克孜勒苏柯尔克孜自治州2022-2023学年高二下学期期末考试
生物 科目
参考答案：
第一题：选择题（16×3=48分 ，每道题只有一个正确答案）
1 2 3 4 5 6 7 8 9
A A D D C D B C C
10 11 12 13 14 15 16 17 18
A D B C B C A D C
第二题：非选择题（本大题共5道小题，共52分）
19、（10分）（1）硝酸盐（或NO3-） 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）
（2）防止皿盖上冷凝水落入培养基造成污染，避免培养基中水分过快挥发（2分，答对一点一分）
检验培养基平板灭菌是否合格（或是否有杂菌污染）
（3）涂布器 无氧、42℃（少答不得分） 蓝
接种等量污泥样品稀释液的牛肉膏蛋白胨培养基（或完全培养基）
（4）1.6×109
（12分）（1）细胞膜的流动性，植物细胞的全能性（答不全不得分）
打破生殖隔离，实现远缘杂交育种
（2）纤维素酶和果胶酶（答不全不得分） 聚乙二醇（PEG） 6
（3）杂种细胞再生出细胞壁
（4）脱分化 再分化 细胞分裂素 生长素（不可颠倒，少答不得分） 消毒 酒精灯火焰旁
21、（8 分）(1) 动物细胞融合 动物细胞培养
（2） 谷蛋白 灭火病毒诱导法 3种
(3)克隆化培养 95%空气和5% 的CO2 培养液
22、（7分）（1）基因表达载体的构建 DNA双链复制
（2）DNA连接酶
（3）Ca2+（CaCl2） T-DNA
（4）DNA分子杂交技术 荧光标记的目的基因的单链
23、（9分）（1）核移植 有性
促性腺 获能 透明带反应 卵细胞膜反应
血清
滋养层 胚胎分割
解析：
1.A【解析】B、 由于当两个或多个细胞连在一起时, 平板上观察到的只是一个菌落, 而样品稀释度无论多高, 都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上, 所以此方法只能估算出样品中的活菌数, 统计的菌落数只是比较接近活菌的实际数,而不一定与活菌的实际数相同，B错误。CD、 菌落是指单个或少数细菌或真菌在固体培养基上大量繁殖时, 形成的一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体, 培养时间不同， 平板上的菌体数量不同, C，D错误；A、 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时, 由于一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌, 所以通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数, C正确;
故选C。
A【解析】无菌操作包括消毒和灭菌，消毒并不是要杀死所有的细菌等微生物，A项错误。
D 【解析】平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，然后培养，但不能用于微生物的计数，稀释涂布平板法通过一系列梯度稀释可将微生物分散并计数，B、C项正确；用血细胞计数板计数微生物时，会将死的微生物计数在内，实验结果往往偏大，D项错误
4.【答案】D
【解答】解：A、外植体消毒可先用酒精处理30s，无菌水清洗洗2～3次后，再用次氯酸钠溶液处理30min，立即用无菌水清洗2﹣3次，A正确；
B、过程①表示脱分化，使外植体细胞失去特有的结构和功能而转变成未分化细胞，B正确；
C、过程②表示再分化，实质是基因的选择性表达，过程①～④表示植物组织培养，体现了植物细胞的全能性，C正确；
D、过程①和②均需在培养基中添加细胞分裂素和生长素，过程①是避光，过程②必须在光照下进行，D错误。
故选：D。
5.C【解析】植物组织培养和动物细胞培养的技术原理不相同，A项错误；动物细胞融合不能打破生殖隔离获得新个体，B项错误；植物组织培养可以用于植物快速繁殖、获得杂种植株等，D项错误。
6.【答案】D
【解答】解：哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，成功培育得到克隆猴“中中”和“华华”的方法是体细胞核移植，发育成克隆猴的胚胎来源于去核卵母细胞+体细胞核。故选：D。
7.【答案】B
【解答】解：A、脐血中含有与骨髓中相同类型的干细胞，具有较强的分裂和分化能力，能自我更新，A正确；
B、早期胚胎细胞的全能性高于脐带血中的干细胞，其分化程度相对脐带血中的干细胞更低，B错误；
C、脐血中含有与骨髓中相同类型的干细胞，可以增殖、分化为血细胞，用来治疗造血功能障碍类疾病，C正确；
D、分化的实质是基因的选择性表达，使得细胞中蛋白质种类有所不同，D正确。
故选：B。
8.C【解析】A.诱导植物原生质体融合或动物细胞融合均可采用物理方法（如电激）或化学方法，A错误；B.去除植物细胞壁需要用纤维素酶和果胶酶处理，将动物组织分散成单个细胞需用胰蛋白酶处理，B错误；C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后可形成既能合成抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞培养可大量制备单克隆抗体，C正确；D.植物组织培养经过脱分化和再分化，动物细胞培养不需要经过脱分化和再分化，D错误。故选C
9. C【解析】A.试管婴儿属于有性繁殖，具有两个亲本的遗传特性；植物组织培养获得试管苗，属于无性繁殖；克隆牛属于无性繁殖，遗传特性主要来源于供核细胞，A错误；
B.试管苗不需要进行胚胎移植，B错误；C.试管婴儿和克隆羊都利用了动物细胞培养技术，试管苗采用了植物组织培养技术，因此三者都应用到了细胞工程技术，C正确；D.试管苗体现植物体细胞的全能性，克隆牛体现动物体细胞的细胞核具有全能性，D错误。
10.答案：A
解析：植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶,所以过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理,A错误;过程②为细胞融合过程,该过程依赖膜的流动性,B正确;过程③需应用植物组织培养技术将杂种细胞培养形成个体,C正确;三倍体植株含有三个染色体组,减数分裂时联会紊乱,可产生无籽柑橘,D正确
11.答案：D
解析：为获得更多的后代,采用激素注射促进雌鼠产生更多的卵母细胞,A错误;细胞a(内细胞团细胞)和细胞b(滋养层细胞)来自同一个受精卵,含有的核基因相同,但因为分化程度不一样,全能性高低不同,B错误;胰蛋白酶能将细胞之间的蛋白质,如黏连蛋白等分解掉,故可用胰蛋白酶消化内细胞团的细胞间蛋白,从而获得分散的胚胎干细胞,C错误;动物细胞体外培养应该在CO2培养箱中进行,D正确
12.B【解释】A、培育转基因动物所需的目的基因可以从供体细胞中直接分离得到，也可从基因文库中获得或人工合成，A错误；B、目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子，B正确；C、由分析可知，将目的基因导入受体细胞时，不存在碱基互补配对，C错误；D、检测目的基因是否表达出产物用的是抗体-抗原杂交法，D错误。故选B。
13.【答案】C
【解析】【分析】为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点，以便于目的基因的插入； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
【详解】A、作为运载体必须具备的条件之一是能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因，A正确；
B、作为运载体必须具备的条件之一是具有多个限制酶切点，以便于目的基因的插入，B正确；
C、作为运载体必须具备的条件之一是具有某些标记基因，以便于重组后进行重组DNA分子的筛选，C错误；
D、携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，停留在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随着染色体DNA进行同步复制，同时运载体对宿主细胞无伤害，以使目的基因在宿主细胞中复制并稳定保存，D正确。
故选C。
14. 【答案】B【解析】
【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
【详解】A、在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞，A错误；
B、过程②为原代培养，培养细胞1分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖出现接触抑制现象，B正确；
C、培养细胞2需要重新用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；
D、进行动物细胞培养的过程中，也存在基因的选择性表达， D错误。
15.答案：C
解析：严格选择转入植物的目的基因，可避免产生对人类有害的物质，减少人们对转基因农作物安全的担忧，A正确；当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，特别是生殖性克隆，但不反对治疗性克隆，B正确；试管婴儿属于有性生殖，C错误；生物武器是指有意识地利用微生物、生化毒剂等侵袭军队、平民、农作物或者牲畜等目标，以达到战争目的的一类武器，有传染性强、作用范围广等特点，应严格禁止，D正确。
A【解析】BCD、生物武器包括病毒，致病菌和生化毒剂，BCD错误。A、毒品不属于病原体，不属于生物武器，B正确。
17.【答案】D
【详解】A、治疗性克隆目的是培养出能够用于医学治疗的供体器官，以解决目前临床上存在的供体器官不足和移植后免疫排斥的问题，A正确；B、治疗性克隆的目的是治疗疾病，B正确；C、用胚胎干细胞通过基因的选择性表达（细胞分化）能够培养出不同的组织细胞，C正确；D、中国政府反对生殖性克隆人，但不反对治疗性克隆，D错误。故选D。
18.答案：C
解析：噬菌体能在自然条件下侵染细菌，但不能侵染玉米细胞。
19.【解析】
(1) 反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气，故BTB培养基应以硝酸盐（或NO3-）为唯一氮源，才可以从污水处理厂的活性污泥中筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌（目的菌）。微生物的实验室培养，对培养基等通常采用高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）法进行灭菌。
（2）待平板凝固后,应倒置放在超净台上, 可以避免培养基中的水分过快的挥发, 同时防止皿盖上的水珠落入培养基而污染培养基。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，目的是检验培养基平板灭菌是否合格（或是否有杂菌污染）。
（3）梯度稀释平板法使用的工具是涂布器。因反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气，具有耐42℃高温的特点，故将样液均匀涂布在BTB培养基上，放在 无氧、42℃环境中培养。反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气,导致环境呈碱性,使BTB培养基呈蓝色。为了判断BTB培养基是否起到了选择目的菌作用，需要设置接种等量污泥样品稀释液的牛肉膏蛋白胨培养基（或完全培养基）作为对照。
（4）一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的污泥样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149，则每毫升原污泥样液中上述微生物数量为（155+160+176+149）/4/0.1×106=1.6×109个。
20.【解析】
(1)由图可知,新型苜蓿的培育过程采用的是植物体细胞杂交技术，该技术涉及的原理有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。植物体细胞杂交技术在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种方面展示出独特的优势，取得了巨大突破。
（2）过程①为去壁，常用方法为酶解法。利用的酶是纤维素酶和果胶酶；过程②为人工诱导原生质体融合，常用的方法包括物理法和化学法。物理法包括离心法、电融合法等；化学法包括 聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高pH融合法。研究人员选择紫花苜蓿体细胞（基因型为Aaaa）和百脉根体细胞（基因型为YYrr），分别含有有4和染色体组和2个染色体组，故融合后得到的杂种细胞含有6个染色体组。
（3）植物体细胞杂交技术包括植物细胞融合和植物组织培养两个过程，植物细胞融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁。
（4）过程④是杂种细胞经过脱分化形成愈伤组织的过程，过程⑤是愈伤组织经再分化形成根、芽，进而形成杂种植株的过程。右图可知横坐标代表植物激素X，促进细胞群分化出芽，故X为细胞分裂素，纵坐标代表植物激素Y,促进细胞群分化出根，故Y为生长素。因在培养瓶中除长出了愈伤组织外还长出了一些某种真菌的菌落，而回顾操作过程，操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的消毒处理和接种外植体环节没有在酒精灯火焰旁进行严格的无菌操作造成的。
21.【解析】
(1)制备单克隆抗体的过程中用到的动物细胞工程的技术有动物细胞融合和动物细胞培养。
（2）结合题干“谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质，科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量，想通过制备相应的单克隆抗体进行检测”可知本实验中注射的特定抗原是谷蛋白。步骤a为诱导动物细胞融合，常用的方法电融合法、PEG融合法和灭活病毒诱导法。其中与植物体细胞杂交相比特有的融合方法是灭活病毒诱导法。经过诱导动物细胞融合，细胞两两融合的产物有B淋巴细胞和B淋巴细胞融合，骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞融合和骨髓瘤细胞融合，共3种。
（3）在诱导动物细胞融合的基础上经过两次筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，步骤b是用特定写选择培养基进行筛选，获得多种杂交瘤细胞。经步骤c克隆化培养和抗体检测筛选，获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。获得的杂交瘤细胞可采用体外培养的方式进行扩大培养，培养过程将它们置于95%空气和5%的CO2混合气体的CO2培养箱中进行培养。培养一段时间后可从培养液中提取单克隆抗体。
22.【解析】
（1）基因工程技术基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。PCR是一项体外托增DNA的技术，其原理是DNA双链复制。
（2）基因工程中，DNA连接酶可以连接两个DNA片段，将土壤农杆菌的Ti质粒（本质也是DNA分子）与目的基因连接，一般采用DNA连接酶。
（3）农杆菌是微生物，需要用Ca2+处理使其成为感受态细胞，易于吸收环境中DNA分子；农杆菌转化法的原理是：在农杆菌的Ti质粒上存在T-DNA片段，它具有可以整合到受体细胞染色体DNA的特点，使目的基因进入植物细胞并稳定维持和表达。
（4）检测受体细胞中是否含有目的基因，常用DNA分子杂交技术进行检测，若出现杂交带，则证明插入成功；该技术要用荧光标记的目的基因的单链作探针，遵循的原理是碱基互补配对原则。
23.【解析】
（1）克隆动物采用的技术是核移植技术，为无性生殖；而题图所示的繁殖过程具有精卵结合形成受精卵的过程，应为有性生殖。克隆动物培养过程与图示繁殖过程相比特有的技术手段是核移植技术。
（2）一般用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。精子要具有受精能力，需对其进行获能处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，透明带反应是阻止多精入卵的第一道屏障，卵细胞膜反应是阻止多精入卵的第二道屏障。
（3）受精卵体外培养所需的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清（或血浆）等物质。
（4）为筛选出具有优良性状的母牛，在胚胎移植前可以选取早期胚胎的滋养层细胞作性别鉴定。为了提高已有胚胎的利用率，可采用胚胎分割技术，一般选择形态正常、发育良好的桑椹胚或囊胚进行胚胎分割，以获得多个胚胎。克孜勒苏柯尔克孜自治州2022-2023学年高二下学期期末考试
生物科目
时间：90分钟 满分：100分
考生须知：
1．本试卷满分100分，考试时间90分钟。
2．本卷由试题卷和答题卡两部分组成，其中试题卷共3页。要求在答题卡上答题，在试题卷上答题无效。
3．作答选择题时，请选出正确答案后，用2B铅笔将答题卡上对应题目的答案字母涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案字母，在试卷上作答无效。
4．答题前，请用0.5mm黑色签字笔在答题卡相应位置上认真填写准考证号、姓名、考场号、座位号、学校。
5．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题（18×3分=54分 ，每道题只有一个正确答案）
1、用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数,原因是（ ）
A. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 C. 平板上的一个菌落就是一个细菌
B. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D. 菌落中的细菌数目是固定的
2、下列关于消毒、灭菌及无菌操作的叙述，错误的是 （ ）
A. 无菌操作就是要杀死所有的细菌等微生物 C. 接种室和工作台可以用紫外线进行消毒
B. 操作者的双手可以用酒精擦拭进行消毒 D. 玻璃器皿可以采用干热灭菌法进行灭菌
3、下列有关微生物的分离、纯培养及计数的叙述，错误的是（ ）
A. 用尿素为唯一氮源的培养基可以分离出分解尿素的细菌
B. 平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散但不可计数
C. 稀释涂布平板法通过一系列梯度稀释可将微生物分散并计数
D. 用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往比实际值偏小
4、某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线如图所示。下列有关叙述错误的是（ ）
取材→消毒愈伤组织出芽生根移栽
A．消毒的流程为酒精消毒→无菌水冲洗→次氯酸钠溶液处理→无菌水清洗
B．过程①的目的是让外植体细胞失去特有的结构和功能，转变成未分化的细胞
C．过程②的实质是基因的选择性表达，过程①～④体现了植物细胞的全能性
D．过程①和②均需在培养基中添加细胞分裂素和生长素，且均必须在光照下进行
5、下列关于动物细胞工程和植物细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 植物组织培养和动物细胞培养的技术原理相同
B. 通过动物细胞融合可以克服生殖隔离获得新个体
C. 植物细胞工程和动物细胞工程都需要在无菌、无毒条件下进行
D. 动物体细胞核移植可以培养克隆动物，植物组织培养只能用于植物体细胞杂交
6、2017年我国科学家应用体细胞克隆技术，成功培育得到克隆猴“中中”和“华华”。这是世界上首次成功地克隆出非人灵长类动物，发育成克隆猴的胚胎来源于（ ）
A．去核卵母细胞 B．去核卵母细胞+精子 C．卵母细胞+精子 D．去核卵母细胞+体细胞核
7、人脐带血中含有与骨髓中相同类型的干细胞。关于此类干细胞的叙述不正确的是（ ）
A．具有自我更新和分化的潜能 B．具有与早期胚胎细胞相同的分化程度
C．可用来治疗造血功能障碍类疾病 D．分化后，表达的蛋白种类发生变化
8、下列关于细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 电融合法可诱导植物原生质体融合，不能诱导动物细胞融合
B. 去除植物细胞壁需酶处理，将动物组织分散成单个细胞不需酶处理
C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫的B淋巴细胞融合后培养可制备单克隆抗体
D. 动植物细胞培养都需要经过脱分化处理
9、下列有关试管婴儿、试管苗和克隆牛三者共同点的叙述，正确的是（ ）
A. 都属于无性繁殖 B. 都需要进行胚胎移植
C. 都需要借助细胞工程技术 D. 都能体现细胞的全能性
10、为培育具有市场竞争力的无籽柑橘,研究者设计如下流程。相关叙述不正确的是( )
A. 过程①需使用胰蛋白酶处理
B. 实现过程②依赖膜的流动性
C. 过程③需应用植物组织培养技术
D. 三倍体植株可产生无籽柑橘
11、小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞,制备流程如下图所示。下列叙述正确的是( )
A.为获得更多的囊胚,采用激素注射促进雄鼠产生更多的精子
B.细胞a和细胞b内含有的核基因不同,所以全能性高低不同
C.用胰蛋白酶将细胞a的膜蛋白消化后可获得分散的胚胎干细胞
D.胚胎干细胞和诱导出的各种细胞都需在CO2培养箱中进行培养
12、下列有关基因工程基本操作程序的叙述，正确的是（ ）
A．转基因生物的目的基因都是从供体细胞中直接分离得到的
B．目的基因主要是指编码蛋白质的基因
C．将目的基因导入受体细胞的过程存在碱基互补配对
D．检测目的基因是否表达可用DNA分子杂交技术
13、作为基因工程的运输工具——载体，必须具备的条件及理由对应不正确的是（ ）
A. 能够在宿主细胞中稳定保存并大量复制，以便提供大量的目的基因
B. 具有多个限制酶切割位点，以便于目的基因的插入
C. 具有某些标记基因，以便目的基因能够准确定位与其结合
D. 对宿主细胞无伤害，以不影响宿主细胞的正常生命活动
14、如图表示某学习小组利用正常的小鼠细胞进行动物细胞培养的过程，①～④表示相关过程。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 过程①可以使用机械法或酶解法改变细胞的通透性
B. 过程②为原代培养，培养细胞1一般会发生接触抑制现象
C. 培养细胞2需要贴附于基质表面生长，直接用离心法进行收集
D. 进行动物细胞培养的过程中，不会发生基因的选择性表达
15、下列关于生物技术的安全性及伦理问题的观点，错误的是( )
A. 应严格选择转入植物的目的基因，避免产生对人类有害的物质
B. 当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆
C. 反对设计试管婴儿的原因之一是试管婴儿技术属于无性繁殖
D. 生物武器具有传染性强、作用范围广等特点，应严格禁止
16、生物武器种类多样，下列不太可能用于制造生物武器的是（ ）
A. 毒品 B.病毒 C.生化毒剂 D. 致病菌
17、“治疗性克隆”可用胚胎干细胞克隆出人体不同的组织、细胞，以用于医学研究和治疗。下列相关叙述错误的是（ ）
A．该技术有望解决临床上供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题
B．人类治疗性克隆可达到治疗疾病的目的
C．胚胎干细胞可克隆出不同组织、细胞的根本原因是基因的选择性表达
D．中国政府既反对克隆人或动物，也反对治疗性克隆
18、下列将目的基因导入受体细胞的方法中，不合理的是( )
A. 利用显微注射法将目的基因导入受精卵，培育了超级小鼠
B. 我国利用花粉管通道法培育了转基因抗虫棉
C. 可利用含目的基因的噬菌体侵染玉米细胞来培育转基因玉米
D. 用Ca2+处理大肠杆菌，有利于细胞吸收环境中的DNA
二、非选择题（本大题共5道小题，共46分）
19、（10分）反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气（2NO3-+10e-+12H+→N2O→N2），在处理工业污水、治理水体富营养化中具有重要作用。科研人员想从一污水处理厂的活性污泥中筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌（目的菌），用于提升温度较高的工业污水的脱氮效率，具体流程如图所示（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）：
（1）BTB培养基以__________为唯一氮源，制成的培养基常用__________法进行灭菌。
（2）待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是_______（2分）。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，目的是________。
（3）将污泥样品梯度稀释后，使用_____（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基上，放在______环境中培养2-3天后，挑选周围显______色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。为了判断BTB培养基是否起到了选择目的菌作用，需要设置______作为对照。
（4）为计数微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的污泥样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149，则每毫升原污泥样液中上述微生物数量为___________。
20、（12分）紫花苜蓿被誉为“牧草之王”，其营养价值位列各种牧草之首，但耐酸性差，青饲易造成家畜臌胀病；百脉根又称“瘠地荀蓿”，耐酸性强，因富含缩合单宁，饲喂时可防止家畜臌胀病的发生。某研究人员选择紫花苜蓿体细胞（基因型为Aaaa）和百脉根体细胞（基因型为YYrr），设计了下列技术路线，以期获得抗臌胀病的新型苜蓿。回答下列问题：
图一 图二
（1）杂种植株的培育所涉及的原理有 。植物体细胞杂交技术的研究在_______，培育植物新品种等方面，取得了巨大突破。
（2）图一中①过程常利用的酶是__________；②过程常用的化学法一般是用 作为诱导剂来诱导细胞融合。融合后得到的杂种细胞含有_____个染色体组。
（3）细胞融合完成的标志是________。
（4）图一中④和⑤过程分别是 、 过程。愈伤组织形成的过程，含有植物激素X和植物激素Y。根据图二判断，植物激素X、Y分为 、 。在植物组织培养时发现，有一个MS培养基中没有加入植物激素X、Y的培养瓶中也长出了与加有激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落，科学家推测出现上述现象可能与该真菌有关。回顾操作过程，操作环境的消毒过程、培养基和器具的灭菌过程应该没有问题，可能是对外植体的_______处理和接种外植体环节没有在_______进行严格的无菌操作。
21、(8分)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质，科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量，想通过制备相应的单克隆抗体进行检测，部分流程如下图：
制备单克隆抗体的过程中用到的动物细胞工程的及技术有 、 。
图中注射的特定抗原是_____（化学成分）。步骤a中与植物体细胞杂交相比特有的融合方法是 。经过a步骤，细胞两两融合的产物有____种。
步骤a的基础上经过步骤c ______和抗体检测筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，获得的杂交瘤细胞可采用体外培养的方式进行扩大培养，培养过程将它们置于 混合气体的CO2培养箱中进行培养。培养一段时间后可从___ _中提取单克隆抗体。
22、（7分） 我国科学家成功克隆了控制水稻理想株型的关键多效基因IPA1。研究发现，基因IPA1发生突变后，会使水稻穗粒数和千粒重（以克表示的一千粒种子的重量）增加，同时茎秆变得粗壮，增加了抗倒伏能力。实验显示，将突变后的IPA1基因导入常规水稻品种，可以使其产量增加10%以上。下图表示该水稻新品种的简易培育流程，据图回答问题：
（1）基因工程核心步骤是_______。利用PCR技术扩增突变的IPA1基因，其原理是__________。
（2）将土壤农杆菌的Ti质粒与目的基因连接，一般采用_________酶。
（3）步骤②将重组质粒导入土壤农杆菌之前，常用_________处理该细菌，使其处于感受态。农杆菌转化法的原理是：在农杆菌的Ti质粒上存在________片段，它可以整合到受体细胞的染色体DNA上，使目的基因进入植物细胞并稳定存在和表达。
（4）为了确定突变的IPA1基因是否插入了水稻胚细胞的染色体DNA中，可用________技术进行检测，该技术要用________作探针。
23、（9分）如图为纯种荷斯坦奶牛的繁殖过程，据图回答下列问题。
（1）克隆动物培养过程与图示繁殖过程相比特有的技术手段是________技术，将这两种繁殖动物的方式进行对比，实质性的区别为后者是________（填“无性”或“有性”）生殖。
（2）一般用______激素对供体母牛做超数排卵处理。精子要具有受精能力，需对其进行_______处理。防止多精入卵受精的生理反应有____________和___________。
（3）受精卵体外培养所需的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及________等物质。
（4）为筛选出具有优良性状的母牛，在胚胎移植前可以选取早期胚胎的________细胞作性别鉴定。为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。
