人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序（共43张PPT）
文档属性
| 名称 | 人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序（共43张PPT） |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 2.4MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（新课程标准） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2014-11-19 16:01:02 | ||
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文档简介
课件43张PPT。1.2 基因工程的基本操作程序知识回顾：基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。一、目的基因的获取1. 从基因文库中获取目的基因1. 基因文库的概念:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的
群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2. 基因文库的种类:基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，
如：cDNA文库基因文库的构建方法① 基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组载体基因组文库导入受体菌中储存② cDNA文库的构建-----逆转录法： 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存基因的结构非编码区非编码区编码区RNA聚合酶结合位点外显子内含子终止子启动子原核真核原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。：编码蛋白质 ,连续不间断编码区非编码区②调控遗传信息表达,上
游的RNA聚合酶结合位点:基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区内含子 外显子 启动子终止子编码区上游 编码区下游 编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列
内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有RNA聚合 酶结合位点(启动子)。与RNA聚合酶结合位点基因结构思考？真核生物的基因用逆转录法得到的
cDNA与原基因相同吗？真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA逆转录酶转录剪接逆转录复制启动子终止子基因不含非编码序列。即不含非编码区和内含子基因组DNA文库与cDNA文库的比较小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以2.利用PCR技术扩增目的基因多聚酶链式反应体外特定DNA片段PCR技术的操作过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键单链DNA双链DNA链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍一PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，
理论上至少需要几个引物？2×（2n-1）(n为循环次数)（24-1）×2=303. 人工合成法 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用DNA合成仪人工合成蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化学合成推测推测思考：化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？3.人工合成法（真核生物）
反转录法目的基因的信使RNA目的基因化学合成法肽链氨基酸序列信使RNA序列基因的核苷酸序列目的基因合成推测推测单链DNA合成 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，
如：cDNA文库二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口
获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口
两个黏性末端注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构
②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键
③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少
④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 三、将目的基因导入受体细胞1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植 物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。三、目的基因导入受体细胞构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：1、目的基因导入植物细胞的方法（2）基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞 ①操作方法：利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 ② 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物1、目的基因导入植物细胞的方法（3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济。 ③例：转基因抗虫棉2、将目的基因导入动物细胞①方法：显微注射法①程序目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：
繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
②常用菌：大肠杆菌
③常用法：Ca2+处理获得感受态细胞
④过程：Ca2+处理
大肠杆菌感受态
细胞感受态细胞
吸收DNA表达载体
与感受态
细胞混合小结：将目的基因导入受体细胞
四、目的基因的检测与鉴定导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？1真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。2目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测1、鉴定——分子水平的鉴定
转基因生
物的DNA探针15N15N14N14N（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了
目的基因基因探针：放射性同位素等标记的DNA分子方法——DNA分子杂交技术变性变性1、鉴定——分子水平的鉴定
变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA探针15N15N转基因生物
的mRNA14N14N1、鉴定——分子水平的鉴定
提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交Bt毒素蛋白将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质 出现杂交带脱分化组织培养2、鉴定——个体水平的鉴定
抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。思考？不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？课堂练习1、有关基因工程的叙述中，错误的是( )
A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A课堂练习2、下列属于获取目的基因的方法的是( )
①利用mRNA反转录形成
②从基因组文库中提取
③从受体细胞中提取
④利用PCR技术
⑤利用DNA转录
⑥人工合成
A.①②③⑤ B.①②⑤⑥
C.①②③④ D.①②④⑥D课堂练习3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ）
A、限制酶只在获得目的基因时才用
B、重组质粒的形成在细胞内完成
C、质粒都可作为运载体
D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D【拓展深化】
工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。
课堂练习4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ）
A、人工合成目的基因
B、目的基因与运载体结合
C、将目的基因导入受体细胞
D、目的基因的检测和表达C【拓展深化】 只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对课堂练习即时应用(随学随练，轻松夺冠)
5．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是( )
A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性
D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达D博客地址：http://blog.163.com/sred4487@126优联系作者：sred4487@126.com秀课件尽在帅老衲
群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2. 基因文库的种类:基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，
如：cDNA文库基因文库的构建方法① 基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组载体基因组文库导入受体菌中储存② cDNA文库的构建-----逆转录法： 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存基因的结构非编码区非编码区编码区RNA聚合酶结合位点外显子内含子终止子启动子原核真核原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。：编码蛋白质 ,连续不间断编码区非编码区②调控遗传信息表达,上
游的RNA聚合酶结合位点:基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区内含子 外显子 启动子终止子编码区上游 编码区下游 编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列
内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有RNA聚合 酶结合位点(启动子)。与RNA聚合酶结合位点基因结构思考？真核生物的基因用逆转录法得到的
cDNA与原基因相同吗？真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA逆转录酶转录剪接逆转录复制启动子终止子基因不含非编码序列。即不含非编码区和内含子基因组DNA文库与cDNA文库的比较小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以2.利用PCR技术扩增目的基因多聚酶链式反应体外特定DNA片段PCR技术的操作过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键单链DNA双链DNA链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍一PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，
理论上至少需要几个引物？2×（2n-1）(n为循环次数)（24-1）×2=303. 人工合成法 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用DNA合成仪人工合成蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化学合成推测推测思考：化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？3.人工合成法（真核生物）
反转录法目的基因的信使RNA目的基因化学合成法肽链氨基酸序列信使RNA序列基因的核苷酸序列目的基因合成推测推测单链DNA合成 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，
如：cDNA文库二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口
获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口
两个黏性末端注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构
②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键
③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少
④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 三、将目的基因导入受体细胞1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植 物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。三、目的基因导入受体细胞构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：1、目的基因导入植物细胞的方法（2）基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞 ①操作方法：利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 ② 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物1、目的基因导入植物细胞的方法（3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济。 ③例：转基因抗虫棉2、将目的基因导入动物细胞①方法：显微注射法①程序目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：
繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
②常用菌：大肠杆菌
③常用法：Ca2+处理获得感受态细胞
④过程：Ca2+处理
大肠杆菌感受态
细胞感受态细胞
吸收DNA表达载体
与感受态
细胞混合小结：将目的基因导入受体细胞
四、目的基因的检测与鉴定导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？1真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。2目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测1、鉴定——分子水平的鉴定
转基因生
物的DNA探针15N15N14N14N（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了
目的基因基因探针：放射性同位素等标记的DNA分子方法——DNA分子杂交技术变性变性1、鉴定——分子水平的鉴定
变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA探针15N15N转基因生物
的mRNA14N14N1、鉴定——分子水平的鉴定
提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交Bt毒素蛋白将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质 出现杂交带脱分化组织培养2、鉴定——个体水平的鉴定
抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。思考？不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？课堂练习1、有关基因工程的叙述中，错误的是( )
A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A课堂练习2、下列属于获取目的基因的方法的是( )
①利用mRNA反转录形成
②从基因组文库中提取
③从受体细胞中提取
④利用PCR技术
⑤利用DNA转录
⑥人工合成
A.①②③⑤ B.①②⑤⑥
C.①②③④ D.①②④⑥D课堂练习3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ）
A、限制酶只在获得目的基因时才用
B、重组质粒的形成在细胞内完成
C、质粒都可作为运载体
D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D【拓展深化】
工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。
课堂练习4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ）
A、人工合成目的基因
B、目的基因与运载体结合
C、将目的基因导入受体细胞
D、目的基因的检测和表达C【拓展深化】 只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对课堂练习即时应用(随学随练，轻松夺冠)
5．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是( )
A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性
D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达D博客地址：http://blog.163.com/sred4487@126优联系作者：sred4487@126.com秀课件尽在帅老衲