课件30张PPT。2.2 动物细胞工程单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合(基础)为什么要进行动物细胞培养?如何进行细胞培养?什么叫动物细胞培养? 从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。1.2 动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50细胞剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,繁殖能力越强,越容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长
接触抑制10代以内,保持正常二倍体核型传代培养动物细胞的培养过程
幼龄动物取动物器官
和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:
1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?
讨 论充足营养适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境植物组织培养和动物细胞培养的比较细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基蔗糖 植物激素葡萄糖 动物血清植物体细胞快速繁殖、
培育无病毒植株获得细胞或
细胞分泌蛋白2.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物)分
类细胞分化程度低,恢复全能性容易 细胞分化程度高,恢复全能性不容易2.1 动物细胞核移植概念:核移植技术1.克隆羊培育过程另一头绵羊的子宫思考:
1、核移植的受体细胞是什么?处在什么时期?
2、通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎? 3、核移植到卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核?4、用于核移植的供体细胞为什么选用传代10代以内的细胞?
5、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么?
2.3体细胞核移植技术的应用前景:1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植4、了解胚胎发育和衰老过程;追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合
细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合 受精作用动物细胞融合细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法
化学法仙台病毒
疱疹病毒
新城鸡瘟病毒用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞融合与融合诱导细胞融合物质诱导剂:仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。
思考讨论:
为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活?二、单克隆抗体什么是抗体?
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
?细胞产生抗体
抗体主要分布于?B淋巴细胞与抗体 1.B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。
2.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。
3.每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
特点:
特异性强、灵敏度高 如何大量生产单克隆抗体?利用淋巴细胞产生抗体的功能
利用肿瘤细胞无限增殖的特性
利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞
利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞单克隆抗体制备过程思考:1、本过程利用了哪些原理?免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合?这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体单克隆抗体的应用与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异性强,灵敏度高,优越性十分明显。应用主要有:1、临床诊断2、作为载体,运载抗癌药物,形成“生物导弹”治疗肿瘤 资料:目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病,用单克隆抗体作为诊断手段,是一个必然趋势。另外,用单克隆抗体做体内诊断,借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意,目前,主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法
--灭活病毒一个新细胞--杂交瘤细胞一个优势--单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代501.动物细胞工程技术的基础是:( )
A.动物细胞融合
B.胚胎移植
C.动物细胞培养
D.核移植C2.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是( )
A.结果是相同的
B.杂种细胞的形成过程基本相同
C.操作过程中酶的作用相同
D.诱导融合的手段相同
B3. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞
诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( )
①淋巴细胞
②小鼠骨髓瘤细胞
③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A. ②④ B.①③⑤
C. ①②③④ D.②③ C