2024.3
2023—2024学年度第二学期3月份阶段检测
高二生物
一、单选题
1. 绍兴是黄酒之乡，“麦曲酶长，酵米复芳；白梅酒酿，伴淋寒香；压滤琼浆，煎煮陈藏”是对绍兴黄酒精致复杂酿造工艺的描述。在黄酒的主发酵过程中，“开耙”（搅拌）是极为关键的一步。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 接种麦曲有利于淀粉的糖化，有利于“酒酿”菌种发酵
B. 煎煮的目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
C. 陈藏有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香
D. 发酵过程中“开耙”可适当提供O2，调节pH，活化酵母
【答案】B
【解析】
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发酵时，一般将温度控制在18～25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生酵母菌。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、淀粉属于生物大分子物质，淀粉糖化为小分子糖有利于发酵过程中酵母菌对糖类的利用，A正确；
B、煎煮是进行消毒，除去发酵产品中的酵母菌等微生物，利于储藏，B错误；
C、陈储”是将榨出的酒放入罐内存放，此过程有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香，C正确；
D、“开耙”（搅拌）是为了让酵母菌进行有氧呼吸，增加酵母菌的数量，有利于活化酵母，D正确。
故选B。
2. 酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图 Ⅰ 所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100 mL完全培养基，下列说法错误的是（ ）
A. 葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性环境、酵母菌产生的次生代谢产物酒精等可抑制杂菌的繁殖
B. 用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109（个·L-1），此数值可能低于实际的活菌数
C. 可用干热灭菌法对培养皿、培养基进行灭菌，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌
D. 由图 Ⅱ 可知，丙瓶出现的原因可能是灭菌不彻底，丁组酵母菌产酒精能力比乙强
【答案】C
【解析】
【分析】果酒制作过程中的相关实验操作：材料的选择和处理→灭菌→榨汁→发酵。利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘10算每升发酵液的微生物数。
【详解】A、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。次生代谢不是生物生长所必需的，在一定的环境和时间条件下进行，产生的酒精不是酵母菌生长所必需的物质，所以是次生代谢物。大多数杂菌在缺氧、有酒精的环境下无法繁殖，A正确；
B、若对菌液计数，需选取菌落数处于30～300培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘103算每升发酵液的微生物数，计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落，所以数目偏小，B正确；
C、培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌，接种过程中，试管口、瓶口等容易被污染的部位，可以通过火焰灼烧灭菌，C错误；
D、丙瓶中活菌数量不为0，而酒精浓度为0，说明培养基可能被杂菌污染，丁瓶的活菌数少于乙瓶，但丁瓶中酒精浓度与乙瓶一致，说明丁组酵母菌产酒精能力比乙强，D错误。
故选C。
3. 从自然界筛选嗜盐菌（好氧型）的一般步骤：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。图1示上述步骤中的一个环节，图2示该筛选过程中一个培养基上菌落的分布情况，其中白色部分为透明圈，黑点代表大小不同的菌落。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 富集培养必须在固体培养基中进行
B. 图1所示的接种方法也适合用于对细菌进行计数
C. 图2中嗜盐菌的耐盐性能最强的是乙
D. 图1和图2所示的培养基分别为选择培养基和鉴别培养基
【答案】C
【解析】
【分析】筛选目的菌株一般是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。常用的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法。培养基在配制时，各种成分在溶化后分装前必须进行pH调整，接种前要进行灭菌，保证无菌操作，培养微生物时，应将培养皿倒置。
【详解】A、富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法，一般在液体培养基中进行，A错误；
B、图1所示的接种方法是平板划线法，该方法不适合对细菌进行计数，B错误；
C、图2中的乙菌落中的透明圈最大，说明该菌落嗜盐菌的耐盐性能最强，C正确；
D、图1和图2所示的培养基都是选择培养基，D错误。
故选C。
4. 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后
B. 在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数
C. 4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大
D. 该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异
【答案】C
【解析】
【分析】影印培养法实质上是使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法。通过影印培养法，可以从在非选择性条件下生长的细菌群体中，分离出各种类型的突变种。
【详解】A、大肠杆菌抗链霉素的性状是由基因突变引起的，该突变发生在与链霉素接触之前，链霉素是对其起选择作用，A错误；
B、采用稀释涂布平板法将菌种接种在5号培养基上，由于两个或多个细菌可能会形成一个菌落，在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能小于初始接种到该培养基上的活菌数，B错误；
C、3号与2号、7号与6号培养基中的菌落数的比值，是抗性菌落占全部菌落的比例，观察实验结果可知，4号与8号培养液中，抗链霉素菌株的比例在逐渐增大，C正确；
D、本实验有对照实验，无链霉素的培养基为对照，可以确定抗链霉素性状属于可遗传的变异，D错误。
故选C。
5. 如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是（ ）
A. 培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子
B. 选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，未体现细胞的全能性
C. 需要通过植物组织培养技术获得的植株只有①③④
D. 植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0（不考虑基因突变）
【答案】D
【解析】
【分析】分析题图可知：对植株A的花粉经过离体培养得到的植株①单倍体植株，而后对该单倍体幼苗经秋水仙素处理得到的植物②是纯合二倍体，该过程属于单倍体育种。植株③的获得采用了植物组织培养技术，该植株的获得利用了诱变育种方法。植株④采用了植物组织培养技术，属于细胞工程育种；植株⑤的培育采用了植物体细胞杂交技术。
【详解】A、对植株A（杂合子Aa）的花粉（A或a）经过离体培养得到的植株①单倍体植株（A或a），秋水仙素处理单倍体植株①，获得的植株②（AA或aa）为纯合子，A错误；
B、选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，通过组织培养技术获得植株③，体现了细胞的全能性，B错误；
C、图中需要通过植物组织培养技术获得的植株是①③④⑤，该过程中利用了细胞的全能性，植株②是秋水仙素处理植株①的幼苗得到，没有用到植物组织培养技术，C错误；
D、植株①是通过花药离体培养获得的单倍体植株（A或a），秋水仙素处理得到植株②（AA或aa）；植株③④是通过植物组织培养获得的，其基因型为Aa；植株⑤是通过植物体细胞杂交的方法获得的，其遗传物质是由植株A和植株B组成的，与植株A的基因型不同，因此植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0，D正确。
故选D。
6. 黑胫病对甘蓝型油菜的危害十分严重，黑芥能抗黑胫病，两者不能直接杂交。为解决该问题，科研人员通过下图所示过程获得抗病品系。据图分析，下列相关叙述不正确的是（ ）
A. 最终获得的抗病植株具有完整的甘蓝型油菜和黑芥的遗传信息
B. 过程①可使用纤维素酶和果胶酶，过程②可利用PEG进行诱导
C. 过程③发生脱分化，过程④体现出植物细胞具有全能性
D. 黑芥与甘蓝型油菜自然状态下不能进行基因交流
【答案】A
【解析】
【分析】据图分析可知，图示为采用植物体细胞杂交技术和植物组织培养技术获得抗黑胫病杂种植株的流程图，图中①表示采用酶解法(纤维素酶和果胶酶)去除细胞壁的过程；②表示诱导原生质体融合的过程。原生质体融合后利用植物组织培养技术得到杂种植株。
【详解】A．黑芥的叶肉细胞原生质体经X射线照射后发生部分染色体结构破坏，因而最终获得的抗病植株不具有完整的黑芥的遗传信息，A错误；
B．过程①表示去除细胞壁的过程，可以用纤维素酶和果胶酶处理；过程②表示诱导原生质体融合的过程，可利用PEG进行诱导，B正确；
C．融合后的原生质体经过诱导长出细胞壁，经过程③发生脱分化和过程④后形成抗病植株，由杂种细胞培育成完整植株的过程体现出植物细胞具有全能性，C正确；
D．根据题意可知，黑芥与甘蓝型油菜不能直接杂交，说明两者存在生殖隔离，自然状态下不能进行基因交流，D正确。
故选A。
7. 研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是（ ）
A. 步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞
B. 经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖
C. 步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交
D. 步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养
【答案】A
【解析】
【分析】单克隆抗体的制备过程：
（1）制备产生抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞；
（2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体；
（3）克隆化培养和抗体检测；
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖；
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。
【详解】A、步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞；步骤⑤向小 鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A正确；
B、经步骤②诱导后融合的细胞只有杂交瘤细胞才能既能分泌TREM2抗体又可无限增殖，B错误；
C、步骤三是特定培养基筛选杂交瘤细胞，步骤4是抗原抗体杂交，C错误；
D、动物细胞培养过程中二氧化碳用于调节培养液的pH值，而植物组织培养的过程中不需要二氧化碳培养箱，D错误。
故选A。
8. 基因组印记(通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达)阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞(类似受精作用)，最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养
B. 甲基化可能会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达
C. “孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
D. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来
【答案】B
【解析】
【分析】从卵泡中取出卵母细胞，再将经过甲基化处理的卵母细胞进行早期胚胎培养、胚胎移植等获得孤雌小鼠。
【详解】A、动物细胞培养时加入抗生素，防止培养过程中的污染，A错误；
B、由题干可知，基因组印记是通过甲基化使一个基因不表达，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达，然后促进了细胞的全能性的表现，获得孤雌小鼠，B正确；
C、“孤雌小鼠”是由两个生殖细胞（修饰后的次级卵细胞和另一个卵子的极体）结合后发育形成，同时由于配子在形成过程中会经历减数分裂的基因重组，或发生基因突变，将导致两个生殖细胞结合后的“孤雌小鼠”其基因型不一定与提供卵母细胞的雌鼠相同，C错误；
D、囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫做孵化，D错误。
故选B。
9. 线粒体置换技术是将妈妈携带突变线粒体的卵子细胞核移植到去核的健康线粒体捐赠者卵胞浆中获得的重构卵母细胞，与携带者丈夫精子进行受精，从而获得重构胚胎也就是通常说的“三亲胚胎”，也被称为“第四代试管婴儿”。下列有关说法错误的是（ ）
A. 重构卵母细胞需培养成熟才可以与获能精子受精
B. 第四代试管婴儿的DNA来自携带者与其丈夫
C. 第四代试管婴儿可避免线粒体疾病
D. 第四代试管婴儿的培育还需要经历早期胚胎培养和胚胎移植等技术
【答案】B
【解析】
【分析】试管婴儿是指人的卵细胞和精子在体外完成受精作用，发育到早期胚胎的一定阶段，再移入到母体子宫内继续发育到足月诞生的婴儿，由于受精过程和早期胚胎发育通常在试管中完成，所以叫试管婴儿。
【详解】A、体外受精时，卵母细胞需培养成熟至MⅡ期具备受精能力，才可以和获能精子进行体外受精，A正确；
B、细胞中的DNA包括核DNA和质DNA，第四代试管婴儿的核DNA来自携带者及其丈夫，质DNA来自捐赠者线粒体DNA，B错误；
C、第四代试管婴儿是由携带者突变线粒体的卵子提供细胞核，捐赠者提供去核的细胞质，可避免携带者的线粒体疾病通过母系遗传传递给下一代，C正确；
D、第四代试管婴儿的培育还需要经历早期胚胎培养到适宜时期，再经历胚胎移植等技术移植到母体子宫孕育成熟，D正确。
故选B。
10. 目前发现的双胞胎有同卵双胞胎、异卵双胞胎和“半同卵双胞胎”。1对“半同卵小姐弟双胞胎”形成过程如图所示，图3中染色单体分离后分别移向细胞的三个不同方向，从而分裂成a、b、c三个细胞，染色体全部来自父系的“合子”致死。其中两个细胞发育成姐弟二人。下列说法，正确的是（ ）
A. 受精卵发育为桑葚胚的过程是在透明带内完成的，孵化后进入囊胚期阶段
B. 排卵是指卵泡从卵巢中排出，图中卵子发育到减数分裂Ⅱ的中期
C. 若细胞a的染色体组成为MP1，则细胞b的染色体组成为MP2
D. 这对双胞胎来源于母亲的染色体相同，来源于父亲的染色体不一定不同
【答案】C
【解析】
【分析】根据图示，半同卵双胞胎的形成过程有两个精子同时进入到一个卵细胞，受精卵中有三个染色体组；有丝分裂过程中，染色体复制，有丝分裂后期形成6个染色体组，通过三极纺锤体将六个染色体组拉开，每一极2个染色体组，其中有两极的染色体各有一组来自双亲，有一极染色体均来自于父亲。细胞分裂后，其中两个细胞发育成个体。
【详解】A、受精卵发育为桑葚胚的过程是在透明带内完成的，到囊胚期时，囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化，A错误；
B、排卵是指卵子从卵泡中排出，此时的卵子通常是处于减数第二次分裂时期的次级卵母细胞。卵子发育到减数第二次分裂中期才具备受精的能力，故图中卵子发育到减数分裂Ⅱ的中期，B错误；
C、来自母系的染色体为M，来自父系的染色体为P1、P2，经过复制后，染色体进行组合，若细胞a的染色体组成为MP1，细胞c的染色体均来自父亲，其染色体组成为P1P2，细胞b的染色体组成为MP2，C正确；
D、细胞a的染色体组成为MP1，细胞b的染色体组成为MP2，这对双胞胎发育为姐弟，来源于父亲的性染色体不同，D错误。
故选C。
11. 如表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
限制酶 Alu Ⅰ BamH Ⅰ Sma Ⅰ Sau3A Ⅰ
识别序列切割位点 AG↓CT TC↑GA G↓GATCC CCTAG↑G CCC↓GGG GGG↑CCC ↓GATC CTAG↑
A. BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
B. Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C. ②④⑤对应识别序列均能被Sau3AⅠ识别并切割
D. T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
【答案】C
【解析】
【分析】限制性内切核酸酶，简称限制酶：（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来；（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；（3）结果：形成黏性末端或平末端。
【详解】A、BamHⅠ与AluⅠ切割的均是磷酸二酯键，A错误；
B、BamHⅠ切割G↓GATCC，Sau3AⅠ切割↓GATC，故二者切割后产生黏性末端是相同的，因此二者切割后产生的黏性末端能够相连，连接后仍然存在GATC的序列，能被Sau3AⅠ切割，但是BamHⅠ不一定能切割，B错误；
C、②④⑤对应的识别序列都存在GATC，都能被Sau3AⅠ识别并切割，C正确；
D、T4DNA连接酶既可以连接黏性末端也可以连接平末端，而图中①、③属于平末端，②⑤是黏性末端，T4DNA连接酶连接平末端时效率较低，D错误。
故选C。
12. THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述错误的是（ ）
EcoRⅠ BamHⅠ KpnⅠ MfeⅠ Hind Ⅲ
A. THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5′端
B. 构建基因表达载体时，用MfeⅠ、HindⅢ切割质粒，用EcoRⅠ、HindⅢ切割目的基因
C. 利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物1和引物4
D. 为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测其蛋白质含量
【答案】C
【解析】
【分析】由图分析可知，要保证将目的基因切割下来，但是又不破坏目的基因，不能选择MfeⅠ切割目的基因，要保证质粒结构的完整性，不能选择BamHⅠ切割质粒。
【详解】A、THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在每一条链的5′端，A正确；
B、构建基因表达载体时，用MfeⅠ、HindⅢ切割质粒时，形成的黏性末端分别是AATT-3'和AGCT-3'，用EcoRⅠ、HindⅢ切割目的基因时，形成的黏性末端分别是AATT-3'和AGCT-3'，形成的黏性末端对应相同，可以成功将目的基因插入质粒，同时避免目的基因自身环化和随意连接，B正确；
C、利用PCR技术扩增基因时，引物从5'端朝着3'端延伸,故应与模板链3'端配对，故应选择引物2和引物3，C错误；
D、为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测玉米蛋白质含量，D正确。
故选C。
13. 为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用农杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF转移到大豆植株中，下图为重组Ti质粒上T-DNA的序列结构示意图。下列相关叙述不正确的是（ ）
A. 以水稻RNA为模板通过逆转录及PCR扩增可获得大量OsPTF基因
B. RNA聚合酶与启动子I识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录
C. 可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的的基因大豆愈伤组织
D. 用EcoRI、BamHI双酶切重组Ti质粒后，经电泳分离至少得到两条带
【答案】B
【解析】
【分析】基因工程的基本操作程序：1、目的基因的获取：①从基因文库中获取，②人工合成（反转录法和化学合成法），③PCR技术扩增目的基因；2、基因表达载体的构建①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质；②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端；③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因；（3）基因表达载体的构建；3、将目的基因导入受体细胞；4、目的基因的检测和表达（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术；（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交；（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交；（4）有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
【详解】A、以水稻RNA为模板通过逆转录可以合成cDNA，然后再以cDNA为模板利用PCR扩增可获得大量OsPTF基因，A正确；
B、识图分析可知，抗除草剂基因位于启动子2的后面，因此RNA聚合酶与启动子2识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录，B错误；
C、由于图中T-DNA的序列中含有目的基因和抗除草剂基因，故可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的的基因大豆愈伤组织，C正确；
D、用EcoRI、BamHI双酶切重组Ti质粒后，会得到三种片段：含有耐低磷基因OsPTF的片段、含有除草剂基因的片段和只含启动子I的片段，因此经电泳分离至少得到两条带，即含耐低磷基因OsPTF的片段和含有除草剂基因的片段，D正确。
故选B。
14. 疫苗是人类预防疾病强有力的手段，疫苗产业也是医疗卫生事业和生物技术产业的重点发展领域之一，目前生产疫苗的两种方法主要有：利用转基因工程菌和借助动物细胞的大规模培养。例如，生产乙肝疫苗时，可以将S基因导入大肠杆菌构建工程菌生产重组乙肝疫苗，或者大规模培养能够表达S蛋白的中国仓鼠卵巢细胞获得乙肝疫苗。下列有关两种方法叙述错误的是（ ）
A. 两种方法都需用转基因技术构建工程菌或工程细胞
B. 将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞
C. 体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以创造无菌环境
D. 哺乳动物细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。
【详解】A、前者生产乙肝疫苗时，需要培养导入了S基因的大肠杆菌，后者生产乙肝疫苗时，需要大规模培养中国仓鼠卵巢细胞，A正确；
B、将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞，钙离子增加细胞的通透性，有利于S基因的导入，B正确；
C、体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以补充营养，减少代谢废物的积累，C错误；
D、哺乳动物细胞为真核生物细胞，可以对蛋白质进行进一步的加工，乙肝病毒感染真核细胞，因此真核细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白，D正确。
故选C。
15. 人类是乙肝病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为乙肝病毒基因工程疫苗的生产和使用流程，质粒中LacZ基因可使细菌能够利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 过程①最好的限制酶选择方案是BamHI和EcoRV
B. 质粒用限制酶BamHI和EcoRV切割后产生4个游离的磷酸基团
C. 过程②需要在培养基中加青霉素和X-gal以筛选蓝色的大肠杆菌菌落
D. 基因工程疫苗不会出现病毒的增殖和感染，安全性高
【答案】D
【解析】
【分析】1、题图过程①表示获取目的基因，构建重组质粒，②表示将重组质粒导入受体细胞并筛选，③表示转基因大肠杆菌表达乙肝病毒外壳，④表示将乙肝病毒外壳作为疫苗接种，⑤表示疫苗受试者体内出现抗体的过程。2、基因工程技术的基本步骤：(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞：根据爱体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。(4)目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：O检测转基因生物染色体的DNA是香插入目的基因-DNA分子杂交技术;检测目的基因是否转录出了mNA-分子杂交技术；⑨检测目的基因是否翻译成蛋白质.-抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、过程①表示获取目的基因，构建重组质粒，需要限制酶BamHI和EcoRI的酶切位点在目的基因两侧，可以获得完整的目的基因，且质粒上也存在这两种酶的识别位点，A错误；
B、质粒用限制酶BamHI和EcoRV切割后产生6个游离的磷酸基团，B错误；
C、过程表②示将重组质粒导入受体细胞，培养基中加青霉素和X-ga可以用于筛选含有重组质粒的大肠杆菌，BamHI和EcoRI由于破坏了质粒中LacZ基因，却保留了青霉素抗性基因，故白色的大肠杆菌菌落即为所需菌落，C错误；
D、基因工程疫苗由于只利用了乙肝病毒的外壳，不含其遗传物质，所以不能完成病毒的增殖和感染，D正确。
故选D。
二、不定项选择题
16. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
【详解】A、正常小鼠是二倍体，所以两个处于2细胞期胚胎的细胞用灭活病毒诱导法融合后，可得到一个含四个染色体组的细胞，A正确；
B、嵌合体中的ES具有自我更新能力，但很难分化形成胎盘，B错误；
C、嵌合体胚胎发育至桑葚胚或囊胚期再移植入小鼠子宫内才可以进一步发育，C错误；
D、四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体会使二者的发育潜能相互补偿，得到的ES小鼠中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织，所以嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型相同，D错误。
故选A。
17. 科学家以糖蜜（含较多蔗糖）为原料，运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，在实验室发酵生产PHA（聚羟基脂肪酸酯）等新型高附加值可降解材料，工艺流程如图。下列相关说法正确的是（ ）
A. 发酵工程一般包括菌种选育等多个步骤，其中心环节是菌种扩大培养
B. 为在一定程度上避免杂菌污染，可适当降低发酵液中盐的浓度
C. 菌株H还能分泌蛋白酶、脂肪酶等分解餐厨垃圾来生成PHA
D. 可在发酵结束之后，采用过滤和沉淀等方法将菌株H从发酵液中分离出来
【答案】CD
【解析】
【分析】发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
【详解】A、发酵工程一般包括菌种选育等多个步骤，发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，A错误；
B、嗜盐单胞菌需要一定的盐浓度，其他微生物则不能在较高的盐浓度下生长，提高发酵液中盐的浓度，一定程度上可以避免杂菌污染，B错误；
C、酶具有专一性，发酵罐中有糖蜜或餐厨垃圾，含有蛋白质和脂肪等物质，故菌株H还能分泌蛋白酶、脂肪酶等分解餐厨垃圾来生成PHA，C正确；
D、发酵结束之后，对于菌体可采取适当的过滤、沉淀措施来分离；而对于菌体的代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，D正确。
故选CD。
18. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（ ）
A. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对
B. 设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸
C. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物
【答案】BCD
【解析】
【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
【详解】A、上述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对，只需要与DNA的两条模板链的两端互补配对即可，A错误；
B、引物为一段核苷酸，引物与DNA模板链结合后，能够从其3＇端开始连接脱氧核苷酸，开始子链的合成，B正确；
C、结合图示可知，融合PCR的第一步两条链重叠部位即互补配对，可互为另一条链的引物，C正确；
D、若融合PCR的第二步获得了128个融合基因，引物数目和新合成的子链数目相同，即该过程消耗了128×2-2=254个引物，D正确。
故选BCD。
19. 通过植物细胞工程对光果甘草进行培养以获得药物甘草西定，过程如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 过程③通常先在生长素与细胞分裂素比例高的培养基中培养
B. 过程④常用射线或化学物质处理后可从诱变体选出所需的突变体植株丙
C. 所得三种植株中乙和丙的遗传信息与甲相同，植株丁和甲是同一物种
D. 过程⑥中甘草西定可通过植物细胞培养获得，应将愈伤组织细胞悬浮培养
【答案】ABC
【解析】
【分析】根据图分析，过程①为接种外植体，②为诱导脱分化形成愈伤组织，③为诱导再分化，④为诱变育种，⑤为植物体细胞杂交。
【详解】A、生长素/细胞分裂素的值高时，利于生根，该值低时利于生芽，过程③需先生芽，再生根，所以需要先在生长素与细胞分裂素比例低的培养基中培养，A错误；
B、过程④常用射线或化学物质处理的是愈伤组织，经筛选，并进一步培养才能获得大量所需的突变体植株丙，B错误；
C、所得三种植株中乙和丙的遗传信息不一定与甲相同，因为植株丙是诱变育种得到的，遗传信息可能会发生改变；植株丁经过了植物体细胞杂交，染色体数目发生了改变，和甲不一致，所以不是同一物种，C错误；
D、过程⑥中甘草西定可通过植物细胞培养获得，应将愈伤组织细胞悬浮培养，即植物组织培养，D正确。
故选ABC。
20. 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（CAR-T细胞疗法）被认为是极具前景抗癌免疫疗法，该T细胞表面的嵌合抗原受体（简称CAR）能直接识别肿瘤细胞的特异性抗原。下图表示一种典型的CAR-T细胞疗法的操作流程。下列叙述正确的是（ ）
A. CAR-T细胞通过CAR特异性识别肿瘤细胞
B. 该免疫疗法利用T细胞清除肿瘤细胞体现了免疫防御功能
C. 回输到病人体内CAR-T细胞通过体液运输到达肿瘤细胞处
D. 利用病人自身的免疫细胞治疗癌症，可尽量避免自身免疫系统的攻击
【答案】ACD
【解析】
【分析】1、细胞免疫过程为：（1）感应阶段：抗原呈递细胞摄取和处理抗原，并暴露出其抗原决定簇，然后将抗原呈递给辅助性T细胞；（2）反应阶段：细胞毒性T细胞接受抗原刺激后增殖、分化形成记忆细胞和新的细胞毒性T细胞，同时辅助性T细胞能合成并分泌细胞因子，增强免疫功能。（3）效应阶段：细胞毒性T细胞发挥效应。
2、体液免疫的过程是：病原体被吞噬细胞吞噬、处理呈递给辅助性T细胞，辅助性T细胞将抗原呈递给B细胞，B细胞在辅助性T细胞产生的淋巴因子的作用下，增殖分化形成浆细胞和记忆细胞，浆细胞合成和分泌抗体，抗体与抗原特异性结合，形成细胞集团或沉淀物，被吞噬细胞进一步吞噬消化；记忆细胞的作用是进行二次免疫应答。
【详解】A、根据题干信息“T细胞表面的嵌合抗原受体(简称 CAR)能直接识别肿瘤细胞的特异性抗原”可知，CAR-T细胞可以通过CAR识别相关癌变细胞，A正确；
B、该免疫疗法利用T细胞清除肿瘤细胞体现了免疫监视功能，B错误；
C、回输CAR-T细胞时进行的是静脉注射，回输到病人体内的CAR-T细胞通过体液运输到达肿瘤细胞，进行肿瘤细胞免疫治疗，C正确；
D、由于自身免疫细胞没有外部抗原，属于利用病人自身的免疫细胞治疗癌症，可避免免疫排斥现象，D正确。
故选ACD。
三、非选择题
21. 青霉素能够破坏细菌的细胞壁，从而杀死细菌，对革兰氏阳性菌有效，而对革兰氏阴性菌无效。工业上常用产黄青霉菌来生产青霉素，图a为生产流程图，请回答下列问题：
（1）在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH调至___性，接种之前的过程①、②都属于___。
（2）发酵罐中发酵时要及时添加必要的营养成分，还要严格控制___等发酵条件。
（3）青霉菌在代谢过程产生的青霉素具有杀菌作用，有同学认为无需对培养液进行严格灭菌，你是否同意这样的观点？___。为什么___。
（4）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌，是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，也存在于某些植物细胞中（如豆血红蛋白），还存在于某些细菌细胞中（如透明颤菌）。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了图b所示的方案：
溶菌酶能够溶解细菌的细胞壁，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理①、②所用的酶分别是上述两种酶中的___，请简述处理④从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路：___。
【答案】21. ①. 酸 ②. 扩大培养
22. 温度、pH、溶解氧
23. ①. 不同意 ②. 青霉素只能杀死部分微生物，某些杂菌会分泌青霉素酶将青霉素分解掉
24. ①. 蜗牛酶、溶菌酶 ②. 将融合细胞涂布在缺乏甲硫氨酸和精氨酸、但其他营养成分齐全的固体培养基上，在该培养基上长出的菌落即为杂种菌株
【解析】
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程一般包括菌种选育、培养基的配制、灭菌、菌种扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。
【小问1详解】
在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要调节pH，若培养霉菌等真菌需要将pH调至酸性，因此培养青霉菌需要将pH调至酸性，接种之前的过程①、②都属于扩大培养，其目的是获得发酵罐中所需要的菌种数量。
【小问2详解】
发酵罐中发酵时要及时添加必要的营养成分，还要严格控制温度、pH、溶解氧等发酵条件，因为环境条件不仅会影响微生物生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。
【小问3详解】
青霉菌在代谢过程产生的青霉素具有杀菌作用，有同学认为无需对培养液进行严格灭菌，这是不合理的，因为青霉素即使有杀菌作用，但其杀菌的范围是有限的，依然对一些细菌，如革兰氏阴性菌无效，因此需要对培养液进行灭菌。
【小问4详解】
青霉菌属于真菌，所以用蜗牛酶去除细胞壁，透明颤菌属于细菌，所以用溶菌酶去除细胞壁。实验中所用青霉菌不能在缺乏甲硫氨酸的培养基上生长，实验中所用透明颤菌不能在缺乏精氨酸的培养基上生长，其融合菌株能够缺陷互补，才能在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培养基上生长，因此可将杂种菌株筛选出来。
22. 绿色荧光蛋白在紫外线的照射下能发出绿色荧光，最初是在一种海蜇中被发现的。转绿色荧光基因（Gfp）的幼鼠在紫外光下能发出绿色荧光。进一步研究发现，绿色荧光蛋白可以帮助人们了解细胞工作的机制，通过寻找荧光便可知道基因何时以及为什么“开启”，这项成就被称为“21世纪的显微镜”。下图表示转基因绿色荧光小鼠的培育过程，图中Neo基因编码的产物能分解G418，G418是一类对原核细胞和真核细胞都有毒性的抗生素。请回答下列有关问题：
（1）①过程将绿色荧光蛋白基因与目的基因连接起来利用的工具是___________。
（2）可以从___________中提取胚胎干细胞，③过程胚胎干细胞培养需要的条件有___________（答出2点即可）。
（3）⑤过程应把转基因胚胎干细胞导入囊胚的___________，为了获得多只小鼠c，⑥过程的操作是___________，该过程的操作要求是_______________。
（4）让转基因干细胞与这些细胞一起发育成胚胎，若幼鼠_________________，则说明Gfp基因在幼鼠体内成功表达。
（5）据图分析，Neo基因在转基因绿色荧光小鼠的培育过程中发挥作用的机理是____________。
【答案】（1）DNA连接酶
（2） ①. 早期胚胎 ②. 提供营养，无菌、无毒的环境，适宜的温度、pH和渗透压，95%空气和5%CO2的气体环境
（3） ①. 内细胞团 ②. 胚胎分割 ③. 将内细胞团均等分割
（4）在紫外光下能发出绿色荧光
（5）将Neo基因作为标记基因，用加有G418的选择培养液筛选出的转基因胚胎干细胞一般是能存活且含有目的基因的细胞
【解析】
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
【小问1详解】
绿色荧光蛋白基因与目的基因连接起来利用的工具是DNA连接酶。
【小问2详解】
可以从早期胚胎中提取胚胎干细胞，③过程胚胎干细胞培养需要的条件有提供营养，无菌、无毒的环境，适宜的温度、pH和渗透压，95%空气和5%CO2的气体环境。
【小问3详解】
⑤过程应把转基因胚胎干细胞导入囊胚的内细胞团，为了获得多只小鼠c，⑥过程的操作是胚胎分割，该过程的操作要求是将内细胞团均等分割。
【小问4详解】
转绿色荧光基因（Gfp）的幼鼠在紫外光下能发出绿色荧光，让转基因干细胞与这些细胞一起发育成胚胎，若幼鼠在紫外光下能发出绿色荧光，则说明Gfp基因在幼鼠体内成功表达。
【小问5详解】
据图分析，Neo基因在转基因绿色荧光小鼠的培育过程中发挥作用的机理是将Neo基因作为标记基因，用加有G418的选择培养液筛选出的转基因胚胎干细胞一般是能存活且含有目的基因的细胞 。
23. 改良水稻的株高和产量性状是实现袁隆平先生“禾下乘凉梦”的一种可能途径。研究人员克隆了可显著增高和增产的eui基因，并开展了相关探索，过程如下图所示。请回答下列问题：
（1）步骤Ⅰ的花药培养过程中，可产生单倍体愈伤组织，将其培养于含______的培养基上，可促进产生二倍体愈伤组织，这样的愈伤组织产生的组培苗都是______。在培养得到丛芽的过程中，培养基中添加的植物激素主要是______。
（2）步骤Ⅱ中，用从细胞内获得的RNA经过______的作用可得到eui基因，对该基因进行PCR扩增时一般在引物的______端添加限制酶的识别位点。
（3）利用农杆菌介导将表达载体导入植物细胞的过程中，整合到植物细胞染色体DNA的区段是______，转化后的细胞需通过______形成植株。
（4）为筛选含重组Ti质粒的菌株，需在培养基中添加______，获得的农杆菌菌株经鉴定后，应侵染Ⅰ中的______，以获得转基因再生植株。
【答案】（1） ①. 秋水仙素 ②. 纯合子 ③. 细胞分裂素和生长素
（2） ①. 逆转录酶 ②. 5'
（3） ①. Ti质粒上的T-DNA ②. 植物组织培养
（4） ①. 抗生素 ②. 愈伤组织
【解析】
【分析】1、单倍体育种的原理是染色体变异，方法是用花药离体培养获得单倍体植株，再人工诱导染色体数目加倍；优点是纯合体自交后代不发生性状分离，因而能明显缩短育种年限。
2、基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。
3、PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
4、植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。
【小问1详解】
二倍体植株的花药经离体培养获得愈伤组织，愈伤组织经秋水仙素处理后纺锤体的形成被抑制，导致染色体不能移向细胞两极，从而引起细胞内染色体数目加倍，所得植株为纯合子，后代不会发生性状分离。要培养得到丛芽，培养基中主要要添加适宜比例的生长素和细胞分裂素，以促进愈伤组织分化出丛芽。
【小问2详解】
RNA经逆转录酶的作用得到eui基因，经逆转录得到的基因结构中不含RNA聚合酶识别位点，因此可以在对基因进行PCR扩增时把RNA聚合酶的识别位点加入进去。由于DNA过程中，子链的延伸方向是从5'端向3'端延伸，因此进行PCR扩增时，应将限制酶识别序列加在引物的5'端。
【小问3详解】
农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将 Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上，该细胞通过植物组织培养技术形成植株。
【小问4详解】
含重组 Ti 质粒的菌株中含有抗生素抗性基因，在该菌株的培养基中加入抗生素，可以把含重组质粒的菌株筛选出来。经筛选和鉴定的菌株侵染愈伤组织，以便将eui基因导入愈伤组织，把导入了eui基因的愈伤组织进行进一步培养，以获得转基因再生植株。
24. 双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过重组 DNA 或细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图 1 是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2 是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。
（1）图1中①步骤注射癌胚抗原的目的是_______________________________。过程③所用的HAT培养基从用途上看属于选择培养基，在该培养基上，_________________________细胞不能生长。
（2）过程④中将杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用__________________原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体的优点有_____________________________________________________________________________。
（3）图1注射长春碱后，要获取单克隆杂交—杂交瘤细胞，方框内至少需要经过________次筛选。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞因为___________________________________________________________________（答 2 点）等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是______________________________________________________________________。
【答案】（1） ①. 刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 ②. 未融合的和同种融合的
（2） ①. 抗原—抗体特异性结合 ②. 能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备
（3） ①. 2##二##两 ②. 细胞密度过大、有害代谢物的积累
（4）双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【小问1详解】
注射癌胚抗原是为了刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞；HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的，未融合的（B细胞或骨髓瘤细胞）和同种融合的细胞（B细胞+B细胞，骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞）不能在该培养基上生长；能生长的为杂交瘤细胞（B细胞+骨髓瘤细胞）既能大量增殖，又能产生抗体。
【小问2详解】
抗原—抗体特异性结合，可以检测是否产生相应的抗体；单克隆抗体能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并可大量制备。
【小问3详解】
单克隆抗体制备过程中至少涉及两次筛选，第一次是利用选择性培养基进行初步筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用克隆化培养和抗体检测的方法筛选出既能大量增殖，又能产生所需抗体的杂交瘤细胞。细胞密度过大、有害代谢物的积累，都会导致动物细胞培养受阻，需更换培养液，进行传代培养。
【小问4详解】
双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞，对人体的副作用更小。
25. 我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①~⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请据图分析回答：
（1）获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是___。
（2）进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有___，且在进行细胞原代培养时会出现___现象。
（3）动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是___。图中过程⑤用到胚胎移植技术，其实质是早期胚胎在___条件下空间位置的转移。除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有___（答出两点）。
（4）研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是___。
【答案】（1）体细胞分化程度高，恢复其全能性较难。
（2） ①. 血清 ②. 接触抑制
（3） ①. 显微操作法 ②. 相同生理环境 ③. 体外受精、转基因技术等
（4）提高融合细胞发育成囊胚的成功率和囊胚中内细胞团的形成率
【解析】
【分析】1、动物细胞核移植是用体细胞作为供体细胞进行的细胞核移植，将供核细胞注射到培养到减数第二次分裂中期的卵母细胞中，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎移植到雌性动物子宫内，就可以孕育出新的个体。
2、动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）温度和pH：36.5°C± 0.5°C、适宜的pH：7.2~7.4；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。3、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
【小问1详解】
与胚胎细胞相比，动物体细胞分化程度更高，故动物体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植恢复其全能性较难。
【小问2详解】
图中①是培养成纤维细胞的过程，该过程采用的是动物细胞培养技术，在培养动物细胞时，培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有血清。体外培养的动物细胞往往具有贴附生长和接触抑制等特点，故细胞原代培养时会出现接触抑制现象。
【小问3详解】
核移植去核方法有显微操作去核法、梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等，动物细胞核移植技术中普遍利用显微操作法去核。 过程⑤为胚胎移植，胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎或通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为个体的技术。胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。
【小问4详解】
依据图中数据，将正常培养的A组与向融合细胞中注入去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的融合细胞B组数据进行对照可知，后者的融合细胞发育成囊胚的成功率、囊胚中内细胞团的形成率都高于前者，说明Kd4d的mRNA既能提高融合细胞发育成囊胚的成功率，又能提高囊胚中内细胞团的形成率。2024.3
2023—2024学年度第二学期3月份阶段检测
高二生物
一、单选题
1. 绍兴是黄酒之乡，“麦曲酶长，酵米复芳；白梅酒酿，伴淋寒香；压滤琼浆，煎煮陈藏”是对绍兴黄酒精致复杂酿造工艺的描述。在黄酒的主发酵过程中，“开耙”（搅拌）是极为关键的一步。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 接种麦曲有利于淀粉的糖化，有利于“酒酿”菌种发酵
B. 煎煮的目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
C 陈藏有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香
D. 发酵过程中“开耙”可适当提供O2，调节pH，活化酵母
2. 酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图 Ⅰ 所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100 mL完全培养基，下列说法错误的是（ ）
A. 葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性环境、酵母菌产生次生代谢产物酒精等可抑制杂菌的繁殖
B. 用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109（个·L-1），此数值可能低于实际的活菌数
C. 可用干热灭菌法对培养皿、培养基进行灭菌，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌
D. 由图 Ⅱ 可知，丙瓶出现的原因可能是灭菌不彻底，丁组酵母菌产酒精能力比乙强
3. 从自然界筛选嗜盐菌（好氧型）的一般步骤：采集菌样→富集培养→纯种分离→计数及性能测定。图1示上述步骤中的一个环节，图2示该筛选过程中一个培养基上菌落的分布情况，其中白色部分为透明圈，黑点代表大小不同的菌落。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 富集培养必须在固体培养基中进行
B. 图1所示的接种方法也适合用于对细菌进行计数
C. 图2中嗜盐菌的耐盐性能最强的是乙
D. 图1和图2所示的培养基分别为选择培养基和鉴别培养基
4. 某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生原因，先将原始菌种接种到1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后
B. 在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数
C. 4号和8号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大
D. 该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异
5. 如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法正确的是（ ）
A. 培育植株①的过程为单倍体育种，获得的植株为纯合子
B. 选择植物的愈伤组织进行诱变处理获得优质的突变体，未体现细胞的全能性
C. 需要通过植物组织培养技术获得的植株只有①③④
D. 植株①②④⑤与植株A基因型相同的概率分别是0、0、1、0（不考虑基因突变）
6. 黑胫病对甘蓝型油菜危害十分严重，黑芥能抗黑胫病，两者不能直接杂交。为解决该问题，科研人员通过下图所示过程获得抗病品系。据图分析，下列相关叙述不正确的是（ ）
A. 最终获得的抗病植株具有完整的甘蓝型油菜和黑芥的遗传信息
B. 过程①可使用纤维素酶和果胶酶，过程②可利用PEG进行诱导
C. 过程③发生脱分化，过程④体现出植物细胞具有全能性
D. 黑芥与甘蓝型油菜自然状态下不能进行基因交流
7. 研究表明，髓系细胞触发受体2（TREM2）是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是（ ）
A. 步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞
B. 经步骤②诱导后融合的细胞既能分泌TREM2抗体又可无限增殖
C. 步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交
D. 步骤⑥和植物组织培养均需使用二氧化碳培养箱进行大规模培养
8. 基因组印记(通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达)阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞(类似受精作用)，最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养
B. 甲基化可能会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达
C. “孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
D. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来
9. 线粒体置换技术是将妈妈携带突变线粒体的卵子细胞核移植到去核的健康线粒体捐赠者卵胞浆中获得的重构卵母细胞，与携带者丈夫精子进行受精，从而获得重构胚胎也就是通常说的“三亲胚胎”，也被称为“第四代试管婴儿”。下列有关说法错误的是（ ）
A. 重构卵母细胞需培养成熟才可以与获能精子受精
B. 第四代试管婴儿的DNA来自携带者与其丈夫
C. 第四代试管婴儿可避免线粒体疾病
D. 第四代试管婴儿的培育还需要经历早期胚胎培养和胚胎移植等技术
10. 目前发现的双胞胎有同卵双胞胎、异卵双胞胎和“半同卵双胞胎”。1对“半同卵小姐弟双胞胎”形成过程如图所示，图3中染色单体分离后分别移向细胞的三个不同方向，从而分裂成a、b、c三个细胞，染色体全部来自父系的“合子”致死。其中两个细胞发育成姐弟二人。下列说法，正确的是（ ）
A. 受精卵发育为桑葚胚的过程是在透明带内完成的，孵化后进入囊胚期阶段
B. 排卵是指卵泡从卵巢中排出，图中卵子发育到减数分裂Ⅱ的中期
C. 若细胞a的染色体组成为MP1，则细胞b的染色体组成为MP2
D. 这对双胞胎来源于母亲的染色体相同，来源于父亲的染色体不一定不同
11. 如表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
限制酶 Alu Ⅰ BamH Ⅰ Sma Ⅰ Sau3A Ⅰ
识别序列切割位点 AG↓CT TC↑GA G↓GATCC CCTAG↑G CCC↓GGG GGG↑CCC ↓GATC CTAG↑
A. BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
B. Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C. ②④⑤对应的识别序列均能被Sau3AⅠ识别并切割
D. T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
12. THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述错误的是（ ）
EcoRⅠ BamHⅠ KpnⅠ MfeⅠ Hind Ⅲ
A. THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5′端
B. 构建基因表达载体时，用MfeⅠ、HindⅢ切割质粒，用EcoRⅠ、HindⅢ切割目的基因
C. 利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物1和引物4
D. 为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测其蛋白质含量
13. 为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用农杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF转移到大豆植株中，下图为重组Ti质粒上T-DNA的序列结构示意图。下列相关叙述不正确的是（ ）
A. 以水稻RNA为模板通过逆转录及PCR扩增可获得大量OsPTF基因
B. RNA聚合酶与启动子I识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录
C. 可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的的基因大豆愈伤组织
D. 用EcoRI、BamHI双酶切重组Ti质粒后，经电泳分离至少得到两条带
14. 疫苗是人类预防疾病强有力的手段，疫苗产业也是医疗卫生事业和生物技术产业的重点发展领域之一，目前生产疫苗的两种方法主要有：利用转基因工程菌和借助动物细胞的大规模培养。例如，生产乙肝疫苗时，可以将S基因导入大肠杆菌构建工程菌生产重组乙肝疫苗，或者大规模培养能够表达S蛋白的中国仓鼠卵巢细胞获得乙肝疫苗。下列有关两种方法叙述错误的是（ ）
A. 两种方法都需用转基因技术构建工程菌或工程细胞
B. 将S基因导入大肠杆菌构建工程菌时需要使用钙离子处理细胞
C. 体外培养中国仓鼠卵巢细胞时要定期更换培养液以创造无菌环境
D. 哺乳动物细胞表达的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白
15. 人类是乙肝病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为乙肝病毒基因工程疫苗的生产和使用流程，质粒中LacZ基因可使细菌能够利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 过程①最好的限制酶选择方案是BamHI和EcoRV
B. 质粒用限制酶BamHI和EcoRV切割后产生4个游离的磷酸基团
C. 过程②需要在培养基中加青霉素和X-gal以筛选蓝色的大肠杆菌菌落
D. 基因工程疫苗不会出现病毒的增殖和感染，安全性高
二、不定项选择题
16. 研究发现，小鼠四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育成胎盘等胚胎以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织。下列叙述正确的是（ ）
A. 将2细胞期胚胎用灭活病毒诱导法使2细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞
B. 嵌合体中的ES具有自我更新能力并只能分化为胎盘等胚外组织
C. 嵌合体胚胎发育至原肠胚时需移植入小鼠子宫内才可以进一步发育
D. 嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型不同
17. 科学家以糖蜜（含较多蔗糖）为原料，运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，在实验室发酵生产PHA（聚羟基脂肪酸酯）等新型高附加值可降解材料，工艺流程如图。下列相关说法正确的是（ ）
A. 发酵工程一般包括菌种选育等多个步骤，其中心环节是菌种扩大培养
B. 为在一定程度上避免杂菌污染，可适当降低发酵液中盐的浓度
C. 菌株H还能分泌蛋白酶、脂肪酶等分解餐厨垃圾来生成PHA
D. 可在发酵结束之后，采用过滤和沉淀等方法将菌株H从发酵液中分离出来
18. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（ ）
A. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对
B. 设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸
C. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物
19. 通过植物细胞工程对光果甘草进行培养以获得药物甘草西定，过程如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A. 过程③通常先在生长素与细胞分裂素比例高的培养基中培养
B. 过程④常用射线或化学物质处理后可从诱变体选出所需的突变体植株丙
C. 所得三种植株中乙和丙的遗传信息与甲相同，植株丁和甲是同一物种
D. 过程⑥中甘草西定可通过植物细胞培养获得，应将愈伤组织细胞悬浮培养
20. 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（CAR-T细胞疗法）被认为是极具前景的抗癌免疫疗法，该T细胞表面的嵌合抗原受体（简称CAR）能直接识别肿瘤细胞的特异性抗原。下图表示一种典型的CAR-T细胞疗法的操作流程。下列叙述正确的是（ ）
A. CAR-T细胞通过CAR特异性识别肿瘤细胞
B. 该免疫疗法利用T细胞清除肿瘤细胞体现了免疫防御功能
C. 回输到病人体内的CAR-T细胞通过体液运输到达肿瘤细胞处
D. 利用病人自身的免疫细胞治疗癌症，可尽量避免自身免疫系统的攻击
三、非选择题
21. 青霉素能够破坏细菌的细胞壁，从而杀死细菌，对革兰氏阳性菌有效，而对革兰氏阴性菌无效。工业上常用产黄青霉菌来生产青霉素，图a为生产流程图，请回答下列问题：
（1）在制备该培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH调至___性，接种之前的过程①、②都属于___。
（2）发酵罐中发酵时要及时添加必要的营养成分，还要严格控制___等发酵条件。
（3）青霉菌在代谢过程产生的青霉素具有杀菌作用，有同学认为无需对培养液进行严格灭菌，你是否同意这样的观点？___。为什么___。
（4）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌，是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，也存在于某些植物细胞中（如豆血红蛋白），还存在于某些细菌细胞中（如透明颤菌）。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了图b所示的方案：
溶菌酶能够溶解细菌的细胞壁，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理①、②所用的酶分别是上述两种酶中的___，请简述处理④从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路：___。
22. 绿色荧光蛋白在紫外线的照射下能发出绿色荧光，最初是在一种海蜇中被发现的。转绿色荧光基因（Gfp）的幼鼠在紫外光下能发出绿色荧光。进一步研究发现，绿色荧光蛋白可以帮助人们了解细胞工作的机制，通过寻找荧光便可知道基因何时以及为什么“开启”，这项成就被称为“21世纪的显微镜”。下图表示转基因绿色荧光小鼠的培育过程，图中Neo基因编码的产物能分解G418，G418是一类对原核细胞和真核细胞都有毒性的抗生素。请回答下列有关问题：
（1）①过程将绿色荧光蛋白基因与目的基因连接起来利用的工具是___________。
（2）可以从___________中提取胚胎干细胞，③过程胚胎干细胞培养需要的条件有___________（答出2点即可）。
（3）⑤过程应把转基因胚胎干细胞导入囊胚___________，为了获得多只小鼠c，⑥过程的操作是___________，该过程的操作要求是_______________。
（4）让转基因干细胞与这些细胞一起发育成胚胎，若幼鼠_________________，则说明Gfp基因在幼鼠体内成功表达。
（5）据图分析，Neo基因在转基因绿色荧光小鼠的培育过程中发挥作用的机理是____________。
23. 改良水稻的株高和产量性状是实现袁隆平先生“禾下乘凉梦”的一种可能途径。研究人员克隆了可显著增高和增产的eui基因，并开展了相关探索，过程如下图所示。请回答下列问题：
（1）步骤Ⅰ的花药培养过程中，可产生单倍体愈伤组织，将其培养于含______的培养基上，可促进产生二倍体愈伤组织，这样的愈伤组织产生的组培苗都是______。在培养得到丛芽的过程中，培养基中添加的植物激素主要是______。
（2）步骤Ⅱ中，用从细胞内获得的RNA经过______的作用可得到eui基因，对该基因进行PCR扩增时一般在引物的______端添加限制酶的识别位点。
（3）利用农杆菌介导将表达载体导入植物细胞的过程中，整合到植物细胞染色体DNA的区段是______，转化后的细胞需通过______形成植株。
（4）为筛选含重组Ti质粒的菌株，需在培养基中添加______，获得的农杆菌菌株经鉴定后，应侵染Ⅰ中的______，以获得转基因再生植株。
24. 双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过重组 DNA 或细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图 1 是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2 是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。
（1）图1中①步骤注射癌胚抗原的目的是_______________________________。过程③所用的HAT培养基从用途上看属于选择培养基，在该培养基上，_________________________细胞不能生长。
（2）过程④中将杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用__________________原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体的优点有_____________________________________________________________________________。
（3）图1注射长春碱后，要获取单克隆杂交—杂交瘤细胞，方框内至少需要经过________次筛选。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞因为___________________________________________________________________（答 2 点）等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
（4）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是______________________________________________________________________。
25. 我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①~⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请据图分析回答：
（1）获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是___。
（2）进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有___，且在进行细胞原代培养时会出现___现象。
（3）动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是___。图中过程⑤用到胚胎移植技术，其实质是早期胚胎在___条件下空间位置的转移。除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有___（答出两点）。
（4）研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是___。
