【临门一脚】2015高考生物热点专题精确射靶热点十三 生物技术实践

热点十三 生物技术实践
【考点精要】
考点一. 微生物的培养与应用
1.培养基
（1）成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
（2）类型：①按培养基物理性质可分为固体 ( http: / / www.21cnjy.com )培养基和液体培养基两种，其中固体培养基用于菌种分离、鉴定、菌落计数等；液体培养基常用于科研或工业生产等。②按培养基的功能可分为选择培养基和鉴别培养基。
（3）制备培养基的流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
2.关于无菌技术
主要是指消毒和灭菌：实验室常用的灭菌方法有 ( http: / / www.21cnjy.com )灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌；常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒。对不同的对象需采用不同的消毒或灭菌方法。
3.菌种的纯化
（1）利用不同菌体的菌落特征不同分离菌种，常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
①平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀 ( http: / / www.21cnjy.com )释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以形成单个菌落。（稀释涂布平板法用途广泛，可以接种，也可以用于微生物的计数）
（2）选择培养，利用不同微 ( http: / / www.21cnjy.com )生物对营养需要的不同或对环境要求的不同，将不同微生物分开。（“选择培养”是否需要，应根据样品中的菌株数量的多少来确定）
4.微生物的计数
（1）方法一：稀释涂布平板法——统计活菌数
测定土壤中的细菌数，一般选用104、1 ( http: / / www.21cnjy.com )05、106倍的稀释液进行平板培养，测定放线菌一般选用103、104和105倍的稀释液进行平板培养，测定真菌一般用102、103和104倍的稀释液进行平板培养。实验时，每一浓度至少涂布3个平板，以增强实验的说服力和准确性。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少个活菌。
计数规则：选择菌落数在30～300的平板进行计数。
①计算方法：每克样品中的菌落数＝( ( http: / / www.21cnjy.com )C÷V)×M（C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数）
②设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
（2）方法二：显微镜直接计数法
原理：利用细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
缺点：不能区分活菌与死菌。
考点二. 果酒、果醋、腐乳、泡菜制作注意事项
1.果酒、果醋制作的注意事项
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前应先冲洗，再除去枝梗。（以避免去除枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。）
（2）防止发酵液被污染：①榨汁机要 ( http: / / www.21cnjy.com )洗净并晾干，发酵装置要洗净并用70%的酒精消毒；②若用简易的发酵装置，每隔一定时间排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等，③发酵瓶排气管用曲颈管，不用直管。
（3）控制发酵条件
果 酒 果 醋
温度 20℃左右，最适合繁殖；18～25℃，酒精发酵 30～35℃
氧气 前期通氧气，然后控制无氧条件 氧气充足
其他 时间：10～12天；pH：5.0～6.0 时间：约7～8天
2.腐乳制作的注意事项
（1）影响腐乳品质的条件：水、盐、酒、温度、 ( http: / / www.21cnjy.com )发酵时间等。①水的控制：含水量约70%，用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形。②盐的控制：盐浓度过高，会影响腐乳的口味；浓度过低，腐乳易腐败变质。③酒的控制：酒精含量一般控制在12%左右。酒精含量过高，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，杂菌繁殖快，豆腐易腐败。④温度的控制：温度为15～18℃，适合毛霉生长。发酵时间控制在6个月左右。
（2）防止杂菌污染：①用来 ( http: / / www.21cnjy.com )腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。②装瓶时，操作要迅速小心。加放卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。
（3）腐乳的发酵包括前期 ( http: / / www.21cnjy.com )发酵和后期发酵：前期发酵所发生的主要变化是毛霉在豆腐上的生长。发酵的温度为15～18 ℃，此温度不适于细菌、酵母菌和曲霉的生长，而适于毛霉生长。前期发酵的作用，一是使豆腐表面有一层菌膜包住，形成腐乳的“体”；二是毛霉分泌以蛋白酶为主的各种酶，有利于豆腐所含有的蛋白质水解为各种氨基酸。后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。通过腌制并配入各种辅料，使蛋白酶作用缓慢，促进其他生化反应，生成腐乳的香气。
3.泡菜制作的注意事项
（1）泡菜坛的选择：选择气密性好的泡菜 ( http: / / www.21cnjy.com )坛。用水封闭坛口使坛内与坛外空气隔绝，这是最简易的造成无氧环境的方法。这样，坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则会有许多需氧菌生长，蔬菜会腐烂。
（2）腌制条件的控制：腌制过程中要注意 ( http: / / www.21cnjy.com )控制腌制的时间、温度和食盐的用量。发酵时间受到温度的影响：18～20℃，腌制15天左右。温度高，时间短一些。温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短，都容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。
考点三. 植物有效成分的提取
1.植物芳香油提取方法的比较
提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法
实验原理 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 使芳香油溶解在有机溶剂中，再蒸发出有机溶剂可获得产品
方法步骤 （1）水蒸气蒸馏（2）分离油层（3）除水过滤 （1）石灰水浸泡、漂洗（2）压榨、过滤、静置（3）再次过滤 （1）粉碎、干燥（2）萃取、过滤（3）浓缩
适用范围 用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 适用原料颗粒细小，能充分浸泡在有机溶剂中的材料
优 点 简单易行，便于分离 成本低，易保持原料原有的结构和功能 出油率高，易分离
缺 点 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题 分离较为困难，出油率相对较低 使用的有机溶剂处理不当会影响植物芳香油的质量
2.实验流程设计
（1）玫瑰精油的提取实验流程
鲜玫瑰花+清水（1:4）→水蒸气蒸馏→油水混合物分离油层除水玫瑰油
（2）橘皮精油的提取实验流程：石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油。
（3）胡萝卜素的提取实验流程：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。
考点四. 植物组织培养
1.菊花的组织培养：
原理：植物细胞的全能性。
基本过程：离体的组织或细胞愈伤组织生根、发芽→幼苗→移栽→完整植物体。
影响因素：营养、激素、pH、温度、光照等。
实验操作：制备MS固体培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培。
2.月季的花药培养
花粉发育经历的时期：小孢子四分体时期→单核期→双核期。
花粉植株产生的途径：
影响培养的因素：材料的种类、年龄、保存时间的长短等。
实验操作：材料的选取、消毒→接种→培养。
考点五：生物技术在其他方面的应用
1．血红蛋白的提取和分离
（1）凝胶色谱法：根据相对分子质量 ( http: / / www.21cnjy.com )的大小分离蛋白质。相对分子质量大的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，从凝胶颗粒间隙向下移动，运动路程较短，移动速度较快，先从凝胶柱洗脱出来；相对分子质量小的蛋白质分子由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留，后从凝胶柱洗脱出来。
（2）电泳技术：在电场的作用下，利用待分 ( http: / / www.21cnjy.com )离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。
（3）蛋白质的提取和分离
步 骤 操 作
样品处理 通过红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液等操作收集到血红蛋白溶液
粗分离 通过透析法去除血红蛋白溶液中相对分子质量较小的杂质
纯化 通过凝胶色谱法分离相对分子质量不同的蛋白质
2.固定化酶与固定化细胞
项 目 固定化酶 固定化细胞
常用方法 化学结合法、物理吸附法、包埋法 包埋法
营养物质 不需要 需 要
化学反应 一 种 一系列
优 点 ①可反复使用；②有利于工艺的连续化、管道化，同时降低了生产成本 ①可以连续发酵，节约成本；②保持酶在细胞内的原始状况，增加了酶的稳定性；③操作容易
不 足 ①酶在固定化时活力有所损失；②不适用于多酶反应 细胞膜、细胞壁会阻碍底物的渗透和扩散，降低反应效率
【巧点妙拨】
1.消毒和灭菌的区别：消毒不能杀死芽孢和孢子，而灭菌能够杀死所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2.在制作果酒的过程中注入的果汁量不要超过发酵容器总体积的2/3，以保证留有部分氧气供酵母菌繁殖产生大量的酵母菌个体。
3.稀释涂布平板法测活菌的数量时，测 ( http: / / www.21cnjy.com )得的值往往比实际值偏低。因为有些菌落可能是两个或多个细菌共同生长在一起形成的。跟实际细菌（包括活细菌和死细菌）的数目相比测得的值更偏低。
4.平板划线法操作时，应在每次灼烧灭菌后，进行冷却；力度大小要适当；划线时最后一区域不要与第一区域相连，以免影响接种纯化的效果。
【典题对应】
例1.(2014 新课标全国Ⅱ，39) ( http: / / www.21cnjy.com )为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用稀释涂布平板法 ( http: / / www.21cnjy.com )检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_______________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为______________。
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的 ( http: / / www.21cnjy.com )细菌。操作时，接种环通过__ _灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_________________________。
(3)示意图A和图B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中 ( http: / / www.21cnjy.com )并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高____________的利用率。
解析：（1）为了检测培养基平 ( http: / / www.21cnjy.com )板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(39＋38＋37)/3＝38个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1＝380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为380×100＝3.8×104，则每升水样中活菌数目为3.8×104×1 000＝3.8×107。（2）接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。（3）比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。（4）振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
答案：（1）检测培养基平板灭菌是否合格 ( http: / / www.21cnjy.com )　 3.8×107 （2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 （3）B （4）溶解氧　 营养物质
命题意图 本题考查微生物的实验室培养技术，意在考查学生对基础知识的理解、对照实验思想及识图分析实际问题的能力。
名师坐堂：解答此题，需要准确理解对照实验思想，能正确处理实验数据，理解区分不同接种方法获得的实验结果不同。
例2.(2010新课标全国卷，39)下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
（1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取， ( http: / / www.21cnjy.com )其理由是玫瑰精油具有_______________________的性质。蒸馏时收集的蒸馏液_______（是、不是）纯的玫瑰精油，原因是____________________________________。
（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏 ( http: / / www.21cnjy.com )过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和________。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是___________________________________。
（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会_______，原因是_______________________________。
（4）密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度________的地方，目的是______________________。
（5）某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取精油时采摘花的最合适时间为________天左右。
（6）从薄荷叶中提取薄荷油时________（能、不能）采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是_____________________________。
解析：（1）水蒸气蒸馏法的原理是利用 ( http: / / www.21cnjy.com )水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层。玫瑰精油具有易挥发、难溶于水、化学性质稳定等性质，故适合用水蒸气蒸馏法提取，收集的蒸馏液为油水混合物。（2）蒸馏时许多因素都会影响产品的品质，如蒸馏温度、时间等。在一定范围内随着蒸馏时间的延长，精油的提取量会增加，但因原料量等条件一定，故超过一定时间后，提取量不再增加。（3）蒸馏过程中要进行冷却，让混合物重新分出油层和水层。若不冷却则会有部分玫瑰精油随水蒸气挥发而流失，使精油提取量下降。（4）因玫瑰精油易挥发，故密封不严的瓶装玫瑰精油应存放在温度较低的地方，以减少玫瑰精油的挥发。（5）提取精油时采摘花的最适时间为花中精油的相对含量最高的时间，即a天左右。（6）因薄荷油与玫瑰精油的化学性质相似，易挥发、难溶于水等，故也可用与提取玫瑰精油相同的方法提取。
答案：（1）易挥发、难溶于水、化学性质 ( http: / / www.21cnjy.com )稳定 不是 玫瑰精油随水蒸气一起蒸馏出来，所得到的是油水混合物 （2）蒸馏温度 在一定的时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加 （3）下降 部分精油会随水蒸气挥发而流失 （4）较低 减少挥发 （5）a （6）能 薄荷油与玫瑰精油的化学性质相似
命题意图 本题考查植物芳香油提取的相关知识，意在考查学生应用相关技术解决实际问题的能力。
名师坐堂：对于选修部分内容的考查主要侧重于基础知识，只要对芳香油提取相关的知识掌握好，就不难做出准确回答。
例3.(2012山东卷，34)辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图。
( http: / / www.21cnjy.com )
（1）图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的_______和________过程。
（2）图中培养外植体的培养基中常用的凝固 ( http: / / www.21cnjy.com )剂是_______。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_______（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是_________。
（3）图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是________。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是_________和纤维素酶。
（4）提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是________。
解析：本题以辣椒素的获得途径为情景，考查生物实验的基本技能和操作，注重生物技术应用于生产的理念。考查的面广，但以识记的知识点应用分析为主。
答案：（1）脱分化（或去分化） 再分化 （2）琼脂 低 高压蒸汽灭菌 （3）70% 果胶酶 （4）防止有机溶剂的挥发
命题意图：本题主要考查植物组织培养的基础知识及提取植物有效成分的注意事项，难度较小。
名师坐堂：该题涉及的知识面较广，学 ( http: / / www.21cnjy.com )生对于选修部分的内容只有全面掌握才能解答好该题，所以学生对选修部分的复习面要广，并不要求对知识的掌握多么深入，只要掌握基础的部分就够了。
【直击高考】
1.（2013新课标Ⅰ卷，39）回答下列有关泡菜制作的习题：
（1）制作泡菜时，所用盐水煮沸，其目 ( http: / / www.21cnjy.com )的是 。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是 。
（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行 的过程。该过程发生在乳酸菌的 中。
（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有 、 和 等。
（4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间 ( http: / / www.21cnjy.com )内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是 ，原因是： 。
2.（2013新课标II卷， ( http: / / www.21cnjy.com )39）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。
回答下列问题：
（1）为了从样本中获取致病 ( http: / / www.21cnjy.com )菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
（2）取该单菌落适当稀释，用 法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。
（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性， ( http: / / www.21cnjy.com )将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀至于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A ；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B ；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 ；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 。
（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 。
3.研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。
（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。
（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或___ ( http: / / www.21cnjy.com )_________接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。实验前需对超净工作台进行____________处理。
（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供__ ( http: / / www.21cnjy.com )____________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度___________。
（4）抑菌实验时，在长满致病 ( http: / / www.21cnjy.com )菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。
4.（2014临沂一模）红茶菌液是一种传统的活菌饮料，能帮助消化，治疗多种胃病。请根据制作流程回答问题：
(1)红茶菌种是酵母菌、 ( http: / / www.21cnjy.com )醋酸菌和乳酸菌的共生体，可以用___________法分离纯化得到不同的菌种。在接种活菌之前要将红茶糖液先煮沸，目的是 ，然后冷却，以防止 。
(2)制备固定化酵母细胞时，首先要 ( http: / / www.21cnjy.com )使酵母细胞处于_________状态。若在培养液中加入酸性的重铬酸钾溶液后，呈现_______________，证明已经产生酒精。
(3)酵母细胞中蛋白质的提取和 ( http: / / www.21cnjy.com )分离一般分为样品处理、粗分离、纯化和___________四步。为了准确模拟生物体内的过程，保持细胞内外的pH一致，在样品处理的透析阶段，应将酵母蛋白溶液放人pH较低的_____________中。在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，原因是气泡会搅乱洗脱液中_____________，降低分离效果。
(4)当___________、糖源都充足时，醋酸菌将培养液中的糖分解为醋酸；在利用乳酸菌制备泡菜时，需要测定亚硝酸盐的含量，在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与 发生重氮化反应后，与N-I-萘基乙二胺盐酸盐结合形成___________色染料。
5.（2013山东卷，34）胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：
（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时 ( http: / / www.21cnjy.com )，可选用 或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是 。
（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供 和 。
（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过 ( http: / / www.21cnjy.com )程应控制好温度和 以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用 方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是 。
（4）纸层析法可用于鉴定所提取胡萝卜素，鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为 。
6.（2013四川卷，10）由于酵 ( http: / / www.21cnjy.com )母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。
( http: / / www.21cnjy.com )
（1）图甲中，过程①需要的酶有 ( http: / / www.21cnjy.com ) 。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以 作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是 。
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个 ( http: / / www.21cnjy.com )平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是 ；推测该同学接种时可能的操作失误是 。
（3）以淀粉为原料，用工 ( http: / / www.21cnjy.com )程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种 菌的发酵罐需要先排气，其原因是 。
（4）用凝胶色谱法分离α一淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较 。
答案
1.（1）消灭杂菌 增加乳酸菌 ( http: / / www.21cnjy.com )含量 （2）无氧呼吸 细胞质 （3）温度、食盐用量、腌制时间 （4）乳酸菌数量增加，杂菌数量较少 乳酸菌比杂菌更为耐酸
2.（1）划线 稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A的弱 耐药菌（4）A
3.(1)压榨 过滤和离心 （2）稀释涂布平板法 高压灭菌锅 消毒（紫外线照射） （3）氮源和碳源 越慢 （4）直径大小
4.（1）稀释涂布平板( ( http: / / www.21cnjy.com )或平板划线) 清除培养液中杂菌（或杀灭培养液中的微生物或灭菌） 高温杀死红茶菌种 （2）活化 灰绿色 （3）纯度鉴定 缓冲液 蛋白质的洗脱次序 （4）氧气 对氨基苯磺酸 玫瑰红
5.（1）稀释涂布平板法 灭菌（防止杂菌污染）（2）碳源 氮源（3）时间 水浴 滤去不溶物（4）对照
6.（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 淀粉 进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法 涂布不均匀 （3）工程酵母 工程菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快 （4）小