人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养

课件49张PPT。第一章 微生物培养技术济南一中生物组 周靖微生物的类群病毒
原核生物：
真菌：
原生动物：特点：结构简单,代谢产物多样、生长繁殖迅速、易于培养、突变率高等，是生物学基础研究和实践应用中的重要材料.一、认识微生物细菌、放线菌、蓝藻、支原体、衣原体、立克次氏体酵母菌、霉菌、食用菌草履虫、变形虫、衣藻、团藻等细菌 常见的三种细菌典型形态
A.球菌 B.杆菌 C.弧菌细菌的构造细菌的特殊结构荚膜
鞭毛
芽孢关于芽孢
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢是休眠体，
不是繁殖体！菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异 放线菌微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的 ，如链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 等SARS病毒、 禽流感病毒病毒真菌如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构酵母菌和霉菌青霉二、微生物的分离和纯培养的基本操作程序（一）培养基的配制1、概念2、营养组成（1）碳源
（2）氮源
（3）生长因子:
（4）水
（5）无机盐
是微生物生长必需的微量有机物的统称,主要包括维生素、某些氨基酸、碱基（嘌呤、嘧啶）等，一般来源于天然物质。常用：无机：铵盐、硝酸盐
有机：蛋白质、氨基酸课本P83 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基P2第二段第五行（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基5.培养基的类型和用途 3.培养基的配制方法4.倒平板将灭菌后的培养基倒入培养皿中，制备平板培养基（2）按功能分: 选择培养基和鉴别培养基选择培养基鉴别培养基：如加入伊红-美蓝，可鉴别大肠杆菌（若有大肠杆菌，则菌落成深紫色，并带有金属光泽）（3）按成分来分:天然培养基和合成培养基能让特定的微生物生长，抑制其它微生物的生长，从而将所需要的微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基，叫做选择培养基。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物（二）接种1、平板划线法2、稀释涂布平板法3、稀释混合平板法接种针与涂布器平板化⑴平板划线法交叉划线法连续划线法（1）平板划线法⑴平板划线法交叉划线法连续划线法问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6支试管，分别加入9ml无菌水101102103104105106⑵稀释涂布平板法a.梯度稀释菌液：菌液b.涂布平板：滴灼试涂取0.1ml菌悬液微量 移液器Pour plate(3)稀释混合平板法（课本P14)（三）培养1、温度2、PH值3、氧气（四）观察记录（五）纯化培养条件：注意：培养皿倒置单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。——菌落培养基配制完成
最后一步，一定是
调整PH值三、无菌技术无菌工作室无菌工作台1、无菌环境泛指在培养微生物的操作中，防止外来杂菌的污染的方法（1）灭菌：　　使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2、消毒与灭菌灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅　（2）消毒：
　　使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法：100 ℃ 5-6min巴氏消毒法：70-75 ℃ 30min或80 ℃ 15min化学药剂消毒法：酒精、氯气紫外线消毒：实验前30min煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药剂（70%酒精等）
紫外线针对不耐高温的液体接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法
干热灭菌
高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养基消毒方法灭菌方法实验操作者的衣服【典例解析】例1．有关微生物营养物质的叙述中，正确的是
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量D例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是
A.防止杂菌污染
B.消灭杂菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前B例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：
（1）右表培养基可培养的微生物类型
是 。
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
如不想浪费此培养基，可再加入 .自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。
（4）表中营养成分共有
类。固氮微生物 3 调整pH 例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（6）右表中各成分重量确定的原则是
。
（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 微生物数量的计算直接计数法间接计数法（一）直接计数法 ——显微镜直接计数法 将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出体积内的微生物总数。一般适用于纯培养悬浮液中单细胞菌体的计数。
优点：直观、快速、操作简单
缺点：
不能区分死菌与活菌，所得为总数，结果往往偏高
不适于对运动细菌的计数
需要相对高的细菌浓度
个体小的细菌在显微镜下难以观察
1、血球计数板 计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网。 每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室体积为l×0.1＝0.1mm3。
(注意：1 ml ＝ 1000 mm3 )血球计数板计数室有两种刻度1大格=16中格25×16=400小格1大格=25中格
16 ×25 =400小格1、稀释
用无菌生理盐水将待测菌稀释成适当浓度的菌悬液。
2、镜检计数室
加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则用自来水冲洗，95%乙醇棉球轻轻擦洗，然后用吸水纸吸干或电吹风吹干。
3、加样
取洁净的血球计数板一块，盖上盖玻片。将菌悬液摇匀，用无菌滴管吸取少许，沿盖玻片边缘滴入一小滴，让菌液利用液体的表面张力充满计数区，静置5min。
注：取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生
2、操作步骤4、显微镜计数（以16小格 ×25中格的 规格为例）
在高倍下(40X)计数对两个计数室记数，方法：每个计数室选5个中格(4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数，求得每个中方格的平均值，再乘上25即为大方格中的总菌数，最后换算成1ml菌液中的总菌数。
注：依照“数上不数下，数左不数右“的原则进行计数
计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体
一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜
计数的结果是两个计数室所记菌数的平均值
5、清洗血球计数板
计数完毕，将血球计数板在水龙头下流水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后电吹风吹干，镜检确认计数区无残留菌体或其它沉淀。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。3、计数方法所统计的5个中格的总菌数A，菌液的稀释倍数为B，则1ml菌液含有的菌数为：
1大格子=25中格（二）间接计数法 ——稀释平板计数法 将待测样品按比例做一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定稀释度、一定量的稀释样液接种到平板上，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。
经过培养，由单个微生物生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个菌落代表样品中的一个微生物个体。统计培养基中的出现的菌落，即可推算出样品中的活菌数。能检测活菌数和杂菌数
时间长，繁琐，测定值时常受各种因素影响
由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成一个单菌落也可能来自样品中的2-3或更多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往偏低
优缺点：编号 稀释菌样 吸取菌样
倾注平板 恒温培养 计数1、操作步骤104 105 106原样 101 102 103 104 105 106
0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.2ml0.2ml0.2ml0.5ml6支试管，分别加入4.5ml无菌水2、计数原则（1）细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30-300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10-100个菌落为宜。
（2）每个稀释度取3个平板平均值，同稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大。
（3）由10-4、10-5、10-6稀释度计算出的总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。3、注意事项稀释菌液与取样时，每支移液管只能用于一个稀释度
倾注平板时的培养基温度要合适
混匀样品时，注意勿用力过猛，以免培养基与含菌混合液溅到培养皿盖与皿壁上。
样品要充分混匀，操作熟练快速（15－20min完成），严格无菌操作，尽量减小操作误差。4、思考（1）为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板？
（2）要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？
（3）当平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你 认为可能的原因是什么？下课