课件45张PPT。专题2
微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养1.能够描述出培养基的一般成分、种类及用途；
2.能够区别消毒和灭菌的不同之处；
3.写出培养基制作的一般的步骤；
4.能够说出在微生物分离纯化实验中可以选用
平板划线法或系列稀释和涂布平板法。
以“杀死禽流感病毒”为背景材料，设计问题，导入新课；首先直接阐明培养基的概念，类型，基本成分，配置原则；再提出无菌技术，列表比较消毒和灭菌的区别，接着以牛肉膏蛋白胨固体培养基配制过程为例讲解培养基的配制；然后讲解纯化大肠杆菌的实验，以图文结合的形式了解平板划线法的有关实验操作，稀释涂布平板法的操作过程；最后通过课堂检测，完善内化课堂知识。
通过图文结合，实验演示，对培养基的配置有全面的了解，通过熟悉的日常生活中的有关消毒和灭菌的情况，掌握更科学的消毒和灭菌的技术。以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例讲解培养基的配制过程，通过设计问题，引发学生思考，学习实验操作过程；对于平板划线法也是教学中的一个重点和难点，在教学中老师先演示实验的具体操作，再结合课本知识融会贯通，以此突破本节重难点内容。杀死禽流感病毒1.微生物有哪些营养方式（代谢类型）?
你能各举一例?2.含C、H、O、N的大分子有机物可做异养微生物的碳源、氮源、能源 ？ 3.你能说出几种灭菌方法?微生物研究和应用的前提：如何获得纯净培养物防止杂菌入侵，获得纯净的培养物①合适的营养和环境条件②确保其他微生物无法混入1.概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.类型：按物理性质划分：按化学成分划分：按用途划分：一、培养基有 无 凝固剂琼脂固体培养基液体培养基分离 鉴定工业 生产（1）按物理性质划分：单个
或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.意义：1.定义：鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体※菌落天然培养基合成培养基化学成分不恒定的天然有机物如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基化学成分完全了解的物质配制而成的培养基如：高氏1号培养基、查氏培养基。用于分类和鉴定（2）按化学成分划分：基础培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来用于鉴别不同类型微生物的培养基选择培养基（3）按用途划分：※几种选择培养基①加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌②不加氮源的无氮培养基分离固氮菌③不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物3.基本成分碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源4. 配制原则(1)目的明确：(2)营养全面、浓度适宜、比例恰当(3)适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）微生物生长不可缺少的微量有机物
如：维生素、氨基酸、碱基等 (4)特殊营养：※蛋白胨:动物蛋白初步消化的产物，富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。主要提供氮源和维生素。 ※牛肉膏：新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而成，含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素。二、无菌技术防止外来杂菌的污染1.哪里需要无菌？2.如何控制无菌？无菌的意义：（1）实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 1.无菌的范围（1）消毒（2）灭菌概念较为温和理化方法
杀死部分有害微生物
(不包括芽孢和孢子)强烈的理化因素
杀死所有的微生物
包括芽孢和孢子常用方法①煮沸消毒法
②巴氏消毒法
③化学药剂消毒法
④紫外线消毒法①灼烧消毒法
②干热灭菌
③高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等2.无菌的方法※芽孢：在某些细菌生长的一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或柱形的，抗逆性强的休眠体。 ※孢子：真菌所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接发育成新个体。 接种室内空气、接种箱、超净工作台用紫外线照射30min紫外线消毒实验者的手臂、实验台等酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌的70 ～75℃,30min； 75℃,15min巴氏消毒日常食物、罐装食品100℃,5～6min煮沸消毒法适用范围条件方法（1）消毒15～30min100kPa，121 ℃培养基、实验器材高压蒸汽灭菌1～2h干热灭菌箱
（160℃～170 ℃ ）耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）干热灭菌烧红酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种的工具、试管口、瓶口灼烧灭菌灭菌时间所需条件适用对象灭菌方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）灭菌1. 器具的灭菌
2. 培养基的配制
3. 培养基的灭菌
4. 倒平板
5. 微生物接种
6. 恒温箱中培养
7. 菌种的保存微生物实验室培养的基本操作程序大肠杆菌的纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基三.实验操作（二）纯化大肠杆菌1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：加棉塞、包牛皮纸、橡皮筋勒紧（一）制备培养基培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌计算?称量?溶化?调节pH?灭菌?倒平板1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上皿盖。4.等待平板冷却凝固（约需5～ 10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：最好不要用这个平板培养微生物。
防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之
间的培养基上滋生。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：①防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
②避免培养基中水分过快蒸发。无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。5.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？单个
或少数菌体1.定义：固体培养基上大量繁殖子细胞群体
（肉眼可见）※菌落2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。（二）纯化大肠杆菌单个细胞单个菌落从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的过程。 何为分离纯化？如何纯化？接种常见方法平板划线法操作核心防止杂菌污染，保持培养物纯度如何分散成单个细胞？稀释涂布平板法斜面接种穿刺接种微生物群分散1.平板划线法：分区划线法连续划线法（1）概念与原理：聚集的菌群连续划线稀释分散单个细胞菌落生长繁殖(2)“平板划线”实验操作
第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环灭菌接种环（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物目的接种结束后
每次划线前取菌种前灼烧时期（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。（3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3个划线平板1个不划线平板（重复实验）（空白对照）（3）培养放入37℃恒温箱中培养12h～24h2.稀释涂布平板法①菌液的梯度稀释：②涂布平板操作：(1)概念与原理：聚集的微生物单个细胞菌液梯度稀释菌落涂布平板(2)操作：生长繁殖①系列梯度稀释操作9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水
注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰1～2cm处。9mL无菌水②涂布平板操作：(1)涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”。
例如:①酒精灯与培养皿的距离要合适
②吸管头不要接触任何其他物体
③吸管要在酒精灯火焰周围等等各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照放入37℃恒温箱中培养12h～24h（2）培养1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃四.菌种的保存3～6个月，转移培养五.成果评价 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。（一）培养基的制作是否合格（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（ ）
A．碳源 B．氮源
C．无机盐 D．生长因子1.不能作为异养微生物碳源的是（ ）
A．牛肉膏 B．含碳有机物
C．石油 D．含碳无机物D A3.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的
是（ ）
A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸
C.待培养基冷却至50℃左右时，进行倒平板
D.待平板冷却凝固约5min～10min后，将平板倒过来
放置。A课件20张PPT。课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2
微生物的培养与应用 1.分离微生物的原理
2.利用选择培养基分离细菌
3.统计细菌数目的方法 简要地介绍尿素的发现过程以及尿素合成的历史，引导学生阅读“课题背景”知识，使学生明确分解尿素的细菌的重要性，突出课题研究的重要意义，设计问题，导入新课。知道了细菌分解尿素的原因后，我们该从什么样的土壤中分离分解尿素的细菌呢？首先结合教材上科学家成功分离Taq细菌的案例，分析得出分离微生物的一般规律，再结合本节的目之一：要分离分解尿素的细菌，进入选择培养基的学习。知道了分离方法后，我们如何对土样中分解尿素的细菌进行计数呢？从而逐层深入依次讨论统计菌落数目的方法及设置对照的作用。
在充分分析Taq细菌分离案例的过程中，让学生理解生物与环境的适应性，从而真正明白分离微生物的原理，并能从逻辑上给出分离微生物的大致思路，这也为选择培养基的学习打好基础，并添加典型实例，让学生更好地理解选择培养基的作用。通过视频的直观性让学生掌握细菌计数的一般方法。尿素的发现历史 1773年，伊莱尔·罗埃尔（Hilaire Rouelle）发现尿素。1828年，德国化学家弗里德里希·维勒首次使用无机物质氰酸铵（NH4CNO，一种无机化合物，可由氯化铵和氰酸银反应制得)与硫酸铵人工合成了尿素。本来他打算合成氰酸铵，却得到了尿素。尿素的合成揭开了人工合成有机物的序幕，实际上开辟了有机化学。一、课题背景1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。1.怎样才能从土壤中分离出分解尿素的细菌呢？二、研究思路 （一）筛选菌株a.提出的问题
—如何寻找耐高温的酶？
b.解决问题的思路
—寻找耐高温环境；
c.原理
—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。启示： :要分离某种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等方法：
⑴抑制大多数微生物不能生长，
⑵造成有利于该菌生长的环境。
结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。（二）实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。概念：选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基:分离自生固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞 KH2PO4 1.4g
NaHPO4 2.1g
MgSO4 H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。（1）该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
（2）此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的
细菌能利用尿素作为氮源而生存。（三）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需
培养基 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受到抑制，所以用此培养基能够选择出分解尿素的微生物。（四）统计菌落数目1、显微镜直接计数：（1）方法：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；
不适于对运动细菌的计数；
需要相对高的细菌浓度；
个体小的细菌在显微镜下难以观察；（2）缺点显微镜直接计数法（四）统计菌落数目1、显微镜直接计数：2、活菌计数法（间接计数法)
（1）操作方法：
稀释涂布平板→统计菌落数
（2）原理：
1个菌落→1个活菌
（3）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。
每克样品中的菌株数=（C/V)* M
其中C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V:所用稀释液的体积；
M:稀释倍数。 当样品的稀释度足够高时，固体培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。
2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）
乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值你认为这两位同学的作法正确吗？
如果有问题，错在哪？（四）统计菌落数目2、活体计数法（间接计数法)①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。
计数法显微镜直接计数
活菌计数法
比浊法
膜过滤法（四）统计菌落数目 在做本课题实验时，利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。
1、A同学筛选出150个菌落。
2、B同学筛选出50个菌落。
B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，只是自己所用的土壤样品不同，但此时也拿不出能令人信服的证据。
请你帮助A同学改进实验，提供具有说服力的证据。分析：一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质)。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。
一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。1、设置对照的目的：
排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。（五）设置 对照土壤中分解尿素的分离与计数(1)1.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )
A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3
C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素
2.使用选择培养基的目的是（ ）
A.培养细菌
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别DC3.统计菌落数目的方法有 （ ） ①涂布平板法 ②重量法 ③直接计数法 ④比浊法 ⑤ 生理指标法 ⑥ 膜过滤法
A.①②③⑥ B.③④⑤⑥
C.②③④⑥ D.①③④⑥D5．通过配置特殊的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。下列哪项操作最终不能达到分离出相应微生物的目的( )
A．在无氮培养基上可从多种细菌中分离出圆褐固氮菌
B．在缺乏有机碳源的培养基上可以从多种细菌中分离得到硝化细菌
C．在培养基中加青霉素可从混杂的真菌中分离到酵母菌
D．在培养基中加高浓度食盐可分离得到金黄色葡萄球菌4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（ ）
A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物 D.高浓度食盐CC课件19张PPT。课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题2
微生物的培养与应用 1.对土样的选取和选择培养基的配制
2.应用稀释涂布平板法对细菌进行计数 首先复习上一课时已经学习了的分离微生物并对其计数的研究思路，接下来按照实验的一般步骤将思路付诸于行动：制备选择培养基、土壤取样、样品的稀释与涂布、培养与观察并计数计算，边学习、边讨论，到底该怎么操作，操作时要注意哪些问题？
有条件的可以带领学生进行类似的实验。这里主要是通过讲解与讨论结合视频的直观性让学生掌握选择培养基的配制，稀释涂布平板法对细菌计数的一般过程以及结果的处理和评价。
（一）筛选菌株一、研究思路 选择培养基（二）统计菌落数目（三）设置 对照活菌计数法（稀释涂布平板法）（一）制备培养基
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。二、实验的具体操作 KH2PO4 1.4g
NaHPO4 2.1g
MgSO4 H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤一（一）制备培养基
（二）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。二、实验的具体操作（一）制备培养基
（二）土壤取样二、实验的具体操作（三）样品的稀释土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤二◆应在火焰旁称取土壤10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度（三）样品的稀释结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。原因：不同微生物在土壤中含量不同。
例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。
目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。（四）取样涂布（五）微生物的培养与观察不同类型的微生物形成的菌落往往有差别---微生物分类依据（五）微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。
选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌：30～37℃培养1～2d
放线菌：25～28℃培养5～7d
霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。三、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤三1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。四、结果分析与评价
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。五、课外延伸研究思路菌种筛选统计菌落菌数目设置对照土壤中分解尿素的分离与计数操作提示 结果分析与评价课外延伸样品稀释实验设计涂布平板培养观察土壤取样1.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是( )
A．链霉素能阻止结核菌的生长
B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效
C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效
D．链霉素可以用于治疗伤寒病人D2.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238
C．涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163
D．涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233D3.下图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题
(1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明到环境中去寻找菌株要根据______________________________。目的菌株对生存环境的要求(2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下表，整个实验过程严格执行无菌操作。如果将其中的纤维素粉换成________，菌落数_____________________________，即可说明选择培养基的作用。
(3)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用____________法，原因是
__________________________________________________明显多于选择培养基上的菌落数葡萄糖稀释涂布平板平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌课件23张PPT。课题3 分解纤维素的微生物的分离1.简述纤维素酶的种类及作用；
2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术；
3.分析分离分解纤维素的微生物的实验流程；
4.掌握实验操作的原理。 首先讲述纤维素的化学组成以及纤维素在生物圈的广泛分布，由此转入到如何对纤维素进行有效利用的问题。接着介绍了产纤维素酶的微生物能够分解纤维素，从而引出对纤维素的利用离不开对分解纤维素的微生物的研究。
本专题重在培养学生的创新思维，要求学生通过自己设计实验方案，并按照自己的实验方案进行主动探究，从而得出结论，有利于培养学生的观察能力、分析能力和逻辑推理能力。 阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题：1. 纤维素在生物圈的分布状况？ 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。一、纤维素和纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶
Cx酶葡萄糖苷酶2.纤维素酶的组成及作用在一支试管中添加纤维素酶，
另一支试管不添加纤维素酶；实验分析：P27-28的小实验是如何构成对照的？滤纸崩溃法3.纤维素分解菌的筛选(学生阅读P28回答如下问题)1.筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。刚果红染色法颜色2.其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后，
红色复合物无法形成，出现以_____________
为中心的________，可以通__________________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌 透明圈是否产生透明圈可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌二、实验设计(根据P28-29思考并回答)土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落什么样的环境取样?① 培养的目的? ②选择培养基的特点?挑选什么样的菌落?
①鉴别培养基的特点?
②如何鉴别?根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找；目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物；刚果红染色法1.纤维素分 解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因_____________【资料二】选择培养阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：液体没有添加琼脂2.该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是: 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。3.你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？葡萄糖纤维素粉鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠)【资料三】刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法二：在倒平板时就加入刚果红。颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。
接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。三、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落
对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。
如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。
为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_______________实验，纤维素酶的发酵方法有______ 发酵和______ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________ 含量进行定量测定。发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 四、课题延伸分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离纤维素酶种类、作用、催化刚果红染色筛选原理实验设计土壤取样选择培养涂布培养纯化培养前置染色法
后置染色法富含纤维素土壤增大分解菌含量染色鉴别分离出分解菌1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是（ ）A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种
B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖
C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁
D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖D2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是（ ）A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物
B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物
C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物
D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛 选出了纤维素分解菌B3.刚果红染色时，加入刚果红可在（ ）
①制备培养基时 ②梯度稀释时
③倒平板时 ④涂布时
⑤培养基上长出菌落时
A．①③ B．②⑤
C．③⑤ D．④⑤
C4.请回答下列与检验饮用水有关的问题：
检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量,这种方法为 。下面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的是 。
A B C D稀释涂布平板法D
