2022-2023学年甘肃省甘南州卓尼县高二（下）7月检测生物试卷（有解析）
文档属性
| 名称 | 2022-2023学年甘肃省甘南州卓尼县高二（下）7月检测生物试卷（有解析） |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 263.4KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2023-08-02 18:57:49 | ||
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文档简介
2022-2023学年甘肃省甘南州卓尼县高二（下）7月检测生物试卷
第I卷（选择题）
一、单选题（本大题共20小题，共40.0分）
1. 下列关于果酒、果醋、泡菜、腐乳制作的说法，正确的是（ ）
A. 腐乳制作的过程中，应用的主要微生物是厌氧菌中的乳酸菌
B. 葡萄酒制作完成后，打开瓶盖盖上一层纱布，适当降低温度可进行葡萄醋的发酵
C. 一个泡菜坛里的所有乳酸菌不构成一个种群
D. 传统发酵过程中利用的是天然的微生物菌种，产品营养价值和安全性更高
2. 为心梗患者注射大剂量的t-PA（一种能高效降解血栓的单链糖蛋白，主要由血管内皮细胞合成、分泌并释放进血液）会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血等副作用，据此分析错误的是（ ）
A. 若利用大肠杆菌来生产t-PA，需要对其合成的t-PA进行后期改造
B. 改造t-PA的技术属于蛋白质工程
C. 欲将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，应直接对蛋白质（t-PA）进行改造
D. 可利用抗原-抗体杂交技术来检测转基因的大肠杆菌是否分泌了t-PA
3. 如图是某二倍体植物花药育种过程的示意图，下列叙述正确的是（ ）
A. 秋水仙素可以抑制着丝粒分裂从而诱导染色体数目加倍
B. 过程②都需提供光照条件诱导愈伤组织合成叶绿素
C. 过程③的培养基中需添加较高浓度的细胞分裂素以利于根的分化
D. 过程④培育的试管苗为纯合子，与亲本基因型可能不同
4. 在动物细胞培养中有部分细胞可以在培养条件下无限制地传代下去，这种培养方式称之为（ ）
A. 原代培养 B. 传代培养 C. 细胞团 D. 癌细胞
5. 植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术或方法与原理不完全相符的是（ ）
A. 植物组织培养获得幼苗和单克隆抗体技术制备抗体-细胞的全能性
B. 酶解法处理植物细胞壁获得原生质体-酶的专一性
C. 原生质体融合和动物细胞融合获得杂交细胞-细胞膜的流动性
D. 紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养获得相应产品-细胞增殖
6. 下列关于组成细胞的物质及细胞结构的描述，正确的是（ ）
A. 酶、抗体、受体的特异性都与氨基酸的排列顺序有关
B. 利用胞吐作用运输的物质都是大分子物质
C. 糖蛋白、抗体、限制酶都是具有识别作用的物质
D. 核糖体都能参与多肽链的合成，其形成都与核仁有关
7. 灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ）
A. 动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B. 微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C. 为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D. 紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果
8. 中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。下列说法错误的是（ ）
A. 分解蔗糖菌株的筛选需将蔗糖作为唯一碳源经多次传代培养以获得目标菌株
B. 培养菌株过程中可采用平板划线法统计活菌数量
C. 嗜盐单胞菌可以采用不需要灭菌的发酵系统来培育
D. 菌株H在培育过程中需要向发酵罐中通入空气，说明该菌的代谢类型为需氧型
9. 基因治疗是人类疾病治疗的一种崭新手段，下列有关叙述正确的是（ ）
A. 体内基因治疗和体外基因治疗效果一样可靠
B. 基因治疗是把缺陷基因诱变成正常基因
C. 基因治疗可以治愈所有的单基因遗传病
D. 基因治疗的靶细胞若是体细胞，则获得的性状一般不会遗传给下一代
10. 下列关于植物细胞全能性的叙述，不正确的是（ ）
A. 同一个体不同细胞的遗传物质相同，全能性大小也相同
B. 具有某种生物全部遗传信息的细胞都具有全能性的特点
C. 生物体内的细胞因基因的选择性表达不能表现出全能性
D. 植物组织培养的全过程可证明分化的植物细胞具有全能
11. 下列有关愈伤组织细胞的叙述，错误的（ ）
A. 愈伤组织一定可以再分化出根和芽 B. 愈伤组织的代谢类型是异养需氧型
C. 愈伤组织易受外因影响而产生突变 D. 愈伤组织是植物细胞脱分化形成的
12. 利用微型繁殖技术快速培育名贵花卉，不选取的培养材料是（ ）
A. 茎尖 B. 花瓣 C. 花粉 D. 叶
13. 下列关于植物组织培养的叙述，错误的是（ ）
A. 用于植物组织培养的外植体就是指离体培养的植物器官或组织
B. 植物组织培养时，常常需要添加细胞分裂素和赤霉素两种植物激素
C. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养物质和调节渗透压
D. 用茎尖进行组织培养获得脱毒苗时，作物不会或者极少感染病毒
14. 动物细胞培养中胰蛋白酶所起的作用是（ ）
A. 消化细胞膜易于融合 B. 分解培养基的蛋白质供给细胞营养
C. 使组织分散成单个细胞 D. 用于细胞内物质的分解
15. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如图技术路线。据图分析，下列叙述不正确的是（ ）
A. 三亲婴儿需要在体外将受精卵培育成胚胎，再移植到子宫内
B. 三亲婴儿的染色体来自母亲和父亲提供的细胞核
C. 三亲婴儿的染色体全部来自母亲提供的细胞核
D. 三亲婴儿的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术
16. 杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，深受广大消费者的欢迎。科研工作者为满足市场需求，通过胚胎工程相关技术快速、大量繁殖杜泊羊。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 对受体杜泊羊进行超数排卵处理可获得较多的卵母细胞
B. 采集到的卵母细胞需在获能培养液中进行获能培养
C. 人工授精后，以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志
D. 收集到的胚胎进行胚胎分割后获得的二分胚的基因型不同
17. 我国首例克隆猫“大蒜”于2019年7月21日经代孕猫自然分娩顺利出生，它是从本体猫“大蒜”的大腿部采集了一块皮下组织，提取体细胞的细胞核与去核的卵母细胞融合，构建重组胚胎，激活后的胚胎再植入代孕猫的子宫内，直至分娩。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 克隆猫与提供去核的卵母细胞的母猫的遗传物质基本相同
B. 克隆猫的诞生属于无性生殖
C. 克隆猫与代孕的遗传物质基本完全相同
D. 克隆猫“大蒜”的培育说明动物细胞有全能性，克隆猫与供体猫的性状完全相同
18. 如图表示三种限制酶BamHⅠ、BglⅡ和MboⅠ的识别序列和切割位点，下列叙述不正确的是（ ）
A. 三种限制酶作用的化学键相同
B. 三种限制酶切割DNA分子后能形成相同的黏性末端
C. 能被BamHⅠ或BglⅡ切割的位点也能被MboⅠ切割
D. 能被MboⅠ切割的位点一定能被BamHⅠ或BglⅡ切割
19. 下列有关细胞增殖、分化和癌变的说法，正确的是（ ）
A. 真核细胞的分裂方式包括有丝分裂、无丝分裂和减数分裂，原核细胞的分裂方式为无丝分裂
B. 在不同细胞分化过程中，基因表达产生的蛋白质都是不同的
C. 神经干细胞与其分化产生的神经胶质细胞的mRNA存在差异
D. 细胞的癌变是细胞异常分化的表现，根本原因是原癌基因的选择性表达
20. 臭鳜（guì）鱼是利用新鲜鳜鱼为原料，配以食盐、香辛料等在25℃-28℃条件下由乳杆菌等多种微生物共同发酵制得。相关叙述错误的是（ ）
A. 新鲜鳜鱼应先宰杀冲洗干净，再用高度白酒进行灭菌
B. 食盐、香辛料等不仅能调味，而且具有防腐功能
C. 腌制时，要将鱼体整齐叠放并进行压实处理
D. 发酵环境控制不严，可能会存在食品安全隐患
二、多选题（本大题共5小题，共15.0分）
21. 精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 用紫外线照射目的是提高野生型谷氨酸棒状杆菌突变率
B. 接种操作需用涂布器把菌液均匀涂到甲的表面
C. 甲为缺少精氨酸的选择性培养基
D. 目的菌M扩大培养后可用于工业化生产鸟氨酸
22. 缺乏维生素A容易导致夜盲症或营养不良，甚至能够威胁到生命。而β胡萝卜素可以在人体内转化成维生素A。科学家尝试通过转基因技术生产富含β胡萝卜素的大米。八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtⅠ表示）参与β胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。根据以上信息分析，下列叙述错误的是（ ）
A. pmi基因作为标记基因可以鉴别受体细胞中是否含有目的基因
B. psy基因和crtⅠ基因的序列中可以含有用到的限制酶的识别序列
C. 可通过花粉管通道法将目的基因导入水稻的受体细胞
D. PCR技术可检测目的基因是否表达出相应的蛋白质
23. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列有关说法正确的是（ ）
A. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵
B. 发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
C. 在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径
D. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
24. 基因表达载体的构建是基因工程的核心。图甲为限制酶EcoRI的识别序列，图乙表示目的基因及限制酶切点，A、B、C、D为四种引物。图丙表示目的基因上的DNA片段，图丁表示质粒。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 选引物A、D进行该目的基因的扩增
B. 不能同时用PstⅠ和HindⅢ切割目的基因和质粒
C. 限制酶的作用部位是图丙中的②
D. 从图丁中可以看出，质粒是一种环状的DNA分子
25. 塑料（聚乙烯）在自然界中很难降，解俗称“白色污染”，北京航空航天大学杨军教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有黄粉虫幼虫和成虫爬出。带着这些疑问，杨军教授对黄粉虫幼虫消化道的微生物进行分离，在幼虫肠道中成功分离出塑料降解菌——微小杆菌YT2。图是从黄粉虫肠道中分离、纯化目的微生物的过程，下列有关叙述错误的是（ ）
A. 富集培养基中含有酵母膏、蛋白胨、琼脂等，蛋白胨能提供所需的碳源、氮源和维生素
B. 实验室分离塑料降解菌时应在培养基中加入葡萄糖作为碳源
C. 将转接至固体斜面培养基上的不同菌落置于4℃的冰箱长期保存
D. 若杀死微小杆菌YT2，黄粉虫无法消化塑料，推测该菌和黄粉虫幼虫的种间关系是互利共生
第II卷（非选择题）
三、实验题（本大题共1小题，共9.0分）
26. 我国有几千年的酿醋历史，中国四大名醋之一的山西老陈醋是以高粱为原料通过微生物发酵而成，在山西省最为盛名的某醋厂园区墙壁上有一首诗“高粱原料酿造成，酵母杆菌一缸生，先酒后醋工艺巧，阳蒸冰冻去水明”。请结合所学知识，回答下列问题：
（1）实际生产中以高粱为原料的酿酒大缸中接入菌种一段时间后，在发酵液表面会出现一定的气泡和泡沫，这些气泡主要由 ______ （微生物）产生，该发酵过程中酒缸并非处于无菌环境中，但发酵液却少有杂菌生长，原因是 ______ 。
（2）“先酒后醋工艺巧”，工作人员是通过 ______ （至少写两点）措施实现产酒到产醋的转变。
（3）研究人员为了筛选出产酸能力强的醋酸菌，配制了含CaCO3的固体培养基（醋酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈），从功能角度来看，该培养基属于 ______ 培养基。用 ______ 法将发酵液中的微生物接种到培养基表面，培养一段时间后，将 ______ 的菌落挑出，单独培养检测即可得到产酸能力强的醋酸菌。
四、探究题（本大题共4小题，共36.0分）
27. 表皮生长因子（ECF）是一种由53个氨基酸组成的耐热单链小分子多肽。ECF可刺激多种细胞的增殖，在角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合方面有很好的疗效。回答下列问题：
（1）利用大肠杆菌来合成表皮生长因子（ECF）时，先用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种 ______ 的生理状态，然后再将含目的基因的表达载体导入其中进行培养。
（2）在培养过程用 ______ 法进行菌种纯化、分离并计数。用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，其目的是 ______ （答出一点即可）；与人体自身合成的ECF蛋白相比，大肠杆菌表达的ECF蛋白往往生物活性较低，可能的原因是 ______ 。
（3）动物的唾液腺能表达高活性的ECF蛋白，这意味着唾液腺是表达ECF，蛋白的一个理想组织。科学家尝试利用转基因克隆猪作为生物反应器，在其唾液腺高效合成ECF，构建重组质粒时，需要将ECF基因与特定的启动子重组在一起，目的是 ______ 。与传统的乳腺生物反应器相比，唾液腺生物反应器的优点有： ______ （答出两点即可）。
28. 胚胎干细胞（ES细胞）具有持续分裂和分化成各种组织细胞的能力。科学家利用已分化的细胞培养出的诱导性多功能干细胞（IPS），也具备胚胎干细胞的特点，诱导产生IPS细胞的前两个阶段为：①分离和培养宿主细胞；②将相关转录因子基因导入宿主细胞（如图所示）。请回答下列问题：
（1）培养宿主细胞应在含有 ______ 的混合气体的恒温培养箱中进行，所用的培养基需加入的天然成分为 ______ ，为及时清除代谢产物需 ______ 。
（2）据图可知，将基因导入宿主细胞所用的载体为 ______ 。
（3）IPS细胞或ES细胞在医学上的应用是培育人造组织器官，其优点为 ______ 。
（4）ES细胞往往取自囊胚的内细胞团或早期性腺细胞，目前ES细胞应用存在部分争议相比IPS细胞，请说出你认为的争议点是 ______ 。
29. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。请据图分析回答下列问题：
（1）动物细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是 ______ 。
（2）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的 ______ 。为了防止有害代谢物的积累，可采用 ______ 的方法，以便清除代谢物。
（3）每隔2周用cTnI作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是 ______ ，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合。
（4）甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是 ______ ，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得 ______ 。
（5）上述单克隆抗体生产过程应用到了动物细胞融合和 ______ 生物技术。
30. 癌症患者进行化疗后，体内白细胞数量会大幅降低，可注射GM-CSF（一种细胞因子）以增加白细胞数量。某科研团队通过基因工程技术大量生产GM-CSF，满足了临床需求。相关限制酶的酶切位点如图所示。
回答下列问题。
（l）体外大量获得GM-CSF基因的方法是 ______ ，用该方法获取GM-CSF基因的过程中需要加入一对引物，其作用是 ______ 。
（2）据图分析，该科研团队构建GM-CSF基因表达载体时，不选择限制酶BamHⅠ的原因是 ______ ；与只选择EcoRⅠ相比，选择PstⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理目的基因和质粒的优点是 ______ 。
（3）将GM-CSF基因表达载体导入大肠杆菌前，一般先用Ca2+处理大肠杆菌的目的是 ______ 。
（4）该科研团队利用质粒中的标记基因筛选出含有GM-CSF基因重组质粒的大肠杆菌。筛选时，应先用含有 ______ 的培养基1筛选己导入质粒的大肠杆菌，再将培养基1中的菌落分别单独接种到含 ______ 的培养基2中进行筛选。若在培养基2中未形成菌落，则其在培养基l中形成的对应菌落是由含重组质粒的大肠杆菌繁殖而成的。
答案和解析
1.【答案】C
【解析】解：A、腐乳制作的过程中，应用的主要微生物是毛霉，A错误；
B、葡萄酒制作时的最适温度是18-30℃，葡萄醋的发酵的最适温度是30-35℃，故葡萄酒制作完成后，打开瓶盖盖上一层纱布，适当升高温度可进行葡萄醋的发酵，B错误；
C、乳酸菌种类较多，一个泡菜坛中的乳酸菌不止一种，因此不能构成一个种群，C正确；
D、传统的发酵没有进行严格的灭菌，生产的食品安全性较低，D错误。
故选：C。
果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物，适宜酵母菌发酵的温度范围是18～30°C；果醋制作的原理是在氧气充足的条件下，醋酸菌将葡萄糖或者乙醇转化成醋酸，醋酸菌无核膜包被的细胞核，是原核生物，属于好氧菌，醋酸菌适宜生长的温度范围是30-35°℃。
本题主要考查传统发酵技术的相关知识，需要注意的细节较多，如果酒、果醋发酵、和腐乳制作的原理、所需菌种、发酵过程等，需要学生能把握知识的内在联系，并利用相关知识综合解决问题的能力。
2.【答案】C
【解析】
【分析】
蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】
A、由于大肠杆菌只有核糖体一种细胞器，不含内质网和高尔基体，无法对t-PA进行加工，故若利用大肠杆菌来生产t-PA，需要对其合成的t-PA进行后期改造，A正确；
B、分析题意，本技术是将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，属于蛋白质工程，B正确；
C、欲将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，应对相应的基因进行改造，C错误；
D、t-PA是一种能高效降解血栓的单链糖蛋白，由于抗原与抗体的集合具有特异性，故可利用抗原-抗体杂交技术来检测转基因的大肠杆菌是否分泌了t-PA，D正确。
3.【答案】D
【解析】解：A、秋水仙素可以抑制纺锤体的形成，但不能抑制着丝粒的分裂，A错误；
B、过程②为脱分化过程，该过程应避光处理，B错误；
C、过程③是再分化过程，该过程的培养基中需添加较高浓度细胞分裂素以利于芽的分化，添加较高浓度的生长素以利于根的分化，C错误；
D、过程④是经花药离体培养后获得的植株，若亲本植株基因型是AaBb,则花药有AB、Ab、aB、ab,再经植物组织培养等过程后，可能得到AABB、AAbb、aaBB、aabb等纯合子，可能与亲本基因型不同，D正确。
故选：D。
分析题图：图中①表示取花药进行离体培养，②表示脱分化过程，③表示再分化过程，④表示试管苗形成单倍体的过程。
本题考查植物组织培养相关知识，要求学生理解识记有关技术的原理和操作步骤，掌握各步骤中需要注意的细节，能将教材中知识结合题中信息进行迁移应用。
4.【答案】D
【解析】解：A、原代培养一般传代1～10代，A错误；
B、传代培养过程中一般细胞可连续分裂10-50代，B错误；
C、原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株，但遗传物质并没有发生改变，C错误；
D、细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为癌细胞，D正确。
故选：D。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
细胞株：原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株。
细胞系：细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。
本题考查动物细胞培养的几个关键概念，意在考查学生的识记和理解能力，属于考纲识记层次的考查。
5.【答案】A
【解析】解：A、植物组织培养获得幼苗的原理是植物细胞的全能性，单克隆抗体技术制备抗体的原理是细胞膜的流动性和细胞增殖，A错误；
B、植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁制备原生质体，利用了酶的专一性，B正确；
C、用物理法或者化学法使得原生质体融合和动物细胞融合，利用了细胞膜具有一定的流动性的特点，C正确；
D、紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养获得相应产品原理是细胞增殖，D正确。
故选：A。
1、植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
本题考查植物组织培养和单克隆抗体的制备过程，意在考查学生的识记能力和判断能力，难度不大。
6.【答案】C
【解析】解：A、酶是蛋白质或RNA，其中RNA的特异性与氨基酸的排列顺序无关，A错误；
B、利用胞吐作用运输的物质不都是大分子物质，如神经递质，B错误；
C、糖蛋白、抗体、限制酶都是具有识别作用的物质，C正确；
D、原核细胞没有核仁，因此其核糖体的形成与核仁无关，D错误。
故选：C。
1、酶是由活细胞的产生的具有催化活性的有机物，绝大多数酶是蛋白质，极少数酶是RNA．
2、真核细胞和原核细胞的比较：
类 别 原核细胞 真核细胞
细胞大小 较小（一般1～10um） 较大（1～100um）
细胞核 无成形的细胞核，无核膜、核仁、染色体，只有拟核 有成形的细胞核，有核膜、核仁和染色体
细胞质 只有核糖体，没有其它复杂的细胞器 有核糖体、线粒体等，植物细胞还有叶绿体等
细胞壁 细细胞壁主要成分是肽聚糖 细胞壁的主要成分是纤维素和果胶
增殖方式 二分裂 有丝分裂、无丝分裂、减数分裂
可遗传变异来源 基因突变 基因突变、基因重组、染色体变异
共性 都含有细胞膜、核糖体，都含有DNA和RNA两种核酸等
3、大分子物质的运输方式是胞吐和胞吞，需要消耗能量，依赖于细胞膜的流动性．
本题考查细胞中的一些重要化合物及其功能、原核细胞和真核细胞的形态和结构的异同，要求考生识记酶的概念，掌握酶的化学本质；识记物质运输方式，尤其是大分子物质的运输方式；识记原核细胞和真核细胞的形态和结构的异同，能结合所学的知识准确判断各选项．
7.【答案】D
【解析】解：A、动植物细胞DNA的提取通常不需要在无菌环境下进行，A错误；
B、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养不能加入抗生素，B错误；
C、一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误；
D、用紫外线照射30min,可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适置喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果，D正确。
故选：D。
消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌。常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌。
本题考查微生物的分离与培养，要求考生识记微生物实验中的消毒、灭菌的概念、具体方法和操作等知识，意在考查考生的识记和分析能力。
8.【答案】B
【解析】解：A、为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，分解蔗糖菌株的筛选需将蔗糖作为唯一碳源经多次传代培养以获得目标菌株，A正确；
B、要统计活菌数量可采用稀释涂布平板法，但不能采用平板划线法，B错误；
C、嗜盐单胞菌H可以在高盐浓度的液体环境下生存，杂菌会由于渗透失水而死亡，嗜盐单胞菌可以采用不需要灭菌的发酵系统来培育，C正确；
D、当菌株H在培育过程中需要向发酵罐中通入空气，说明该菌进行有氧呼吸，代谢类型为需氧型，D正确。
故选：B。
选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
本题主要考查的是微生物的分离和培养的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
9.【答案】D
【解析】解：A、体内基因治疗是用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因，体外基因治疗是先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后在体外完成基因转移，并将成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内，因此相对来说，体外基因治疗效果较为可靠，A错误；
B、基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，B错误；
C、目前基因治疗处于初期的临床试验阶段，由于技术、伦理等因素的限制，基因治疗只能用于某些疾病的治疗，C错误；
D、基因治疗的靶细胞若是体细胞，则获得的性状一般不会遗传给下一代，D正确。
故选：D。
基因治疗（治疗遗传病最有效的手段）
1、概念：把正常基因导入病人体内有缺陷的细胞中，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。例：将腺苷酸脱氨酶（ADA）基因导入患者的淋巴细胞，治疗复合型免疫缺陷症。
2、种类：体外基因治疗和体内基因治疗（注意两者的区别），其中效果比较可靠的是体外基因治疗。体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内，如腺苷酸脱氨酶基因的转移。体内基因治疗：用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因的方法。
3、用于基因治疗的基因种类：正常基因、反义基因、编码可以杀死癌变细胞的蛋白酶基因（自杀基因）。
本题主要考查的是基因工程在医疗方面的具体应用的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
10.【答案】A
【解析】解：A、同一个体不同体细胞都是由同一个受精卵分裂和分化而来，其遗传物质相同，而生殖细胞遗传物质减半，全能性大小也不相同，一般分化程度高的全能性低，A错误；
B、具有某种生物全部遗传信息的细胞都具有全能性的特点，都有发育成个体的潜能，B正确；
C、生物体内的细胞因基因的选择性表达不能表现出全能性，需要离体培养且形成新的个体才能表现出全能性，C正确；
D、通过植物组织培养能将分化的植物细胞离体培养成新的植株，可证明分化的植物细胞具全能性，D正确。
故选：A。
关于细胞的“全能性”，可以从以下几方面把握：
（1）概念：细胞的全能性是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。
（2）细胞具有全能性的原因是：细胞含有该生物全部的遗传物质。
（3）细胞全能性大小：受精卵＞干细胞＞生殖细胞＞体细胞。
（4）细胞表现出全能性的条件：离体、适宜的营养条件、适宜的环境条件。
本题考查细胞全能性的相关知识，要求考生识记细胞全能性的概念、能对细胞全能性大小进行比较，掌握细胞全能性体现的标志，能结合所学的知识准确判断各选项，属于识记和理解层次的考查。
11.【答案】A
【解析】解：A、愈伤组织在一定条件下才能再分化出根和芽，A错误；
B、愈伤组织没有叶绿体，不能进行光合作用，其代谢类型是异养需氧型，B正确；
C、愈伤组织处于分生状态，易受外因影响而产生突变，C正确；
D、愈伤组织是植物细胞脱分化形成的，其全能性高，D正确。
故选：A。
1、植物组织培养：离体的植物组织、器官或细胞（外植体）愈伤组织胚状体→植株（新植体）。
2、愈伤组织的特点：高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织（色浅）。
本题考查植物组织培养的相关知识，要求考生识记植物组织培养的具体过程、条件等基础知识，能结合所学的知识准确答题。
12.【答案】C
【解析】解：A、茎尖一般没有病毒积累，分裂能力强，可作为植物组织培养的材料，A正确；
B、花瓣细胞属于体细胞，可作为植物组织培养的材料，B正确；
C、花粉是经减数分裂形成的，在此过程中发生了基因重组，因而不一定能保持亲本的优良性状，且花粉培养获得是单倍体植株，C错误；
D、叶片细胞属于体细胞，可作为植物组织培养的材料，D正确。
故选：C。
植物的芽、茎尖或根尖的组织细胞一般没有病毒积累，具有较强的分裂能力，全能性程度高，分化程度相对较低，容易脱分化，因此可作为植物组织培养的材料。
本题考查植物组织培养的相关知识，要求考生识记植物组织培养的概念及适宜材料，能根据题干要求做出准确的判断。
13.【答案】B
【解析】解：A、用于植物组织培养的外植体就是指离体培养的植物器官或组织，外植体应选择分裂旺盛的部分，如根尖、茎尖等，A正确；
B、植物组织培养时，常常需要添加植物激素，比如生长素和细胞分裂素，B错误；
C、培养基中添加蔗糖的目的是提供营养，同时调节渗透压，维持细胞正常形态，C正确；
D、茎尖位于植物分生区附近，病毒极少，甚至无病毒。因此，若要获得脱毒苗，一般选取植物体的茎尖组织进行培养，D正确。
故选：B。
植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。植物组织培养包括脱分化和再分化两个重要的步骤，这两个步骤都需要植物激素诱导，但植物激素的比例不同。
本题考查植物组织培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题是解答本题的关键。
14.【答案】C
【解析】
【分析】
本题考查动物细胞培养过程，特别是该过程中胰蛋白酶的作用，只要考生识记相关知识点即可正确作答，属于考纲识记层次的考查。对于此类试题，考查在平时的学习过程中，要学会构建知识网络结构，避免不必要的错误。
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。所以在动物细胞培养时，首先要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，以分解组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞。
【解答】
A、胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，A错误；
B、胰蛋白酶的作用不是分解培养基的蛋白质，B错误；
C、胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞，C正确；
D、胰蛋白酶用于分解细胞外的物质，D错误。
故选：C。
15.【答案】C
【解析】解：A、受精卵需要在体外培养形成早期胚胎后才可移植入母体的子宫，A正确；
B、三亲婴儿的细胞核基因一半来自母亲，一半来自父亲，所以染色体来自母亲和父亲提供的细胞核，B正确；
C、看图可知：三亲婴儿采用了体外受精的技术手段，三亲婴儿的染色体一半来自于母亲提供的细胞核，C错误；
D、三亲婴儿的培育过程采用了核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术等，D正确。
故选：C。
分析题图：图示表示三亲婴儿的培育过程，由图可知，三亲婴儿的培育采用了核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术等。
本题结合图解，考查胚胎工程的相关知识，要求考生识记胚胎工程涉及的技术手段及其应用，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查。
16.【答案】C
【解析】解：A、用促性腺激素对供体羊进行超数排卵处理，可以获得较多的卵母细胞，A错误；
B、采集到的精子需要在获能溶液中进行获能培养，B错误；
C、人工受精后，若在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体或观察到雌雄原核，说明卵子已经受精，C正确；
D、胚胎分割后获得的胚胎基因型相同，D错误。
故选：C。
胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞等技术。胚胎移植时，供受体需要处于相同的生理状态；胚胎分割产生的胚胎基因型相同。
本题考查胚胎工程的相关知识，要求考生识记胚胎移植的基本程序；识记体外受精的过程；识记胚胎分割的特点，能结合所学的知识准确答题。
17.【答案】B
【解析】解：A、克隆猫与提供体细胞核的名为“大蒜”的猫的遗传物质基本相同，A错误；
B、克隆猫是利用体细胞进行细胞核移植得到的，属于无性生殖，B正确；
C、克隆猫与代孕母猫的遗传物质不相同，代孕猫提供的是供胚胎发育的适宜环境，C错误；
D、克隆猫的产生说明动物细胞核有全能性，由于卵母细胞的细胞质中也存在遗传物质，因此克隆猫的性状与供体猫的性状不完全相同，D错误。
故选：B。
1、动物细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆动物。动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核具有全能性。克隆动物的遗传物质来自双亲，其核遗传物质来自供核生物，而细胞质基因来自提供细胞质的生物。
2、胚胎移植的生理学基础：
（1）动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的，这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
（2）早期胚胎在一定时间内处于游离状态，这就为胚胎的收集提供了可能。
（3）受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体的存活提供了可能。
（4）供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
本题考查动物细胞核移植和胚胎移植的相关知识，意在考查学生对所学知识的理解与掌握程度，难度不大。
18.【答案】D
【解析】解：A、三种限制酶作用的化学键相同，都是磷酸二酯键，A正确；
B、三种限制酶切割DNA分子后能形成相同的黏性末端，即CTAG，B正确；
CD、BamHⅠ和BglⅡ的识别序列中含有MboⅠ的识别序列，因此能被BamHⅠ或BglⅡ切割的位点也能被MboⅠ切割，但能被MboⅠ切割的位点不一定能被BamHⅠ或BglⅡ切割，C正确；D错误。
故选：D。
限制酶：
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
本题考查限制酶的相关知识，要求考生识记限制酶的特点及作用，能根据图中信息准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。
19.【答案】C
【解析】解：A、原核细胞的分裂方式为二分裂，A错误；
B、在不同细胞分化过程中，基因表达产生的蛋白质有些是相同的，如呼吸酶、ATP 合成酶等，B错误；
C、在神经胶质细胞中某些基因进行了表达，产生了与神经干细胞不同的mRNA，C正确；
D、细胞癌变过程是基因突变的结果，根本原因是原癌基因或抑癌基因发生基因突变，D错误；
故选：C。
1、细胞分化是指在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程.细胞分化的意义：使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率；
2、细胞癌变本质是原癌基因和抑癌基因发生基因突变引起。
本题考查细胞的生命历程中增殖、分化、癌变的特征和机制，需要充分理解细胞形态、结构和功能发生变化机制、不同特征之间的联系，可借助概念图、表格等学习工具进行总结归纳。
20.【答案】A
【解析】A、新鲜鳜鱼应先宰杀冲洗干净，但高度白酒只能杀灭鳜鱼表面的微生物，且不包括芽孢和孢子，所以属于消毒，并不是灭菌，A错误；
B、食盐、香辛料等不仅能调味，而且还能防止杂菌污染，具有防腐功能，B正确；
C、由题干信息可知，制作臭鳜鱼利用的是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，故在腌制时，要将鱼体整齐叠放并进行压实处理，创造无氧环境，C正确；
D、发酵环境控制不严，会导致杂菌污染，可能会存在食品安全隐患，D正确。
故选：A。
1、由题干可知，制作臭鳜鱼利用的是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
2、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
本题考查传统发酵技术，要求考生识记相关传统发酵的操作和消毒与灭菌的区别，意在考查考生的理解和运用能力。
21.【答案】ABC
【解析】解：A、紫外线能提高基因突变率，故用紫外线照射目的是提高野生型谷氨酸棒状杆菌突变率，A正确；
B、由图观察可知，图甲中菌落分散、随机或均匀分布在平板表面，接种操作是稀释涂布平板法，故接种操作需用涂布器把菌液均匀涂到甲的表面，B正确；
C、乙中新出现的N菌种为精氨酸依赖型菌，而M菌种为野生型谷氨酸棒状杆菌，甲培养基上只有野生型谷氨酸棒状杆菌，没有出现精氨酸依赖型菌，说明甲所用培养基缺少精氨酸，甲培养基是一种选择培养基，C正确；
D、从图中可看出，乙中新出现的N菌种为精氨酸依赖型菌，而M菌种为野生型谷氨酸棒状杆菌，精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，故目的菌N扩大培养后可用于工业化生产鸟氨酸，D错误。
故选：ABC。
图表示将紫外线照射处理的菌液接种在缺乏精氨酸的培养基上，因此甲中M表示野生型谷氨酸棒状杆菌；向培养基中添加某物质精氨酸后继续培养，其中M为野生型谷氨酸棒状杆菌，N为精氨酸依赖型菌。
本题考查微生物的培养与分离的相关知识，要求学生理解识记有关技术的原理和操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节。
22.【答案】BD
【解析】解：A、pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，故可以作为标记基因可以鉴别受体细胞中是否含有目的基因，A正确；
B、若psy基因和crtⅠ基因的序列中含有用到的限制酶的识别序列，则会破坏目的基因，B错误；
C、可通过基因枪法、花粉管通道法等将目的基因导入水稻的受体细胞，C正确；
D、PCR可扩增特定基因，但要检测目的基因是否表达应该用抗原-抗体杂交法，D错误。
故选：BD。
基因表达载体的成分：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。
本题主要考查基因工程的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。
23.【答案】BC
【解析】
【分析】
本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，难度不大。
1、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。
2、产品不同，分离提纯的方法一般不同。（1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；（2）如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。
3、发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。4、发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。
【解答】
A、发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，A错误；
B、由分析可知，发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，B正确；
C、在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢途径，C正确；
D、单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，D错误。
24.【答案】BCD
【解析】解：A、DNA复制只能从5'到3′合成子链，PCR过程中，Taq酶是在引物的3'向后延伸的，因此应选取B和C作为引物，A错误；
B、不能同时用Pst I和HindⅢ切割质粒，会导致质粒上无抗性基因，无法检测目的基因是否插入，B正确；
C、限制酶的作用部位是图丙中的②磷酸二酯键，C正确；
D、从图丁中可以看出，质粒是一种环状的DNA分子，D正确。
故选：BCD。
1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及操作步骤，掌握各操作工具的作用及操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题。
25.【答案】ABC
【解析】解：A、富集培养基是液体培养基，不需要添加琼脂，A错误；
B、实验室分离塑料降解菌时应以在培养基中加入塑料作为唯一碳源，不能加入葡萄糖，B错误；
C、将转接至固体斜面培养基上的不同菌落置于4℃的冰箱临时保存，长期保存用的是甘油管藏法，C错误；
D、微小杆菌YT2生活在黄粉虫的消化道内，若杀死微小杆菌YT2，黄粉虫无法消化塑料，可推测该菌和黄粉虫幼虫的种间关系是互利共生，D正确。
故选：ABC。
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
本题主要考查微生物的选择培养，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力，能够运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。
26.【答案】酵母菌 酵母菌呼吸作用产生的CO2溶解在发酵液中，导致pH降低，发酵液中酵母菌可生长繁殖，而多数微生物的生长繁殖受到抑制 升高发酵温度、通入无菌空气等 选择培养基 稀释涂布平板 周围有透明圈
【解析】解：（1）果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧菌，在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖而绝大多数微生物都因无法适应这一环境而受到抑制，因此家庭制作高粱果酒的酿酒缸并非处于无菌的环境，但发酵液却少有被杂菌污染。
（2）醋酸发酵的菌种是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，最适温度为30-35°C；酒精发酵的菌种是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，最适温度为18-30°C，因此进行醋酸发酵时，发酵条件与酒精发酵时条件相比，主要的区别是发酵温度更高，需要通入无菌空气。
（3）该培养基的目的是为了筛选出能产生醋酸的醋酸菌，故属于选择培养基。后续需要挑单菌落，故需要使用稀释涂布平板法进行微生物接种分离。培养一段时间后，因为醋酸菌可产生醋酸，进而溶解培养基中的碳酸钙进而形成透圈。所以将周围含有透明圈的菌落挑出，即是目的菌。
故答案为：
（1）酵母菌 酵母菌呼吸作用产生的CO2溶解在发酵液中，导致pH降低，发酵液中酵母菌可生长繁殖，而多数微生物的生长繁殖受到抑制
（2）升高发酵温度、通入无菌空气等
（3）选择培养基 稀释涂布平板 周围有透明圈
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。在有氧的情况下酵母菌生长繁殖速度快，把糖分解成二氧化碳和水。在无氧的环境中酵母菌把糖分解成酒精和二氧化碳。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
本题主要考查传统发酵技术的相关知识，需要注意的细节较多，如果酒、果醋发酵的原理、所需菌种、发酵过程等，需要学生能把握知识的内在联系，并利用相关知识综合解决问题的能力。
27.【答案】能吸收周围环境中DNA分子 稀释涂布平板 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；可以避免培养基中的水分过快地挥发 大肠杆菌属于原核生物，没有内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工 使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达 不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制
【解析】解：（1）将目的基因导入微生物细胞时常有钙离子转化法，即先用Ca2+处理微生物细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将含目的基因的表达载体导入其中进行培养。
（2）稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。由于一个活菌可形成一个菌落，因此通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。因此在培养过程用稀释涂布平板法进行菌种纯化、分离并计数。用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，这样既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；又可以避免培养基中的水分过快地挥发。由于大肠杆菌是原核生物，其细胞中无内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工，因此与人体自身合成的ECF蛋白相比，大肠杆菌表达的ECF蛋白往往生物活性较低。
（3）动物的唾液腺能表达高活性的ECF蛋白，这意味着唾液腺是表达ECF蛋白的一个理想组织。科学家尝试利用转基因克隆猪作为生物反应器，在其唾液腺高效合成ECF，构建重组质粒时，需要将ECF基因与特定的启动子重组在一起，目的是使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达。乳腺生物反应器需是处于生殖期的雌性动物才可生产ECF蛋白，因此与传统的乳腺生物反应器相比，唾液腺生物反应器的优点有不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制。
故答案为：
（1）能吸收周围环境中DNA分子
（2）稀释涂布平板 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；可以避免培养基中的水分过快地挥发 大肠杆菌属于原核生物，没有内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工
（3）使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达 不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制
1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、将目的基因导入微生物细胞常用钙离子转化法：用Ca2+处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合（在缓冲液中）→一定温度下，感受态细胞吸收DNA分子，完成转化。
3、乳腺生物反应器是利用转基因动物的乳汁生产某些药用蛋白，乳腺生物反应器需是处于生殖期的雌性动物才可生产药用蛋白，而唾液腺生物反应器则是任何生长期的雌雄动物均可生产。
本题考查基因工程、微生物分离和培养，要求考生识记基因工程的操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，了解基因工程技术的应用及实例；识记稀释涂布平板法的原理及用途，能结合所学的知识准确答题。
28.【答案】95%空气和5%的CO2 血清 定期更换培养液 病毒 不会产生免疫排斥反应 从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题
【解析】解：（1）动物细胞应在的含有95%空气和5%的CO2的混合气体的恒温培养箱中培养，另外为满足细胞对未知因子的需求，在培养基需加入血清等成分。培养过程中为及时清除代谢产物需定期更换培养液。
（2）据图可知，将基因导入宿主细胞所用的载体为病毒。
（3）由于IPS细胞可以来自自身体细胞的诱导，ES细胞可以来自自身胚胎，因此培育人造组织器官的优点是不会产生免疫排斥反应。
（4）ES细胞应用存在部分争议的原因是：从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题。
故答案为：
（1）95%空气和5%的CO2 血清 定期更换培养液
（2）病毒
（3）不会产生免疫排斥反应
（4）从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题
1、题图分析：图中，①分离和培养宿主细胞；②将若干个相关的基因导入宿主细胞；③将导入基因的细胞在ES细胞专用培养体系中培养，同时根据需要加入相应物质以促进重编程；④出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定（细胞形态、表观遗传学、体外分化潜能等方面）。
2、动物细胞培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。
（3）适宜的温度和pH：
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
本题考查细胞工程和胚胎工程，考查学生识记基础知识的能力。能综合运用所学知识解决社会生活中的一些生物学问题。
29.【答案】维持培养液的pH 抗生素 定期更换培养液 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞 乙和丙 能产生（特异性强、灵敏度高的）抗cTnI抗体的杂交瘤细胞 动物细胞培养
【解析】解：（1）动物细胞培养时将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体环境中，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（2）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素。为了防止有害代谢物的积累，可采用定期更换培养液的方法，以便清除代谢物。
（3）为了提高淋巴细胞的免疫能力，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞，一般通过3次注射相应抗原实现。最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合。
（4）由图可知：杂交瘤细胞需要对甲筛选，因此乙和丙应该是筛选得到的杂交瘤细胞；其中①代表用特定的选择培养基进行筛选，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，就能获得足够数量的能分泌抗cTnI抗体的细胞。
（5）单克隆抗体生产过程在使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞形成杂交瘤细胞的过程中应用到了动物细胞融合，在生产单克隆抗体的过程中应用了动物细胞培养技术。
故答案为：
（1）维持培养液的pH
（2）抗生素 定期更换培养液
（3）加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞
（4）乙和丙 能产生（特异性强、灵敏度高的）抗cTnI抗体的杂交瘤细胞
（5）动物细胞培养
1、在体外培养杂交瘤细胞时，培养液中通常加入血清或血浆等天然成分，将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体环境中进行培养，CO2的主要作用是维持培养液的pH；为防止有害代谢物的积累，需要定期更换培养液；动物细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。
2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
本题结合图解，考查动物细胞工程的相关知识，要求考生识记动物细胞培养的过程及条件；识记单克隆抗体制备的过程，掌握单克隆抗体的优点及应用，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题。
30.【答案】PCR 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 该酶会破坏GM-CSF基因 防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接 使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 氨苄青霉素 四环素
【解析】解：（1）PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，可大量获得目的基因，故体外大量获得GM-CSF基因的方法是PCR。引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，其作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
（2）由图甲可知，限制酶BamH I会破坏目的基因（GM-CSF基因），因此构建GM-CSF基因表达载体时，不选择限制酶BamH I。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，故与只选择EcoR I相比，选择Pst I和Hind III两种限制酶同时处理目的基因和质粒的优点是防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接。
（3）将GM-CSF基因表达载体导入微生物之前，一般先用Ca2+处理微生物，其目的是使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（4）由图可知，在构建基因表达载体时，抗四环素基因被限制酶Pst I和Hind III破坏了，而抗氨苄青霉素基因是完整的，即重组质粒上只含抗氨苄青霉素基因这一种标记基因，普通质粒上含抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因两种标记基因，故筛选时，应先用含有氨苄青霉素的培养基1筛选已导入质粒的大肠杆菌，再将培养基1中的菌落分别单独接种到含四环素的培养基2中进行筛选，若在培养基2中未形成菌落，则其在培养基1中形成的对应菌落是由含重组质粒的大肠杆菌繁殖而成的。
故答案为：
（1）PCR 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
（2）该酶会破坏GM-CSF基因 防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接
（3）使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
（4）氨苄青霉素 四环素
PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制，需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物（使 DNA聚合酶能够从引物的 3'端开始连接脱氧核糖核苷酸）、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），过程包括：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
本题主要考查的是基因工程的基本操作的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
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第I卷（选择题）
一、单选题（本大题共20小题，共40.0分）
1. 下列关于果酒、果醋、泡菜、腐乳制作的说法，正确的是（ ）
A. 腐乳制作的过程中，应用的主要微生物是厌氧菌中的乳酸菌
B. 葡萄酒制作完成后，打开瓶盖盖上一层纱布，适当降低温度可进行葡萄醋的发酵
C. 一个泡菜坛里的所有乳酸菌不构成一个种群
D. 传统发酵过程中利用的是天然的微生物菌种，产品营养价值和安全性更高
2. 为心梗患者注射大剂量的t-PA（一种能高效降解血栓的单链糖蛋白，主要由血管内皮细胞合成、分泌并释放进血液）会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血等副作用，据此分析错误的是（ ）
A. 若利用大肠杆菌来生产t-PA，需要对其合成的t-PA进行后期改造
B. 改造t-PA的技术属于蛋白质工程
C. 欲将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，应直接对蛋白质（t-PA）进行改造
D. 可利用抗原-抗体杂交技术来检测转基因的大肠杆菌是否分泌了t-PA
3. 如图是某二倍体植物花药育种过程的示意图，下列叙述正确的是（ ）
A. 秋水仙素可以抑制着丝粒分裂从而诱导染色体数目加倍
B. 过程②都需提供光照条件诱导愈伤组织合成叶绿素
C. 过程③的培养基中需添加较高浓度的细胞分裂素以利于根的分化
D. 过程④培育的试管苗为纯合子，与亲本基因型可能不同
4. 在动物细胞培养中有部分细胞可以在培养条件下无限制地传代下去，这种培养方式称之为（ ）
A. 原代培养 B. 传代培养 C. 细胞团 D. 癌细胞
5. 植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术或方法与原理不完全相符的是（ ）
A. 植物组织培养获得幼苗和单克隆抗体技术制备抗体-细胞的全能性
B. 酶解法处理植物细胞壁获得原生质体-酶的专一性
C. 原生质体融合和动物细胞融合获得杂交细胞-细胞膜的流动性
D. 紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养获得相应产品-细胞增殖
6. 下列关于组成细胞的物质及细胞结构的描述，正确的是（ ）
A. 酶、抗体、受体的特异性都与氨基酸的排列顺序有关
B. 利用胞吐作用运输的物质都是大分子物质
C. 糖蛋白、抗体、限制酶都是具有识别作用的物质
D. 核糖体都能参与多肽链的合成，其形成都与核仁有关
7. 灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ）
A. 动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B. 微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C. 为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D. 紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果
8. 中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。下列说法错误的是（ ）
A. 分解蔗糖菌株的筛选需将蔗糖作为唯一碳源经多次传代培养以获得目标菌株
B. 培养菌株过程中可采用平板划线法统计活菌数量
C. 嗜盐单胞菌可以采用不需要灭菌的发酵系统来培育
D. 菌株H在培育过程中需要向发酵罐中通入空气，说明该菌的代谢类型为需氧型
9. 基因治疗是人类疾病治疗的一种崭新手段，下列有关叙述正确的是（ ）
A. 体内基因治疗和体外基因治疗效果一样可靠
B. 基因治疗是把缺陷基因诱变成正常基因
C. 基因治疗可以治愈所有的单基因遗传病
D. 基因治疗的靶细胞若是体细胞，则获得的性状一般不会遗传给下一代
10. 下列关于植物细胞全能性的叙述，不正确的是（ ）
A. 同一个体不同细胞的遗传物质相同，全能性大小也相同
B. 具有某种生物全部遗传信息的细胞都具有全能性的特点
C. 生物体内的细胞因基因的选择性表达不能表现出全能性
D. 植物组织培养的全过程可证明分化的植物细胞具有全能
11. 下列有关愈伤组织细胞的叙述，错误的（ ）
A. 愈伤组织一定可以再分化出根和芽 B. 愈伤组织的代谢类型是异养需氧型
C. 愈伤组织易受外因影响而产生突变 D. 愈伤组织是植物细胞脱分化形成的
12. 利用微型繁殖技术快速培育名贵花卉，不选取的培养材料是（ ）
A. 茎尖 B. 花瓣 C. 花粉 D. 叶
13. 下列关于植物组织培养的叙述，错误的是（ ）
A. 用于植物组织培养的外植体就是指离体培养的植物器官或组织
B. 植物组织培养时，常常需要添加细胞分裂素和赤霉素两种植物激素
C. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养物质和调节渗透压
D. 用茎尖进行组织培养获得脱毒苗时，作物不会或者极少感染病毒
14. 动物细胞培养中胰蛋白酶所起的作用是（ ）
A. 消化细胞膜易于融合 B. 分解培养基的蛋白质供给细胞营养
C. 使组织分散成单个细胞 D. 用于细胞内物质的分解
15. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如图技术路线。据图分析，下列叙述不正确的是（ ）
A. 三亲婴儿需要在体外将受精卵培育成胚胎，再移植到子宫内
B. 三亲婴儿的染色体来自母亲和父亲提供的细胞核
C. 三亲婴儿的染色体全部来自母亲提供的细胞核
D. 三亲婴儿的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术
16. 杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，深受广大消费者的欢迎。科研工作者为满足市场需求，通过胚胎工程相关技术快速、大量繁殖杜泊羊。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 对受体杜泊羊进行超数排卵处理可获得较多的卵母细胞
B. 采集到的卵母细胞需在获能培养液中进行获能培养
C. 人工授精后，以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志
D. 收集到的胚胎进行胚胎分割后获得的二分胚的基因型不同
17. 我国首例克隆猫“大蒜”于2019年7月21日经代孕猫自然分娩顺利出生，它是从本体猫“大蒜”的大腿部采集了一块皮下组织，提取体细胞的细胞核与去核的卵母细胞融合，构建重组胚胎，激活后的胚胎再植入代孕猫的子宫内，直至分娩。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 克隆猫与提供去核的卵母细胞的母猫的遗传物质基本相同
B. 克隆猫的诞生属于无性生殖
C. 克隆猫与代孕的遗传物质基本完全相同
D. 克隆猫“大蒜”的培育说明动物细胞有全能性，克隆猫与供体猫的性状完全相同
18. 如图表示三种限制酶BamHⅠ、BglⅡ和MboⅠ的识别序列和切割位点，下列叙述不正确的是（ ）
A. 三种限制酶作用的化学键相同
B. 三种限制酶切割DNA分子后能形成相同的黏性末端
C. 能被BamHⅠ或BglⅡ切割的位点也能被MboⅠ切割
D. 能被MboⅠ切割的位点一定能被BamHⅠ或BglⅡ切割
19. 下列有关细胞增殖、分化和癌变的说法，正确的是（ ）
A. 真核细胞的分裂方式包括有丝分裂、无丝分裂和减数分裂，原核细胞的分裂方式为无丝分裂
B. 在不同细胞分化过程中，基因表达产生的蛋白质都是不同的
C. 神经干细胞与其分化产生的神经胶质细胞的mRNA存在差异
D. 细胞的癌变是细胞异常分化的表现，根本原因是原癌基因的选择性表达
20. 臭鳜（guì）鱼是利用新鲜鳜鱼为原料，配以食盐、香辛料等在25℃-28℃条件下由乳杆菌等多种微生物共同发酵制得。相关叙述错误的是（ ）
A. 新鲜鳜鱼应先宰杀冲洗干净，再用高度白酒进行灭菌
B. 食盐、香辛料等不仅能调味，而且具有防腐功能
C. 腌制时，要将鱼体整齐叠放并进行压实处理
D. 发酵环境控制不严，可能会存在食品安全隐患
二、多选题（本大题共5小题，共15.0分）
21. 精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 用紫外线照射目的是提高野生型谷氨酸棒状杆菌突变率
B. 接种操作需用涂布器把菌液均匀涂到甲的表面
C. 甲为缺少精氨酸的选择性培养基
D. 目的菌M扩大培养后可用于工业化生产鸟氨酸
22. 缺乏维生素A容易导致夜盲症或营养不良，甚至能够威胁到生命。而β胡萝卜素可以在人体内转化成维生素A。科学家尝试通过转基因技术生产富含β胡萝卜素的大米。八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtⅠ表示）参与β胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。根据以上信息分析，下列叙述错误的是（ ）
A. pmi基因作为标记基因可以鉴别受体细胞中是否含有目的基因
B. psy基因和crtⅠ基因的序列中可以含有用到的限制酶的识别序列
C. 可通过花粉管通道法将目的基因导入水稻的受体细胞
D. PCR技术可检测目的基因是否表达出相应的蛋白质
23. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列有关说法正确的是（ ）
A. 发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵
B. 发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
C. 在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径
D. 通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
24. 基因表达载体的构建是基因工程的核心。图甲为限制酶EcoRI的识别序列，图乙表示目的基因及限制酶切点，A、B、C、D为四种引物。图丙表示目的基因上的DNA片段，图丁表示质粒。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 选引物A、D进行该目的基因的扩增
B. 不能同时用PstⅠ和HindⅢ切割目的基因和质粒
C. 限制酶的作用部位是图丙中的②
D. 从图丁中可以看出，质粒是一种环状的DNA分子
25. 塑料（聚乙烯）在自然界中很难降，解俗称“白色污染”，北京航空航天大学杨军教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有黄粉虫幼虫和成虫爬出。带着这些疑问，杨军教授对黄粉虫幼虫消化道的微生物进行分离，在幼虫肠道中成功分离出塑料降解菌——微小杆菌YT2。图是从黄粉虫肠道中分离、纯化目的微生物的过程，下列有关叙述错误的是（ ）
A. 富集培养基中含有酵母膏、蛋白胨、琼脂等，蛋白胨能提供所需的碳源、氮源和维生素
B. 实验室分离塑料降解菌时应在培养基中加入葡萄糖作为碳源
C. 将转接至固体斜面培养基上的不同菌落置于4℃的冰箱长期保存
D. 若杀死微小杆菌YT2，黄粉虫无法消化塑料，推测该菌和黄粉虫幼虫的种间关系是互利共生
第II卷（非选择题）
三、实验题（本大题共1小题，共9.0分）
26. 我国有几千年的酿醋历史，中国四大名醋之一的山西老陈醋是以高粱为原料通过微生物发酵而成，在山西省最为盛名的某醋厂园区墙壁上有一首诗“高粱原料酿造成，酵母杆菌一缸生，先酒后醋工艺巧，阳蒸冰冻去水明”。请结合所学知识，回答下列问题：
（1）实际生产中以高粱为原料的酿酒大缸中接入菌种一段时间后，在发酵液表面会出现一定的气泡和泡沫，这些气泡主要由 ______ （微生物）产生，该发酵过程中酒缸并非处于无菌环境中，但发酵液却少有杂菌生长，原因是 ______ 。
（2）“先酒后醋工艺巧”，工作人员是通过 ______ （至少写两点）措施实现产酒到产醋的转变。
（3）研究人员为了筛选出产酸能力强的醋酸菌，配制了含CaCO3的固体培养基（醋酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈），从功能角度来看，该培养基属于 ______ 培养基。用 ______ 法将发酵液中的微生物接种到培养基表面，培养一段时间后，将 ______ 的菌落挑出，单独培养检测即可得到产酸能力强的醋酸菌。
四、探究题（本大题共4小题，共36.0分）
27. 表皮生长因子（ECF）是一种由53个氨基酸组成的耐热单链小分子多肽。ECF可刺激多种细胞的增殖，在角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合方面有很好的疗效。回答下列问题：
（1）利用大肠杆菌来合成表皮生长因子（ECF）时，先用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种 ______ 的生理状态，然后再将含目的基因的表达载体导入其中进行培养。
（2）在培养过程用 ______ 法进行菌种纯化、分离并计数。用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，其目的是 ______ （答出一点即可）；与人体自身合成的ECF蛋白相比，大肠杆菌表达的ECF蛋白往往生物活性较低，可能的原因是 ______ 。
（3）动物的唾液腺能表达高活性的ECF蛋白，这意味着唾液腺是表达ECF，蛋白的一个理想组织。科学家尝试利用转基因克隆猪作为生物反应器，在其唾液腺高效合成ECF，构建重组质粒时，需要将ECF基因与特定的启动子重组在一起，目的是 ______ 。与传统的乳腺生物反应器相比，唾液腺生物反应器的优点有： ______ （答出两点即可）。
28. 胚胎干细胞（ES细胞）具有持续分裂和分化成各种组织细胞的能力。科学家利用已分化的细胞培养出的诱导性多功能干细胞（IPS），也具备胚胎干细胞的特点，诱导产生IPS细胞的前两个阶段为：①分离和培养宿主细胞；②将相关转录因子基因导入宿主细胞（如图所示）。请回答下列问题：
（1）培养宿主细胞应在含有 ______ 的混合气体的恒温培养箱中进行，所用的培养基需加入的天然成分为 ______ ，为及时清除代谢产物需 ______ 。
（2）据图可知，将基因导入宿主细胞所用的载体为 ______ 。
（3）IPS细胞或ES细胞在医学上的应用是培育人造组织器官，其优点为 ______ 。
（4）ES细胞往往取自囊胚的内细胞团或早期性腺细胞，目前ES细胞应用存在部分争议相比IPS细胞，请说出你认为的争议点是 ______ 。
29. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。请据图分析回答下列问题：
（1）动物细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是 ______ 。
（2）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的 ______ 。为了防止有害代谢物的积累，可采用 ______ 的方法，以便清除代谢物。
（3）每隔2周用cTnI作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是 ______ ，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合。
（4）甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是 ______ ，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得 ______ 。
（5）上述单克隆抗体生产过程应用到了动物细胞融合和 ______ 生物技术。
30. 癌症患者进行化疗后，体内白细胞数量会大幅降低，可注射GM-CSF（一种细胞因子）以增加白细胞数量。某科研团队通过基因工程技术大量生产GM-CSF，满足了临床需求。相关限制酶的酶切位点如图所示。
回答下列问题。
（l）体外大量获得GM-CSF基因的方法是 ______ ，用该方法获取GM-CSF基因的过程中需要加入一对引物，其作用是 ______ 。
（2）据图分析，该科研团队构建GM-CSF基因表达载体时，不选择限制酶BamHⅠ的原因是 ______ ；与只选择EcoRⅠ相比，选择PstⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理目的基因和质粒的优点是 ______ 。
（3）将GM-CSF基因表达载体导入大肠杆菌前，一般先用Ca2+处理大肠杆菌的目的是 ______ 。
（4）该科研团队利用质粒中的标记基因筛选出含有GM-CSF基因重组质粒的大肠杆菌。筛选时，应先用含有 ______ 的培养基1筛选己导入质粒的大肠杆菌，再将培养基1中的菌落分别单独接种到含 ______ 的培养基2中进行筛选。若在培养基2中未形成菌落，则其在培养基l中形成的对应菌落是由含重组质粒的大肠杆菌繁殖而成的。
答案和解析
1.【答案】C
【解析】解：A、腐乳制作的过程中，应用的主要微生物是毛霉，A错误；
B、葡萄酒制作时的最适温度是18-30℃，葡萄醋的发酵的最适温度是30-35℃，故葡萄酒制作完成后，打开瓶盖盖上一层纱布，适当升高温度可进行葡萄醋的发酵，B错误；
C、乳酸菌种类较多，一个泡菜坛中的乳酸菌不止一种，因此不能构成一个种群，C正确；
D、传统的发酵没有进行严格的灭菌，生产的食品安全性较低，D错误。
故选：C。
果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物，适宜酵母菌发酵的温度范围是18～30°C；果醋制作的原理是在氧气充足的条件下，醋酸菌将葡萄糖或者乙醇转化成醋酸，醋酸菌无核膜包被的细胞核，是原核生物，属于好氧菌，醋酸菌适宜生长的温度范围是30-35°℃。
本题主要考查传统发酵技术的相关知识，需要注意的细节较多，如果酒、果醋发酵、和腐乳制作的原理、所需菌种、发酵过程等，需要学生能把握知识的内在联系，并利用相关知识综合解决问题的能力。
2.【答案】C
【解析】
【分析】
蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】
A、由于大肠杆菌只有核糖体一种细胞器，不含内质网和高尔基体，无法对t-PA进行加工，故若利用大肠杆菌来生产t-PA，需要对其合成的t-PA进行后期改造，A正确；
B、分析题意，本技术是将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，属于蛋白质工程，B正确；
C、欲将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，应对相应的基因进行改造，C错误；
D、t-PA是一种能高效降解血栓的单链糖蛋白，由于抗原与抗体的集合具有特异性，故可利用抗原-抗体杂交技术来检测转基因的大肠杆菌是否分泌了t-PA，D正确。
3.【答案】D
【解析】解：A、秋水仙素可以抑制纺锤体的形成，但不能抑制着丝粒的分裂，A错误；
B、过程②为脱分化过程，该过程应避光处理，B错误；
C、过程③是再分化过程，该过程的培养基中需添加较高浓度细胞分裂素以利于芽的分化，添加较高浓度的生长素以利于根的分化，C错误；
D、过程④是经花药离体培养后获得的植株，若亲本植株基因型是AaBb,则花药有AB、Ab、aB、ab,再经植物组织培养等过程后，可能得到AABB、AAbb、aaBB、aabb等纯合子，可能与亲本基因型不同，D正确。
故选：D。
分析题图：图中①表示取花药进行离体培养，②表示脱分化过程，③表示再分化过程，④表示试管苗形成单倍体的过程。
本题考查植物组织培养相关知识，要求学生理解识记有关技术的原理和操作步骤，掌握各步骤中需要注意的细节，能将教材中知识结合题中信息进行迁移应用。
4.【答案】D
【解析】解：A、原代培养一般传代1～10代，A错误；
B、传代培养过程中一般细胞可连续分裂10-50代，B错误；
C、原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株，但遗传物质并没有发生改变，C错误；
D、细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为癌细胞，D正确。
故选：D。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
细胞株：原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株。
细胞系：细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。
本题考查动物细胞培养的几个关键概念，意在考查学生的识记和理解能力，属于考纲识记层次的考查。
5.【答案】A
【解析】解：A、植物组织培养获得幼苗的原理是植物细胞的全能性，单克隆抗体技术制备抗体的原理是细胞膜的流动性和细胞增殖，A错误；
B、植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁制备原生质体，利用了酶的专一性，B正确；
C、用物理法或者化学法使得原生质体融合和动物细胞融合，利用了细胞膜具有一定的流动性的特点，C正确；
D、紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养获得相应产品原理是细胞增殖，D正确。
故选：A。
1、植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
本题考查植物组织培养和单克隆抗体的制备过程，意在考查学生的识记能力和判断能力，难度不大。
6.【答案】C
【解析】解：A、酶是蛋白质或RNA，其中RNA的特异性与氨基酸的排列顺序无关，A错误；
B、利用胞吐作用运输的物质不都是大分子物质，如神经递质，B错误；
C、糖蛋白、抗体、限制酶都是具有识别作用的物质，C正确；
D、原核细胞没有核仁，因此其核糖体的形成与核仁无关，D错误。
故选：C。
1、酶是由活细胞的产生的具有催化活性的有机物，绝大多数酶是蛋白质，极少数酶是RNA．
2、真核细胞和原核细胞的比较：
类 别 原核细胞 真核细胞
细胞大小 较小（一般1～10um） 较大（1～100um）
细胞核 无成形的细胞核，无核膜、核仁、染色体，只有拟核 有成形的细胞核，有核膜、核仁和染色体
细胞质 只有核糖体，没有其它复杂的细胞器 有核糖体、线粒体等，植物细胞还有叶绿体等
细胞壁 细细胞壁主要成分是肽聚糖 细胞壁的主要成分是纤维素和果胶
增殖方式 二分裂 有丝分裂、无丝分裂、减数分裂
可遗传变异来源 基因突变 基因突变、基因重组、染色体变异
共性 都含有细胞膜、核糖体，都含有DNA和RNA两种核酸等
3、大分子物质的运输方式是胞吐和胞吞，需要消耗能量，依赖于细胞膜的流动性．
本题考查细胞中的一些重要化合物及其功能、原核细胞和真核细胞的形态和结构的异同，要求考生识记酶的概念，掌握酶的化学本质；识记物质运输方式，尤其是大分子物质的运输方式；识记原核细胞和真核细胞的形态和结构的异同，能结合所学的知识准确判断各选项．
7.【答案】D
【解析】解：A、动植物细胞DNA的提取通常不需要在无菌环境下进行，A错误；
B、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养不能加入抗生素，B错误；
C、一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误；
D、用紫外线照射30min,可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适置喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果，D正确。
故选：D。
消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌。常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌。
本题考查微生物的分离与培养，要求考生识记微生物实验中的消毒、灭菌的概念、具体方法和操作等知识，意在考查考生的识记和分析能力。
8.【答案】B
【解析】解：A、为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，分解蔗糖菌株的筛选需将蔗糖作为唯一碳源经多次传代培养以获得目标菌株，A正确；
B、要统计活菌数量可采用稀释涂布平板法，但不能采用平板划线法，B错误；
C、嗜盐单胞菌H可以在高盐浓度的液体环境下生存，杂菌会由于渗透失水而死亡，嗜盐单胞菌可以采用不需要灭菌的发酵系统来培育，C正确；
D、当菌株H在培育过程中需要向发酵罐中通入空气，说明该菌进行有氧呼吸，代谢类型为需氧型，D正确。
故选：B。
选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
本题主要考查的是微生物的分离和培养的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
9.【答案】D
【解析】解：A、体内基因治疗是用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因，体外基因治疗是先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后在体外完成基因转移，并将成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内，因此相对来说，体外基因治疗效果较为可靠，A错误；
B、基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，B错误；
C、目前基因治疗处于初期的临床试验阶段，由于技术、伦理等因素的限制，基因治疗只能用于某些疾病的治疗，C错误；
D、基因治疗的靶细胞若是体细胞，则获得的性状一般不会遗传给下一代，D正确。
故选：D。
基因治疗（治疗遗传病最有效的手段）
1、概念：把正常基因导入病人体内有缺陷的细胞中，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。例：将腺苷酸脱氨酶（ADA）基因导入患者的淋巴细胞，治疗复合型免疫缺陷症。
2、种类：体外基因治疗和体内基因治疗（注意两者的区别），其中效果比较可靠的是体外基因治疗。体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内，如腺苷酸脱氨酶基因的转移。体内基因治疗：用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因的方法。
3、用于基因治疗的基因种类：正常基因、反义基因、编码可以杀死癌变细胞的蛋白酶基因（自杀基因）。
本题主要考查的是基因工程在医疗方面的具体应用的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
10.【答案】A
【解析】解：A、同一个体不同体细胞都是由同一个受精卵分裂和分化而来，其遗传物质相同，而生殖细胞遗传物质减半，全能性大小也不相同，一般分化程度高的全能性低，A错误；
B、具有某种生物全部遗传信息的细胞都具有全能性的特点，都有发育成个体的潜能，B正确；
C、生物体内的细胞因基因的选择性表达不能表现出全能性，需要离体培养且形成新的个体才能表现出全能性，C正确；
D、通过植物组织培养能将分化的植物细胞离体培养成新的植株，可证明分化的植物细胞具全能性，D正确。
故选：A。
关于细胞的“全能性”，可以从以下几方面把握：
（1）概念：细胞的全能性是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。
（2）细胞具有全能性的原因是：细胞含有该生物全部的遗传物质。
（3）细胞全能性大小：受精卵＞干细胞＞生殖细胞＞体细胞。
（4）细胞表现出全能性的条件：离体、适宜的营养条件、适宜的环境条件。
本题考查细胞全能性的相关知识，要求考生识记细胞全能性的概念、能对细胞全能性大小进行比较，掌握细胞全能性体现的标志，能结合所学的知识准确判断各选项，属于识记和理解层次的考查。
11.【答案】A
【解析】解：A、愈伤组织在一定条件下才能再分化出根和芽，A错误；
B、愈伤组织没有叶绿体，不能进行光合作用，其代谢类型是异养需氧型，B正确；
C、愈伤组织处于分生状态，易受外因影响而产生突变，C正确；
D、愈伤组织是植物细胞脱分化形成的，其全能性高，D正确。
故选：A。
1、植物组织培养：离体的植物组织、器官或细胞（外植体）愈伤组织胚状体→植株（新植体）。
2、愈伤组织的特点：高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织（色浅）。
本题考查植物组织培养的相关知识，要求考生识记植物组织培养的具体过程、条件等基础知识，能结合所学的知识准确答题。
12.【答案】C
【解析】解：A、茎尖一般没有病毒积累，分裂能力强，可作为植物组织培养的材料，A正确；
B、花瓣细胞属于体细胞，可作为植物组织培养的材料，B正确；
C、花粉是经减数分裂形成的，在此过程中发生了基因重组，因而不一定能保持亲本的优良性状，且花粉培养获得是单倍体植株，C错误；
D、叶片细胞属于体细胞，可作为植物组织培养的材料，D正确。
故选：C。
植物的芽、茎尖或根尖的组织细胞一般没有病毒积累，具有较强的分裂能力，全能性程度高，分化程度相对较低，容易脱分化，因此可作为植物组织培养的材料。
本题考查植物组织培养的相关知识，要求考生识记植物组织培养的概念及适宜材料，能根据题干要求做出准确的判断。
13.【答案】B
【解析】解：A、用于植物组织培养的外植体就是指离体培养的植物器官或组织，外植体应选择分裂旺盛的部分，如根尖、茎尖等，A正确；
B、植物组织培养时，常常需要添加植物激素，比如生长素和细胞分裂素，B错误；
C、培养基中添加蔗糖的目的是提供营养，同时调节渗透压，维持细胞正常形态，C正确；
D、茎尖位于植物分生区附近，病毒极少，甚至无病毒。因此，若要获得脱毒苗，一般选取植物体的茎尖组织进行培养，D正确。
故选：B。
植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。植物组织培养包括脱分化和再分化两个重要的步骤，这两个步骤都需要植物激素诱导，但植物激素的比例不同。
本题考查植物组织培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题是解答本题的关键。
14.【答案】C
【解析】
【分析】
本题考查动物细胞培养过程，特别是该过程中胰蛋白酶的作用，只要考生识记相关知识点即可正确作答，属于考纲识记层次的考查。对于此类试题，考查在平时的学习过程中，要学会构建知识网络结构，避免不必要的错误。
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。所以在动物细胞培养时，首先要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，以分解组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞。
【解答】
A、胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，A错误；
B、胰蛋白酶的作用不是分解培养基的蛋白质，B错误；
C、胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞，C正确；
D、胰蛋白酶用于分解细胞外的物质，D错误。
故选：C。
15.【答案】C
【解析】解：A、受精卵需要在体外培养形成早期胚胎后才可移植入母体的子宫，A正确；
B、三亲婴儿的细胞核基因一半来自母亲，一半来自父亲，所以染色体来自母亲和父亲提供的细胞核，B正确；
C、看图可知：三亲婴儿采用了体外受精的技术手段，三亲婴儿的染色体一半来自于母亲提供的细胞核，C错误；
D、三亲婴儿的培育过程采用了核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术等，D正确。
故选：C。
分析题图：图示表示三亲婴儿的培育过程，由图可知，三亲婴儿的培育采用了核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术等。
本题结合图解，考查胚胎工程的相关知识，要求考生识记胚胎工程涉及的技术手段及其应用，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查。
16.【答案】C
【解析】解：A、用促性腺激素对供体羊进行超数排卵处理，可以获得较多的卵母细胞，A错误；
B、采集到的精子需要在获能溶液中进行获能培养，B错误；
C、人工受精后，若在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体或观察到雌雄原核，说明卵子已经受精，C正确；
D、胚胎分割后获得的胚胎基因型相同，D错误。
故选：C。
胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞等技术。胚胎移植时，供受体需要处于相同的生理状态；胚胎分割产生的胚胎基因型相同。
本题考查胚胎工程的相关知识，要求考生识记胚胎移植的基本程序；识记体外受精的过程；识记胚胎分割的特点，能结合所学的知识准确答题。
17.【答案】B
【解析】解：A、克隆猫与提供体细胞核的名为“大蒜”的猫的遗传物质基本相同，A错误；
B、克隆猫是利用体细胞进行细胞核移植得到的，属于无性生殖，B正确；
C、克隆猫与代孕母猫的遗传物质不相同，代孕猫提供的是供胚胎发育的适宜环境，C错误；
D、克隆猫的产生说明动物细胞核有全能性，由于卵母细胞的细胞质中也存在遗传物质，因此克隆猫的性状与供体猫的性状不完全相同，D错误。
故选：B。
1、动物细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆动物。动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核具有全能性。克隆动物的遗传物质来自双亲，其核遗传物质来自供核生物，而细胞质基因来自提供细胞质的生物。
2、胚胎移植的生理学基础：
（1）动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的，这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。
（2）早期胚胎在一定时间内处于游离状态，这就为胚胎的收集提供了可能。
（3）受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体的存活提供了可能。
（4）供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
本题考查动物细胞核移植和胚胎移植的相关知识，意在考查学生对所学知识的理解与掌握程度，难度不大。
18.【答案】D
【解析】解：A、三种限制酶作用的化学键相同，都是磷酸二酯键，A正确；
B、三种限制酶切割DNA分子后能形成相同的黏性末端，即CTAG，B正确；
CD、BamHⅠ和BglⅡ的识别序列中含有MboⅠ的识别序列，因此能被BamHⅠ或BglⅡ切割的位点也能被MboⅠ切割，但能被MboⅠ切割的位点不一定能被BamHⅠ或BglⅡ切割，C正确；D错误。
故选：D。
限制酶：
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
本题考查限制酶的相关知识，要求考生识记限制酶的特点及作用，能根据图中信息准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查。
19.【答案】C
【解析】解：A、原核细胞的分裂方式为二分裂，A错误；
B、在不同细胞分化过程中，基因表达产生的蛋白质有些是相同的，如呼吸酶、ATP 合成酶等，B错误；
C、在神经胶质细胞中某些基因进行了表达，产生了与神经干细胞不同的mRNA，C正确；
D、细胞癌变过程是基因突变的结果，根本原因是原癌基因或抑癌基因发生基因突变，D错误；
故选：C。
1、细胞分化是指在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程.细胞分化的意义：使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率；
2、细胞癌变本质是原癌基因和抑癌基因发生基因突变引起。
本题考查细胞的生命历程中增殖、分化、癌变的特征和机制，需要充分理解细胞形态、结构和功能发生变化机制、不同特征之间的联系，可借助概念图、表格等学习工具进行总结归纳。
20.【答案】A
【解析】A、新鲜鳜鱼应先宰杀冲洗干净，但高度白酒只能杀灭鳜鱼表面的微生物，且不包括芽孢和孢子，所以属于消毒，并不是灭菌，A错误；
B、食盐、香辛料等不仅能调味，而且还能防止杂菌污染，具有防腐功能，B正确；
C、由题干信息可知，制作臭鳜鱼利用的是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，故在腌制时，要将鱼体整齐叠放并进行压实处理，创造无氧环境，C正确；
D、发酵环境控制不严，会导致杂菌污染，可能会存在食品安全隐患，D正确。
故选：A。
1、由题干可知，制作臭鳜鱼利用的是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
2、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
本题考查传统发酵技术，要求考生识记相关传统发酵的操作和消毒与灭菌的区别，意在考查考生的理解和运用能力。
21.【答案】ABC
【解析】解：A、紫外线能提高基因突变率，故用紫外线照射目的是提高野生型谷氨酸棒状杆菌突变率，A正确；
B、由图观察可知，图甲中菌落分散、随机或均匀分布在平板表面，接种操作是稀释涂布平板法，故接种操作需用涂布器把菌液均匀涂到甲的表面，B正确；
C、乙中新出现的N菌种为精氨酸依赖型菌，而M菌种为野生型谷氨酸棒状杆菌，甲培养基上只有野生型谷氨酸棒状杆菌，没有出现精氨酸依赖型菌，说明甲所用培养基缺少精氨酸，甲培养基是一种选择培养基，C正确；
D、从图中可看出，乙中新出现的N菌种为精氨酸依赖型菌，而M菌种为野生型谷氨酸棒状杆菌，精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，故目的菌N扩大培养后可用于工业化生产鸟氨酸，D错误。
故选：ABC。
图表示将紫外线照射处理的菌液接种在缺乏精氨酸的培养基上，因此甲中M表示野生型谷氨酸棒状杆菌；向培养基中添加某物质精氨酸后继续培养，其中M为野生型谷氨酸棒状杆菌，N为精氨酸依赖型菌。
本题考查微生物的培养与分离的相关知识，要求学生理解识记有关技术的原理和操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节。
22.【答案】BD
【解析】解：A、pmi基因编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长，故可以作为标记基因可以鉴别受体细胞中是否含有目的基因，A正确；
B、若psy基因和crtⅠ基因的序列中含有用到的限制酶的识别序列，则会破坏目的基因，B错误；
C、可通过基因枪法、花粉管通道法等将目的基因导入水稻的受体细胞，C正确；
D、PCR可扩增特定基因，但要检测目的基因是否表达应该用抗原-抗体杂交法，D错误。
故选：BD。
基因表达载体的成分：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。
本题主要考查基因工程的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。
23.【答案】BC
【解析】
【分析】
本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，难度不大。
1、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。
2、产品不同，分离提纯的方法一般不同。（1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；（2）如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。
3、发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。4、发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。
【解答】
A、发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，A错误；
B、由分析可知，发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，B正确；
C、在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢途径，C正确；
D、单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，D错误。
24.【答案】BCD
【解析】解：A、DNA复制只能从5'到3′合成子链，PCR过程中，Taq酶是在引物的3'向后延伸的，因此应选取B和C作为引物，A错误；
B、不能同时用Pst I和HindⅢ切割质粒，会导致质粒上无抗性基因，无法检测目的基因是否插入，B正确；
C、限制酶的作用部位是图丙中的②磷酸二酯键，C正确；
D、从图丁中可以看出，质粒是一种环状的DNA分子，D正确。
故选：BCD。
1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及操作步骤，掌握各操作工具的作用及操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题。
25.【答案】ABC
【解析】解：A、富集培养基是液体培养基，不需要添加琼脂，A错误；
B、实验室分离塑料降解菌时应以在培养基中加入塑料作为唯一碳源，不能加入葡萄糖，B错误；
C、将转接至固体斜面培养基上的不同菌落置于4℃的冰箱临时保存，长期保存用的是甘油管藏法，C错误；
D、微小杆菌YT2生活在黄粉虫的消化道内，若杀死微小杆菌YT2，黄粉虫无法消化塑料，可推测该菌和黄粉虫幼虫的种间关系是互利共生，D正确。
故选：ABC。
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
本题主要考查微生物的选择培养，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力，能够运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。
26.【答案】酵母菌 酵母菌呼吸作用产生的CO2溶解在发酵液中，导致pH降低，发酵液中酵母菌可生长繁殖，而多数微生物的生长繁殖受到抑制 升高发酵温度、通入无菌空气等 选择培养基 稀释涂布平板 周围有透明圈
【解析】解：（1）果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧菌，在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖而绝大多数微生物都因无法适应这一环境而受到抑制，因此家庭制作高粱果酒的酿酒缸并非处于无菌的环境，但发酵液却少有被杂菌污染。
（2）醋酸发酵的菌种是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，最适温度为30-35°C；酒精发酵的菌种是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，最适温度为18-30°C，因此进行醋酸发酵时，发酵条件与酒精发酵时条件相比，主要的区别是发酵温度更高，需要通入无菌空气。
（3）该培养基的目的是为了筛选出能产生醋酸的醋酸菌，故属于选择培养基。后续需要挑单菌落，故需要使用稀释涂布平板法进行微生物接种分离。培养一段时间后，因为醋酸菌可产生醋酸，进而溶解培养基中的碳酸钙进而形成透圈。所以将周围含有透明圈的菌落挑出，即是目的菌。
故答案为：
（1）酵母菌 酵母菌呼吸作用产生的CO2溶解在发酵液中，导致pH降低，发酵液中酵母菌可生长繁殖，而多数微生物的生长繁殖受到抑制
（2）升高发酵温度、通入无菌空气等
（3）选择培养基 稀释涂布平板 周围有透明圈
1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。在有氧的情况下酵母菌生长繁殖速度快，把糖分解成二氧化碳和水。在无氧的环境中酵母菌把糖分解成酒精和二氧化碳。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
本题主要考查传统发酵技术的相关知识，需要注意的细节较多，如果酒、果醋发酵的原理、所需菌种、发酵过程等，需要学生能把握知识的内在联系，并利用相关知识综合解决问题的能力。
27.【答案】能吸收周围环境中DNA分子 稀释涂布平板 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；可以避免培养基中的水分过快地挥发 大肠杆菌属于原核生物，没有内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工 使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达 不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制
【解析】解：（1）将目的基因导入微生物细胞时常有钙离子转化法，即先用Ca2+处理微生物细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将含目的基因的表达载体导入其中进行培养。
（2）稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。由于一个活菌可形成一个菌落，因此通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。因此在培养过程用稀释涂布平板法进行菌种纯化、分离并计数。用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，这样既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；又可以避免培养基中的水分过快地挥发。由于大肠杆菌是原核生物，其细胞中无内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工，因此与人体自身合成的ECF蛋白相比，大肠杆菌表达的ECF蛋白往往生物活性较低。
（3）动物的唾液腺能表达高活性的ECF蛋白，这意味着唾液腺是表达ECF蛋白的一个理想组织。科学家尝试利用转基因克隆猪作为生物反应器，在其唾液腺高效合成ECF，构建重组质粒时，需要将ECF基因与特定的启动子重组在一起，目的是使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达。乳腺生物反应器需是处于生殖期的雌性动物才可生产ECF蛋白，因此与传统的乳腺生物反应器相比，唾液腺生物反应器的优点有不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制。
故答案为：
（1）能吸收周围环境中DNA分子
（2）稀释涂布平板 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；可以避免培养基中的水分过快地挥发 大肠杆菌属于原核生物，没有内质网和高尔基体，不能对ECF蛋白进行加工
（3）使目的基因在唾液腺细胞中特异性表达 不受年龄限制、不受性别的限制、不受特殊生理状态限制
1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、将目的基因导入微生物细胞常用钙离子转化法：用Ca2+处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合（在缓冲液中）→一定温度下，感受态细胞吸收DNA分子，完成转化。
3、乳腺生物反应器是利用转基因动物的乳汁生产某些药用蛋白，乳腺生物反应器需是处于生殖期的雌性动物才可生产药用蛋白，而唾液腺生物反应器则是任何生长期的雌雄动物均可生产。
本题考查基因工程、微生物分离和培养，要求考生识记基因工程的操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，了解基因工程技术的应用及实例；识记稀释涂布平板法的原理及用途，能结合所学的知识准确答题。
28.【答案】95%空气和5%的CO2 血清 定期更换培养液 病毒 不会产生免疫排斥反应 从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题
【解析】解：（1）动物细胞应在的含有95%空气和5%的CO2的混合气体的恒温培养箱中培养，另外为满足细胞对未知因子的需求，在培养基需加入血清等成分。培养过程中为及时清除代谢产物需定期更换培养液。
（2）据图可知，将基因导入宿主细胞所用的载体为病毒。
（3）由于IPS细胞可以来自自身体细胞的诱导，ES细胞可以来自自身胚胎，因此培育人造组织器官的优点是不会产生免疫排斥反应。
（4）ES细胞应用存在部分争议的原因是：从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题。
故答案为：
（1）95%空气和5%的CO2 血清 定期更换培养液
（2）病毒
（3）不会产生免疫排斥反应
（4）从囊胚内细胞团获得的ES细胞是扼杀胚胎获得的，因而用于再生医学涉及人类伦理问题
1、题图分析：图中，①分离和培养宿主细胞；②将若干个相关的基因导入宿主细胞；③将导入基因的细胞在ES细胞专用培养体系中培养，同时根据需要加入相应物质以促进重编程；④出现ES样克隆后进行iPS细胞的鉴定（细胞形态、表观遗传学、体外分化潜能等方面）。
2、动物细胞培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。
（3）适宜的温度和pH：
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
本题考查细胞工程和胚胎工程，考查学生识记基础知识的能力。能综合运用所学知识解决社会生活中的一些生物学问题。
29.【答案】维持培养液的pH 抗生素 定期更换培养液 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞 乙和丙 能产生（特异性强、灵敏度高的）抗cTnI抗体的杂交瘤细胞 动物细胞培养
【解析】解：（1）动物细胞培养时将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体环境中，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（2）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素。为了防止有害代谢物的积累，可采用定期更换培养液的方法，以便清除代谢物。
（3）为了提高淋巴细胞的免疫能力，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞，一般通过3次注射相应抗原实现。最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合。
（4）由图可知：杂交瘤细胞需要对甲筛选，因此乙和丙应该是筛选得到的杂交瘤细胞；其中①代表用特定的选择培养基进行筛选，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，就能获得足够数量的能分泌抗cTnI抗体的细胞。
（5）单克隆抗体生产过程在使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞形成杂交瘤细胞的过程中应用到了动物细胞融合，在生产单克隆抗体的过程中应用了动物细胞培养技术。
故答案为：
（1）维持培养液的pH
（2）抗生素 定期更换培养液
（3）加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞
（4）乙和丙 能产生（特异性强、灵敏度高的）抗cTnI抗体的杂交瘤细胞
（5）动物细胞培养
1、在体外培养杂交瘤细胞时，培养液中通常加入血清或血浆等天然成分，将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体环境中进行培养，CO2的主要作用是维持培养液的pH；为防止有害代谢物的积累，需要定期更换培养液；动物细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。
2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
本题结合图解，考查动物细胞工程的相关知识，要求考生识记动物细胞培养的过程及条件；识记单克隆抗体制备的过程，掌握单克隆抗体的优点及应用，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题。
30.【答案】PCR 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 该酶会破坏GM-CSF基因 防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接 使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 氨苄青霉素 四环素
【解析】解：（1）PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，可大量获得目的基因，故体外大量获得GM-CSF基因的方法是PCR。引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，其作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
（2）由图甲可知，限制酶BamH I会破坏目的基因（GM-CSF基因），因此构建GM-CSF基因表达载体时，不选择限制酶BamH I。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，故与只选择EcoR I相比，选择Pst I和Hind III两种限制酶同时处理目的基因和质粒的优点是防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接。
（3）将GM-CSF基因表达载体导入微生物之前，一般先用Ca2+处理微生物，其目的是使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（4）由图可知，在构建基因表达载体时，抗四环素基因被限制酶Pst I和Hind III破坏了，而抗氨苄青霉素基因是完整的，即重组质粒上只含抗氨苄青霉素基因这一种标记基因，普通质粒上含抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因两种标记基因，故筛选时，应先用含有氨苄青霉素的培养基1筛选已导入质粒的大肠杆菌，再将培养基1中的菌落分别单独接种到含四环素的培养基2中进行筛选，若在培养基2中未形成菌落，则其在培养基1中形成的对应菌落是由含重组质粒的大肠杆菌繁殖而成的。
故答案为：
（1）PCR 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
（2）该酶会破坏GM-CSF基因 防止GM-CSF基因、质粒的自身环化，防止反向连接
（3）使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态
（4）氨苄青霉素 四环素
PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制，需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物（使 DNA聚合酶能够从引物的 3'端开始连接脱氧核糖核苷酸）、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），过程包括：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
本题主要考查的是基因工程的基本操作的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
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