课件20张PPT。专题2 细胞工程2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体思考题1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?
酶解法,如纤维素酶或果胶酶
2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?
无需,因为动物细胞无细胞壁
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?
离心、电激等物理方法;PEG等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个吗?
不能
植物体细胞杂交的意义:打破生殖隔离,克服远缘杂交不亲和的障碍,培育作物新品种。一、动物细胞融合有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。(一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。(二)动物细胞融合的过程杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。细胞A细胞B杂交细胞灭活的病毒物理法
化学法灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合,形成杂交细胞
(细胞膜具有一定的流动性)为什么灭活的病毒能作为诱导剂?因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。不灭活的病毒能作为诱导剂吗?
不能,因为不灭活的病毒会感染细胞。(三)动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、
人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法(同左)灭活的病毒物理(离心、振动、电激)
化学(聚乙二醇)诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体 什么是抗体?
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
B淋巴细胞(浆细胞)能产生抗体
(一)获得抗体的传统方法1、把某种抗原反复注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需的抗体。 产量低,纯度低,特异性差。2、缺点:人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的B淋巴细胞,形成细胞群。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念用单个B淋巴细胞进行克隆,得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体,这种抗体就叫做单克隆抗体。
遗憾的是,在体外培养条件下,单个B淋巴细胞是不可能无限增殖的探索2、怎样才能获得单克隆抗体?提示1:仅用细胞培养技术可行吗?提示2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?提示3:有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢?如何大量生产单克隆抗体?利用B淋巴细胞产生抗体的功能。
利用肿瘤细胞无限增殖的特性。
利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。
利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。
●杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖,又能产生专一抗体。 单克隆抗体的制备整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选:用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞第二次筛选(克隆化培养和抗体检测):筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。
单克隆抗体的概念:
由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖,也就是通过克隆,形成细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 (三)单克隆抗体的应用 与常规抗体相比,单克隆抗体特异性强,灵敏度高,并可大量制备。应用主要有:1、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载药物准确、高效、简易、快速 把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合,制成“生物导弹”。 资料:
目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病,用单克隆抗体作为诊断手段,是一个必然趋势。另外,用单克隆抗体做体内诊断,借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意,目前,主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。