2022-2023学年度下期高二第三次考试
生物学试卷B 卷
满分100分，考试时间90分钟
本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分，所有答案都写在答题卷上。
一、选择题（本题共30 小题，每小题2 分，共60 分。在每小题给出的四个选项中，只有一
项是符合题目要求的）
1.《本草纲目》中记载了酿制烧酒的过程“以糯米或粳米等蒸熟，酿瓮中七日，……入甑蒸
令汽上，用器承取滴露”，“凡酸败之酒，皆可蒸烧”。下列说法正确的是（ ）
A.为使酵母菌进行酒精发酵，酿制时“瓮”应装满后密封
B.“儒米或粳米”中所含物质只能为微生物提供碳源和氮源
C.在利用酵母菌发酵的“七日”中，水和酒精是同时产生的
D.发酵过程中密封不严，醋酸杆菌将酒精转化为醋酸使酒“酸败”
2．丙草胺是一种应用广泛的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某生物兴趣
小组从活泉公园土壤中分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其进行计数（如下图所示），
以期为修复被丙草胺污染土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是（ ）
A．用以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养
B．将培养基 pH 调至酸性，有利于丙草胺降解菌的生长繁殖
C．通过计算得知每克土壤中的菌株数约为 1.7×109个
D．除了用图中所示计数方法之外，还可用显微镜直接计数其计数结果往往比实际值偏大
3．酵母的蛋白含量高，可用作饲料蛋白，且有些酵母能利用工业废甲醇作为碳源进行繁殖，
既可减少污染，又可降低成本。研究人员拟从土壤中分离该类酵母并大量培养，操作流程如
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下图。下列相关叙述错误的是（ ）
A．玻璃器皿、金属用具和培养基可选择高压蒸汽灭菌
B．③④过程中使用的培养基均需以甲醇作为唯一的碳源
C．为了保证结果准确，对每一个平板的菌落都要进行计数并取平均值
D．将发酵液稀释100倍后，用25×16（1mm×1mm×0.1mm）型血细胞计数板计数5个中格
中的细胞数为25个，则发酵液中每毫升有1.25×108个细胞
4.．在传统发酵技术中，果醋的制作往往在果酒制作基础上进行。下图甲是醋酸发酵装置，
乙是培养液pH变化曲线图，下列叙述不正确的是（ ）
A．发酵初期不通气，溶液中没有气泡产生 B．中期可以闻到酒香，说明进行了酒精发酵C．后期接种醋酸菌，适当通气并提高发酵温度 D．图乙中能正确表示pH变化的曲线是②
5.在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌操作。图中，符合无菌
操作要求的有（ ）
①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿；②菌种试管口在火焰上灼烧；③接种前
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灼烧接种环；④接种前培养皿在火焰上灼烧；⑤靠近火焰接种
A．①②③④ B．①②③⑤ C．①③④⑤ D．②③④⑤
6.下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是（ ）
从紫草的愈伤组织中提取紫草素、利用细胞工程培育“番茄—马铃薯”杂种植株都利用了植物组织培养技术
在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，可能会发生细胞脱分化、染色体变异或基因突变，而不可能发生细胞分化和基因重组
“试管婴儿”实质上就是“体外受精”和“胚胎移植”的“产物”，但无法使不能产生精子或卵细胞的夫妇得到自己的孩子
动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术手段、所依据的原理均相同，都能形成杂种个体
7．某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线如图所示。下列有关叙述错误
的是（ ）
取材→消毒 愈伤组织 出芽 生根 移栽
A．消毒的流程为酒精消毒→无菌水冲洗→次氯酸钠溶液处理→无菌水清洗
B．过程①的目的是让外植体细胞失去特有的结构和功能，转变成未分化的细胞
C．过程②的实质是基因的选择性表达，过程①～④体现了植物细胞的全能性
D．过程①和②均需在培养基中添加细胞分裂素和生长素，且均必须在光照下进行
8．如图所示为植物体细胞杂交技术流程图，其中甲和乙分别表示两种二倍体植物细胞，所
含有的染色体组分别是AA和BB。据图分析下列叙述正确的是（ ）
A．①过程需用到果胶酶、纤维素酶和蛋白酶 B．c细胞只有AABB这一种类型
C．过程④和⑤分别是分化和再分化 D．获得的植物d因为有同源染色体所以可育
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9.下列有关生物工程描述正确的有（ ）
①依据植物细胞的全能性，可利用花药进行单倍体育种
②依据基因重组原理，可利用植物细胞进行微型繁殖
③依据基因突变原理，可利用射线处理愈伤组织获得作物新品种
④依据膜的通透性，可利用海藻酸钠作材料包裹愈伤组织获得人工种子
⑤制备单抗时先利用特定的抗原蛋白饲喂小鼠，再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞
⑥制备的单抗可以用来直接杀死癌细胞
⑦体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加抗生素保证无毒条件
A. 一项 B. 两项 C. 三项 D. 四项
10.如图是利用奶牛乳腺生产血清白蛋白的过程。下列有关叙述错误的是（ ）
将牛组织置于清水中并加入一定量的胰蛋白酶处理可得到单细胞
图中涉及基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植等技术
选用未受精的卵细胞作为受体细胞是因为其具有让细胞核全能性得到表达的环境
若要获得同卵双胎或多胎，分割囊胚时需将内细胞团均等分割
11.用胚胎干细胞（ES细胞）定向诱导分化出人造组织器官进行自体移植，可以解决临床上
存在的供体器官不足和移植后免疫排斥的问题，下图表示胚胎干细胞分离和定向诱导分化的流程图，其中①～④为细胞或细胞结构，Ⅰ～Ⅳ为操作过程，下列叙述与图中相符的是（ ）
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图中ES细胞是由③分离来的，此外还可以从原始性腺中分离
ES细胞在饲养层细胞上会向不同类型的组织细胞分化
过程Ⅴ的结果多种多样体现了ES细胞具有发育的全能性
图中所涉及的现代生物技术有体细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养等技术
12.中国科学家应用体细胞核移植方法培育了克隆猴“中中”和“华华”。下列有关“中中”
和“华华”的叙述，不正确．的是（ ）
与核供体相比，他们体细胞的染色体数目不变
核移植技术并未对细胞核供体猴进行完全的复制
早期胚胎的培养液中含维生素和激素等能源物质
用体细胞核移植的技术难度大于胚胎细胞核移植
13．下列关于胚胎分割的叙述，正确的是（ ）
A．胚胎分割移植可产生基因型完全相同的新个体
B．对胚胎分割的次数越多，产生的新个体也越多
C．原肠胚已出现胚层分化，是进行胚胎分割的最佳时期
D．经多次分割且不含内细胞团细胞的囊胚也能正常发育
14．早在2018年，当最后一头雄性北白犀离世那天起，地球上就只剩下 2头雌性北白犀。
下列利用现代科技帮助它们产生后代的方案中不可行的是（ ）
A．将北白犀的体细胞与去核卵母细胞融合，利用胚胎移植等技术培育出新个体
B．将北白犀的卵细胞与保存的精细胞体外受精，通过胚胎分割技术培育更多个体
C．将北白犀的体细胞与骨髓瘤细胞融合，利用动物细胞培养技术培育出新个体
D．将北白犀的体细胞诱导成多能干细胞，进而诱导出生殖细胞再繁衍培育新个体
15．大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物，
电泳结果如图所示。下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述不正确的是（ ）
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A．提取DNA时可加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解
B．将提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺试剂进行鉴定
C．电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理
D．根据电泳结果，质粒上一定没有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，而有限制酶Ⅲ的切割位点
16. 下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（ ）
重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体
所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快
只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达
17. 下列关于DNA粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与电泳鉴定的叙述，正确的是（ ）
用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量相近
使用二苯胺试剂能有效测定不同提取液中DNA的纯度差别
PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子大小等有关
PCR扩增4次循环后，得到的含有两种引物的DNA片段所占比例为18
18. 干扰素是一种广谱抗病毒制剂，是具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），下图为通过基因工程生产干扰素的部分操作，图中①②③④表示相关操作过程。下列相关分析
错误的是（ ）
图中过程①③中都需要用到限制性核酸内切酶
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过程②需用热稳定性DNA聚合酶，②操作的原理是DNA双链复制
过程③操作要注意干扰素基因上有启动子、终止子及标记基因等
过程④为目的基因的导入，最后必须对干扰素进行功能活性鉴定
19. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，根据图示
判断下列叙述错误的是（ ）
用限制酶Ⅱ切割获得目的基因时，有四个磷酸二酯键被水解
质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割后获得的DNA片段可以连接形成重组DNA
质粒中的标记基因便于筛选出目的基因已经表达的细胞
20. 蛋白质工程中对蛋白质分子进行设计时，主要包括（ ）
①从预期的蛋白质的功能出发 ②进行少数氨基酸的替换
③设计全新的蛋白质 ④直接改变蛋白质的空间结构
A. ①② B. ①②③ C. ②③④ D. ①②④
21．T4溶菌酶来源于T4噬菌体，是重要的工业用酶。科学家通过一定技术使T4溶菌酶的第
3位异亮氨酸变为半胱氨酸（异亮氨酸的密码子是AUU、AUC、AUA，半胱氨酸的密码子是UGU、UGC），于是在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，从而使T4溶
菌酶的耐热性得到了提高。对上述过程的叙述错误的是（ ）
A．对T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程的范畴
B．上述过程通过直接改造T4溶菌酶mRNA上的2个碱基实现
C．参与新的T4溶菌酶合成的tRNA种类可能不变
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D．改造后的T4溶菌酶肽键数不变，二硫键的作用类似于DNA中的氢键
22. 下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述正确的是（ ）
启动子和终止子分别驱动和终止目的基因的翻译过程
没有与目的基因重组的质粒也可能进人受体细胞
质粒上的目的基因必须整合到受体细胞的DNA上才能不被分解
以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同
23．大肠杆菌中的EcoRⅠ酶能够专一性识别CAATTC序列，并在C与A之间将这段序列剪开。
该酶属于（ ）
A．DNA连接酶 B．RNA聚合酶
C．限制性核酸内切酶 D．DNA聚合酶
24. 科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。以下有关基因工程
的叙述错误的是（ ）
在基因工程中，PCR技术可用于任何目的基因的获取，且能迅速获得大量目的基因
启动子对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的
应用DNA探针技术，可以检测转基因马铃薯植株中目的基因的存在及其转录产物
用同一种限制酶，分别处理质粒和含目的基因的DNA，可用DNA连接酶连接形成重组DNA分子
25. 关于基因工程下列说法正确的有（ ）
①限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工 ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 ④只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达 ⑤所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序
列 ⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物身上
⑦质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体
A. 2项 B. 3项 C. 4项 D. 5项
26.下图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图，有关叙述正确的是（ ）
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A ．后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定
B ．过程 ① 需要提供 95% 空气和 5%CO2 的混合气体
C ．过程 ② 常使用显微操作去核法对受精卵进行处理
D ．过程 ③ 将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植
27. 生物技术的发展带来了安全性与伦理问题，下列中国政府的态度错误的是（ ）
要求对转基因生物产品及其加工品加贴标注
禁止生殖性克隆，支持治疗性克隆
实施体外受精—胚胎移植及其衍生技术必须获得卫生部的批准证书
任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器
28. 下列关于生物工程相关知识的叙述，正确的是( )
①在基因工程操作中为了获得重组质粒，可以用不同的限制性内切酶切割质粒和目的基 因，但露出的黏性末端必须相同
②只要B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，就能产生单克隆抗体
③蛋白质工程的目标是通过基因重组，合成生物体本来没有的蛋白质
④太空育种获得的植株也存在与转基因植物一样的安全性问题
⑤生态农业使废物资源化，提高能量的传递效率，减少了环境污染
⑥单克隆抗体制备过程中，诱导细胞融合之前，需将抗原注射给实验小鼠，目的是获得 产生单一抗体的浆细胞
A. ③⑥ B. ①⑥ C. ③④ D. ②③⑥
29. 下列有关试管婴儿和设计试管婴儿的区别的说法，正确的是（ ）
前者不需要对胚胎进行基因诊断，后者需要对胚胎进行基因诊断
前者属于无性繁殖，后者属于有性生殖
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前者需要经过胚胎移植，后者不需要经过胚胎移植
前者需要体外受精，后者不需要体外受精
30. 目前科学家已成功培养出全球首例遗传性稳定且能自然繁殖的转基因四倍体鱼类种群，
这在脊椎动物中是首例。虽然四倍体鱼生长快、肉质好、抗病力强，但研究人员并不直接
把它投入生产，而是将它与二倍体鱼杂交的后代投入生产。你认为这样做最主要的意义是
A. 防止基因污染，保护物种多样性 B. 保护自身知识产权
C. 避免新物种破坏生态平衡 D. 充分利用杂种优势
二、非选择题（本题共4 小题，共40 分）
31.（除备注外，每空1 分，共9分） 已知一种含N有机物X（仅含有N、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组欲用下表所示成分配制的培养基筛选土壤中能高效降解X 的细菌（目标菌M）：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 蛋白胨 葡萄糖 尿素 琼脂 有机物X
1.4g 2.1g 0.2g 1.0g 10.0g 1.0g 15.0g 1.0g
回答下列问题：
(1)该培养基为_______（理化性质）培养基，培养基灭菌的一般方法为_______，目标菌 M
的同化类型是_______。
(2)根据培养基的成分判断，该培养基_______（填“能”或“不能”）分离出土壤中分解有
机物X的细菌，原因是____ ___（2分）。
(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常根据菌落的形状、大小，颜色等特征来初
步区分不同种的微生物，原因是____ ___。
(4)统计结果数一般用_______表示(“菌落数”或者“活菌数”)，一般选择数目在_______
范围的平板上计数。
32．（每空1分，共10分）埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。人感染埃博拉病毒后会引起出血热，治疗该病的有效方法是注射抗体。如图为制备埃博拉病毒的
单克隆抗体的过程，据图回答问题：
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（1）以埃博拉病毒 GP蛋白作为疫苗比较安全，其原因是GP蛋白自身没有感染能力，但保
留有 。
（2）已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的过程体现了细胞膜具有 的结构特点。
在体外融合时需要诱导，与诱导植物原生质体融合不同的是图中还可用 诱导融合。
（3）图中筛选1所采用的培养基属于 ，筛选 2含多次筛选，筛选所依据的基本原
理是 。两次筛选后的所需细胞群应具备的特点是 。
（4）在体外进行动物细胞培养时需要在合成培养基的基础上添加 等天然成分。同
时为了维持培养液的pH，需要提供的气体环境是 。
（5）获得的单克隆抗体最终可以从 中提取。“抗体—药物偶联物”中，抗体的作用
是 。
33. （除备注外每空1分，共10分） 近年来烟草叶绿体基因工程在提高光合效率、抗性和 品质等方面取得了研究进展。下图是将拟南芥果糖1，6-二磷酸醛缩酶基因（简称“醛缩酶基因”）转入烟草叶绿体基因组的部分流程示意图，请据图回答下列问题：
（1）图 1 中，利用 PCR 技术扩增拟南芥醛缩酶基因时，应选用的引物是__________。图 2 重组质粒中未标注出的必需元件还有_______，构建该重组质料用的限制性核酸内切酶有________。
（2）将拟南芥醛缩酶基因导入烟草叶绿体基因组时，一般将含有目的基因的质粒包裹在金粉上，通过轰击进入叶绿体中，这种方法称为________(“农杆菌转化法”或者“花粉管通
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道法”或者“基因枪法”)。叶绿体基因组中存在基因区和基因间隔区，应将目的基因导入叶绿体基因组中的基因间隔区，其原因是_____________________。
（3）检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是___________，该项技术用到的基因探针 的制作方法是：在________________________上用放射性同位素等做标记。
（4）若拟南芥醛缩酶基因在烟草叶绿体中成功表达，其活性是野生型烟草的1.4～1.9倍， 在高CO2浓度下可达2.2倍，说明拟南芥醛缩酶通过_____________来提高光合效率。
34．（除备注外，每空1分，共11分）由陈薇院士主导研制的缺陷型腺病毒重组新冠疫苗已
在多个国家开展三期临床实验。请据此回答相关问题：
（1）新冠病毒是RNA 病毒，陈薇院士团队提取新冠病毒的RNA后，可在 酶的作用
下，合成一段DNA分子。以新冠病毒的RNA为模板合成的DNA分子中含有合成新冠病毒表面
刺突蛋白（简称为“S蛋白”）基因，可用特定的 酶将该基因从DNA分子上切割下来。
（2）陈薇院士团队用切割“S蛋白”基因的酶切割缺陷型腺病毒（简称“腺病毒”）的DNA，
以便获得 ，然后可用 酶将“S 蛋白”基因和用同种酶切割过的腺病毒DNA
整合在一起形成一个重组DNA分子。将重组DNA分子与腺病毒蛋白质外壳重组形成重组病毒， 重组病毒感染人体细胞后可使人体细胞合成S蛋白，重组病毒感染人体细胞的过程相当于基
因工程的 的过程。
（3）科学家采用了缺陷型腺病毒作为合成新冠病毒表面刺突蛋白的基因的载体，你认为科
学家选它的理由有_ 等（写出2点）。
（4）疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止 进而提高疫苗的安全性。
（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么这一启示
是 。
（6）研究发现，如果将S 蛋白上的某个氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此
种技术的基本流程 。
高二下期第三次考试B 卷宏素班 第 12 页 共 12 页高二下期第三次考试生物B卷 宏素班答案
1.答案：D (高一会考期间假期作业A卷第1题）
A、酿制时“瓮”不能装满，要留有一定的空间，A错误；
B、“儒米或粳米”中所含物质不仅能为微生物提供碳源和氮源，也可能提供水和无机盐等，B错误；
C、在利用酵母菌发酵的“七日”中，先进行有氧呼吸产生水，后进行无氧呼吸产生酒精，C错误；
D、发酵过程中密封不严，空气进入，醋酸杆菌将酒精转化为醋酸使酒“酸败”，D正确。故选：D。
2.【答案】B
【分析】统计菌落数目的方法：（1） 显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量：②方法：用计数板计数;回缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法(活菌计数法）：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活茵。②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性：b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数-(C-V)×M，其中e代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL），M代表稀释倍数。
【详解】A、要分离出能有效降解丙草胺的细菌菌株，需要以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养，该培养甚中只有降解丙草胶的细菌菌株才能生长，其他微生物的生长会受到抑制，A正确；
B、细菌中性偏碱，将培养基 pH 调至中性或微碱性，有利于丙草胺降解菌的生长繁殖，B错误；
C、5号试管的稀释倍数是106，则每克士壤中的菌株数为 (168+175+167)÷3÷0.1×106=1.7×109个，C正确；
D、图中利用的是稀释涂布平板法进行计数，还可用显微镜直接计数法，由于死亡的微生物往往计算在内，因此其计数结果往往比实际值偏大，D正确。故选B。
3.【答案】C
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。【详解】A、灭菌可杀死所有微生物，包括芽孢等休眠体，玻璃器皿、金属用具和培养基可选择高压蒸汽灭菌，A正确；
B、由图观察可知，③过程是利用选择培养基进行选择培养，使用的培养基需以甲醇作为唯一的碳源，步骤④是将筛选出的菌体进一步纯化，以筛选能利用工业废甲醇作为碳源的酵母，因此使用的培养基也需以甲醇作为唯一的碳源，B正确；
C、菌落计数时应计数菌落在30-300的平板并取平均值，C错误；
D、5个中格中的细胞数为25个，则平均每个小方格内的细胞数为25÷（5×16），计数室为400个小方格，因此发酵液中每毫升有25÷（5×16）×400×10000×100=1.25×108个细胞，D正确。
故选C。
4.【答案】A
【分析】1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、若发酵初期不通入气体，酵母菌仍能进行无氧呼吸产生二氧化碳，所以溶液中有气泡产生，A错误；
B、酒精是酵母菌无氧呼吸产生的，若中期可以闻到酒香，说明进行了酒精发酵，B正确；
C、果酒制作需要缺氧环境，且温度为18～25℃（18-30℃），而果醋制作需要氧气，且温度为30℃～35℃，所以后期接种醋酸菌，需通气并适当升高温度，C正确；
D、果酒制作中，酵母菌进行细胞呼吸产生的二氧化碳溶于水形成碳酸，使pH逐渐下降，进行果醋发酵后，产生的醋酸也使pH下降，所以图乙中能正确表示pH变化的曲线是②，D正确。故选A。
5.【答案】B
【分析】1、培养基配制和微生物接种都需要在无菌环境中进行，且培养基需要灭菌。
2、试管口，接种环可以在酒精灯火焰灼烧。
3、培养皿可用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌，不能直接放在火焰上灼烧。
【详解】①火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿，这是因为酒精灯火焰旁具有无菌区域，能够防止杂菌污染，①正确；
②菌种试管口在火焰上灼烧，这样能够防止杂菌污染，②正确；
③接种前灼烧接种环，能够杀死接种环上的杂菌，③正确；
④接种前培养皿不能在火焰上灼烧，灼烧会导致培养基融化等，正确操作是接种时在酒精灯火焰旁进行操作④错误；
⑤靠近火焰接种，这样能够防止杂菌污染，⑤正确。综上所述，①②③⑤正确。故选B。
【答案】D
【解答】A.凡是涉及到离体细胞培育成个体的都用到了植物组织培养，由组织培养成愈伤组织也需要植物组织培养，A正确；
B.根尖细胞形成愈伤组织的过程中是细胞脱分化的过程，可能会有基因突变和染色体变异，基因重组是减数分裂过程中发生的，B正确；
C.不能产生精子或卵细胞的夫妇无法利用生殖细胞完成体外受精获得试管婴儿，C正确；
D.动物细胞融合与植物体细胞杂交相比基本原理相同，融合方法也类似，动物细胞融合技术中有灭活的病毒进行诱导，而植物没有此方法，但目前动物细胞融合还没有培育成杂交个体，D错误。故选D。
7.【答案】D
【解答】解：A、外植体消毒可先用酒精处理30s，无菌水清洗洗2～3次后，再用次氯酸钠溶液处理30min，立即用无菌水清洗2﹣3次，A正确；
B、过程①表示脱分化，使外植体细胞失去特有的结构和功能而转变成未分化细胞，B正确；
C、过程②表示再分化，实质是基因的选择性表达，过程①～④表示植物组织培养体现了植物细胞的全能性C正确；
D、过程①和②均需在培养基中添加细胞分裂素和生长素，过程①是避光，过程②必须在光照下进行，D错误。
8.【答案】D
【解答】解：A、①是去除植物细胞壁获得原生质体的过程，由于植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此根据酶的专一性，该过程需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，A错误；
B、融合的细胞有三种：AAAA、BBBB、AABB，B错误；
C、过程④和⑤分别是脱分化和再分化，C错误；
D、植物体细胞杂交，获得的植物d，因为具有两个亲本的遗传信息，有同源染色体所以可育，D正确。故选：D。
9.【答案】B
【分析】本题综合考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记相关知识点，对各叙述作出准确的判断，选出正确的答案；本题有一定难度，需要考生准确判断每句叙述，才能找出正确答案这需要考生牢固地掌握基础知识。
【解答】①依据植物细胞的全能性，可利用花药进行单倍体育种，①正确；
②利用利用植物细胞进行微型繁殖是依据细胞的全能性，②错误；
③依据基因突变原理，可利用射线处理愈伤组织获得作物新品种，③正确；
④依据膜的通透性，可利用海藻酸钠作材料包裹胚状体获得人工种子，④错误；
⑤制备单抗时先利用特定的抗原蛋白注射到小鼠体内，再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞，⑤错误；
⑥利用单克隆抗体的将药物定向带到癌细胞所在位置作用，不是用来直接杀死癌细胞，⑥错误；
⑦筛选出的杂交瘤细胞体外培养时需添加抗生素防止细菌污染，⑦错误。综上所述，B正确，ACD错误。
10.【答案】A
【解析】A. 动物细胞需要在特定的培养液中培养，用胰蛋白酶可以分离得到单细胞，A错误；
B. 图示有转基因技术、动物细胞的培养、核移植、早期胚胎培养及胚胎移植等技术，B正确；
C. 未受精的卵母细胞较大，营养物质丰富，含有促进细胞核全能性表达的物质，C正确；
D. 为获得同卵双胎或多胎，可通过胚胎分割获得多个胚胎，一般分割囊胚期的内细胞团，且需均等分割，D正确。
11.【答案】D
【分析】本题考查胚胎干细胞的应用， 意在考查学生的识记与理解能力、分析题图获取信息的能力。
【解答】A.图中ES细胞是由④内细胞团分离来的，此外还可以从原始性腺中分离，A错误；
B.ES细胞在饲养层细胞上能够维持不分化的状态，B错误；
C.V的结果是形成不同种类的细胞，而不能形成不同的组织器官，不能体现ES细胞具有发育的全能性，C错误；
D.图中所涉及的现代生物技术有体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养等技术，D正确。
12.【答案】C
【分析】本题考查动物细胞核移植、胚胎培养等知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
【解答】A.细胞核移植过程中，体细胞的染色体数目不变，A正确；
B.由于受体细胞质中有少量的遗传物质，故该技术并未对细胞核供体猴进行完全的复制，B正确；
C.维生素、激素都不属于能源物质，C错误；
D.由于体细胞的全能性小于胚胎细胞，用体细胞核移植的技术难度大于胚胎细胞核移植，D正确。
13.【答案】A
【解答】解：A、胚胎分割移植由于不改变细胞内的遗传物质，所以可产生基因型完全相同的新个体，A正确；
B、胚胎分割次数越多，得到的胚胎发育成功率越低，B错误；
C、桑葚胚和囊胚是进行胚胎分割的最佳时期，C错误；
D、对囊胚进行分割时，要确保内细胞团均等分割，不含内细胞团细胞的胚胎无法正常发育，D错误。
14.【答案】C
【解答】解：A、将北白犀的体细胞与去核卵母细胞融合，利用胚胎移植等技术培育出新个体，该过程属于克隆，方案可行，A正确；
B、将北白犀的卵细胞与保存的精细胞体外受精，培养到桑椹胚（桑葚胚）或囊胚阶段后，通过胚胎分割技术培育更多个体，方案可行，B正确；
C、动物细胞全能性受限制，利用现有技术无法将动物细胞直接培育为新个体，C错误；
D、将北白犀的体细胞诱导成多能干细胞，进而诱导出生殖细胞，由生殖细胞再繁衍培育新个体属于干细胞技术的应用，该方案可行，D正确。故选：C。
15.【答案】D
【解答】解：A、由于蛋白质可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA时加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解，而让DNA析出，A正确；
B、由于DNA在2mol/LNaCl溶液中溶解度较大，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，所以将提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺试剂在沸水条件进行鉴定，B正确；
C、DNA带负电，电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理，C正确；
D、因为质粒的本质是环状的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ处理后电泳只有一条条带，可能是该质粒上有一个切割位点，也可能没有切割位点，D错误。故选：D。
16.【答案】C
【分析】本题考查基因工程的工具和操作步骤等方面的知识，意在考查学生对知识的理解和记忆能力。
【解答】A.基因工程中常用的工具酶有DNA连接酶、限制性核酸内切酶，运载体不属于工具酶，A错误；
B.一种限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列，即具有特异性，B错误；
C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快，并且遗传物质少，C正确；
D.目的基因进入受体细胞需要检测和鉴定，不一定能成功实现表达，D错误。
17.【答案】C
【解析】解：A、由于猪属于哺乳动物，哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核及细胞器，没有DNA，故用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量不相近，A错误；
B、在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，二苯胺只能鉴定有无DNA，不能鉴定DNA的纯度，B错误；
C、PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶浓度、DNA分子大小等有关，C正确；
D、PCR扩增4次即DNA复制了4次，共形成16个DNA，根据半保留复制，有2个子代DNA含有其中一种引物，14个子代DNA同时含有两种引物，因此同时含有两种引物的DNA占，D错误。故选：C。
1、DNA粗提取和鉴定的实验原理：
（1）DNA的溶解性：①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的；②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精．利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响．大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
（3）DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
2、PCR原理：在高温作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
本题考查DNA的粗提取和鉴定，以及PCR技术，意在考查学生识记所学知识要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力，同时获取题干信息准确答题。
18.【答案】C
【分析】本题考查基因工程相关知识，意在考查基础知识的理解和运用能力。
【解答】A.图中过程①要用限制酶剪切产生目的基因，③中要用限制性核酸内切酶剪切质粒，A正确；
B.过程②为目的基因的PCR扩增，需用热稳定性DNA聚合酶，②操作的原理是DNA双链复制，B正确；
C.基因表达载体要有启动子、终止子及标记基因等，并不是目的基因必须有这些，C错误；
D.过程④为目的基因的导入，最后必须对干扰素进行功能活性鉴定，D正确。故选C。
19.【答案】D
【分析】解答本题的关键是识记基因工程的操作工具及具体的操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合题干信息准确答题。
【解答】A、根据题意分析图形可知，在限制性核酸内切酶I的识别序列内部含有限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点，若用限制性核酸内切酶Ⅱ切割获得目的基因时，则目的基因的前后各有一个该限制酶的识别序列和切割位点，因此会有4个磷酸二酯键被水解，A正确；
B、若用限制酶Ⅱ切割质粒，两个标记基因都会被破坏，若用限制酶I切割目的基因只能切开一端，无法获取目的基因，因此质粒用限制性核酸内切酶Ⅰ切割，目的基因用限制性核酸内切酶Ⅱ切割，B正确；
C、限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割后获得的DNA片段可以连接形成重组DNA，C正确；
D、质粒中的标记基因便于筛选出含有目的基因的受体细胞，D错误。故选D。
20.【答案】B
【分析】本题知识点简单，考查蛋白质工程的相关知识，要求考生识记蛋白质的工程的概念、基本原理、途径及操作步骤，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查。
1、蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。
2、蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径。
【解答】①从预期蛋白质的功能出发去推测氨基酸排列顺序，属于蛋白质工程的基本途径，①正确；
②对已知结构的蛋白质进行少数氨基酸的替换，属于蛋白质工程中的分子设计，②正确；
③设计全新的蛋白质属于蛋白质工程，③正确；
④由于蛋白质分子通常较大，直接改变蛋白质的空间结构不易操作，因此蛋白质工程是在基因的水平上实现的，④错误。综上所述，ACD错误，B正确。故选B。
21.【答案】B
【解答】解：A、对蛋白质分子的设计和改造是通过蛋白质工程来实现的，故对T4溶菌酶的改造属于蛋白质工程的范畴，A正确；
B、蛋白质工程直接改造的对象为基因，并不是mRNA，B错误；
C、改造前组成T4溶菌酶的氨基酸中就含有半胱氨酸，改造后组成T4溶菌酶的氨基酸中也可能仍含有异亮氨酸，因此参与其合成的tRNA种类可能不变，C正确；
D、改造后的T4溶菌酶替换了一个氨基酸，氨基酸总数不变，且发生替换的两个氨基酸R基上都不含羧基或氨基，所以肽键数不变，二硫键使T4溶菌酶的耐热性提高；DNA分子中氢键越多，热稳定性越强，二者作用类似D正确。
22.【答案】B
【分析】本题考查基因工程和蛋白质工程的相关知识，意在考查学生的识记与理解能力。
【解答】A.启动子和终止子分别驱动和终止目的基因的转录过程，A错误；
B.没有与目的基因重组的普通质粒也可以进入受体细胞，所以需要检测，B正确；
C.若直接将目的基因片段导入受体细胞，则很容易被分解失效，只有整合后随运载体一起友好的寄居在受体细胞，所以使用质粒运载体是为了将目的基因导入受体细胞，避免目的基因被分解，但不是绝对的，C错误；
D.由于密码子具有简并性，因此以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列不一定相同，D错误。故选B。
23.【答案】C
【解答】解：限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，故大肠杆菌中的EcoRⅠ酶能够专一性识别CAATTC序列，并在C与A之间将这段序列剪开，该酶属于限制性核酸内切酶。故选：C。
24.【答案】A
【分析】 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。
【解答】A.用PCR技术提取目的基因，需要已知基因的部分起始核苷酸序列，以便制备引物，而并非所有的目的基因都已知其核苷酸序列，A错误；
B.基因表达载体中的启动子能驱动基因，促进基因表达，因此该结构对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的，B正确；
C.DNA探针技术又称分子杂交技术，是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的新技术，将目的基因的一段已知序列的多聚核苷酸用同位素或荧光染料等标记制成特异性探针，根据探针与所测分子的杂交程度检测细胞中是否存在目的基因及其转录产物，C正确；
D.用同种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA，可产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接就可以形成重组DNA分子，D正确。故选A。
25.【答案】A
【分析】本题属于简单题，属于考纲中识记层次的要求，考查了基因工程的工具和操作步骤等方面的知识，要求考生能区分工具和工具酶，并且理解细菌作为受体细胞的优点等知识。
1、基因工程：是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【解答】 ①一种限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列，其具有特异性，所以限制酶的切口不都是GAATTC碱基序列，①错误；
②基因工程又称转基因技术，是在DNA上进行的分子水平的设计施工，②正确；
③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，运载体不属于工具酶，③错误；
④目的基因进入受体细胞需要检测和鉴定，不一定能成功实现表达，④错误；
⑤一种限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列，即具有特异性，⑤错误；
⑥基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品，因而可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物身上，⑥正确；
⑦基因工程常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等，⑦错误。
综上，A正确，BCD错误。故选A。
26.【答案】B
【思路点拨】思路点拨图解：图示过程为体细胞克隆过程，取乙牛体细胞，对处于减数第二次分裂中期的卵母细胞去核，然后进行细胞核移植；融合后的细胞激活后培养到早期胚胎，再进行胚胎移植，最终得到克隆牛。
【详解】A 、后代丁的细胞核的遗传物质来自甲，细胞质的遗传物质来自于乙牛，则丁的遗传性状由甲和乙的遗传物质共同决定， A 错误；
B 、动物细胞培养中需要提供 95% 空气（保证细胞的有氧呼吸）和 5%CO 2 （维持培养液的 pH ）的混合气体， B 正确； C 、过程 ② 常使用显微操作去核法对卵母细胞进行处理， C 错误；
D 、过程 ③ 将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑椹胚后移植， D 错误。故选 B 。
27.【答案】B
【分析】本题考查转基因的安全性与伦理性问题，意在考查学生对所学知识的运用能力。
【解答】A.要求对转基因生物产品及其加工品加贴标注，A正确；
B.中国政府的态度是禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆，B错误；
C.实施体外受精—胚胎移植及其衍生技术必须获得卫生部的批准证书，C正确；
D.任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器，D正确。故选B。
28.【答案】B
【分析】本题综合考查生物工程相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。
【解答】①在基因工程操作中为了获得重组质粒，一般用相同的限制性内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，以露出相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接形成重组质粒；也可以用不同的限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，但露出的粘性末端相同，再用DNA连接酶连接，①正确；
②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞之后，还要筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞，②错误；
③蛋白质工程的目标是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，③错误；
④太空育种是将种子放到太空微重力、高真空、宇宙射线辐射等环境下，诱使种子发生变异，这种变异和自然界植物的自然变异一样，只是突变频率有所改变，因此不存在安全性问题，④错误；
⑤生态农业使废物资源化，提高了能量的利用效率，减少了环境污染，不能提高能量的传递效率，⑤错误；
⑥诱导细胞融合之前，需将抗原反复注射给实验小鼠，目的是获得产生单一抗体的浆细胞，⑥正确。
综上所述，ACD错误，B正确。故选B。
29.【答案】A
【解析】 试管婴儿不需要对胚胎进行基因诊断，而设计试管婴儿需要对胚胎进行基因诊断，A正确；两者都属于有性生殖，B错误；两者都需要进行胚胎移植，C错误；两者都需要进行体外受精，D错误。
30.【答案】A
【分析】本题考查转基因生物的安全性的相关知识，意在考查理解能力。
【解答】四倍体与二倍体杂交后得到的是三倍体，三倍体减数分裂时染色体联会紊乱，不能形成正常配子，高度不育，这样做可以防止基因污染、保护环境中物种的多样性、维护生态平衡。综上所述，BCD错误，A正确。
31.(1) 固体 湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法） 异养型
(2) 不能 培养基含蛋白胨、尿素等，有机物X不是唯一氮源
(3) 在一定培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征
(4) 菌落数 30 ～300
【解析】(1) 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质一培养基，用以培养、分离鉴定、保存微生物或积累其代谢物，其中，不含凝固剂（如琼脂）、呈液体状态的培养基为液体培养基，加入琼脂后，呈固体状态的培养基为固体培养基;培养基一般采用湿热灭菌法，即利用沸水或高压蒸汽进行灭菌的方法；同化类型有两种，自养和异养，目标菌M靠分解有机物X生活则为异养类型。
(2) 分离土中有机物X的细菌的原理是在以有机物X为唯一氮源的培养基上，只有能分解有机物X的细菌才能以有机物X为氮源生长繁殖，不能分解有机物X的细菌因缺乏氮源而无法生长繁殖，该培养基含有尿素，蛋白胨可以为其他微生物的生存提供氮源，所以不能分离出分解有机物X的细菌
(3) 研究人员根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步判断不同种的微生物，原因是不同的微生物形成的菌落有不同的特征，是鉴定菌种的重要标志：各种微生物在一定条件下形成的菌落特征，如大小、形状、边缘、颜色等，具有一定的稳定性
(4) 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌：为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数。
32.【答案】（1）抗原性
（2）一定的流动性 灭活的病毒
（3）选择培养基 抗原与抗体的反应具有特异性 既能无限增殖，又能产生专一抗体
（4）血清 95%空气和5%CO2
（5）小鼠腹水或培养液 靶向作用
【解答】解：（1）GP蛋白没有感染能力，能被宿主细胞的免疫细胞强烈识别，引发体液免疫，产生抗体，GP蛋白保留有抗原性。
（2）免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时，细胞膜相互融合，体现了细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。动物细胞融合时还可以用灭活的病毒诱导融合。
（3）筛选1是筛选出杂交瘤细胞，需要用选择培养基进行选择，骨髓瘤细胞两两融合的细胞不能生存。筛选2需要克隆化培养、抗体检测，依据的原理是抗原和抗体特异性结合。两次筛选出的细胞既能无限增殖又能产生特异性抗体。
（4）动物细胞培养时，在合成培养基中还需要添加血清，以供应动物细胞生长的某些物质。培养时的气体环境是95%空气和5%CO2，CO2能维持培养液的pH。
（5）获取的产生特异性抗体的杂交瘤细胞可以进行细胞培养，也可以注射到小鼠腹腔，最后从小鼠腹水或培养液中提取单克隆抗体。“抗体—药物偶联物”中，抗体的作用是靶向作用，即抗体和肿瘤抗原特异性结合，将药物运输到肿瘤细胞。
33.【答案】
（1）引物甲、引物丙；复制原点；HindⅢ和BclⅠ
（2）基因枪法；避免对叶绿体自身的基因组的表达造成影响
（3）DNA分子杂交技术（或“PCR技术”）；含有目的基因的DNA单链片段（或“与目的基因互补的RNA单链片段”）
（4）促进暗反应中CO2的固定（利用）
【分析】本题考查基因工程的知识点，熟知基因工程操作过程和正确获取信息是解题的关键，题目难度适中。
【解答】（1）由于DNA是由两条反向平行的多核苷酸链组成，而复制时的模板链起作用的方向只有一种，图1中，利用PCR技术扩增拟南芥醛缩酶基因时，应选用的引物是引物甲、引物丙。图2重组质粒中未标注出的必需元件还有复制原点，构建该重组质料用的限制性核酸内切酶有HindⅢ和BclⅠ。
（2）将拟南芥醛缩酶基因导入烟草叶绿体基因组时，一般将含有目的基因的质粒包裹在金粉上，通过轰击进入叶绿体中，这种方法称为基因枪法。叶绿体基因组中存在基因区和基因间隔区，应将目的基因导入叶绿体基因组中的基因间隔区，其原因是避免对叶绿体自身的基因组的表达造成影响。
（3）检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是DNA分子杂交技术，该项技术用到的基因探针的制作方法是：在含有目的基因的DNA单链片段（或“与目的基因互补的RNA单链片段”）上用放射性同位素等做标记。
（4）若拟南芥醛缩酶基因在烟草叶绿体中成功表达，其活性是野生型烟草的1.4～1.9倍，在高CO2浓度下可达2.2倍，说明拟南芥醛缩酶通过促进暗反应中CO2的固定（利用）来提高光合效率。
34.【答案】（1）逆转录 限制性内切（限制）
（2）相同的黏性末端 DNA连接 将目的基因导入受体细胞
（3）能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害
（4）病毒在人体内进行增殖
（5）DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物体
（6）从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列
【解答】解：（1）新冠病毒是RNA病毒。提取新冠病毒的RNA后，可在逆转录酶的催化作用下合成一段DNA分子。限制性内切酶能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割DNA分子，故可用限制性内切酶将棘突蛋白基因从DNA分子上切割下来。
（2）用相同的限制酶切割S蛋白基因和缺陷型腺病毒的DNA能形成相同的黏性末端，这样就可以用DNA连接酶将S蛋白基因和用同种酶切割过的腺病毒DNA整合在一起形成一个重组DNA分子。重组病毒感染人体细胞的过程相当于基因工程中将目的基因导入受体细胞的过程。
（3）基因工程的运载体应具有能自主复制（这样可使目的基因在受体细胞中复制）、有多个限制酶切位点（便于与目的基因的结合）、有标记基因（便于检测目的基因是否进去受体细胞）、对宿主细胞无害等特点。缺陷型腺病毒作为合成新冠病毒表面棘突蛋白的基因的载体具有这样的特点。
（4）复制缺陷型腺病毒不能增殖，在疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止病毒在人体内进行增殖，进而提高疫苗的安全性。
（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为基因工程理论的建立提供了启示，这一启示不仅证明了DNA是遗传物质，还证明了DNA可以从一种生物转移到另一种生物个体。
（6）将S蛋白上的某个氨基酸改变为半胱氨酸，属于蛋白质工程的范畴。相应的蛋白质工程的过程为从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
