶 显微注射 细胞核移植技术 (2)基因工程成功率
较低，而受精卵数量少。胚胎成纤维细胞能够分裂增殖，便于为基因工程提供大量受体细胞，有利于
筛选 (3)A (4)AC
【必备知识】动物体细胞核移植技术和克隆动物；基因工程的操作程序综合；
【关键能力】应用能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】（1）通过步骤 A获取重组质粒 T时，除需要限制酶 BamHI外，还需要限制酶 HindⅢ、DNA连
接酶；步骤 B是获得重组细胞常用的方法是显微注射法；步骤 C是将动物的一个细胞的细胞核移入一
个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，该技术称为细胞核移植技术。
（2）动物基因工程中常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的全能性高，易于表达，
极大程度的增加了实验的可行性和成功率；但是基因工程成功率依然较低，而受精卵数量少；而拉克
斯牛的胚胎成纤维细胞能够分裂增殖，便于为基因工程提供大量受体细胞，有利于筛选。
（3）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而
是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，因为卵细胞的细胞质可使体细胞
细胞核全能性得到表达，A正确。
（4）AC、分析题图可知拉克斯牛体内的神经、肌肉和乳腺细胞中均含有乳糖酶基因可以合成乳糖酶，从
而在体内合成乳糖；图中拉克斯牛为雌性，对其进行克隆繁育，无法获得雄拉克斯牛，AC正确；B、
拉克斯牛的核基因与图中黑白花奶牛除了乳糖酶基因不同外，还有部分质粒上的基因，B错误；D、
导入了乳糖酶基因的重组细胞 2，不一定就能培育出拉克斯牛，D错误。
20．(10分，每空 2分)
【答案】(1)血清 培养液的 pH (2)同期发情 免疫排斥反应 (3)内细胞团
【必备知识】动物细胞培养技术；胚胎的体外培养；胚胎移植技术；胚胎分割技术；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】2
【详解】（1）体外培养受精卵时，类似于动物细胞培养过程，在培养液中通常需加入血清等一些天然成
分，还需要一定的气体环境，O2是细胞代谢所必需的，提供 CO2以维持培养液的 pH。
（2）在胚胎移植前要对接受胚胎的当地普通绵羊即受体进行同期发情处理，使它们的生理状态相同；由
于免疫豁免现象的存在，代孕母羊对置入子宫的早期胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这就为早期胚
胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
（3）内细胞团将来能发育成个体，采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对胚胎进行分割时，要特别
注意将囊胚期的内细胞团均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。
21．(11分，除标注外，每空 2分)
【答案】(1) PCR（1分） (2)BD (3)基因表达载体 需要把目的基因片段插入表达载体的启动子、
终止子之间 (4)愈伤组织 基因的选择性表达
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【必备知识】基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定；基因工程的操
作程序综合；
【关键能力】分析、应用能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】（1）可通过 PCR的方法扩增目的基因（草甘膦抗性基因）。
（2）两个引物应该与目的基因的两条链的 3'端分别碱基互补配对，则需要的引物序列为 5’-GTTCCT-3’
和 5’-ATGGCT-3’，BD符合题意。
（3）需要把目的基因片段插入表达载体的启动子、终止子之间，目的基因才能表达，所以需要将草甘膦
抗性基因与质粒构建基因表达载体，直接将草甘膦抗性基因导入受体细胞基因是不会表达的。
（4）外植体经过脱分化形成愈伤组织，所以把草甘膦抗性基因导入棉花细胞，脱分化形成愈伤组织。由
于基因的选择性表达，草甘膦抗性基因在愈伤组织中不表达，在棉花植株中进行了正常的表达。
22．(14分，每空 2分)
【答案】(1)表达 可以使药用蛋白基因在宿主细胞中有效表达 (2)含有目的基因和不含目的基因
(3)SmaI会破坏目的基因 BamHI和 HindIII (4)受精卵 乳腺细胞
【必备知识】基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定；胚胎移植技术；
【关键能力】应用能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】（1）据图可知，图 1所示载体有启动子、终止子和标记基因、限制酶切割位点等多种结构，能
够实现目的基因的有效表达，故属于表达载体。
（2）分析题意，质粒上一般具有两种抗生素抗性基因，且其中一个会因目的基因的插入而失活，由于不
含目的基因的质粒含有两种标记基因，而含有目的基因的质粒质粒只有一种标记基因，故这种双标记
和插入失活能使两者在含有抗生素的培养基中得以区分。
（3）据图可知，SmaI会破坏目的基因，故不能选择该酶进行酶切，且目的基因两端都有 EcoRI酶，为避
免切出的末端反向连接，基因表达载体构建时最好选择 BamHI和 HindIII。
（4）由于受精卵的全能性最高，故重组质粒的受体细胞是受精卵，而操作目的是利用乳腺生物反应器生
产某种药用蛋白，故目的基因的受体细胞是乳腺细胞。
23．(12分，每空 2分)
【答案】(1)基因表达载体的构建 (2)预期蛋白质的功能 推测应有的氨基酸序列 (3)修饰
合成 改造
【必备知识】蛋白质工程原理及操作流程；筛选、获取合适的目的基因；
【关键能力】理解能力
【核心素养】生命观念
【难度】3
【详解】（1）基因工程的主要步骤包括获取目的基因、基因表达载体的构建，将目的基因导入到受体细
胞、目的基因的检测与鉴定，其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。
（2）图示为蛋白质工程的设计流程，流程 A是预期蛋白质的功能，根据结构与功能相适应的原理推测，
流程 B是推测应有的氨基酸序列，进而根据遗传密码和氨基酸的对应关系以及转录过程中的碱基互补
配对原则，推测应有的脱氧核苷酸序列，而后进行相关基因的合成。
（3）与基因工程相比，蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基
因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需要，
该过程中对蛋白质的改造最终还需要落实到基因上，因此被称为第二代基因工程。
高二生物月考 答案第 6页，共 6页2022-2023学年度第二学期月考
高二生物试题
说明：本试题满分 100分，考试时间 75分钟。请在答题卡上作答。
一、选择题：本题共 13小题，每小题 2分，共 26分。在每小题给出的四个选项中，只有一项
是符合题目要求的。
1．2017年 11月 27日，世界上首例体细胞克隆猴“中中”和“华华”在我国诞生。克隆动物一般是
指将动物体细胞核移植到去核卵母细胞中培育成的新个体，该技术主要是利用了动物细胞核
的（ ）
A．全能性 B．复杂性 C．多样性 D．统一性
2．下列关于动物细胞核移植技术的叙述，错误的是（ ）
A．在体细胞核移植过程中，普遍使用的去核方法是显微操作法
B．由于体细胞分化程度高，因此体细胞核移植难度高于胚胎细胞核移植
C．非人灵长类动物的体细胞核移植难度较大
D．克隆动物所利用的细胞核可以是卵细胞或精子中的细胞核
3．下列细胞中，哪一个代表发生了受精作用（ ）
A． B． C． D．
4．科学家已经在实验室内通过一定技术手段将干细胞定向诱导分化成原始生殖细胞，再经过细
胞培养成功培育出能够受精的人造精子和人造卵子。这项技术为试管婴儿提供了广阔的发展
前景。下列叙述错误的是（ ）
A．人造卵子是健康女性捐赠细胞核和不孕症女性的去核卵母细胞构成的重组细胞
B．培养人造卵子需要加入血清等成分并提供无菌无毒的环境
C．人造生殖细胞受精形成的胚胎在桑葚胚之前，每个细胞都具有全能性
D．人造卵子技术为女性不育的家庭带来了福音，但也存在伦理隐患
5．如图为受精作用及胚胎发育示意图，a、b代表两个发育时期，下列叙述正确的是（ ）
A．受精卵的遗传物质一半来自精子
B．a、b分别表示原肠胚和囊胚
C．受精卵发育为桑葚胚的过程是在透明带内完成的，孵化后进入 a阶段
D．②过程细胞的数量在不断增加，但细胞的体积在不断减小
6．下列有关 DNA连接酶的叙述，正确的是（ ）
A．E·coliDNA连接酶来自大肠杆菌，只能连接平末端
B．催化具有相同黏性末端的 DNA片段之间形成磷酸二酯键
C．催化具有相同黏性末端的 DNA片段之间形成氢键
D．可以将单个的脱氧核苷酸连接到 DNA片段上
7．下列有关限制酶的叙述，正确的是（ ）
A．限制酶识别序列越短，则该序列在 DNA中出现的几率就越小
B．—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端碱基数相同
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C．只有用相同的限制酶处理含目的基因和质粒，才能形成重组质粒
D．用限制酶切割 DNA分子中部，获得一个目的基因时被水解的磷酸二酯键有 2个
8．下列关于 PCR扩增 DNA片段及电泳鉴定的叙述，错误的是（ ）
A．在凝胶中 DNA分子的迁移速率主要和 DNA分子的大小、构象等有关
B．耐高温的 DNA聚合酶只能从引物的 5′端开始连接脱氧核苷酸
C．反应过程中的每一轮循环依次包括变性、复性、延伸三步
D．PCR扩增产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来进行鉴定
9．下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是（ ）
A．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞 mRNA逆转录获得
B．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原点
C．借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来
D．基因表达载体需要包含目的基因、标记基因、起始密码子、终止密码子等序列
10．蛋白质工程取得的进展，向人们展示出诱人的前景。下列叙述错误的是（ ）
A．可以改造现有蛋白质或制造一种新的蛋白质
B．基本思路是从预期蛋白质功能出发的
C．直接操作对象是蛋白质
D．蛋白质工程的实现需要多学科技术支撑
11．我国科研人员利用小鼠获得了单倍体胚胎干细胞，流程如下图所示。目前构建成功的单倍
体胚胎干细胞，其细胞核内包含的性染色体全部都是 X染色体，而无包含 Y染色体的细胞。
已知小鼠 Y染色体比 X染色体短小。下列叙述错误的是（ ）
A．精子头部入卵后，透明带迅速发生生理反应拒绝其它精子进入透明带
B．为得到只含精子染色体的胚胎干细胞需在核融合前剔除卵子的雌原核
C．由图可知，单倍体胚胎干细胞来自小鼠囊胚期的内细胞团细胞
D．Y染色体比 X染色体短小，可能缺少支持单倍体胚胎干细胞存活的基因
12．大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核 DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，
质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒 DNA。用三种限制酶处理提取的产物，
电泳结果如图所示。下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述错误的是（ ）
A．利用 DNA和蛋白质在冷酒精中溶解性的差异可将 DNA进一步纯化分离
B．在提取白色丝状物时双向搅拌比单向搅拌更有利于获得结构完整的 DNA
C．电泳鉴定 DNA利用了 DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理
D．根据电泳结果，质粒上不一定含有限制酶 I和Ⅱ的切割位点，一定有限制酶Ⅲ的切割位点
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13．2019年 1月 24日，我国科学家宣布世界首批疾病克隆猴——5只生物节律紊乱体细胞克隆
猴在中国诞生，开启了克隆猴模型应用于生命科学研究的“春天”。科学家采集了一只一岁半
的、睡眠紊乱最明显的 BMALl（生物节律基因）敲除猴的体细胞，通过体细胞核移植技术，
获得了 5只克隆猴——这是国际上首次成功构建一批遗传背景一致的生物节律紊乱猕猴模
型。下列相关叙述错误的是（ ）
A．体细胞核移植技术的原理是动物体细胞核的全能性
B．5只克隆猕猴细胞核基因型与核供体细胞完全一致
C．体细胞核移植需用取自新鲜卵巢的卵母细胞直接作受体细胞
D．该研究可弥补实验猕猴繁殖周期长、单胎数量少的不足
二、多选题：本题共 5小题，每小题 3分，共 15分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两
个以上选项符合题目要求，全部选对得 3分，选对但不全的得 1分，有选错的得 0分。
14．常用的核移植方法主要有细胞质内注射法和透明带下注射法两种。前者是用微型注射针将
供体细胞的细胞核吸出注入去核卵母细胞质内；后者是直接将供体细胞注入去核卵母细胞透
明带内，然后促使两个细胞融合，从而具有发育的全能性。我国科学家于 2017年底培育出
的体细胞克隆猴“中中”和“华华”采用的就是后者。下列有关叙述错误的是（ ）
A．供体细胞注入卵母细胞透明带内后，就可自行进入卵母细胞
B．相比之下，透明带下注射法对供体细胞核和卵母细胞的损伤更小
C．可以用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
D．“中中”和“华华”核 DNA均来自供体细胞，质 DNA均来自去核卵母细胞
15．胚胎工程理论的发展和技术的应用提高了良种奶牛的繁育速度，保证了我国高品质牛奶的
充足供应。如图表示繁殖良种奶牛以及获取胚胎干细胞的流程，下列叙述正确的是（ ）
A．体外受精与体内受精不同的是体外受精前精子需要获能
B．进行①胚胎分割后获得的 2个健康胚胎的遗传性状相同
C．可从早期囊胚（b）中的滋养层细胞获得胚胎干细胞（e）
D．进行②胚胎移植时能否成功，与供体和受体的生理状态有关
16．科学家研究发现，将甘露葡萄糖酶氨基酸序列中两个位点的组氨酸和脯氨酸都替换为脯氨
酸后，其热稳定性显著提高。下列相关叙述正确的是（ ）
A．上述过程应先设计甘露葡萄糖酶的三维结构，再预期其功能
B．替换蛋白质中的氨基酸可以通过改造基因中的碱基序列实现
C．细胞合成热稳定性高的甘露葡萄糖酶的过程遵循了中心法则
D．可用 PCR技术检测细胞是否合成热稳定性高的甘露葡萄糖酶
17．如图是被农杆菌侵染的水稻植株的 DNA片段，研究者将其连接成环，并以此环为模板进
行 PCR，扩增出 T—DNA插入位置两侧的未知序列，据此来确定 T—DNA插入的具体位置。
有关说法正确的是（ ）
A．农杆菌在自然条件下主要侵染单子叶植物和裸子植物，T—DNA存在于其 Ti质粒上
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B．若扩增循环 n 次，需要 2n+1-2个引物
C．利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列
D．将扩增出的未知序列与水稻基因组序列比对可确定 T—DNA的插入位置
18．乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不
产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得
能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏
好的起始密码子序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子序列。下列说法错误的是（ ）
A．引物 1的 5′端序列应包含 XbaⅠ的识别序列
B．引物 1的 5′端序列应考虑将 GTG改为 ATG
C．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
D．酵母工程菌培育成功的标志是产生乳酸脱氢酶
三、非选择题：本题共 5小题，共 59分。
19．（12分）有些人体内缺乏足够的乳糖酶（LCT），无法充分消化牛奶中的乳糖，会导致喝牛
奶后产生腹泻等不良反应。我国科研人员利用转基因技术和克隆技术培育出了可产低乳糖牛
奶的拉克斯牛，培育过程如图所示，A～C表示操作步骤。（图中胚胎成纤维细胞是由胚胎
干细胞经分裂分化后产生的一类仍具有分裂能力的细胞）
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(1)通过步骤 A获取重组质粒 T时，除需要限制酶 BamHI外，还需要__________等酶的参与。
实现步骤 B常用的方法是__________，步骤 C中的技术被称为__________。
(2)动物基因工程中常用受精卵作为受体细胞，而在拉克斯牛的培育过程中选择胚胎成纤维细
胞作为受体细胞，此举有何意义：__________。
(3)在现有的技术条件下，还不能直接将重组细胞 1培养成一个新个体，而必须获取重组细胞
2后才能发育成新个体，你认为原因最可能是__________（填字母）。
A．重组细胞 2的细胞核才具有全能性
B．重组细胞 2的核DNA与重组细胞 1不同
C．重组细胞 2中核基因的表达情况与重组细胞 1不同
D．卵细胞较大，便于操作
(4)下列对拉克斯牛的分析中正确的有__________（填字母）。
A．拉克斯牛体内的神经、肌肉和乳腺细胞中均含有乳糖酶基因
B．除乳糖酶基因外，拉克斯牛的核基因与图中黑白花奶牛相同
C．对图中拉克斯牛进行克隆繁育，无法获得雄拉克斯牛
D．导入了乳糖酶基因的重组细胞 2，一定能培育出拉克斯牛
20．（10分）杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者
通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如图所示，请据图回答问题：
(1)在体外培养受精卵时，培养液中通常需加入_________等一些天然成分，还需要提供 CO2
以维持_______________________。
(2)在胚胎移植前要对接受胚胎的当地普通绵羊进行_________处理。代孕母羊对置入子宫的
早期胚胎基本上不发生______________________，这就为早期胚胎在代孕母羊体内的存
活提供了可能。
(3)采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对囊胚期的胚胎进行分割时，要特别注意将___
_______均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。
21．（11分）草甘膦是农业生产中使用的除草剂，从某种细菌中提取草甘膦抗性基因转入棉花
植株，获得抗草甘膦的转基因棉花。回答下列问题。
(1)提取到的草甘膦抗性基因可通过_____扩增。
(2)草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5’——ATGGCT………AGGAAC——3’
3’——TACCGA………TCCTTG——5’
根据上述序列，应选择_____（填字母）作为引物进行草甘膦抗性基因的扩增。
A．引物：5’-TACCGA-3’ B．引物：5’-GTTCCT-3’
C．引物：5’-AUGGCU-3’ D．引物：5’-ATGGCT-3’
(3)要使草甘膦抗性基因能在受体细胞中正常表达，需要利用质粒构建成_______________，
不能直接将草甘膦抗性基因导入受体细胞，原因是_________________________________
____________。
(4)农杆菌转化法把草甘膦抗性基因导入棉花细胞，脱分化形成__________后，草甘膦抗性基
因没有表达，再分化发育成棉花植株后，草甘膦抗性基因正常表达，原因是___________
________________________。
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22．（14分）基因工程中的载体分为克隆载体和表达载体。克隆载体用来克隆和扩增 DNA片段，
而表达载体是使外源基因在宿主细胞中有效表达。图 1为利用乳腺生物反应器生产某种药用
蛋白过程中使用的一种载体，其中含有氨苄青霉素抗性基因（Ampr）、四环素抗性基因（Tetr）
及多种限制酶的识别位点；图 2为目的基因及限制酶的识别位点。回答下列问题：
(1)图 1所示的载体为______载体，判断依据是__________________。
(2)质粒上一般具有两种抗生素抗性基因，且其中一个会因目的基因的插入而失活。这种双标
记和插入失活能使____________（质粒）的受体细胞在含有抗生素的培养基中得以区分。
(3)构建重组质粒时不能使用 SmaI的原因是________。限制酶的最好选择为______。
(4)重组质粒的受体细胞和目的基因表达的细胞分别是____________和___________。
23．（12分）糖尿病是近年来高发的“富贵病”，常见类型有遗传型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。遗传型
糖尿病的主要病因之一是胰岛受损。科研机构做出如下设计：取糖尿病患者的细胞，将人的
正常胰岛素基因导入其中，然后进行细胞培养，诱导产生胰岛组织，重新植入患者的胰岛，
使胰岛恢复功能。Ⅱ型糖尿病需要注射胰岛素治疗。目前临床使用的胰岛素制剂注射 120min
后才出现高峰，与人体生理状态不符。科研人员通过一定的工程技术手段，将胰岛素 B链
的 28号和 29号氨基酸互换，获得了速效胰岛素，速效胰岛素已通过临床试验。
(1)对遗传型糖尿病患者进行治疗的基因工程步骤中的核心步骤是________________。
(2)科研人员利用蛋白质工程合成速效胰岛素，该技术的实验流程为
其中，流程 A是______________________，流程 B是__________________________。
(3)与基因工程相比，蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，
通过基因______________或基因______________，对现有蛋白质进行______________，
或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需要。
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