人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养（共42张PPT）

课件42张PPT。专题２ 微生物的培养与应用课题１
微生物的实验室培养学习目标1、了解有关培养基的用途和种类；知道培
养不同的微生物需要不同的培养基。
2、了解培养基的基本成分，理解尽管培养
基的配方各不相同，但基本成分相似
3、掌握无菌技术操作的要求，能运用该技
术完成培养基的制备、倒平板、平板划
线等操作。
4、能区别消毒和灭菌，会运用常用的消毒
和灭菌方法。自学指导 怎样才能顺利达到上述目标？要靠大家紧张有效的自学。请同学们认真阅读教材P14-20，10分钟后进行检测。比一比，看谁知识掌握得最牢固.先学
（一）学生认真阅读教材P14-20，（教师巡视，保证每位学生都集中精力)(时间10分钟）
（二）提问：随机点名学生回答，如有错误，
教师引导其他学生更正、讨论。
（三）检测、板演
1.出示检测题
2.让三名学生板演，其他学生做到笔记本上，教师巡视，搜集检测中出现的错误。课堂检测1、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ）
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量D2、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ）
A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前B3、右表是某微生物培养基成分，请据此回答：
（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
如不想浪费此培养基，可再加入 .自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。
（4）表中营养成分共有 类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。
（6）右表中各成分重量确定的原则是 。
（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 后教
（一）更正：
1.教师公布答案、学生自改。
2.自己寻找错误原因或同桌之间小声讨论
（二）点评：
1. 对于学生讨论后不能解决的问题， 教师进行有针对性的分析和讲解
2. 评检测题，点拨知识点
一、基础知识：（一）培养基 培养基是按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（1）按物理性质来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。
（2）按功能来分:可分为选择培养基和鉴别培养基。
（3）按成分来分:可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容) 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 4.培养基的用途液体培养基：增菌
固体培养基：纯化，增菌
半固体培养基：动力检测，保种选择培养基加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:
分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基:
分离导入了目的基因的受体细胞
加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞P22 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基: 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
优点：营养成分丰富，培养效果好
缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;天然培养基：液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔半固体培养基：无动力 有动力(弥散)(是否运动) （二）无菌技术1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是稀释涂布平板法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 　（１）消毒定义：
　　使用较为温和化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部分微生物的过程（不包括芽孢和孢子）。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80
℃ 下煮15min
C、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等
进行皮肤消毒;氯气消毒水源
D、紫外线消毒
……(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法A、灼烧灭菌
B、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。
C、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维
持15-30min.(2)灭菌的方法： 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 无菌技术1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考 二、实 验 操 作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（计算）2.称量
按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL。 4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板（如教材17图示）。倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.
在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.微生物接种方法问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
2、长期保存：甘油冷冻管藏法(-20℃)三、结果分析与评价 （一）培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
（二）接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。本课题知识小结:当堂训练
《红对勾》P20 读题解题