课件36张PPT。2．2 动物细胞工程
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术专题2 细胞工程学习导航专题2 细胞工程一、动物细胞工程
1．常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、_______________、生产_____________等。
2．基础：________________技术。动物细胞融合单克隆抗体动物细胞培养二、动物细胞培养
1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成____________，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞____________和____________。单个细胞生长增殖胰蛋白酶细胞悬液3．相关概念
(1)细胞贴壁：细胞悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上。
(2)细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到______________时，细胞停止分裂增殖的现象。
(3)原代培养：指动物组织消化后的____________。
(4)传代培养：贴壁的细胞，出现____________后，需要重新用____________来处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖的培养过程。表面相互接触初次培养接触抑制胰蛋白酶培养液微量元素氨基酸血清、血浆36.5±0.5 ℃7.2～7.4细胞代谢5．应用
(1)生产生物制品：如____________疫苗、干扰素、
____________等。
(2)应用于基因工程：动物细胞是基因工程技术中常用的____________，离不开动物细胞培养。
(3)检测____________，判断某种物质的毒性。
(4)用于生理、病理、药理等方面的研究,如筛选抗癌药物等。病毒单克隆抗体受体细胞有毒物质三、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物核移植概念
(1)供体：________________________。
(2)受体：________________________。
(3)结果：形成重组胚胎，发育成____________。动物一个细胞的细胞核去掉细胞核的卵母细胞动物个体体细胞核移植3．体细胞核移植的过程4．体细胞核移植的应用前景
(1)畜牧生产方面：加速家畜____________进程，促进优良畜群繁育。
(2)保护濒危物种方面：增加动物的____________。
(3)医药卫生领域：转基因动物作为____________，生产医用蛋白。
(4)治疗人类疾病：转基因克隆动物细胞、组织和器官作为____________的供体等。
5．体细胞核移植技术存在的问题
(1)成功率非常低。
(2)绝大多数克隆动物存在健康问题。
(3)对克隆动物食品的____________问题存在争议。遗传改良存活数量生物反应器异种移植安全性1．判一判
(1)动物细胞培养体现了动物细胞的全能性( )
(2)动物细胞在培养的过程中一些细胞会发生遗传物质的变化
( )
(3)在动物细胞的培养过程中，培养液中可以不加入血清和血浆等物质( )
(4)动物体细胞核移植的受体细胞是卵细胞( )√×××2．连一连
将下列动物细胞培养的应用与相应实例连线动物细胞培养1．动物细胞培养过程解读(1)原理：细胞增殖。
(2)选材：一般取自幼龄动物的器官或组织，因为这些组织或器官的生命力旺盛，分裂能力强。
(3)将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：
①保证细胞所需要的营养供应。
②保证细胞内有害代谢产物的及时排出。2．两组概念划分
(1)划分原代培养和传代培养的界线是以分瓶为界，即配制细胞悬液后转入培养液中的第一次培养为原代培养，分瓶后的培养(无论分瓶多少次)均为传代培养。
(2)划分细胞株和细胞系以培养到50代为界，50代以前为细胞株；50代以后部分细胞遗传物质改变，具有癌变特点，能无限传代下去，称为细胞系。3．植物组织培养与动物细胞培养的异同原理植物细胞的全能性细胞增殖培养基固体或半固体培养基,包括矿质元素、蔗糖、维生素、琼脂、植物激素等液体培养基，包括无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸、动物血清等培养条件再分化阶段需光不需光细胞来源离体植物器官、组织或细胞胚胎或幼龄动物组织、器官结果获得新个体或细胞产品大量产生细胞或细胞产物用途①快速繁殖名贵花卉和果树
②培养无病毒植株、转基因植物
③大规模生产细胞产品如药物、食品添加剂、香料、色素等①生产蛋白质制品如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
②检测有毒物质
③研究生理、药理、病理①都需要人工条件下的无菌操作，无菌培养
②都是合成培养基
③都需要适宜的温度、pH等条件
④都进行有丝分裂特别提醒 动、植物细胞全能性的差异
动物细胞培养时没有脱分化，也就没有再分化过程，原因是动物细胞高度分化后发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力；而植物细胞组织培养能获得个体。 (2013·高考大纲全国卷改编)关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是( )
A．动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B．动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C．烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠瘤细胞可离体培养增殖
D．动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒B[解析] 动物细胞培养的培养基中需加入动物血清，植物组织培养的培养基中需加入植物激素等，A项正确。动物细胞培养需利用胰蛋白酶将动物组织分散成单个细胞再进行培养,植物组织培养中不需要将细胞分离，B项错误。叶片细胞高度分化，但仍具有全能性，可以通过植物组织培养形成新个体；小鼠瘤细胞能够不断分裂增殖，C项正确。有毒物质会影响细胞正常的生命活动，故可根据细胞在培养过程中生命活动的变化情况检测有毒物质；植物茎尖细胞分裂较快，细胞中几乎无病毒,故可用茎尖通过植物组织培养形成脱毒苗，D项正确。(2014·南京高二检测)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列有关说法正确的是( )
A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理
B．细胞培养应在CO2培养箱中进行，CO2的作用是作为细胞代谢原料
C．取甲细胞进行培养，传至10代～50代就会完全停止
D．乙细胞在原代培养过程中，最终会出现停止增殖的现象D解析：A错，胃蛋白酶的最适pH大约为2，这一环境下细胞往往会受到破坏，不利于培养，所以一般用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶处理细胞；B错，培养液中CO2的作用是调节培养液的pH；C错，肝肿瘤细胞可以无限增殖；D对，正常肝细胞在原代培养过程中会出现接触抑制现象，停止增殖。动物体细胞核移植技术和克隆动物1．过程分析(1)原理：动物细胞核的全能性，而不是动物细胞的全能性。因动物体细胞的全能性受到限制，不能经培养直接发育成完整个体。所以用体细胞核移植技术能够得到克隆动物，说明动物体细胞的细胞核具有全能性。
(2)供体和受体的选择
①供体：一般选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传基础。
②受体选择去核的减Ⅱ中期的卵母细胞。
原因：卵母细胞的体积大，易操作，细胞质中含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。2．克隆动物的特点
(1)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，但不是完全相同，因为：①克隆动物的细胞质遗传物质来自于受体卵母细胞;②生物的性状不仅与遗传物质有关,还受环境影响。
(2)核基因是供体核基因的100%的复制。
(3)克隆动物是一种无性繁殖方式。
特别提醒 核移植的供体细胞的选择
核移植时，一般不选择生殖细胞作为供核细胞，原因是生殖细胞与正常细胞相比，遗传物质减半，自然状态下单倍体动物都很少，克隆动物成功率会更低。 科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁殖速度，可以对此转基因奶牛进行克隆(如图所示)。(1)在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织进行分离，形成单个细胞，这一过程中需要利用________酶处理，不能用纤维素酶与果胶酶的原因是______________。
(2)转基因奶牛的克隆成功，说明动物细胞的________具有全能性。
(3)将进行细胞培养的供体细胞核注入去核的卵母细胞中，去掉卵母细胞核的目的是__________________________________________________。胰蛋白酶具有专一性细胞核使犊牛的性状主要由供体细胞核决定(4)重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内会生出与供体奶牛遗传性状相同的犊牛，但也有可能出现性状上的某些差异，原因可能是_______________________________________________________________________________________________________。
(5)体细胞核移植技术得到的克隆牛从生殖方式上看属于____________(选填“有性生殖”或“无性生殖”)。①生物的性状受细胞核和细胞质共同控制；②生物的性状还受环境因素的影响无性生殖[解析] (1)对动物组织进行分离，用胰蛋白酶处理，才能形成单个细胞。因为酶具有专一性，所以不能用纤维素酶和果胶酶将动物细胞分散开。(2)克隆动物的成功
证明了动物细胞的细胞核具有全能性。(3)去掉卵母细胞核后,重组细胞的遗传物质主要来自供体细胞核，其性状主要由供体细胞核决定。(4)重组细胞发育而来的犊牛与供体奶牛不完全相同，因为重组细胞的遗传物质主要来自供体细胞核，少量来自卵母细胞的细胞质，性状还受环境的影响。(5)体细胞核移植没有经过两性生殖细胞的结合，所以从生殖方式上看属于无性生殖。(1)图中生长激素基因与运载体结合后通常采用什么方法导入奶牛体细胞？
(2)图中重组细胞与重组目的基因的“层次”是否一样？
提示：(1)显微注射法。
(2)不一样，重组细胞属于细胞水平，而重组目的基因属于分子水平。判断有性生殖与无性生殖的方法
(1)从概念上判断：有性生殖是经两性生殖细胞结合而成的合子发育成个体的生殖方式。无性生殖是指不经过两性生殖细胞的结合由亲本直接产生子代的生殖方式。
(2)从培养细胞的种类上判断：组织培养中培养的是生殖细胞时，属于有性生殖；组织培养中培养的是体细胞、组织或器官时，属于无性生殖。植物体细胞杂交和动物细胞核移植都属于无性生殖。(2014·南京高二期中)一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途,但是不能( )
A．有选择地繁殖某一性别的家畜
B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种
D．改变动物的基因型
解析:由于核基因来自体细胞,所以不会改变动物的基因型。D本部分内容讲解结束按ESC键退出全屏播放
1．(2014·安徽屯溪一中高二检测)关于动物细胞培养的叙述，错误的是( )
A．用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B．将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C．在培养瓶中要定期用蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D．动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞会衰老死亡
解析：选D。动物细胞传代培养中可能产生细胞系细胞，可无限增殖。
2．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是( )
A．都需用CO2培养箱 B．都须用液体培养基
C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
解析：选C。用动、植物成体的体细胞进行离体培养都必须在无菌条件下进行。用植物成体的体细胞进行离体培养获得新个体体现的是细胞的全能性，而动物体细胞离体培养主要是获得细胞或其代谢产物。
3．(2014·苏州高二质检)动物细胞培养的特点是( )
①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③分散生长 ④接触抑制
⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传代1～10代
A．①②④⑥ B．②③④⑤
C．①③④⑥ D．③④⑤⑥
解析：选A。动物细胞培养的过程是细胞有丝分裂的过程，在动物细胞培养的过程中存在细胞贴壁等特点，需要用胰蛋白酶处理，使细胞分散成单个。细胞的原代培养一般传代1～10代，以后为传代培养。
4．(2014·连云港高二检测)下列不属于动物细胞工程应用的是( )
A．大规模生产干扰素，用于抵抗病毒引起的感染
B．为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤细胞
C．大规模生产食品添加剂、香料等
D．利用核移植技术，加快优良种畜的繁殖
解析：选C。大规模生产食品添加剂、香料等属于植物组织培养的应用。
5．乙马的卵细胞核被甲马的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂发育成重组胚胎，再植入丙马的子宫内发育，结果产下一匹小马。下列叙述正确的是( )
A．直接在体外对甲马的体细胞进行诱导也能培养出胚胎
B．小马的性状与甲马完全相同
C．此项技术可用于保护濒危物种
D．该过程可以很好地证明动物细胞的全能性
解析：选C。克隆过程中细胞质遗传物质来自一方，而细胞核中遗传物质来自另一方，所以小马的性状与甲马不完全一致。该过程只能说明动物细胞核具有全能性，而不能证明动物细胞的全能性。
6．如图表示动物细胞培养程序图，请据图回答下列问题。
①取动物组织块
↓
__②__
↓
③处理组织分散成单个细胞
↓
④制成________
↓
⑤转入培养液中进行培养
↓
⑥处理贴壁细胞分散成单个细胞，制成________
↓
⑦转入培养液中进行培养
(1)过程②表示____________。
(2)过程③和⑥用____________处理组织块或贴壁细胞分散成单个细胞，这样做的目的是________________________________________________________________________。
(3)④和⑥的过程都要把分散的细胞制成____________。
(4)过程⑤进行的细胞培养是__________，细胞适于________生长增殖。
(5)过程⑦进行的细胞培养是__________，一般传至________代后就不易传下去了，传至________代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞的____________会发生改变。继续培养时，少部分发生了________的细胞，朝着等同于________的方向发展。
解析：进行动物细胞培养时，首先将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成许多单个细胞，然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶内置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。以后，细胞进行有丝分裂，数目不断增多。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常被称为传代培养。
答案：(1)剪碎组织
(2)胰蛋白酶 解除由于接触对细胞生长和繁殖的抑制
(3)细胞悬液
(4)原代培养 贴壁
(5)传代培养 10 10～50 细胞核型 突变 癌细胞
1．动物细胞培养的原理是细胞增殖。
2．细胞在培养过程中会出现细胞贴壁(生长)和细胞接触抑制现象。
3．动物细胞的培养分为原代培养和传代培养。
4．动物细胞培养的条件包括：无菌、无毒的环境，适宜的营养、温度和pH及气体环境。
5．动物细胞核移植的原理是动物细胞核的全能性。
6．哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
7．在动物细胞培养中CO2的作用是维持培养液的pH。
1．动物细胞培养过程的顺序是( )
①原代培养 ②传代培养 ③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液
A．①②③ B．①③②
C．②①③ D．③①②
解析：选D。动物细胞培养是用动物胚胎或幼龄动物器官通过胰蛋白酶处理制成细胞悬液，再通过原代培养和传代培养得到细胞株。
2．不能作为组织培养、细胞培养或克隆的生物材料的是( )
A．花粉 B．幼叶
C．卵细胞 D．人血中的红细胞
解析：选D。人血中的红细胞是成熟的红细胞，没有细胞核，不能作为组织培养、细胞培养或克隆的生物材料。
3．(2014·南宁二中高二检测)下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是( )
A．动物细胞培养需要无菌、营养、适宜的温度和pH等条件
B．用胰蛋白酶作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞
C．放入CO2培养箱中培养动物细胞的主要目的是为了满足细胞对CO2的需求
D．细胞株一般具有恒定的染色体组型、生化特征等
解析：选C。解答本题的关键是知道动物细胞培养的条件、过程，能准确识别细胞株与细胞系的异同，CO2培养箱中CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。
4．动物细胞培养过程中一定可以出现的情况是( )
A．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞
B．培养过程中多数细胞的基因型会发生改变
C．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的
D．当细胞发生类似于癌细胞的变化时，可进行传代培养
解析：选D。由于细胞之间相互接触而发生接触抑制现象，所以正常培养的细胞在培养瓶壁上只能形成单层细胞，A项错；克隆培养法中细胞进行有丝分裂，所以细胞的基因型一般不会发生改变，B项错；二倍体细胞传代培养至10～50代时多数的细胞会死亡，只有少数的细胞能够培养至50代以后成为细胞系，C项错；类似于癌细胞的突变，细胞能够无限增殖，可以进行传代培养，D项正确。
5．某研究性学习小组同学在研究细胞工程时，列表比较了植物细胞工程和动物细胞培养的有关内容，其中错误的是( )
选项
比较项目
植物细胞工程
动物细胞培养
A
处理方法
酶解法去除细胞壁
用胰蛋白酶处理后制成细胞悬液
B
原理
细胞增殖
细胞的全能性
C
应用
快速繁殖技术
生产干扰素等
D
培养基性质
固体培养基
液体培养基
解析：选B。本题考查了植物细胞工程和动物细胞培养有关方面的比较。A项，去除细胞壁时用的是纤维素酶和果胶酶，而在动物细胞培养中采用胰蛋白酶处理组织分散成单个细胞。B项，植物细胞工程的原理是植物细胞的全能性和细胞增殖，动物细胞培养的原理是细胞增殖，没有体现出全能性。C项，植物细胞工程可以高效快速地实现种苗的大量繁殖，利用动物细胞培养可以大规模生产病毒疫苗、干扰素等。D项，两者的培养基性质和成分是不同的。
6．动物细胞培养和植物组织培养的主要区别是( )
A．动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织
B．动物细胞培养可以传代，而植物组织培养不能传代
C．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同
D．动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能
解析：选A。动物细胞培养和植物组织培养都有细胞分裂过程，因而细胞与组织均能传代。二者所用培养基的成分大致相同，都有营养物质，但也有成分不同，如动物细胞培养有血清，而植物组织培养不需要血清。植物组织培养过程中，由于受外界环境条件的影响，细胞分裂时也可能发生基因突变、染色体变异而引起遗传物质改变。植物组织培养一般用分生组织培养。
7．(2013·高考浙江卷)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。下列叙述错误的是 ( )
A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D．丁过程得到的细胞具有异质性
解析：选C。甲过程表示从实验小鼠身上取皮肤组织小块，该过程需要对小鼠进行消毒，故A项正确。乙过程表示将皮肤组织分散为单个细胞，可用胰蛋白酶进行酶解消化，故B项正确。丙过程表示由组织细胞培养到细胞系的过程，小鼠细胞是二倍体细胞，其细胞系大多数为有限细胞系，能继续培养下去具有异倍体核型的连续细胞系很少，故C项错误。丁过程表示通过选择或纯化从细胞系中获得具有特殊性质的细胞株的过程，细胞株具有异质性，故D项正确。
8．(2014·海淀区高二检测)下列对哺乳动物体细胞核移植技术的描述不正确的是( )
A．该技术的难度明显高于胚胎细胞核移植
B．通常采用减数第二次分裂期的去核卵母细胞作为受体细胞
C．可通过显微操作法除去卵母细胞核
D．克隆动物是对提供体细胞的动物进行了完全复制
解析：选D。克隆动物的受体细胞是去核卵母细胞，所以其遗传物质主要来自体细胞核，但细胞质的遗传物质则来自卵母细胞，所以不是对提供体细胞的动物的完全复制。
9．下列为克隆羊“多利”的培育过程示意图。
下列各项有关表述错误的是( )
A．克隆羊“多利”的主要性状与甲羊一致，因其细胞核基因来自甲羊
B．克隆羊“多利”的培育过程中采用了核移植等生物技术
C．乙羊的去核卵细胞为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件
D．此过程说明高度分化的动物细胞具有全能性
解析：选D。生物的性状主要由细胞核中的基因控制，此过程中培育成的早期胚胎需要移植到第三只羊的子宫内完成发育过程，此实验只能说明高度分化的动物细胞的细胞核具有全能性，而不能证明细胞的全能性。
10．(2014·阳泉高二检测)中科院动物研究所与福州大熊猫研究中心合作，通过将大熊猫细胞核植入去核后的兔子卵细胞中，在世界上最早克隆出一批大熊猫早期胚胎，表明我国大熊猫人工繁殖研究再次走在世界前列。下列描述与克隆无关的是( )
A．“复制” B．无性繁殖
C．组织培养 D．基因工程
解析：选D。克隆是一种无性繁殖方式。子代与亲本相同，因而也可认为是由亲本“复制”而来；该过程需采用组织培养技术，但与基因工程无关。
11．如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据图回答：
(1)容器A中放置的是动物器官或组织，它一般取自________________________________________________________________________
________________________。
(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是________，然后用胰蛋白酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是________________________________________________________________________。
(3)培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有____________________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这时的培养称为________。
(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用________处理，然后配制成________再分装。
解析：(1)动物细胞培养一般取材于动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，因为这部分细胞的分裂能力强。(2)在进行培养时应尽量使细胞分散，便于与培养液充分接触，进行物质交换；使其分散需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。(3)动物细胞培养过程中应尽量使培养基成分与体内的环境基本相同，所以需要添加糖、氨基酸、无机盐、动物血清等。培养的过程分为原代培养和传代培养两个大阶段，分瓶之前的培养称为原代培养。(4)当细胞数目较多时，需要用胰蛋白酶处理，使细胞分散，从玻璃瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬液继续培养。
答案：(1)胚胎或幼龄动物的器官或组织
(2)剪碎 使细胞与培养液充分接触
(3)糖、氨基酸、无机盐和动物血清 原代培养
(4)胰蛋白酶 细胞悬液
12．动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。如图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。
(1)肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)气室中充入5%CO2气体的主要作用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素的______________，以保证抗生素对肝脏无害。
(4)有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具，探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。
材料用具：
肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养液，植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂)，显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管，吉姆萨染液(使染色体着色)，有机物X溶液等。
实验过程：
①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取4等份，备用。
②利用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置，按下表步骤操作(“√”表示已完成的步骤)。
甲
乙
丙
丁
步骤一：加入肝脏培养液
√
√
√
√
步骤二：加入有机物X溶液
√
√
步骤三：放置肝脏小块
√
上表中还需进行的操作是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
③培养一段时间后，取4组装置中的等量培养液，分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。
④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察________________________________________________________________________，
并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞正常，则说明________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)把肝脏切成小薄片，有利于肝脏细胞吸收氧气和营养物质、排出代谢废物。(2)气室中充入5%CO2的作用是形成碳酸来维持培养液适宜的pH。(3)要注意选择抗生素的种类和剂量来抑制细菌生长，否则会影响肝脏细胞。(4)乙组或丁组没有处理，向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块作为对照实验，有机物X有毒性，可诱发染色体断裂，所以要观察淋巴细胞的染色体形态和数量是否变化。甲组添加肝脏小块，淋巴细胞染色体正常，丙组没有添加肝脏小块，淋巴细胞出现染色体异常，说明肝脏小块对有机物X具有解毒作用。
答案：(1)吸收氧气和营养物质、排出代谢废物
(2)维持培养液适宜的pH
(3)种类和剂量
(4)②向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块 ④染色体形态和数量 肝脏小块对有机物X具有解毒作用
13．现有A和B两个肉牛品种，A品种牛的细胞组可表示为A细胞核、A细胞质，B品种牛则为B细胞核、B细胞质。
(1)如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基本步骤是，从A品种牛体内取出体细胞，进行体外培养，然后再从培养细胞中取出________注入B品种牛的________卵母细胞，经过某些刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为____________，将该胚胎移入代孕母牛的________中，通过培育可达到目的。
(2)上述过程中运用了动物细胞工程的哪些技术？
________________________________________________________________________。
(3)克隆牛的产生说明____________________具有全能性。由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自________个亲本，细胞质来自________性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成________(填“相同”或“不同”)。
(4)请举一例，说明克隆牛培育成功的实际意义。________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：动物的克隆所用的方法是核移植，也就是把动物体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，然后经过某些刺激和培养后形成重组胚胎，再移入代孕动物的子宫中继续发育，从而获得克隆个体。克隆动物的成功说明了动物体细胞核具有全能性，克隆动物的遗传特性与提供细胞核的个体基本一致。在体细胞克隆动物中不仅用到了核移植，还用到了动物细胞培养。
答案：(1)细胞核 去核 重组胚胎 子宫
(2)动物细胞核移植和动物细胞培养
(3)动物体细胞核 两 雌 不同
(4)保护濒危物种，繁育优良品种，医学上克隆器官等
14．(2014·枣庄高二检测)如图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答下列问题。
(1)图中①所示的结构名称是________。
(2)图中③④所示的生物技术名称分别是__________、____________。
(3)过程③通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)过程④通常用②作为受体细胞的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(5)图示方法与一般的异体核移植相比最大的优点是________________，该种基因治疗所属类型为________________。
解析：(1)①是从供体(患者)体细胞分离出的细胞核。(2)③表示核移植技术，④表示转基因技术。(3)核移植的受体细胞一般是去核的卵母细胞，原因是它体积大、易操作、营养物质丰富，此外，它还含有促进细胞核全能性表达的物质。(4)早期胚胎中的细胞分化程度低，全能性高，可诱导分化成各种组织器官。(5)图示培育出的细胞(胰岛B细胞)核遗传物质来自患者本人，所以移植后不发生免疫排斥反应；图中所示基因治疗是体外转基因，故所属类型为体外基因治疗。
答案：(1)细胞核
(2)核移植技术 转基因技术(或基因工程、DNA重组技术、基因拼接技术)
(3)含有促进细胞核全能性表达的物质
(4)这些细胞分化程度极低，全能性易于表达，可以定向地诱导分化为各类细胞
(5)没有免疫排斥反应 体外基因治疗
课件36张PPT。2．2.2 动物细胞融合与单克隆抗体专题2 细胞工程学习导航专题2 细胞工程一、动物细胞融合两个或多个动物细胞细胞杂交杂交灭活的病毒细胞免疫新品种培育单克隆抗体远缘杂交二、单克隆抗体
1．传统抗体的获得
(1)方法：①向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生____________；②从动物____________中分离所需抗体。
(2)缺陷：产量低、纯度低、____________。抗体血清特异性差2．单克隆抗体的制备脾脏骨髓瘤细胞B淋巴细胞杂交瘤细胞抗体体外培养腹水3．单克隆抗体的应用
(1)优点：____________、灵敏度高、产量高。
(2)应用
①作为诊断试剂，具有准确、____________、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和____________。特异性强高效运载药物1．判一判
(1)细胞融合技术与传统的有性杂交相比，其优越性在于能定向地改造生物的性状( )
(2)制备单克隆抗体时，要选用已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞( )
(3)动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体能体现细胞的全能性
( )
(4)动物细胞融合和植物体细胞杂交的结果是相同的( )√×××2．比一比低高低高差强动物细胞融合 ↓
细胞融合：加促融因子于将融合的细胞之中，诱导融合
↓
杂种细胞选择：利用选择培养基等，使亲本细胞死亡，而
让杂种细胞存活
↓
杂种细胞克隆：对选出的杂种细胞进行克隆，经过培养，
就能获得所需要的无性繁殖系2．过程3．重组细胞的特点
融合形成的杂种细胞具有两种细胞的遗传信息，通过动物细胞的培养，杂种细胞表现出两个亲本细胞的特点。4．植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别细胞膜的流动性和植物细胞的全能性细胞膜的流动性酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种体细胞，再经过植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合物理方法、化学方法物理方法、化学方法、灭活病毒形成杂种植株形成杂种细胞特别提醒 病毒的应用
(1)免疫调节中，病毒作为抗原。
(2)基因工程中，病毒可作为载体。
(3)细胞工程中，灭活病毒可作细胞融合的诱导剂，但一般不用于植物体细胞融合过程。 (2014·温州高二检测)如图所示为细胞融合技术的一些过程：
(1)从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，采用的方法中与诱导植物原生质体融合不同的是________________处理。
(2)若A、B细胞为单倍体烟草植物的体细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了________。用灭活的病毒细胞壁这种酶可能是__________、________，由此生成的细胞经培养形成的细胞团称为___________。
(3)若将基因型为AaBB的番茄细胞与基因型为AAbb的番茄细胞融合，由融合细胞培养成的愈伤组织细胞的基因型是____________。
(4)若将染色体组成为2A＋XX的人细胞与染色体组成为2B＋XX的鼠细胞融合，培育成的人—鼠细胞的染色体组成是____________________。纤维素酶果胶酶愈伤组织AAAaBBbb2A＋2B＋XX＋XX[解析] (1)动物细胞融合特有的方法是用灭活的病毒诱导融合。
(2)植物细胞有细胞壁，若A、B细胞为单倍体烟草植物的体细胞，那么这样的细胞已经用纤维素酶和果胶酶脱掉了细胞壁;植物体细胞杂交获得的杂种细胞，经脱分化形成愈伤组织。
(3)(4)细胞融合后的染色体或基因分别是两种细胞的染色体或基因累加。生物工程技术产生后代的遗传物质的来源归类
(1)杂种植株和动物杂交细胞的遗传物质来自融合的两个亲本细胞。
(2)克隆动物细胞核遗传物质来自供体动物细胞核，细胞质遗传物质来自受体去核的卵母细胞的细胞质。
(3)转基因生物的遗传物质中，目的基因来自外源生物，绝大多数遗传物质来自两个亲本。
(4)植物组织培养的植株细胞中遗传物质来自一方亲本细胞。(2014·广州高二质检)关于动物细胞融合的说法，不正确的是
( )
A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞
C．常用的诱导动物细胞融合的因素有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射等
D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能C解析：动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程；融合后的细胞具有两个或多个细胞的遗传物质;动物细胞融合时常用的诱导因素有:聚乙二醇、灭活的病毒、电激等，紫外线照射易引起基因突变，因此该过程不能利用紫外线照射；细胞融合突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。单克隆抗体1．制备过程与对接技术手段2．比较制备单克隆抗体中的几种细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖能无限增殖，但不能产生抗体既能产生抗体，又能无限增殖3.单克隆抗体制备过程中的筛选及原因
(1)第一次筛选是在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，因为有三种融合情况：B淋巴细胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，而只有B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞才是需要的杂种细胞。
(2)第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生所需特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是由单个杂交瘤细胞克隆来的，所以产生的抗体一定是化学性质单一、特异性强的单克隆抗体。4．植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备的比较细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶)注射特定抗原，处理正常小鼠①物理法：离心、振动、电激等
②化学法：聚乙二醇(PEG)①物理、化学法：与植物细胞融合相同
②生物法：灭活的病毒克服远缘杂交障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围诊断、治疗、预防疾病。例如:单抗诊断盒、
“生物导弹”治疗癌症特别提醒 细胞杂交的结果
(1)杂交瘤细胞是经免疫产生的B淋巴细胞和瘤细胞融合而成的。
(2)植物体细胞杂交的终点是杂种植株，且杂种植株具有两个亲本细胞的遗传物质，其染色体数(组)、基因组成都是两个细胞之和，表现两个亲本的遗传性状，但不一定是符合人们需求的两个亲本的优良性状。 如图是制备分泌抗X(H10N8流感病毒)抗体的过程，根据图解回答问题：(1)给小鼠注射抗原的目的是___________________________________________________。
(2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有______________________________________的特性。
(3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了____________________和________________的动物细胞工程技术手段。获得能产生相应抗体的B淋巴细胞既能产生特定抗体，又能无限增殖动物细胞培养动物细胞融合(4)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开,以利于细胞融合，可用_______________________处理离体组织细胞使之分散。
[解析] (1)根据抗原抗体特异性结合的原理，为获得特定抗体，用特定抗原刺激，小鼠体内便可产生能产生特定抗体的B淋巴细胞。
(2)杂交瘤细胞具有两种细胞的遗传物质，既能产生特定抗体,又能无限增殖。
(3)从图中看出，单克隆抗体技术实际是应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术。
(4)细胞融合时是单个细胞和单个细胞的融合，为将细胞从动物组织中离散，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。胰蛋白酶或胶原蛋白酶(1)融合后的细胞，在培养时通过什么方式进行繁殖？细胞中染色体数目与淋巴细胞相比有何不同？
(2)图中筛选过程中对细胞克隆培养时，在特定培养基上使每个孔一个细胞的目的是什么？
提示：(1)有丝分裂。融合后细胞内染色体数目加倍。
(2)使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的(或单一细胞培养以保证抗体的纯度)。(2013·高考重庆卷)如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是( )A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
解析：选D。明确单克隆抗体制备过程的几个关键环节是准确解答本题的关键。①是从小鼠脾脏中获得的能产生抗体的浆细胞,A项错误；②中应该使用能促进细胞融合的促融剂，如聚乙二醇等，B项错误；③同时具有从脾脏中分离出的浆细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④是经筛选培养获得的能产生特异性抗体的细胞群，D项正确。本部分内容讲解结束按ESC键退出全屏播放
1．动物细胞融合的目的中，最重要的是( )
A．克服远缘杂交不亲和的障碍
B．制备单克隆抗体
C．培育新物种
D．生产杂交细胞
解析：选B。植物体细胞杂交，主要是为了克服远缘杂交不亲和的障碍，以培育新品种。另外，植物体细胞杂交还应用了植物细胞的全能性。动物细胞作为整体，它的全能性受到限制，目前只见到高度分化的细胞核在去核卵细胞中表现全能性，还未见到融合细胞核表现出全能性的例子，因此动物细胞融合不能用来培育新的物种。生产杂交细胞，也不是细胞融合的主要目的。
2．灭活的仙台病毒的抗原性和感染力是( )
A．失去抗原性，具有感染力
B．具有抗原性，也具有感染力
C．失去抗原性，也失去感染力
D．具有抗原性，失去感染力
解析：选D。灭活后的病毒已失去感染力，但是不破坏病毒的抗原结构，仍具有抗原性。
3．动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的比较中，正确的是( )
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段基本相同
C．培养基成分相同
D．都能形成杂种细胞
解析：选D。动物细胞融合和植物体细胞杂交这两项细胞工程技术中，都包含有细胞融合的过程，都能形成杂种细胞。对于诱导方法来说，除动物细胞的融合还可用灭活的病毒作诱导剂外，其他的基本相同。植物体细胞杂交前需先去掉细胞壁，在完成细胞融合后，还要将杂种细胞培育成植株，所以，它们所应用的技术手段是有差别的。植物细胞培养用的是固体培养基，动物细胞培养用的是液体培养基，其成分中还有动物血清，培养基成分有一定的差别。
4．(2014·成都高二检测)对于下面制备单克隆抗体过程的示意图，不正确的叙述是( )
A．①表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的
B．④中的筛选是通过抗原、抗体反应进行的
C．②促进细胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介导
D．⑤可以无限增殖
解析：选A。单克隆抗体是利用免疫处理的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合得到，融合方法可以有化学方法聚乙二醇诱导、生物方法灭活病毒诱导；如果要筛选可以通过检测抗原、抗体反应，若有反应说明表达了抗体；融合细胞具有双亲特点，既能无限增殖又能产生单一抗体。B淋巴细胞也可以从血浆中提取。
5．(2014·潍坊高二检测)下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是( )
A．制备过程中不需要动物细胞培养技术
B．杂交瘤细胞具有T淋巴细胞与瘤细胞的所有特点
C．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产
D．单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂
解析：选D。制备单克隆抗体需培养杂交瘤细胞，杂交瘤细胞具有B淋巴细胞和瘤细胞的特点，但并非所有特点，用专一性抗体检测出的杂交瘤细胞才能用于单克隆抗体的生产。
6．(2014·高考新课标全国卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
回答下列问题：
(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________小鼠，理由是________________________________________________________________________。
(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________，
体系中出现多种类型细胞的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)杂交瘤细胞中有________个细胞核，染色体数目最多是________条。
(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是________________________。
解析：(1)据图分析可知，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血清抗体效价几乎都达到16 000以上，小鼠Y的血清抗体的效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。(2)融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和B淋巴细胞的自身融合细胞。细胞的融合是随机的，并且不可能所有细胞都融合，故体系中会出现多种类型的细胞。(3)动物细胞融合后形成的是具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。杂交瘤细胞的细胞核中的染色体数目为40＋60＝100条。(4)正常细胞的分裂次数是有限的，且经过免疫的B淋巴细胞高度分化，不能无限增殖，而是经多次传代培养后逐渐衰老死亡。
答案：(1)4 Y Y小鼠的血清抗体效价最高 (2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100% (3)1 100 (4)不能无限增殖
1．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2．动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。
3．动物细胞融合的主要用途是制备单克隆抗体。
4．杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。
5．单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量制备。
6．单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物。
1．动物细胞融合和植物原生质体融合决定于( )
A．细胞膜的流动性
B．细胞膜的选择透过性
C．细胞质的流动性
D．细胞质中酶的活性
解析：选A。细胞融合的原理是细胞膜的流动性。
2．某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几种不正确( )
植物细胞工程
动物细胞工程
技术手段
植物组织培养、植物体细胞杂交
动物细胞培养和融合等
特殊处理
酶解法去除细胞壁
胃蛋白酶处理得到细胞悬浮液
融合方法
物理方法、化学方法、生物方法
物理方法、化学方法和生物方法
典型应用
无病毒植物的培育、人工种子、种间植物杂交等
单克隆抗体的制备等
培养基区别
所用的糖必须为葡萄糖
所用的糖为葡萄糖且动物血清不可缺少
A.0 B．1
C．2 D．3
解析：选D。受培养基pH影响，动物的组织块剪碎后只能用胰蛋白酶处理使细胞分散开，而不能用胃蛋白酶处理；植物细胞原生质体的促融方法可用物理法或化学法，而不用生物法；植物组织培养的培养基中的糖用的是蔗糖，而不是葡萄糖。
3．(2014·泉州高二检测)单克隆抗体(单抗)实质上是单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的免疫球蛋白。下列有关叙述中，错误的是( )
A．单抗作为生物导弹能定向到达癌细胞所在部位
B．单抗制备的过程要用到动物细胞培养和细胞融合技术
C．在单抗制备的过程中必须经过至少两次细胞筛选
D．只有用物理或化学方法的诱导，才能促使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞
解析：选D。促使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞除了可以用物理或化学方法的诱导外，还可以用灭活的动物病毒诱导其融合，故选项D错。借助单克隆抗体的导向作用，生物导弹能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。单抗制备的过程首先要用到细胞融合技术将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合为杂交瘤细胞，再通过动物细胞培养技术获得大量单克隆抗体。在单抗制备的过程中必须经过至少两次细胞筛选：一要选出杂交瘤细胞，二要筛选出能够分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
4．在进行课题研究时，甲、乙、丙、丁四位同学所采用的方法中错误的是( )
A．甲用酶解法去除植物细胞的细胞壁
B．乙用青蛙的血清来配制小鼠细胞的培养液
C．丙用化学法诱导原生质体的融合
D．丁用体外培养法制备单克隆抗体
解析：选B。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因此可用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁；由于青蛙和小鼠的代谢具有较大差异，所以应用小鼠血清来配制小鼠细胞的培养液；诱导原生质体的融合常用物理法和化学法；制备单克隆抗体既可在生物体内，也可用体外培养法。
5．如图是单克隆抗体制备过程示意图，其中①过程注射的物质和A细胞的名称分别是( )
A．抗体、T淋巴细胞 B．抗原、T淋巴细胞
C．抗体、B淋巴细胞 D．抗原、B淋巴细胞
解析：选D。①注射抗原后，在抗原刺激作用下，小鼠体内产生对应该抗原的B淋巴细胞(浆细胞)。
6．(2014·南京高二检测)正常细胞合成DNA有两条途径：a通路(主通路)和b通路(旁路)。用于进行单克隆抗体制备的骨髓瘤细胞是DNA合成的b通路缺陷型细胞株，让B淋巴细胞与这种缺陷型细胞融合，再在加入DNA合成的a通路阻断剂(氨基嘌呤)的培养液中培养，这种培养会产生哪些效果( )
①促进细胞融合 ②淘汰B淋巴细胞 ③淘汰骨髓瘤细胞 ④选择杂交瘤细胞 ⑤淘汰骨髓瘤细胞相互融合的细胞 ⑥淘汰B淋巴细胞相互融合的细胞
A．①②③④⑤⑥ B．②③④⑤⑥
C．②③④ D．④⑤⑥
解析：选B。B淋巴细胞和B淋巴细胞—B淋巴细胞由于不能无限增殖会被淘汰；由于所用的骨髓瘤细胞的DNA合成的b通路缺陷，培养液中再加入DNA合成的a通路阻断剂，则骨髓瘤细胞及骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞由于不能合成DNA会被淘汰，只有杂交瘤细胞可被选择。
7．有人用间接免疫荧光测定细胞表面抗原的分布：以不同荧光染料标记抗体，被标记的抗体分别与小鼠细胞膜和人细胞膜的抗原结合分别产生绿色和红色荧光，然后做如图所示实验，对有关现象的解释，错误的是( )
A．抗体结合荧光物的部位与抗体结合抗原的部位不同，因而能介导荧光物标记膜抗原
B．细胞膜都具有流动性，因而能用合适的诱导方法使两种细胞彼此融合
C．膜内分子能在膜上扩散移动，因而才会发生融合后膜抗原的分布变化
D．人和小鼠细胞具有相同的抗原，因而能借免疫系统制备标记抗体
解析：选D。人和小鼠细胞表面的抗原结构是不同的；两种生物的细胞能融合，其理论基础为细胞膜的流动性；抗体与荧光物的结合部位和抗体与抗原的结合部位不同，因此抗体能同时与荧光物及抗原结合；抗原是细胞膜上的一种成分，两种细胞融合后，由于膜内分子(抗原)的扩散移动而使得两种细胞上的抗原(带荧光标记)能均匀分布。
8．由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述不正确的是( )
A．“瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成
B．“弹头”是由放射性同位素、化学药物和细胞毒素等物质构成
C．“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能
D．“生物导弹”是利用细胞工程制备出来的
解析：选C。“弹头”中的药物既能杀伤肿瘤细胞，也能杀死正常细胞，不具有选择性。“生物导弹”中的“瞄准装置”是由专一识别特定肿瘤细胞的单克隆抗体构成；“弹头”是由杀死肿瘤细胞的放射性同位素、化学药物和细胞毒素等物质构成；“生物导弹”是利用动物细胞融合、动物细胞培养等细胞工程技术制备出来的。
9．关于单克隆抗体的生产和应用，错误的是( )
A．对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞
B．融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养产生遗传物质改变后才能进行传代培养
C．特定的单克隆抗体可制成试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染
D．治疗癌症的“生物导弹”原理之一是利用单克隆抗体的特异性识别癌细胞
解析：选B。单克隆抗体的制备是用骨髓瘤细胞和经过免疫的B淋巴细胞融合后得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有B淋巴细胞产生抗体的特点，所以不需经过遗传物质的改变便能无限增殖；单克隆抗体最广泛的应用是作为诊断试剂；如果把抗癌细胞的单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合，制成“生物导弹”，注入体内，借助单克隆抗体的导向作用，将药物带到癌细胞所在位置，将癌细胞杀死。
10．利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是( )
A．用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B．体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
C．将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
D．利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者
解析：选D。单克隆抗体是效应B细胞和骨髓瘤细胞诱导融合后形成的杂交瘤细胞大量增殖后产生的，A项方法获得的抗体纯度低，不能称为单克隆抗体。B项中效应B细胞无法实现大量增殖。C项中形成的杂交细胞有三类，既有效应B细胞和瘤细胞融合在一起的，又有两个效应B细胞融合在一起的，还有两个瘤细胞融合在一起的。
11．如图所示为细胞融合技术的一些过程：
(1)从A、B细胞到C细胞的过程中，必须用________处理。
(2)若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为________细胞，由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为________过程。
(3)若A为人细胞，B为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质，在形成C细胞时，细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光。到D细胞阶段，两种颜色的荧光均匀分布，请解释原因。________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：让不同植物体细胞的原生质体融合，融合必须通过一定的技术手段进行人工诱导。单克隆抗体制备过程需得到化学性质单一、特异性强的抗体。科学家发现，在动物发生免疫过程中，每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，要想获得大量的单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行克隆，形成细胞群。但在体外培养条件下，一个B淋巴细胞不可能无限增殖，这就需要B淋巴细胞与骨髓瘤细胞在灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导下融合，再筛选出杂交瘤细胞。最后考查了细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。
答案：(1)诱导剂 (2)杂交瘤 克隆 (3)细胞膜上的蛋白质是可以运动的(或细胞膜具有流动性)
12．如图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
(1)________________技术是单克隆抗体技术的基础。
(2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。
(3)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________________。
(4)选用的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的________________的特点，又具备淋巴细胞的________________特点。
(5)淋巴细胞是由动物体________中的________细胞分化、发育而来。
(6)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是________________。
解析：抗体是由B淋巴细胞分泌的，每一种B淋巴细胞只能分泌一种抗体。要想获得大量单一抗体，需要将某一种B淋巴细胞大量克隆，但在体外培养的条件下，B淋巴细胞不能无限增殖，而骨髓瘤细胞可以在体外无限增殖。科学家将这两种细胞通过灭活的病毒诱导融合，在特定的选择培养基中筛选出杂交瘤细胞，再将杂交瘤细胞分开培养，从中选育出产生高特异性抗体的细胞进行体外大规模培养，从而获得大量的单克隆抗体。淋巴细胞是由动物骨髓中的造血干细胞分化发育来的。杂交瘤细胞培养过程中需要吸收氨基酸、葡萄糖等营养物质，是通过主动运输进入细胞内的。
答案：(1)动物细胞培养 (2)选择 (3)灭活的病毒 (4)在体外大量增殖 分泌特异性抗体 (5)骨髓 造血干 (6)主动运输
13．甲流(H7N9)在世界各地大面积蔓延并出现了死亡病例。科学家已分离出甲型H7N9病毒(一种RNA病毒)。某制药厂根据下面流程图生产预防和治疗甲流的抗体，请据图回答下列有关问题。
(1)生产单克隆抗体一般选用[A]________细胞和[B]________细胞，在某诱导剂的作用下融合。
(2)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成________种类型的C细胞。
(3)理论上，注射了该抗体的人群不能长期对甲流有防疫作用，试分析原因________________________________________________________________________。
(4)不同种动物的体细胞融合，相比诱变育种和杂交育种方法，具有________________________________________________________________________等突出的优点。
(5)请说明单克隆抗体的主要作用________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，B细胞是取自感染病毒的人体内的B淋巴细胞，二者在聚乙二醇诱导剂的作用下融合。在细胞融合的过程中，可能有的能融合，有的不能融合。如果仅考虑两个细胞的融合，则可能有A细胞与A细胞、A细胞与B细胞、B细胞与B细胞三种融合方式，所以需要筛选出既能无限增殖又能产生特异性抗体(即A细胞与B细胞融合)的D细胞(杂交瘤细胞)。注射了该抗体的人群不能长期对甲流有防疫作用的原因可能是甲流病毒不断产生变异，因而原抗体对变异的甲流病毒不起作用，或者是抗体已经消失等。诱变育种和杂交育种只能发生在同种生物之间，而动物体细胞融合可以发生在不同种生物之间，因而可克服远缘杂交不亲和的障碍。单克隆抗体作为诊断试剂，用于治疗疾病和运载药物等。
答案：(1)骨髓瘤 B淋巴
(2)3
(3)引起甲流的病毒不断发生变异(意思相同则可)
(4)目的性强、克服远缘杂交不亲和性(能有效地打破物种的生殖隔离界限；意思相同即可)
(5)作为诊断试剂，用于治疗疾病和运载药物(意思相同即可)
14．有性生殖的生物产生后代时需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合。如图为细胞融合的简略过程，请回答下列问题。
(1)若a、b表示两种植物体细胞，则杂种细胞d会再生出________，分裂形成愈伤组织并逐步发育成杂种植株。这项技术克服了________________________________________________________________________。
(2)若a、b分别为B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，则经融合并筛选得到的d细胞的特点是____________________________________，由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比，具有________________________________的特点。下列是单克隆抗体制备过程的部分图解，请把代表各步骤的字母填写在流程示意图中。
解析：(1)若a、b表示两种植物体细胞，杂种细胞d再生出细胞壁，后才能成为杂交细胞，最后分化形成杂种植株，克服了远缘杂交不亲和的障碍。(2)若a、b表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，筛选出的d细胞是既能迅速大量繁殖，又能产生专一性抗体的杂交瘤细胞，它产生的抗体具有特异性强、灵敏度高，并能大量制备的特点。
答案：(1)细胞壁 远缘杂交不亲和的障碍 (2)既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体 特异性强、灵敏度高，并可能大量制备
