山东省潍坊市诸城繁华中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物学试题（含解析）

诸城繁华中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物学试题 2024.4
一、选择题：本题共15小题，每题2分，每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 明代冯时任在《酒中》记载：“每至桑落时，取其寒暄得所，以井水酿酒甚佳”意思是每到桑叶飘落的季节，井水的温度最适宜酿酒，所酿造的酒品质最好。有关桑叶酒的酿制，下列说法错误的是（　　）
A. 用密闭容器进行桑叶酒发酵时，需定期放气
B. 采用井水酿制，主要是因井水温度有利于微生物发酵
C. 酿制中期起泡现象是微生物有氧呼吸产生的CO2释放形成的
D. 桑叶酒发酵时，可用重铬酸钾测定酒精含量的变化
2. 纤维素分解菌是一种新型饲料添加剂，能够提高粗纤维饲料的转化率，为养殖业提供更多的饲料来源。为得到高产的纤维素分解菌。研究人员欲从反刍动物粪便中进行分离筛选，步骤如下，下列分析正确的是（ ）
A. 为防止杂菌污染，一般采用干热灭菌法对接种工具和培养基A、B进行灭菌
B. 培养基B是选择培养基，其中应加入纤维素作为唯一氮源
C. 用甲培养基中得到的菌落来推算粪便中纤维素分解菌的量时，结果偏大
D. 丙中出现的透明圈越小说明细菌分解纤维素能力越弱
3. 两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 过程①制备植物细胞原生质体时，需使用纤维素酶、淀粉酶和果胶酶处理相关植物细胞
B. 过程②的目的是使中间偃麦草的染色体断裂，耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段
C. 过程③中通常采用PEG和灭活的病毒诱导原生质体相互融合从而得到杂种细胞
D. 杂种细胞形成杂种植株必须先在内质网的作用下形成细胞壁，然后经过脱分化、再分化两个过程
4. 悬浮培养的动物细胞会因细胞密度过大、有害代谢产物积累等因素而分裂受阻。生产上常用灌流式培养避免这些现象出现。灌流式培养是在细胞培养管内，一边不断注入新鲜培养基，一边将培养液的上清液不断移出。下列相关叙述错误的是（　　）
A. 灌流式培养的细胞会贴壁生长，但不会出现接触抑制现象
B. 灌流是在细胞密度达到一定浓度或者营养物质低于一定浓度时进行
C. 过高的灌流速率会导致营养物质不能得到充分利用，造成培养基浪费
D. 配制灌流式培养所需培养基时应考虑细胞生存的液体环境的渗透压
5. 采用CTAB法可获得高纯度的DNA，CTAB是阳离子去污剂，可溶解细胞膜，与核酸形成复合物，溶于乙醇。具体步骤∶将植物叶片研磨成粉末，加入CTAB提取液（含CTAB、2mol/LNaCl），离心后，取上清液；上清液中加入氯仿、异戊醇混合液，充分混匀，离心取上清液，加入异丙醇于-20℃沉淀，再用RNA酶、95%的乙醇沉淀DNA；自然干燥后，加缓冲液溶解DNA后备用。下列说法错误的是（ ）
A. CTAB-核酸复合物溶于高盐溶液中，可通过加乙醇使核酸沉淀并去除CTAB
B. 推测氯仿和异戊醇抽提可除去蛋白质、多糖等杂质，异丙醇或乙醇可将DNA沉淀分离
C. CTAB可通过加速解聚核蛋白用于提取叶绿体DNA和质粒DNA
D. 提取的DNA可在一定温度下利用二苯胺溶液鉴定
6. 骨骼肌细胞膜损伤后，会被TRIM72分子快速感知，该分子会将细胞内囊泡转运到损伤部位形成膜补丁，进而修复细胞膜。TRIM72属于TRIM蛋白家族成员，具有RING、B-box、Coiled-coil和SPRY四个区域，B-box区相互作用有利于TRIM72分子间二硫键的形成，促进TRIM72的寡聚化，SPRY区能与囊泡结合。下列说法错误的是（　　）
A. 细胞膜受损后会改变细胞膜的通透性，影响细胞的稳态
B. B-box区与SPRY区功能不同的直接原因是分子结构不同
C. 多个TRIM72分子形成寡聚体的过程中会脱下水分子
D. SPRY区能与囊泡结合说明该区域具有一定的亲脂性
7. 我国古代劳动人民根据红曲霉有耐酸的特点，采用明矾和酸米来调节酸度抑制杂菌，培养出高纯度的红曲，红曲可以用于传统黄酒的制作。下列说法错误的是（　　）
A. 将红曲加入发酵坛内相当于微生物培养过程中的“接种”
B. 通过明矾和酸米调节底物的酸度抑制杂菌的生长属于选择培养
C. 黄酒酿造初期利用木耙搅拌，目的是通气和调节温度以加快菌种的生长繁殖
D. 黄酒制作属于传统发酵技术，其所用的大米、糯米等需要进行严格灭菌
8. 为纯化某种细菌，某小组在培养基上划线接种了该种细菌，培养结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A. 接种环应该在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧实现灭菌
B. 每次接种前接种环都需灼烧灭菌，完成图示接种过程至少需灼烧3次
C. 使用后的培养基在丢弃前要进行灭菌处理，以免污染环境
D. 为验证培养基灭菌是否合格，该实验应再设计一个未接种的培养基作为对照
9. 木质素是一类复杂的有机聚合物，在细胞壁的形成中特别重要，赋予木材和树皮刚性且不容易腐烂的特性。科研人员从木材场土壤中筛选分离出木质素分解菌并进行鉴定，实验流程如图所示。下列说法正确的是（　　）
A. 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要消毒，操作完成后一定要洗手
B. 图示的接种方法还可用于微生物的计数，统计结果往往比活菌的实际数目少
C. 若每次稀释倍数都是10倍，则步骤④试管内是9mL无菌水，共将土壤稀释了105倍
D. 若培养得到⑥所示的菌落，则所用的培养基是以木质素为唯一碳源
10. 甜叶菊植株中所含的甜菊糖是理想的蔗糖替代甜味剂，但甜叶菊种子繁殖遗传性状不稳定。科研人员利用植物组织培养技术提高甜叶菊的繁殖效率，其不同阶段的培养结果如图所示。下列说法错误的是（　　）
A. 培养至图1所示的过程一般不需要光照
B. 愈伤组织再分化为根和丛芽，本质上是基因选择性表达的结果
C. 与图1相比，图2培养基中生长素与细胞分裂素含量的比值显著高于1
D. 若用该技术直接生产甜菊糖，只需培养至图1所示的阶段
11. 细胞培养肉技术是一种新型食品合成生物技术，其合成过程是首先将肌肉干细胞从肌肉组织中分离出来，随后在体外大规模培养细胞获得肌肉、脂肪等组织，再经食品化加工得到肉类食品。下列说法正确的是（　　）
A. 宜用胃蛋白酶处理肌肉组织得到分散的肌肉干细胞
B. 培养过程中需要定期更换培养液，以防止杂菌污染
C. 体外大规模培养细胞时，培养箱中需要O2，不需要CO2
D. 肌肉干细胞具有组织特异性，只能培养获得肌肉、脂肪等组织
12. 荷斯坦奶牛产奶量高，某公司引进了纯种荷斯坦奶牛，欲利用胚胎移植和胚胎分割技术繁育高产的荷斯坦奶牛群体。下列说法错误的是（　　）
A. 胚胎分割可以提高胚胎的利用率 B. 胚胎移植一般选择囊胚或原肠胚时期的胚胎
C. 胚胎分割可看作动物无性繁殖或克隆的方法之一
D. 胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
13. 科研人员用基因工程的方法从大肠杆菌细胞内获得了干扰素，干扰素主要用于治疗慢性甲型和乙型肝炎。下列说法正确的是（　　）
A. 干扰素是一种具有干扰病毒复制作用的糖蛋白
B. 转录干扰素基因需要用到解旋酶和RNA聚合酶
C. 发酵生产的干扰素属于大肠杆菌的初生代谢产物
D. 只要检测出大肠杆菌细胞中含有干扰素基因就可用于生产干扰素
14. 科研人员将4个基因（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态，具有活跃的分裂能力，称为iPS细胞。下列说法错误的是（　　）
A. 实验中使用的逆转录病毒属于基因工程中的载体
B. 导入的4个基因可能与基因表达调控有关
C. 若要了解每个基因作用的相对大小，实验设计的对照组应导入上述4个基因
D. iPS细胞进一步分化成各种组织细胞的过程不能体现细胞的全能性
15. 研究发现，在某植物液泡膜上的Na+/K+逆向转运蛋白可提高其耐盐碱能力。科研人员以该转运蛋白对应的AINHX基因作为目的基因，通过转基因技术培育出了耐盐碱的马铃薯，AINHX基因两端的核苷酸序列如下表所示。下列说法正确的是（　　）
已知序列 5'-AACTATGCGCTCATGA- - - - GCAATGCGTAGCCTCT
3'-TTGATACGCGAGTACT- - - - CGTTACGCATCGGAGA
PCR引物 ①5'-TTGATACGCGAGTACT ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT
③5'-AGAGGCTACGCATTGC ④5'-AACTATGCGCTCATGA
A. 构建表达载体使用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体
B. 利用PCR技术扩增AINHX基因时，需要选择引物③和④
C. 培育耐盐碱的马铃薯时，可利用显微注射法将重组载体导入受体细胞
D. 应从分子水平上对转基因马铃薯进行检测，以确定其能否表现出耐盐碱的特性
二、选择题：本题共5小题，每题3分，每小题有一个或多个选项符合题目要求。
16. 微生物发酵可以将粮食（如玉米、小麦等）及各种植物纤维加工成燃料乙醇，将燃料乙醇和普通汽油按一定比例混配，就形成了目前广泛使用的乙醇汽油。下列说法正确的是（　　）
A 微生物发酵结束后，可以采用过滤、沉淀等纯化措施来获得乙醇
B. 发酵过程要随时检测培养液中的微生物数量和产物浓度
C. 可以使用非粮食生物材料（如秸秆）来规避生产乙醇汽油导致粮食短缺的风险
D. 通过微生物发酵可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白作为食品添加剂
17. 我国科学家经多年反复试验，获得了体细胞克隆猴。培育过程中，为提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了重构胚，克隆猴的培育流程如图所示。下列说法正确的是（　　）
A. 从胎猴中取出的体细胞，需在添加天然血清的合成培养基中培养
B. 卵母细胞的“去核”实际是指去除卵母细胞的纺锤体-染色体复合物
C. TSA处理重构胚可降低组蛋白的乙酰化水平，从而提高胚胎的发育率和妊娠率
D. 与鼠相比，培育克隆猴对人类疾病致病机制的研究、新药研发等具有更重要的意义
18. 重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是（　　）
A. 通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B. 无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C. 在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D. 获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子
19. 关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是（　　）
A. DNA溶于酒精，蛋白质不溶于酒精，利用这一原理初步分离DNA与蛋白质
B. 将研磨液过滤到烧杯中，在冰箱放置一段时间后，上清液中含DNA和蛋白质
C. 将析出的丝状物或沉淀物溶于2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂在沸水浴下鉴定DNA
D. 实验结果变色不明显，可能是研磨不充分导致DNA不能从细胞核中充分释放
20. 以纯化鉴定后的重组大杆菌RecQ解旋酶免疫小（2n=40），融合免疫小的脾细胞及骨髓瘤细胞（2n=62-68）筛选杂交瘤细胞，制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体（mAb）；相关检测结果如图A、B所示。有关说法正确的是（ ）
A. 重组大肠杆菌RecQ解旋酶可刺激相应B淋巴细胞增殖分化
B. 单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选和2次抗原检测
C. 杂交瘤细胞在融合的过程中可能会发生染色体数目的丢失
D. 该mAb能特异性与RecQ解旋酶结合，在稀度为1/800时可显著抑制RecQ解旋酶与DNA的结合
三、非选择题：本题共5小题，共55分。
21. (10分，除特殊标注外，每空1分)不同动物乳汁的成分虽各有差异，但都含有丰富的营养成分，是微生物生长繁殖的良好培养基。乳制品一旦被微生物污染，会腐败变质而失去食用价值，甚至引起食物中毒。
（1）鲜乳汁常用巴氏消毒法处理，其优点是_________（2分）。若要制成发酵乳，需要对鲜乳汁进行灭菌后再接种乳酸菌发酵，此处的灭菌是指_______（2分）。
（2）根据食品安全的有关标准，每毫升合格的牛奶中细菌总数不超过50000个。若要测定牛奶中微生物数量，可利用特定的______在显微镜下直接计数，但该方法统计的结果往往比实际的活菌数要偏_____，原因是______（2分）。
（3）通常新挤出的乳汁在25℃可保持6h不腐败变质，在这段时间内细菌是受到抑制的，待乳汁的自身杀菌作用消失后，将乳汁置于室温下，可以观察到乳汁所特有的菌群交替现象，如图所示。推测下列说法合理的是_______（2分）。
A. 新鲜乳汁中含有溶菌酶等抗菌物质，对微生物具有抑制作用
B. 新挤出的乳汁在25℃保持6h后，乳汁中的微生物全部来自空气
C. 乳链球菌代谢使乳汁pH降低后，因乳酸杆菌耐酸能力强而开始大量繁殖
D. 当pH降低至3．0~3．5时，绝大多数细菌受到抑制，真菌开始大量繁殖
E. 乳汁的乳糖在胨化细菌阶段前基本已消耗掉，能分解蛋白质和脂肪的胨化细菌开始大量繁殖
22. (11分，除特殊标注外，每空1分)癌症的免疫疗法是指重新激活抗肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫细胞，进而克服肿瘤的免疫逃逸、某些种类癌细胞表面高表达银蛋白PSMA，CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。科研人员尝试构建双特异性抗体PSMA×CD28的生产流程，如图1所示；双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理，如图2所示。
（1）据图1分析，制备双特异性抗体PSMA×CD28的过程中，用到的动物细胞工程技术主要有_______（2分）（答出2点即可）。
（2）双特异性抗体PSMA×CD28制备时，应先将______（物质X）（2分）分别注射到小鼠体内再分离出B淋巴细胞。将B淋巴细胞分别与小鼠的骨髓瘤细胞融合，常用的诱导方法有____（答出2种即可）（2分）。
（3）抗体都是由两条H链和两条L链组成的4条肽链对称结构。据图2分析，杂交瘤细胞A×B会产生多种抗体，原因是______（2分）。双特异性抗体PSMA×CD28协助杀伤癌细胞的机理是_____（3分）。
23. (11分，除特殊标注外，每空1分)小鼠肿瘤转移抑制基因（kissl基因）仅在特定组织中表达，在雌性激素诱导下，细胞内信号传导系统可以与kissl基因启动子P的特定区域结合，激活kissl基因的转录。
（1）利用PCR技术扩增kissl基因时，设计引物的作用是______（2分）。PCR是在PCR扩增仪中自动完成的，完成以后常采用_______来鉴定PCR的产物。
（2）据图分析，在构建kissl基因表达载体时，应使用限制酶______对图1所示质粒和图2所示含kissl基因的DNA片段分别进行切割，此过程选用这两种限制酶的原因是______（2分）。
（3）研究人员扩增了不同长度的启动子片段P1~P5，分别构建这些片段与绿色荧光蛋白基因融合的载体，转入体外培养_______（填“含kissl基因且能表达”或“含kissl基因不能表达”或“不含kissl基因”）的小鼠细胞中，以确定不同片段的转录活性。对导入不同启动子的细胞进行绿色荧光强度检测，结果如图所示请推测哪种启动子片段的转录活性最高，并阐释你的理由_______（2分）。根据启动子P的激活机制，推测启动子P应用于基因工程的优势是_______（2分）。
24. (10分，除特殊标注外，每空1分)随着畜牧业的发展，现代化的繁育技术早已替代传统的奶牛育种技术。在我国某奶牛现代化胚胎生产工厂，建立了一套成熟的生产高产奶奶牛胚胎的生产线，请根据所学知识。回答下列问题：
（1）为了改良本地奶牛产奶量低以及解决生产成本的问题，研究人员从澳大利亚购买了20头雌性荷斯坦奶牛，精子直接从精子库购买，精子解冻之后，在进行体外受精之前我们需要对精子：进行_________处理。为了增加卵细胞的数量，可以对荷斯坦奶牛注射_________。进行体外受精之后，需要进一步判断卵细胞是否受精，判断的方法是_________（2分）。
（2）获得早期胚胎之后，还不能直接作为商品进行售卖，还需要对其进行性别鉴定。SRY-PCR技术是比较常用的性别鉴定方法，利用的原理是通过判断胚胎细胞是否具备雄性个体Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）来判断胚脸的性别。在进行PCR时应选择SRY基因的一段碱基作引物，取胚胎中_________细胞的DNA作模板，最后利用SRY基因特异性探针，对扩增产物进行检测；我们应该选择反应结果呈_________（填“阴性”或“阳性”）者作为商品出售，原因是_________（2分）。
（3）得到胚胎后，通过胚胎移植技术就可以让本地牛生出具备高产奶优良性状的雌性奶牛，且高产奶性状不受本地牛的影响，原因是_________（2分）。
25. (13分，除特殊标注外，每空1分)研究人员利用引进的优良品种奶牛A、B作为供体，用本地品种奶牛C作为受体，大规模培育出优良品种奶牛，操作流程如图。
（1）过程①常用_______处理，目的是使A牛_______(2分)。
（2）采集的精子与卵母细胞要分别在体外进行____（2分），才能用于体外受精。只有发育到_____期的卵子才能与精子结合。
（3）胚胎移植前需对受体母牛C进行_______处理，为供体的胚胎提供相同的生理环境，以确保胚胎移植后能正常发育。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是_______（2分）。
（4）应用胚胎分割技术，应选择发育良好、形态正常的_____(2分)胚进行分割。在对内细胞团进行分割时，为保证正常发育，须做到______。如需对初期胚胎进行性别鉴定，宜取囊胚期的_______细胞进行鉴定。
诸城繁华中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物学试题
答案 2024.4
一、选择题：本题共15小题，每小题只有一个选项符合题目要求。
1. C【详解】A、酿酒时酵母菌无氧呼吸产生CO2，需定期放气，A正确；B、井水温度较高，采用井水酿制，主要是因井水温度有利于微生物发酵，B正确；C、酿制中期起泡现象是微生物无氧呼吸产生的CO2释放形成的，C错误；D、桑叶酒发酵时产生酒精，酸性重铬酸钾遇酒精变成灰绿色，可根据颜色深浅测定酒精含量的变化，D正确。故选C。
2. D【详解】A、对接种工具可以采取干热灭菌，培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌，A错误；B、纤维素的元素组成是C、H、O，培养基B中应加入纤维素作为唯一碳源，不能作为氮源，B错误；C、甲培养基是选择培养基，用涂布平板法操作得到菌落，培养基上生长的菌落不一定均为纤维素分解菌，其他杂菌可能利用纤维素分解菌的分解产物进而在此培养基上存活，同时可能多个细菌共同形成一个菌落，此时按照菌落的数目记作一个细菌，故综合来看，无法判断推算结果偏大偏小，C错误；D、根据培养基丙中菌落周围形成的透明圈的大小来判断细菌分解纤维素的能力，透明圈越小，细菌分解纤维素能力越弱，D正确。故选D。
3.B【详解】A、过程①是获得植物细胞的原生质体，由于植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，不需要淀粉酶，A错误；B、根据题干信息“将其中一个细胞的染色体在融合前断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种”，故定程2通过紫外线照射是使中间偃麦草的染色体断裂，耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段，B正确；C、灭活的病毒诱导是动物细胞融合特有的方法，诱导植物原生质体融合常用物理法、化学法，C错误；D、杂种细胞形成细胞壁需要高尔基体的参与，D错误。故选B。
4. A【详解】A、悬浮培养的动物细胞不出现贴壁生长现象，A错误；B、悬浮培养的动物细胞会因细胞密度过大、有害代谢产物积累等因素而分裂受阻，而灌流是在细胞密度达到一定浓度或者营养物质低于一定浓度时进行，B正确；C、过高的灌流速率，培养的细胞没有及时利用营养物质，会导致营养物质不能得到充分利用，造成培养基浪费，C正确；D、动物细胞的细胞外液的渗透压是相对稳定且适宜的，配制灌流式培养所需培养基时应考虑细胞生存的液体环境的渗透压，D正确。故选A。
5. C【详解】A、由题干可知，CTAB-核酸复合物溶于2mol/LNaCl溶液即高盐溶液中，DNA不溶于酒精，因此可通过加乙醇使核酸沉淀并去除CTAB，A正确B、由题干“上清液中加入氯仿、异戊醇混合液”可知，氯仿和异戊醇抽提可除去蛋白质、多糖等杂质；由题干“充分混匀，离心取上清液，加入异丙醇于-20℃沉淀，再用RNA酶、95%的乙醇沉淀DNA”可知，异丙醇或乙醇可将DNA沉淀分离，B正确；C、叶绿体DNA和质粒DNA不与核蛋白结合，因此CTAB不能通过加速解聚核蛋白来提取这两种DNA，C错误；D、DNA在一定温度水浴条件下，与二苯胺反应呈蓝色，因此可利用二苯胺溶液鉴定，D正确。故选C
6. C【详解】A、细胞膜有控制物质进出细胞的功能，受损后细胞膜通透改变，影响细胞稳态，A正确；B、蛋白质的功能不同直接原因是分子结构不同，B正确；C、TRIM72分子形成寡聚体的过程中，二硫键的形成，不会脱下水分子，C错误；D、SPRY区能与囊泡结合说明该区域具有一定的亲脂性，D正确。故选C。
7. D【详解】A、微生物培养工程中的“接种”是放入微生物，题干说红曲可以用于传统黄酒的制作，即将红曲加入发酵坛内相当于微生物培养过程中的“接种”，A正确；B、选择培养基是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，所以通过明矾和酸米调节底物的酸度抑制杂菌的生长属于选择培养，B正确；C、黄酒酿造初期利用木耙搅拌，增加溶氧量，有利于散热，从而达到通气和调节温度的目的，以加快菌种的生长繁殖，C正确；D、黄酒制作属于传统发酵技术，传统发酵技术是直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术，所以其所用的大米、糯米等不需要进行严格灭菌，D错误。故选D。
8. B【详解】A、接种时，对接种环等金属用具通常用灼烧灭菌法，将接种环直接在酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧，可以迅速彻底地灭菌，A正确；B、平板划线法接种和分离微生物时，每划线一次需灼烧一次接种环，最后一次划线结束时，为防止菌种污染仍需要灼烧一次，共需灼烧4次接种环，B错误；C、为了防止环境污染或感染操作者，使用过的培养基在丢弃之前要进行灭菌处理，C正确；D、微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将一个未接种的平板倒置培养作为对照以检测培养基灭菌是否彻底，D正确。故选B。
9. B【详解】A、取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌，操作完成后一定要洗手，A错误；B、图示的接种方法是稀释涂布平板法，方法还可用于微生物的计数，该方法接种时当两个或多个细胞（细菌）连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果往往比活菌的实际数目少，B正确；C、若每次稀释倍数都是10倍，则步骤④试管内是9mL无菌水，共将土壤稀释了104倍，C错误；D、若培养得到了如步骤⑥所示的菌落，已知这些细菌均为异养型细菌，菌5周围没有透明圈，说明菌5不是木质素分解菌；菌1～4周围均有透明圈，说明这些菌是木质素分解菌，则步骤⑥所用的培养基是添加了木质素的牛肉膏蛋白胨的培养基，D错误。故选B。
10. C【详解】A、培养至图1所示的过程，为脱分化过程，该培养过程一般不需要光照，A正确；
B、愈伤组织再分化为根和丛芽，发生细胞分化，细胞分化本质上是基因选择性表达的结果，B正确；C、图1培养基中（脱分化过程）生长素与细胞分裂素含量的比值约等于1，促进愈伤组织的形成；图2培养基中（再分化过程）生长素与细胞分裂素含量的比值小于1，促进芽的分化，C错误；D、若用该技术直接生产甜菊糖（细胞产物），只需培养至图1（愈伤组织）所示的阶段即可，D正确。故选D。
11. D【详解】A、宜用胰蛋白酶处理肌肉组织得到分散的肌肉干细胞，A错误；B、培养过程中需要定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害，B错误；C、体外大规模培养细胞时，培养箱中需要O2供细胞代谢利用，需要CO2维持pH，C错误；D、成体干细胞具有组织特异性，只能分化为特定的细胞或组织，肌肉干细胞属于成体干细胞具有组织特异性，只能培养获得肌肉、脂肪等组织，D正确。故选D。
12. B【详解】A、胚胎分割可以将早期胚胎分割多份，再经移植获得同卵双胎或多胎，所以说胚胎分割可以提高胚胎的利用率，A正确；B、胚胎移植一般选择桑葚胚或囊胚时期的胚胎，B错误；C、胚胎分割使得来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一，C正确；D、胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，D正确。故选B。
13. A【详解】A、干扰素是一种具有干扰病毒复制作用的糖蛋白，A正确；B、转录干扰素基因需要用到RNA聚合酶，不需要解旋酶，B错误；C、发酵生产的干扰素（细胞生命活动不需要的产物）属于大肠杆菌的次级代谢产物，C错误；D、大肠杆菌细胞中有干扰素基因不一定表达，需要检查有没有产生干扰素，D错误。故选A。
14. D【详解】A、题干中将4个基因（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，使用的逆转录病毒属于基因工程中的运载体，A正确；B、题干中说导入4个基因后，在培养ES细胞的培养基上培养2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态，具有活跃的分裂能力，所以说导入的4个基因可能与基因表达调控有关，B正确；C、若要了解每个基因作用的相对大小，实验设计的对照组应导入上述4个基因，实验组分别加入4个基因中的3个基因，通过比较实验组和对照的实验现象，得出每个基因作用的相对大小，C正确；D、细胞的全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性，而iPS细胞进一步分化成各种组织细胞的过程能体现细胞的全能性，D错误。故选D。
15. B【详解】A、构建基因表达载体使用的工具是限制酶、DNA连接酶和载体，使用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，而载体不是工具酶，A错误；B、引物是一段已知目的基因的核苷酸序列，③与已知目的基因的这条链3'-TTGATACGCGAGTACT- - - - CGTTACGCATCGGAGA的5'到3'的部分序列相同，④与已知目的基因的这条链5'-AACTATGCGCTCATGA- - - - GCAATGCGTAGCCTCT的5'到3'的部分序列相同，所以利用PCR技术扩增AINHX基因时，需要选择引物③和④，B正确；C、培育耐盐碱马铃薯时，常用农杆菌转化法将重组载体导入受体细胞，C错误；D、确定其能否表现出耐盐碱的特性，应从个体水平上对转基因马铃薯进行检测，D错误。故选B。
二、选择题：本题共5小题，每小题有一个或多个选项符合题目要求。
16. BC【详解】A、因为微生物发酵结束后，产品是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品，A错误；B、发酵过程要随时检测培养液中的微生物数量和产物浓度，以了解发酵进程，B正确；C、乙醇汽油是90%的普通汽油与10%的燃料乙醇调和而成的，由于燃料乙醇所占比例较低，虽然需要消耗部分粮食，但不会增加粮食短缺的风险。而且在生产燃料乙醇时，可以利用秸杆、稻草等加工转化为乙醇，所以可以使用非粮食生物材料（如秸秆）来规避生产乙醇汽油导致粮食短缺的风险，C正确；D、单细胞蛋白，也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料，人工培养的微生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团，通过发酵工程获得的大量的微生物菌体是单细胞蛋白，所以通过微生物发酵可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白，但不能作为食品添加剂，D错误。故选BC。
17. ABD【详解】A、因为动物细胞培养需要在由糖类、氨基酸、无机盐、维生素等构成的合成培养基的基础上，加入血清等天然成分，所以从胎猴中取出的体细胞，需在添加天然血清的合成培养基中培养，A正确；B、将卵母细胞培养到减数第二次分裂中期后，进行去核操作，去核事实上是去除卵母细胞的纺锤体-染色体结构，B正确；C、TSA是组蛋白脱乙酰酶抑制剂，用TSA处理重构胚可提高组蛋白的乙酰化水平，调节重构胚相关基因的表达，从而提高胚胎的发育率和妊娠率，C错误；D、猴属于灵长类动物，与人更接近，因此与鼠相比，培育克隆猴对人类疾病致病机制的研究、新药研发等具有更重要的意义，D正确。故选ABD。
18. BD【详解】A、通过PCR1获得产物AB需要进行3轮PCR扩增，A错误；B、AB下链的延伸方向向左，CD上链的延伸方向向右，所以无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD，B正确；C、需要分别在不同的反应体系中通过PCR获得AB和CD，C错误。故选BD。
19. A【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离，A错误；B、DNA提取的实验中，要将研磨液过滤到烧杯中，在冰箱放置一段时间后，取上清液，所以上清液中含有DNA和蛋白质，低温可以防止DNA被分解，B正确；C、DNA鉴定时，将提取到的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂，在水浴加热下呈现蓝色，C正确；D、如果出现实验结果变色不明显，可能是研磨不充分导致DNA不能从细胞核中充分释放，提取的DNA分子减少，D正确。故选A。
20. ACD【详解】A、重组大肠杆菌RecQ解旋酶对于小鼠来说是抗原，可以刺激相应B淋巴细胞增殖分化产生其抗体，A正确；B、单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选和1次抗原检测，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出产特定抗体的杂交瘤细胞，再对该细胞进行克隆化培养和抗原抗体杂交检测，B错误；C、融合免疫小的脾细胞及骨髓瘤细胞（2n=62-68），可知杂交瘤细胞在融合的过程中可能会发生染色体数目的丢失，C正确；D、由图B可知，该mAb能特异性与RecQ解旋酶结合，据图2分析，单抗稀释度为1/800时RecQ解旋酶结合DNA活性最低，所以在稀度为1/800时可显著抑制RecQ解旋酶与DNA的结合，D正确。故选ACD。
三、非选择题：本题共5小题。
21.【答案】（1） ①. 可以杀死乳汁中的绝大多数微生物，并且不会破坏牛奶的营养成分 ②. 使用强烈理化方法杀死鲜乳汁中所有的微生物
（2） ①. 细菌计数板（或血细胞计数板） ②. 大 ③. 显微镜直接计数统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和 （3）ACDE
【小问3详解】A、通常新挤出的乳汁在25℃可保持6h不腐败变质，在这段时间内细菌是受到抑制的，说明新鲜乳汁中含有溶菌酶等抗菌物质，对微生物具有抑制作用，A正确；B、新挤出的乳汁在25℃保持6h后，由曲线可知，6h后的乳汁中喊你有少量的乳链球菌和乳酸杆菌，所以6h后乳汁中的微生物不全部来自空气，B错误；C、由图可知，6h后，乳链球菌的含量逐渐增加，PH逐渐下降，而乳酸杆菌随着P会下降，乳酸杆菌的数量逐渐增加，所以乳链球菌代谢使乳汁pH降低后，因乳酸杆菌耐酸能力强而开始大量繁殖，C正确；D、由图可知，当pH降低至3．0~3．5时，乳链球菌和乳酸杆菌的数量下降直至为0，即绝大多数细菌受到抑制，真菌开始大量繁殖，D正确；E、由图可知，PH降至3~3.5时，真菌数量先增加后减少，意味着乳汁中的乳糖基本消耗完了，真菌没有可以利用的碳源，所以数量下降；而胨化细菌因为能分解蛋白质和脂肪，开始大量繁殖，E正确。故选ACDE。
22. 【答案】（1）动物细胞培养、动物细胞融合
（2） ①. PSMA、CD28 ②. PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法
（3） ①. 融合细胞会表达出两种L链和两种H链，而L链和H链又是随机组合的 ②. 双特异性抗体PSMA×CD28既能结合PSMA，又能结合CD28，使CD28在癌细胞与T细胞结合部位聚集，从而有效激活T细胞杀伤癌细胞
【小问3详解】融合细胞会表达出两种L链和两种H链，而L链和H链又是随机组合的，所以杂交瘤细胞A×B会产生多种抗体。双特异性抗体PSMA×CD28协助杀伤癌细胞的机理是双特异性抗体PSMA×CD28既能结合PSMA，又能结合CD28，使CD28在癌细胞与T细胞结合部位聚集，从而有效激活T细胞杀伤癌细胞。
23.【答案】（1）①. 使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸 ②.琼脂糖凝胶电泳
（2）①. HindⅢ和KpnI ②. 目的基因和启动子含HindⅢ和KpnI的识别序列；HindⅢ和KpnI酶切后构建的表达载体中目的基因与启动子的转录方向一致
（3）①. 含kiss1基因且能表达 ②. P3的转录活性最高，因为导入P3的细胞中绿色荧光强度最强 ③. 以P作为目的基因的启动子，可通过外源雌激素调控启动子的激活，进而调控目的基因的表达
【小问2详解】质粒上启动子和终止子之间有四个酶切位点，目的基因和启动子上含HindⅢ和KpnI的识别序列，且HindⅢ和KpnI酶切后构建的表达载体中目的基因与启动子的转录方向一致，因此选择限制酶HindⅢ和KpnI对质粒和含kissl基因的DNA片段分别进行切割。
【小问3详解】肿瘤转移抑制基因（kissl基因）仅在特定组织中表达，在雌性激素诱导下，细胞内信号传导系统可以与kissl基因启动子P的特定区域结合，激活kissl基因的转录，实验探究不同片段的转录活性，应选择有kissl基因且能表达的小鼠细胞作为转化的受体细胞，以探究细胞内信号传导系统与哪一片段结合后转录活性最高。由图可知，在不同长度的启动子片段P1~P5，P3的细胞中绿色荧光强度最强，故P3启动子片段的转录活性最高。由题意“细胞内信号传导系统可以与kissl基因启动子P的特定区域结合，激活kissl基因的转录”可知，启动子P应用于基因工程时，以P作为目的基因的启动子，可通过外源雌激素调控启动子的激活，进而调控目的基因的表达。
24. 【答案】（1）①. 获能 ②. 促性腺激素 ③. 观察透明带和卵细胞膜之间是否存在第二极体
（2）①. 滋养层 ②. 阴 ③. 反应结果呈阴性的，证明其细胞内没有Y染色体，为雌性个体
（3）供体胚胎可以与受体母牛子宫建立正常的生理和组织联系，其遗传特性在孕育过程中不受影响
【小问2详解】取胚胎中的滋养层细胞中的DNA作为模板。SRY基因特异性探针，对扩增产物进行检测时，如果扩增产物有SRY基因，则探针检测结果为阳性（存在基因-探针结合区域），此动物性别为雄性；如果扩增产物无SRY基因，则探针检测结果为阴性（不存在基因-探针结合区域），此动物为雌性。
25. 【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. 超数排卵 （2）①. 获能处理和成熟培养 ②. MⅡ
（3）①. 同期发情 ②. 受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应
（4） ①. 桑葚胚或囊 ②. 均等分割 ③. 滋养层