人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养（共67张PPT）

课件67张PPT。专题二 课题一 微生物的实验室培养一、培养基按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质基础知识根据物理性质的不同分类
固体培养基——微生物的分离、计数
半固体培养基——观察微生物的运动、鉴定菌种
液体培养基——常用于工业生产
鉴定菌种需要观察其菌落的特征,而要形成菌落必须用固体培养基、半固体培养基,而不能用液体培养基。因为在液体培养基中，菌体可移动无法形成菌落，从而导致无法鉴定菌种。 （一）培养基的分类菌落由单个细菌在适宜培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群体固体培养基半固体培养基液体培养基主要用于微生物的分离、计数等主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等主要用于工业生产需加入凝固剂，如琼脂半固体培养基：无动力 有动力(是否运动) 根据化学成分的不同分类
合成培养基——用化学成分已知的化学物质配成
——成分明确,常用于分类,鉴定等
天然培养基——用化学成分不明确的天然物质配成
——成分不明确,常用于工业生产（加蛋白胨，酵母粉等）根据用途的不同分类
选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。
如：
加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到金黄色葡萄球菌（耐盐细菌）
加青霉素可抑制细菌和放线菌的生长，分离酵母菌和霉菌
不加氮源的无氮培养基，分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基，分离自养型微生物
根据用途的不同分类
鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。
如：
伊红—美蓝培养基,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈黑色,并带有金属光泽,可以用来鉴别大肠杆菌。（二）微生物需要的营养物质及功能营养物质的种类 碳源
氮源
水
无机盐
特殊营养物质（生长因子） 凡是能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质无机碳源
CO2、NaHCO3等有机碳源
糖类（最常用）
脂肪酸、花生粉饼、石油等①合成微生物的细胞物质和一些代谢产物
②异养微生物的主要能源物质1、微生物的碳源（需要量最大） 自养型和异养型微生物分别能利用哪类碳源物质？思考
异养型微生物的碳源为
自养型微生物的碳源为
含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）无机氮源
N2、NH3、NH4+、NO3-（最常用）等有机氮源
尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质2、微生物的氮源牛肉膏是用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。
——主要作用是补充碳源、氮源、磷酸盐、维生素
蛋白胨用新鲜牛骨及牛肉混合提取，经过消化、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。
——主要作用是补充碳源、氮源、维生素
对于异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。无机氮源
N2、NH3、NH4+、NO3-（最常用）等有机氮源
尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物2、微生物的氮源 哪些微生物能够利用氮气？代谢类型是？
哪些微生物能够利用氨气？代谢类型是？
氮源能否为微生物提供能量？
思考3、微生物的特殊营养物质（生长因子）微生物生长不可缺少的微量有机物维生素、氨基酸、碱基等
天然物质包括：酵母膏，蛋白胨，动植物组织提取液等
酵母膏是采用新鲜酵母为原料，经酵母酶解自溶、分离过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有酵母自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色至浅棕色，较澄清。
产品富含蛋白质、氨基酸类、肽类、核苷酸、B族维生素、微量元素。
——主要作用是补充氮源和提供微生物生长的各种维生素及氨基酸及生长因子。 3、微生物的特殊营养物质（生长因子）微生物生长不可缺少的微量有机物维生素、氨基酸、碱基等
天然物质包括：酵母膏，蛋白胨，动植物组织提取液等
酶和核酸的组成成分为什么特殊营养物质不可缺少？
缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限。思考 请判断下列说法的正确性同一种物质不能既做碳源，又做氮源。
氨基酸属于哪一类营养物质。
碳源都能提供能量。
NaHCO3只能提供碳源。
无机氮源也能提供能量。
微生物都需要生长因子。
常见微生物主要的碳源、氮源、代谢类型不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、特殊营养物质的要求．①、目的要明确
根据所培养的微生物的种类、培养的目的等选择原料
②、营养要协调
注意各种营养物质的浓度和比例,最重要为碳源和氮源
的比
③、pH要适宜
细菌 中性或微碱性 放线菌 pH7.5~8.5
霉菌 酸性（三）培养基的配置原则二、无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止外来杂菌入侵（获得纯净培养物的关键）的方法。1）清洁和消毒2）灭菌 3）实验操作在酒精灯火焰附近进行 4）避免已经灭菌处理的材料用具与周
围的物品相接触1.注意事项：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢子是一种脱离亲本后能发育成新个体的单细胞或少数细胞的繁殖体。孢子一般有休眠作用，能在恶劣的环境下保持自有的传播能力，并再在有利条件之下才直接发育成新个体1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
2、巴氏消毒法：70-75 ℃煮30min或 80 ℃煮15min
3、化学药剂消毒法:用70%的酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源
4、紫外线或化学药物消毒法：紫外线照射30min，照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂等消毒液，加强消毒效果(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌——酒精灯火焰:
接种环、接种针、试管口、瓶口、其它金属用具
2、干热灭菌——干热灭菌箱(160-170℃加热1-2h)：
玻璃器皿、金属用具
3、高压蒸汽灭菌——高压蒸汽灭菌锅（100kPa、121 ℃维持15-30min）(2)灭菌的方法：灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。旁栏思考煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药剂（70%酒精等）
紫外线针对不耐高温的液体接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法
干热灭菌
高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）吸管实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养基1、消毒方法2、灭菌方法干热灭菌本实验目的：用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养阶段1：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基阶段2：纯化大肠杆菌三、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一
起加热?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于
水中，减少误差。1．计算 2.称量 3．溶化②加琼脂的目的是什么?仅作为凝固剂4、调pH 5、分装6．灭菌：
将培养基转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅。
将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。③在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有
培养基的锥形瓶的目的是什么？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，
在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中
杂菌污染的作用。④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？不能，因为培养皿要保持干燥，应该用
干热灭菌。7、倒平板待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以避免培养基表面的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。（二）纯化大肠杆菌接种方法有：
平板划线法和稀释涂布平板法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法将接种的培养基和未接种的培养基都放在37度恒温箱，培养12h和24h,观察并记录结果。菌种的保存1.临时保藏：
接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。
2.长期保存：
甘油冷冻管藏法实验报告目录
1.引言 (实验原理，实验背景，相关研究)
2.材料与方法
2.1 实验试剂及材料 （产地，价格，型号，规格）
2.2 重要仪器
2.3 方法 （具体实验参数）
2.3.1 xxxxxx
2.3.2 xxxxxx
3.结果与分析 （成功或失败的原因分析）
3.1 xxxxxx
3.2 xxxxxx
4.结论和创新点
5.继续研究计划
6.参考文献:
致谢答辩PPT参考模板四川省成都市第七中学
XXX XXX 环境因素对XXX的影响一、研究背景 二、设计思路 三、实验方法 五、结论和创新点 四、实验结果与分析 六、继续研究计划
关于研究对象
丹参系唇形科鼠尾草属植物。丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎,是中国沿用已久的传统中药之一，用于治疗心血管病,具有活血养血和益气作用。丹参主产于四川、安徽、江苏及河南等省。

一．研究背景不同地区丹参药材质量差别很大,栽培丹参的生长周期长且有效成分含量低,影响丹参有效成分积累的因素不清等给丹参临床使用和质量控制带来一定困难。设计思路二、设计思路
酶法水解BSA溶液反 应影 响因 素稳 定 性
电泳实验蛋白质纤维 染 色染色效果与结构的关系毒性实验三．研究的材料及方法实验试剂及材料
丹参幼苗：四川省中江市丹参种质资源基地
植物多糖多酚RNA提取试剂盒：北京BIO-TEK公司
ExTaqDNA聚合酶：自宝生物工程（大连）有限公司
丹参酮IIA标准品：中国药品生物制品鉴定所
重要仪器
PCR仪：HYBAID公司
凝胶成像系统及图片处理软件：KODAK公司
冷冻离心机：Gene公司
全波长分光光度仪：BECKMAN公司实验方法三．研究的材料及方法1 京尼平的制备与鉴别
京尼平苷按文献[9]所述的方法，在β-葡萄糖苷酶的催化下水解，采用乙醚萃取、重结晶等手段，得到了京尼平。与标准样品同时进行薄层层析（TLC）分析，以测定Rf值。
四、结 果3.1丹参在不同条件下的培养
3.2丹参叶、茎和根总RNA的提取
3.3对照组丹参相关基因的扩增
3.4丹参不同部位重要基因半定量PCR及丹参酮ⅡA含量分析
3.5不同环境培养下，丹参根部相关基因的半定量PCR3.2 丹参根，茎，叶总RNA的提取
分光光度计测得RNA的OD260和OD280值（均数±标准差）结构显示所提取的总RNA质量较高，没有明显的降解五、结论 通过对丹参根、茎、叶三个部位丹参酮ⅡA含量和相关基因表达的对比试验发现，丹参茎和叶都不含有丹参酮ⅡA。
养丹参获取丹参酮ⅡA的最佳条件是：温度20℃，光照时间为8 h/D，水分为丹参体重的100％。 创　新　点采用不同条件培养丹参，研究不同条件对丹参酮ⅡA相关基因的表达量的影响。研究光照时间,温度和水分对相关基因表达量的影响研究发现：光照时间，水分和温度对丹参酮ⅡA含量的影响显著。
展望
探究更多的环境因素的影响，如：对土壤的矿质元素,光照强度等进行分析，探究适合丹参酮ⅡA含量的最佳培养条件，用于提高农业生产产量。
参考文献[1] 郭宝林，林生，冯毓秀等。丹参主要居群的遗传关系药材道地性的初步研究。中草药，2002,33(12):1113-1116致 谢 衷心感谢对本实验进行指导的
所有老师和在座的评委老师!