第38讲 微生物的培养技术和应用
目录 01 模拟基础练 【题型一】微生物的实验室培养 【题型二】分离特定微生物并测定其数量 【题型三】微生物的培养与应用综合 02 重难创新练 03 真题实战练
题型一 微生物的实验室培养
1．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（ ）
A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基
B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min
C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌
D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类
2．防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是（ ）
A．利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒
B．利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160℃的热空气中维持2～3h
D．利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行
3．瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。如图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（ ）
A．牛体内提取的瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌
B．甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基
C．乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数
D．实验中培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长
4．研究员从柽柳根际土壤中筛选出了某种耐盐碱促生菌，对其分别进行了耐盐碱能力测试和对植物生长发育的影响实验，发现该菌株不仅能在盐浓度为0~160g/L、pH为7.0~11.0的条件下生长，还能显著促进拟南芥、玉米在盐碱胁迫下的生长发育。下列叙述错误的是（ ）
A．筛选该促生菌株需要用高盐、碱性的选择培养基
B．该促生菌株耐盐碱能力测试的试验中自变量是盐浓度
C．筛选到的促生菌株可用稀释涂布平板法进行纯培养并计数
D．该促生菌株可以作为研究盐碱地专用微生物肥料的候选菌株
题型二 分离特定微生物并测定其数量
5．内生细菌是指一类存活于植物内部而不使植物表现出明显感染症状的微生物，某些内生细菌不仅能起到生物防治作用，还能减少农药滥用对环境的污染，在生产实际中有很大的应用价值。下列有关分离纯化内生细菌的说法正确的是（ ）
A．要分离出植物的内生细菌，需对植物材料进行灭菌处理
B．利用平板划线法可以对内生细菌进行分离、纯化和计数
C．牛肉膏蛋白胨培养基中能提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨、琼脂
D．实验中通常需要设置一组空白培养基一起培养，以检验培养基灭菌是否彻底
6．某科研团队在热带雨林土壤中分离获得了高效分解纤维素的细菌，为探究影响其纤维素酶活性的条件，设计了如表所示的实验。下列叙述错误的是（ ）
试管 底物和试剂 实验条件
1 纤维素+2mL纤维素酶溶液 30℃水浴；pH=7
2 纤维素+2mL纤维素酶溶液 ①______；pH=3
3 纤维素+2mL纤维素酶溶液 0℃水浴；pH=②______
A．若试管1和试管2形成对比实验，则①为30℃水浴处理
B．实验结束时，试管1中的纤维素含量可能最低
C．试管3中纤维素酶的空间结构在低温条件下遭到破坏
D．可增加设置其他温度和pH的试管以完善该实验
7．尿素是一种重要的农业氮肥，但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数，过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．①～⑤系列的操作称为梯度稀释，②～⑤应加10mL无菌水
B．接种培养基应以尿素为唯一氮源，该培养基属于鉴别培养基
C．图示所用培养基需先用干热灭菌法进行灭菌后，再调节PH
D．若接种的三个平板平均菌落数为62个，则1g土样中约有菌落6.2×107个
8．牛和山羊等反刍动物具有特殊的器官-瘤胃。瘤胃中生活着多种微生物，其中有许多细菌能分解尿素。为了获得能高效分解尿素的细菌，科研人员利用瘤胃内容物进行了如图所示的实验。下列说法正确的是（ ）
A．该过程中所用的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．以尿素为唯一氮源的培养基在有氧条件下能分离瘤胃中的尿素分解菌
C．③过程应选择残余尿素浓度最低的培养瓶中微生物进一步接种
D．过程④的结果是由于菌液稀释浓度太低导致的
题型三 微生物的培养与应用综合
9．研究人员为探究大蒜汁对4种微生物的抑菌效果。将不同浓度的大蒜汁装入无菌牛津杯，放在培养基表面，使其与培养基充分接触。同时用无菌水做对照实验。再将培养皿放入适宜的培养箱中培养，收集到实验结果，如图所示。据图分析下列错误的是（ ）
A．不同浓度的大蒜汁对大肠杆菌的抑制效果最强
B．实验证明，大蒜汁对细菌的抑菌效果更显著
C．大蒜汁的浓度越高，对4种微生物的抑菌效果越好
D．抑菌圈边缘的菌落对大蒜汁敏感，所以选择抑菌圈边缘的菌落进行扩增培养
10．牛津杯法可测定发酵液中抗生素的含量，具体做法是：在培养皿中倒入不含任何营养物质的琼脂凝固成底层平板，同时将牛津杯竖直立在将要凝固的底层平板上；再将含少量琼脂的培养基熔化并冷却后加入敏感指示菌，混匀后倒入底层平板上形成双层平板，后取出牛津杯，形成小孔。向A、B、C小孔中分别加入浓度不同且已知的抗生素，在小孔D、E、F中加入等量的发酵液，培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小。下列说法错误的是（ ）
A．双层培养基灭菌均可以用湿热灭菌法，培养皿灭菌可以用干热灭菌法
B．底层培养基可以弥补培养皿底部或超净工作台不平，利于后续实验观察
C．倒入上层平板后，需使用灭菌后的涂布器将敏感指示菌均匀地涂布在培养基表面
D．通过比较D、E、F和A、B、C周围抑菌圈的大小可以比较发酵液中抗生素的浓度
11．合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭大肠杆菌的效果，结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基上生长的菌落呈蓝色
B．据该实验结果可知，杀菌效果最好的消毒液是A
C．可采用显微镜直接计数法或菌落计数法测定样品的大肠杆菌数量
D．实验中用到的吸管、培养皿和金属用具可采用于热灭菌法
12．黄瓜枯萎病是由尖镰孢菌引起的。研究表明，芽孢杆菌能产生几丁质酶等物质分解尖镰孢菌的细包壁而被广泛用于黄瓜枯萎病的防治。实验室对抑菌率在69%以上的3株芽孢杆菌进行复筛，结果如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
N1、N2和N3菌株（四周）对尖镰孢菌（中心）的抑制效果模式图
A．该实验的对照组设置是平板上只接种芽孢杆菌
B．实验结果表明N2菌株抑制尖镰孢菌的效果最好
C．挑选出抑制效果最强的菌株后，需要对其进行纯化培养
D．利用尖镰孢菌发酵生产几丁质酶等物质，可用于防治枯萎病
一、单选题
1．灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治灰霉病，研究人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。下列叙述，错误的是（ ）
A．在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌
B．取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用
C．为筛选出高效拮抗菌，只需在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照
D．灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物可能为最高效拮抗菌
2．某同学欲检测消毒餐具中大肠杆菌的数量是否超标，进行如下操作：用蒸馏水分3～5次冲洗待检餐具内表面，制成待测样液备用；配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基，将待测样液接种于琼脂培养基上。下列叙述错误的是（ ）
A．为了确保检测的准确性，冲洗待检餐具的蒸馏水应该换成无菌水
B．生长在伊红一亚甲蓝琼脂培养基上的大肠杆菌菌落具有金属光泽
C．设置牛肉膏蛋白胨培养基作对照可检验该鉴别培养基的效果
D．为便于观察菌落的颜色，应将培养基的pH调至中性或弱碱性
3．采用巴氏消毒法进行杀菌处理的牛奶通常被称为“巴氏杀菌乳”，某款牛奶的产品介绍如图所示。根据图上信息，下列叙述正确的是（ ）
A．如果盒装牛奶出现鼓包，很可能是乳酸菌污染导致
B．巴氏消毒可以破坏微生物的蛋白质结构，使其失去活性
C．巴氏消毒的优点是既能杀死所有微生物，又不破坏牛奶的成分
D．鲜牛奶应保存在2~6℃条件下，因为在这个区间的温度能够杀死微生物
4．木质素一种大量存在于秸秆中的含碳有机物。木质素降解菌分泌的漆酶不仅能降解木质素，还可催化蓝色物质苯胺蓝分解成H2O和CO2。研究人员利用苯胺蓝培养基筛选高效降解木质素的菌株。下列叙述错误的是（ ）
A．从秸秆还田的土壤中取样并加入无菌水制备菌悬液
B．使用涂布器将稀释的菌液接种至苯胺蓝培养基
C．挑选周围出现较大蓝色环带的菌落进行后续实验
D．产漆酶菌能在以木质素为唯一碳源的培养基生长
5．耐高温纤维素酶可以加速催化纤维素的水解。某研究小组将纤维素分解菌进行诱变和高温处理获得新菌株甲，制作出菌株甲培养基的滤液，进行了下列实验：
步骤 试管A 试管B
1 加入用2mL缓冲液配制的菌株甲滤液 加入2mL缓冲液
2 在①条件下水浴保温30min
3 加入适量的纤维素液，80℃水浴保温10min
4 加入适量的斐林试剂，②，观察溶液颜色
下列分析错误的是（ ）
A．该实验能探究菌株甲分泌的纤维素酶能否耐受80℃高温
B．表格中，①处应该为80℃，②处可为60℃水浴加热约2min
C．若步骤4中试管A、B溶液颜色分别为砖红色、蓝色，则该酶能耐受80℃高温
D．纤维素酶在80℃下保存，有利于保持酶的活性和结构的稳定性
6．废纸主要成分是木质纤维，利用发酵工程可将活动产生的大量废纸转化为新的资源——燃料乙醇，如图是利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程，下列说法正确的是（ ）
A．从土壤中筛选①中的目的微生物时，培养基需添加牛肉膏、葡萄糖等有机物
B．没有接种微生物的培养基上未长出菌落，则说明选择培养基有选择作用
C．可通过分解纤维素得到的葡萄糖含量判断②获得的酶液活性
D．满足④的常见微生物为醋酸菌，应保证⑤发酵罐装置密闭而产生乙醇
7．科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如下表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①（接种方法）接种后培养→将周边出现②的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
8．为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员从土壤中筛选纤维素分解菌并计数，部分操作流程如图。下列叙述正确的是（ ）
①土壤取样时，应做到随机取样
②富集培养可采用液体培养基，可充分利用其中的营养物质
③选择培养的培养基应以纤维素为唯一碳源
④进行系列梯度稀释的目的是便于涂布平板后得到单菌落
⑤涂布平板时，将接种环从酒精中取出后，应放在火焰上灼烧防止污染
⑥菌落计数时，统计的菌落数往往比实际数目少
A．①②③④ B．①③④⑥
C．②③④⑥ D．②③④⑤
9．下图是实验人员利用“影印法”初检氨基酸S缺陷型菌株的过程，影印法培养微生物可以保证不同培养基中的同种菌株有相同接种位置。结合图示分析，下列有关叙述正确的是（ ）
A．对菌液进行诱变处理，可使菌种定向变异为氨基酸S缺陷型
B．图示的基本培养基既属于鉴别培养基，也属于选择培养基
C．进行过程②的操作时，应先将丝绒布转印至基本培养基上
D．图示菌落B中有氨基酸S缺陷型菌，菌落A能合成氨基酸S
10．野生型大肠杆菌能够在基本培养基上生长，经诱变获得了两种营养缺陷型的突变体M、N，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。若将两种突变体在完全培养基（液体）中混合培养一段时间后，再采用稀释涂布平板法接种在基本培养基平板上，培养后长出了大肠杆菌菌落。下列有关叙述正确的是（ ）
A．野生型大肠杆菌诱变时发生了生态突变或染色体变异
B．突变体M和N能相互为对方提供所缺营养物质
C．在混合培养期间突变体M和N发生了遗传物质的交流
D．混合培养获得的大肠杆菌都能在基本培养基中生长
二、多选题
11．植酸酶能催化分解植酸磷，从而提高植物性物料中磷的利用率。科研人员从土壤中分离出5种能够产生植酸酶的细菌菌株，分别为a、b、c、d和e。植酸磷被分解后培养基上会出现透明圈，分离的操作过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．可用干热灭菌法对土壤样品进行灭菌
B．该实验采用了平板划线法进行接种和计数
C．经过图示的操作，土壤样品被稀释了10 倍
D．e细菌植酸酶的活性比a细菌植酸酶的高
12．为证明青霉素在某种细菌产生抗药性过程中所起的作用是选择而非诱变，实验方案如图所示。图中③平板影印是指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种的方法。下列叙述正确的是（ ）
A．进行扩大培养的培养基配制过程不添加琼脂，但需进行干热灭菌
B．②过程接种方法为稀释涂布平板法，此法可用于微生物的分离和计数
C．B组培养基中应添加青霉素，且培养过程中应进行倒置培养
D．该实验结果说明青霉素起到了选择作用
13．在一系列微生物的作用下，黑茶（中国边疆游牧民族的主要饮品）会产生一种对人体非常有益的金黄色颗粒“金花”。研究人员对“金花”中的微生物进行了分离和鉴定，过程如图。下列说法正确的是（ ）
A．向“金花”样品中加入蒸馏水制成样品悬液
B．稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果可能比实际值偏小
C．涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化
D．可通过生态组测序对菌种进行准确鉴定
14．袋装酸奶的包装上通常都会注明“胀袋勿食”。某同学选择一袋过期的胀袋密封酸奶，按图中的操作流程进行实验，研究其中某微生物的生长情况。下列有关叙述不正确的是（ ）
A．酸奶“胀袋”可能是由于混入了醋酸菌等厌氧菌
B．培养皿中倒入培养基后要保证一直水平正放
C．可通过观察固体培养基上生长的菌落的形状、大小和颜色等特征初步鉴定菌种
D．若3个平板的平均菌落数是180个，则1mL酸奶中某微生物数目为9×105个
15．某小组用传统酱油为样品，使用了两个不同的接种方法练习菌落数目统计，方法1是将菌液和培养基一起倒入平板中混合均匀，方法2为稀释涂布平板法，部分实验流程如下图，两种方法计数结果如下表，下列有关说法正确的是（ ）
培养时间/h 24 48 72
方法1平板上平均菌落数 47 92 92
方法2平板上平均菌落数 170 190 190
A．实验中，平板上生出的菌落都属于同一种微生物
B．方法1菌落数较少的原因之一可能是部分不耐热菌死亡
C．根据方法2菌落数可推算样品中微生物密度为1.9×106个/ml
D．根据实验结果可得知，该品种酱油微生物严重超标，不可食用
三、非选择题
16．有机农药苯磺隆是一种强效除草剂，长期使用会严重污染环境；研究发现，苯磺隆能被土壤中某种微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示，请回答相关问题：
(1)微生物的培养基一般都应该含有的成分有水、无机盐和 四类，此外，培养基还要满足微生物生长对pH、 以及氧气的要求。土壤有“微生物的天然培养基”之称，为了获取能降解苯磺隆的菌种，选择的土壤样品应来自 。
(2)图甲中选择培养的目的是 ；在划线纯化操作时，划线工具使用前后都要进行 灭菌。
(3)若要检测土样中的细菌含量，应采用 法进行接种。运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小，原因是 。
(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液作图乙所示实验，该实验设计不合理之处是因为 。
17．一次性口罩主要成分是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维。研究人员欲从合适的土壤样品中筛选出能高效降解一次性口罩的细菌，设计了如图1所示的流程。请回答下列问题：
(1)图1中“甲”指的是 ，目的是提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度，此过程使用的培养基中应以 （填化合物名称）为唯一碳源，为增大菌体与培养基的接触面积，从物理性质看，该培养基应是 。
(2)将分离纯化得到的不同菌种分别接种到鉴别培养基上，鉴别培养基中加入了能与聚丙烯纤维结合的显色染色剂。设不同菌种的菌落面积为s，菌落周围透明圈的面积为S，选择S/s的比值 的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。
(3)欲估算某土壤样品中有多少能高效降解一次性口罩的目的菌，接种平板时应用 法。根据图2操作能计算出1g该土壤中约有 个高效降解一次性口罩的目的菌。
18．磷是植物生长的重要元素，施入土中的磷大多数与Ca2+等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见下图，请回答下列问题：
(1)经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则每克土样中的活菌数为 个。运用这种方法统计的结果往往比实际值 ，原因是 。
(2)步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较 的菌落。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据 对细菌进行初步的鉴定和分类。
(3)常采用 法对高效解磷菌进行分离和计数，要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置 作为对照。
(4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基中，并在37℃、200r·min-1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到曲线：
用摇床进行培养的好处是 （写出两点）。结果表明最优良的解磷菌株是 。
(5)纯化菌种时，也可按下图所示接种方法，接种环需要灼烧 次。
一、单选题
1．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基-甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基-甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
2．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的生态
B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细包数量的变化
3．（2024·湖南·高考真题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（ ）
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦ C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
4．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码生态突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细包，而色氨酸合成途径的中间产物积累
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
二、多选题
9．（2024·吉林·高考真题）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（ ）
A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
三、非选择题
10．（2024·江西·高考真题）聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）是一种聚酯塑料，会造成环境污染。磷脂酶可催化PET降解。为获得高产磷脂酶的微生物，研究人员试验了2种方法。回答下列问题：
(1)方法1从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯（一种磷脂类物质）为唯一碳源制备 培养基，可提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有 、 、 等营养物质。
(2)方法2采用 技术定向改造现有微生物，以获得高产磷脂酶的微生物。除了编码磷脂酶的生态外，该技术还需要 、 、 等“分子工具”。
(3)除了上述2种方法之外，还可以通过 技术非定向改造现有微生物，筛选获得能够高产磷脂酶的微生物。
(4)将以上获得的微生物接种到鉴别培养基（在牛肉膏蛋白胨液体培养基中添加2%的琼脂粉和适量的卵黄磷脂）平板上培养，可以通过观察卵黄磷脂水解圈的大小，初步判断微生物产磷脂酶的能力，但不能以水解圈大小作为判断微生物产磷脂酶能力的唯一依据。从平板制作的角度分析，其原因可能是 。
11．（2024·宁夏四川·高考真题）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 。
(2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是 。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可）
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 色。
12．（2023·北京·高考真题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细包内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。
(2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
(4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。
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目录 01 模拟基础练 【题型一】微生物的实验室培养 【题型二】分离特定微生物并测定其数量 【题型三】微生物的培养与应用综合 02 重难创新练 03 真题实战练
题型一 微生物的实验室培养
1．为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，某研究小组进行了如下实验。相关操作或叙述正确的是（ ）
A．固体培养基X对菜品中的细菌有选择性，属于选择培养基
B．配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15～30min
C．在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌
D．根据菌落的特征可准确判断细菌的种类
【答案】B
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。无菌技术是获得纯微生物培养物的前提。
【详解】A、实验目的是研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，固体培养基X没有做任何处理，不属于选择培养基，所以对菜品中的细菌没有选择性，A正确；
B、为了排除微生物污染，对配制的培养基X需要采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，即在121℃、100kPa条件下处理15～30min，B正确；
C、据题意可知，在固体培养基X上接种后，还需要对微生物进行计数，因此接种细菌，只能用涂布法，不能用平板划线法，C错误；
D、在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，D错误。
故选B。
2．防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是（ ）
A．利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒
B．利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160℃的热空气中维持2～3h
D．利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行
【答案】B
【分析】获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌，常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法等；灭菌的方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。
【详解】A、有的微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，因此可以使用这些微生物进行生物消毒，如净化污水、污泥，A正确；
B、用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石炭酸等消毒液，可以加强消毒效果，B正确；
C、培养基应该用高压蒸汽灭菌，C错误；
D、接种环等金属用具一般用灼烧灭菌，即直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧灭菌，D错误。
故选B。
3．瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。如图表示从牛的瘤胃中分离和鉴定纤维素分解菌。下列叙述正确的是（ ）
A．牛体内提取的瘤胃液不能使用干热灭菌，应使用湿热灭菌
B．甲和乙应使用纤维素为唯一碳源的牛肉膏蛋白胨培养基
C．乙和丁的接种方法均可分离纯化并进行计数
D．实验中培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长
【答案】A
【分析】刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖无法发生这种反应。在含有纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中就会出现以这些菌为中心的透明圈。
【详解】A、从牛体内提取的瘤胃液不能灭菌，否则不能分离出目标微生物，A正确；
B、蛋白胨为微生物生长提供的主要营养是碳源、氮源和维生素等，甲和乙的培养基应以纤维素为唯一碳源培养目的菌，B错误；
C、乙和丁的接种方法分别是平板划线法和涂布平板法，平板划线法不能用于计数，C错误；
D、由于瘤胃液中微生物多为厌氧菌，培养基表面加入一层无菌石蜡能促进目的菌生长，D错误。
故选A。
4．研究员从柽柳根际土壤中筛选出了某种耐盐碱促生菌，对其分别进行了耐盐碱能力测试和对植物生长发育的影响实验，发现该菌株不仅能在盐浓度为0~160g/L、pH为7.0~11.0的条件下生长，还能显著促进拟南芥、玉米在盐碱胁迫下的生长发育。下列叙述错误的是（ ）
A．筛选该促生菌株需要用高盐、碱性的选择培养基
B．该促生菌株耐盐碱能力测试的试验中自变量是盐浓度
C．筛选到的促生菌株可用稀释涂布平板法进行纯培养并计数
D．该促生菌株可以作为研究盐碱地专用微生物肥料的候选菌株
【答案】B
【分析】微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
【详解】A、促生菌具有耐盐碱性，故需要用高盐、碱性的选择培养基来筛选该菌株，A正确；
B、该促生菌株耐盐碱能力测试的试验中自变量是盐浓度和pH值，B错误；
C、稀释涂布平板法的原理是在足够稀释度下将样液均匀涂布得到单个独立的菌落，故该方法可以用于纯培养，同时一个菌落是由一个活菌繁殖而来，该方法还可以用于计数，C正确；
D、促生菌具有耐盐碱性，该促生菌株可以作为研究盐碱地专用微生物肥料的候选菌株，D错误。
故选B。
题型二 分离特定微生物并测定其数量
5．内生细菌是指一类存活于植物内部而不使植物表现出明显感染症状的微生物，某些内生细菌不仅能起到生物防治作用，还能减少农药滥用对环境的污染，在生产实际中有很大的应用价值。下列有关分离纯化内生细菌的说法正确的是（ ）
A．要分离出植物的内生细菌，需对植物材料进行灭菌处理
B．利用平板划线法可以对内生细菌进行分离、纯化和计数
C．牛肉膏蛋白胨培养基中能提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨、琼脂
D．实验中通常需要设置一组空白培养基一起培养，以检验培养基灭菌是否彻底
【答案】A
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础；
2、按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长；
3、消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、需要从植物材料中分离目的菌株，不能对植物材料灭菌处理，A正确；
B、利用稀释涂布平板法可以对内生细菌进行分离、纯化和计数，平板划线不能计数，B错误；
C、用牛肉膏蛋白胨培养细菌时，牛肉膏和蛋白胨富含蛋白质，可以提供氮源，但琼脂是凝固剂，不能提供氮源，C错误；
D、实验中通常需要设置一组空白培养基一起培养，如果该平板出现菌落则说明培养基灭菌不彻底，该平板未出现菌落说明培养基灭菌比较彻底，D错误。
故选A。
6．某科研团队在热带雨林土壤中分离获得了高效分解纤维素的细菌，为探究影响其纤维素酶活性的条件，设计了如表所示的实验。下列叙述错误的是（ ）
试管 底物和试剂 实验条件
1 纤维素+2mL纤维素酶溶液 30℃水浴；pH=7
2 纤维素+2mL纤维素酶溶液 ①______；pH=3
3 纤维素+2mL纤维素酶溶液 0℃水浴；pH=②______
A．若试管1和试管2形成对比实验，则①为30℃水浴处理
B．实验结束时，试管1中的纤维素含量可能最低
C．试管3中纤维素酶的空间结构在低温条件下遭到破坏
D．可增加设置其他温度和pH的试管以完善该实验
【答案】B
【分析】温度过高，会使酶的空间结构遭到破坏，使酶永久失活；而在低温下，酶的活性明显降低，但酶的空间结构稳定，在适宜的温度下酶的活性可以升高。
【详解】A、若试管1和试管2形成对比实验，温度是无关变量，应保证相同且适宜，则①为30℃水浴处理，A正确；
B、试管①条件最接近热带雨林的土壤，实验结束时，试管①中的纤维素含量可能最低，B正确；
C、酶绝大多数是蛋白质，少数是RNA，低温不会破坏纤维素酶的空间结构，C错误；
D、本实验温度梯度和酸碱度梯度设置都比较大，所以可增加设置其他温度和pH的试管以完善该实验，D错误。
故选B。
7．尿素是一种重要的农业氮肥，但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数，过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．①～⑤系列的操作称为梯度稀释，②～⑤应加10mL无菌水
B．接种培养基应以尿素为唯一氮源，该培养基属于鉴别培养基
C．图示所用培养基需先用干热灭菌法进行灭菌后，再调节PH
D．若接种的三个平板平均菌落数为62个，则1g土样中约有菌落6.2×107个
【答案】A
【分析】微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、①～⑤系列的操作称为梯度稀释，②～⑤应加9mL无菌水，A正确；
B、该培养基应以尿素为唯一氮源，能分解尿素的微生物能存活，不能分解尿素的不能存活，因此该培养基属于选择培养基，B错误；
C、图示所用培养基需先调节pH，再用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法）进行灭菌，C错误；
D、根据图解可知，对菌液进行稀释时共稀释了106倍，若接种的三个平板平均菌落数为62个，则1g土样中约有菌落62×106=6.2×107个，D错误。
故选A。
8．牛和山羊等反刍动物具有特殊的器官-瘤胃。瘤胃中生活着多种微生物，其中有许多细菌能分解尿素。为了获得能高效分解尿素的细菌，科研人员利用瘤胃内容物进行了如图所示的实验。下列说法正确的是（ ）
A．该过程中所用的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．以尿素为唯一氮源的培养基在有氧条件下能分离瘤胃中的尿素分解菌
C．③过程应选择残余尿素浓度最低的培养瓶中微生物进一步接种
D．过程④的结果是由于菌液稀释浓度太低导致的
【答案】B
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基；稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
【详解】A、该过程中涉及的接种环使用灼烧灭菌、涂布器使用酒精消毒后灼烧灭菌，吸管、培养皿等玻璃器皿常用干热灭菌，培养基使用高压蒸汽灭菌，有些试剂不耐高温，不能用高温灭菌，如尿素，A正确；
B、因瘤胃中高度缺氧，所以在分离瘤胃中的尿素分解菌时还应该提供厌氧的环境，B错误；
C、为获得能高效分解尿素的细菌，在③选择接种时应该选择尿素浓度最低的培养瓶，说明瓶中微生物分解尿素的能力强，C正确；
D、过程④的培养基上菌落局部密集是由于涂布不均匀导致的结果，D错误。
故选B。
题型三 微生物的培养与应用综合
9．研究人员为探究大蒜汁对4种微生物的抑菌效果。将不同浓度的大蒜汁装入无菌牛津杯，放在培养基表面，使其与培养基充分接触。同时用无菌水做对照实验。再将培养皿放入适宜的培养箱中培养，收集到实验结果，如图所示。据图分析下列错误的是（ ）
A．不同浓度的大蒜汁对大肠杆菌的抑制效果最强
B．实验证明，大蒜汁对细菌的抑菌效果更显著
C．大蒜汁的浓度越高，对4种微生物的抑菌效果越好
D．抑菌圈边缘的菌落对大蒜汁敏感，所以选择抑菌圈边缘的菌落进行扩增培养
【答案】B
【分析】对照实验：在探究某种条件对研究对象的影响时，对研究对象进行的除了该条件不同以外，其他条件都相同的实验。这个不同的条件就是唯一的变量。根据变量设置一组对照实验，使实验结果更具有说服力。一般来说，对实验变量进行处理的就是实验组，没有处理的就是对照组。
【详解】A、通过曲线图可知，不同浓度的大蒜汁对大肠杆菌的抑制效果最强，对毛霉的抑制效果最弱，A正确；
B、通过曲线图可知，大蒜汁对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、毛霉都有一定的抑制作用，其中对细菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）的抑菌效果更显著，B正确；
C、图示只表示到大蒜浓度为50%，无法说明大蒜汁的浓度越高，抑菌效果越好，C错误；
D、抑菌圈边缘的菌落对大蒜汁敏感，所以选择抑菌圈边缘的菌落进行扩增培养，D错误。
故选B。
10．牛津杯法可测定发酵液中抗生素的含量，具体做法是：在培养皿中倒入不含任何营养物质的琼脂凝固成底层平板，同时将牛津杯竖直立在将要凝固的底层平板上；再将含少量琼脂的培养基熔化并冷却后加入敏感指示菌，混匀后倒入底层平板上形成双层平板，后取出牛津杯，形成小孔。向A、B、C小孔中分别加入浓度不同且已知的抗生素，在小孔D、E、F中加入等量的发酵液，培养一段时间后，测量小孔周围抑菌圈的大小。下列说法错误的是（ ）
A．双层培养基灭菌均可以用湿热灭菌法，培养皿灭菌可以用干热灭菌法
B．底层培养基可以弥补培养皿底部或超净工作台不平，利于后续实验观察
C．倒入上层平板后，需使用灭菌后的涂布器将敏感指示菌均匀地涂布在培养基表面
D．通过比较D、E、F和A、B、C周围抑菌圈的大小可以比较发酵液中抗生素的浓度
【答案】B
【分析】常见物品的消毒或灭菌方法
（1）消毒方法及适用对象：
①化学药剂消毒法：操作者双手、动植物表面等。
②煮沸消毒法：日常食品、罐装食品等。
③巴氏消毒法：牛奶等不耐高温的液体等。
④紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工作台等。
（2）灭菌方法及适用对象：
①灼烧灭菌：接种工具、其他金属用具等。
②干热灭菌：玻璃器皿、金属用具等。
③湿热灭菌：培养基等。
【详解】A、湿热灭菌法是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，培养基的灭菌通常选择用湿热灭菌法。耐高温的和需要保持干燥的物品，如培养皿通常用干热灭菌法灭菌，A正确；
B、加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补，使所形成的抑菌圈都接近处于同一平面上，利于后续实验观察，B正确;
C、依题意，将含少量琼脂的培养基熔化并冷却后加入敏感指示菌，混匀后倒入底层平板上形成双层平板，敏感指示菌就已经接种至上层培养基中了，不用涂布器再进行涂布，C错误；
D、依题意，A、B、C小孔中分别加入浓度不同且已知的抗生素，作为对照组；在小孔D、E、F中加入等量的发酵液，产生的抑菌圈与A、B、C周围对应的抑菌圈比较，就可以推断发酵液中抗生素的浓度，D错误。
故选B。
11．合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭大肠杆菌的效果，结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基上生长的菌落呈蓝色
B．据该实验结果可知，杀菌效果最好的消毒液是A
C．可采用显微镜直接计数法或菌落计数法测定样品的大肠杆菌数量
D．实验中用到的吸管、培养皿和金属用具可采用于热灭菌法
【答案】A
【分析】平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细包繁殖而来的肉眼可见的子细包群体，这就是菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
【详解】A、大肠杆菌在伊红-亚甲蓝培养基上生长的菌落呈深紫色，并有金属光泽，A正确；
B、A消毒液活菌数减少量最多，日杀菌时间较短，效率最高，故A消毒液杀菌效果最好，B正确；
C、微生物计数的方法多种多样，包括显微镜直接计数法和平板菌落计数法等，C正确；
D、干热灭菌是一种利用高温进行灭菌的方法，适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，上不易被高温损坏的物品。这种方法主要适用于需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，D错误。
故选A。
12．黄瓜枯萎病是由尖镰孢菌引起的。研究表明，芽孢杆菌能产生几丁质酶等物质分解尖镰孢菌的细包壁而被广泛用于黄瓜枯萎病的防治。实验室对抑菌率在69%以上的3株芽孢杆菌进行复筛，结果如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
N1、N2和N3菌株（四周）对尖镰孢菌（中心）的抑制效果模式图
A．该实验的对照组设置是平板上只接种芽孢杆菌
B．实验结果表明N2菌株抑制尖镰孢菌的效果最好
C．挑选出抑制效果最强的菌株后，需要对其进行纯化培养
D．利用尖镰孢菌发酵生产几丁质酶等物质，可用于防治枯萎病
【答案】B
【分析】题图分析：据图可知，N1菌株组中对应的尖廉孢菌的菌落最小，说明N1菌株的抑制效果最佳，其次是N3菌株。N2菌株组中对应的尖廉孢菌的菌落最大，说明N2菌株抑制效果最差。
【详解】A、该实验研究的是芽孢杆菌对尖镰孢菌的抑制作用，因此对照组设置与图中实验组的区别是平板上只接种尖镰孢菌或在接种芽孢杆菌处接种等量的蒸馏水，A正确；
B、据图可知，这三组实验中，N1菌株组中平板中央的尖镰孢菌菌落最小，说明N1菌株抑制尖镰孢菌增殖的效果最强，B错误；
C、为了确保所使用的菌株是纯净的，不含有其他杂菌，挑选出抑制效果最强的菌株后，需对其进行纯化培养，C正确；
D、依题意，芽孢杆菌主要是通过产生几丁质酶等物质来抑制尖镰孢菌的增殖，因此可利用芽孢杆菌发酵生产几丁质酶等物质，利用这些物质防治枯萎病，D错误。
故选B。
一、单选题
1．灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治灰霉病，研究人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。下列叙述，错误的是（ ）
A．在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌
B．取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用
C．为筛选出高效拮抗菌，只需在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照
D．灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物可能为最高效拮抗菌
【答案】B
【分析】纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他的连续划线，微生物细包数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细包繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细包。
【详解】A、由题意可知，灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害，因此在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌，A正确；
B、取无菌发酵滤液的目的是排除其他杂菌的干扰，利用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用，从而获得专一性的拮抗菌，B正确；
C、为筛选出高效拮抗菌，需在普通培养基中央接种等量的灰葡萄孢，此后将该培养基与其他实验组置于相同且适宜的条件下培养，而后通过比对挑选出灰葡萄孢几乎无生长的培养基对应的微生物即为拮抗效果最好的拮抗菌，C错误；
D、最高效拮抗菌对灰葡萄孢的拮抗效果是最好的，导致灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏，D错误。
故选B。
2．某同学欲检测消毒餐具中大肠杆菌的数量是否超标，进行如下操作：用蒸馏水分3～5次冲洗待检餐具内表面，制成待测样液备用；配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基，将待测样液接种于琼脂培养基上。下列叙述错误的是（ ）
A．为了确保检测的准确性，冲洗待检餐具的蒸馏水应该换成无菌水
B．生长在伊红一亚甲蓝琼脂培养基上的大肠杆菌菌落具有金属光泽
C．设置牛肉膏蛋白胨培养基作对照可检验该鉴别培养基的效果
D．为便于观察菌落的颜色，应将培养基的pH调至中性或弱碱性
【答案】B
【分析】各种微生物培养基的配方一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。例如，在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。
【详解】A、蒸馏水中可能存在大肠杆菌，对检测结果产生干扰，为了确保检测的准确性，冲洗待检餐具的蒸馏水应该换成灭菌后的无菌水，A正确；
B、生长在伊红一亚甲蓝琼脂培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色且具有金属光泽，B正确；
C、为检验该鉴别培养基的效果，应设置接种大肠杆菌的伊红一亚甲蓝琼脂培养基作对照，C错误；
D、大肠杆菌属于细菌，在培养细菌时，需要将培养基的pH调至中性或弱碱性，D错误。
故选B。
3．采用巴氏消毒法进行杀菌处理的牛奶通常被称为“巴氏杀菌乳”，某款牛奶的产品介绍如图所示。根据图上信息，下列叙述正确的是（ ）
A．如果盒装牛奶出现鼓包，很可能是乳酸菌污染导致
B．巴氏消毒可以破坏微生物的蛋白质结构，使其失去活性
C．巴氏消毒的优点是既能杀死所有微生物，又不破坏牛奶的成分
D．鲜牛奶应保存在2~6℃条件下，因为在这个区间的温度能够杀死微生物
【答案】B
【分析】消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒和灭菌工作主要包括两个方面：对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒等；灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。
【详解】A、乳酸菌无氧呼吸不产生气体，污染不会鼓包，A正确；
B、巴氏消毒通过加热牛奶到一定温度，可以破坏微生物的蛋白质结构，使其失去活性，从而达到杀菌的效果，B正确；
C、巴氏消毒法的优点是能够杀死大部分病原微生物，同时尽量减少对牛奶营养成分的破坏，C错误；
D、鲜牛奶应保存在2-6℃的范围内，因为这个温度区间可以抑制微生物的生长和繁殖，而不是直接杀死微生物，D错误。
故选B。
4．木质素一种大量存在于秸秆中的含碳有机物。木质素降解菌分泌的漆酶不仅能降解木质素，还可催化蓝色物质苯胺蓝分解成H2O和CO2。研究人员利用苯胺蓝培养基筛选高效降解木质素的菌株。下列叙述错误的是（ ）
A．从秸秆还田的土壤中取样并加入无菌水制备菌悬液
B．使用涂布器将稀释的菌液接种至苯胺蓝培养基
C．挑选周围出现较大蓝色环带的菌落进行后续实验
D．产漆酶菌能在以木质素为唯一碳源的培养基生长
【答案】B
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】A、因为秸秆还田的土壤中通常富含降解木质素的微生物，因此从这样的土壤中取样来筛选降解菌，为了获得单菌落，需要加入一定量的无菌水制备菌悬液，A正确；
B、研究人员利用苯胺蓝培养基筛选高效降解木质素的菌株，可以使用稀释涂布平板法，用涂布器将稀释的菌液接种至苯胺蓝培养基，能降解木质素的菌种分泌漆酶会催化苯胺蓝分解，在该菌落的周围会产生透明圈，所以可根据是否产生透明圈及透明圈的大小筛选出高效降解木质素的菌株，B正确；
C、能降解木质素的菌种分泌漆酶会催化苯胺蓝分解，在该菌落的周围会产生透明圈，为了筛选高效降解木质素的菌株，应选择周围出现较大透明圈的菌落进行后续实验，C错误；
D、产漆酶菌产生的漆酶可以降解木质素，为该菌生长提供碳源，所以产漆酶菌能在以木质素为唯一碳源的培养基生长，D错误。
故选B。
5．耐高温纤维素酶可以加速催化纤维素的水解。某研究小组将纤维素分解菌进行诱变和高温处理获得新菌株甲，制作出菌株甲培养基的滤液，进行了下列实验：
步骤 试管A 试管B
1 加入用2mL缓冲液配制的菌株甲滤液 加入2mL缓冲液
2 在①条件下水浴保温30min
3 加入适量的纤维素液，80℃水浴保温10min
4 加入适量的斐林试剂，②，观察溶液颜色
下列分析错误的是（ ）
A．该实验能探究菌株甲分泌的纤维素酶能否耐受80℃高温
B．表格中，①处应该为80℃，②处可为60℃水浴加热约2min
C．若步骤4中试管A、B溶液颜色分别为砖红色、蓝色，则该酶能耐受80℃高温
D．纤维素酶在80℃下保存，有利于保持酶的活性和结构的稳定性
【答案】A
【分析】本实验的过程步骤中对纤维素酶进行高温处理，然后观察是否能将纤维素水解产生还原糖，还原糖可用斐林试剂鉴定观察是否产生砖红色沉淀，可确定本实验目的是为探究新菌株所产纤维素酶能否耐受80℃高温。
【详解】A、研究小组将纤维素分解菌进行诱变和高温处理获得新菌株甲，制作出菌株甲培养基的滤液，滤液中含有纤维素酶，根据实验步骤3、4可确定该实验可以用来探究菌株甲分泌的纤维素酶能否耐受80℃高温，A正确；
B、①处保温80℃，是因为步骤3中的纤维素液水浴保温80℃，两处保温温度应保持一致，B正确；
C、若步骤4中试管A、B溶液颜色分别为砖红色、蓝色，说明A试管中的纤维素被分解为葡萄糖（还原性糖），说明纤维素酶具有活性，说明该酶能耐受80℃高温，C正确；
D、低温抑制酶的活性，当温度上升，酶的活性可恢复，因而酶适合在低温条件下保存，D错误。
故选A。
6．废纸主要成分是木质纤维，利用发酵工程可将活动产生的大量废纸转化为新的资源——燃料乙醇，如图是利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程，下列说法正确的是（ ）
A．从土壤中筛选①中的目的微生物时，培养基需添加牛肉膏、葡萄糖等有机物
B．没有接种微生物的培养基上未长出菌落，则说明选择培养基有选择作用
C．可通过分解纤维素得到的葡萄糖含量判断②获得的酶液活性
D．满足④的常见微生物为醋酸菌，应保证⑤发酵罐装置密闭而产生乙醇
【答案】B
【分析】据图分析：①表示纤维素分解菌的筛选，②表示纤维素酶的活性鉴定，③表示纤维素发酵，④表示酒精发酵，⑤表示无氧发酵，X表示酵母菌。
【详解】A、从土壤中筛选能产生分解纤维素酶的微生物时，培养基应只添加纤维素作为唯一碳源，A正确；
B、没有接种微生物的培养基上未长出菌落，则说明该培养过程中没有杂菌污染，B错误；
C、可通过分解一定量纤维素得到的葡萄糖含量判断②获得的酶液的活性，得到的葡萄糖越多，说明产生的酶活性越高，C正确；
D、满足④的常见微生物为酵母菌，应保证⑤发酵罐装置密闭而产生乙醇，D错误。
故选B。
7．科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如下表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①（接种方法）接种后培养→将周边出现②的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
【答案】B
【分析】微生物的营养物质：主要包括水、碳源、氮源、能源、无机盐等，这些物质能够满足微生物的生长、繁殖和参与各种生理活动，促进合成新的细包和物质，同时将代谢废物排出。
【详解】A、表中所示培养基中为微生物的生长提供氮源的物质是牛肉膏和蛋白胨，A正确；
B、若筛选的是产酯化酶的霉菌（真菌），应将培养基在用高压蒸汽灭菌法灭菌前调至酸性，B错误；
C、表中①可代表稀释涂布平板法，聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，因此若被筛选的微生物能分泌酯化酶，则在其菌落的周围会产生透明圈，因此②处应填透明圈，C正确；
D、利用平板划线法分离得到单菌落的原理是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落，D错误。
故选B。
8．为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员从土壤中筛选纤维素分解菌并计数，部分操作流程如图。下列叙述正确的是（ ）
①土壤取样时，应做到随机取样
②富集培养可采用液体培养基，可充分利用其中的营养物质
③选择培养的培养基应以纤维素为唯一碳源
④进行系列梯度稀释的目的是便于涂布平板后得到单菌落
⑤涂布平板时，将接种环从酒精中取出后，应放在火焰上灼烧防止污染
⑥菌落计数时，统计的菌落数往往比实际数目少
A．①②③④ B．①③④⑥
C．②③④⑥ D．②③④⑤
【答案】B
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】①获取土壤中纤维素分解菌时需要选择富含纤维素的环境，如树林中堆积的落叶经长时间发酵分解形成的腐殖土，①错误；
②富集培养可采用液体培养基，可充分利用其中的营养物质，②正确；
③分析题意，本实验目的是从土壤中筛选纤维素分解菌并计数，选择培养的培养基应以纤维素为唯一碳源，③正确；
④进行系列梯度稀释的目的是便于涂布平板后得到单菌落，④正确；
⑤将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后放在火焰上灼烧，以免引燃酒精，⑤错误；
⑥菌落计数时，统计的菌落数往往比实际数目少，这是因为当两个或多个细包连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，⑥正确。
故选B。
9．下图是实验人员利用“影印法”初检氨基酸S缺陷型菌株的过程，影印法培养微生物可以保证不同培养基中的同种菌株有相同接种位置。结合图示分析，下列有关叙述正确的是（ ）
A．对菌液进行诱变处理，可使菌种定向变异为氨基酸S缺陷型
B．图示的基本培养基既属于鉴别培养基，也属于选择培养基
C．进行过程②的操作时，应先将丝绒布转印至基本培养基上
D．图示菌落B中有氨基酸S缺陷型菌，菌落A能合成氨基酸S
【答案】B
【分析】影印培养法，是指确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落的一种微生物培养方法。主要操作方法是：用灭菌的丝绒覆盖在一块与培养皿同样大小（或略小）的木制圆柱体上，轻轻地在母种培养皿的菌苔上印一下，把细菌菌落全部转移到丝绒面上，然后将这一丝绒面再印在另外的选择性培养基平板上，获得与原始平板完全相同的接种平板。待培养后，比对各培养皿在相同位置出现相同的菌落，从而筛选出适当的菌株。
【详解】A、诱变处理可使菌种发生生态突变，生态突变具有不定向性，A正确；
B、图中的基本培养基属于选择培养基，但不属于鉴别培养基，B错误；
C、为避免完全培养基中的氨基酸污染丝绒布，进行过程②的操作时，应先将丝绒布转印至基本培养基上，C正确；
D、根据培养基上的菌落分布可知，菌落B在基本培养基（即选择培养基）和完全培养基中均有生长，菌落A不能在基本培养基（即选择培养基）中生长，因此菌落A中有氨基酸S缺陷型菌，D错误。
故选B。
10．野生型大肠杆菌能够在基本培养基上生长，经诱变获得了两种营养缺陷型的突变体M、N，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。若将两种突变体在完全培养基（液体）中混合培养一段时间后，再采用稀释涂布平板法接种在基本培养基平板上，培养后长出了大肠杆菌菌落。下列有关叙述正确的是（ ）
A．野生型大肠杆菌诱变时发生了生态突变或染色体变异
B．突变体M和N能相互为对方提供所缺营养物质
C．在混合培养期间突变体M和N发生了遗传物质的交流
D．混合培养获得的大肠杆菌都能在基本培养基中生长
【答案】B
【分析】生态突变是指生态中碱基对的增添、缺失或替换，这会导致生态结构的改变，进而产生新生态。
【详解】A、野生型大肠杆菌是原核生物，其遗传物质主要位于拟核的DNA上，并没有像真核生物那样的染色体结构。因此，野生型大肠杆菌在诱变时不可能发生染色体变异，只能发生生态突变，A正确；
B、根据题目描述，突变体M和N都是营养缺陷型，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。然而，当它们在完全培养基中混合培养一段时间后，再接种到基本培养基上却长出了大肠杆菌菌落。这说明在混合培养期间，突变体M和N能够相互为对方提供所缺失的营养物质，从而使得双方都能在基本培养基上生长，B正确；
C、根据题目描述，突变体M和N都是营养缺陷型，且单独培养时均不能在基本培养基上生长，所以在混合培养期间，突变体M和N能够相互为对方提供所缺失的营养物质，并不一定是发生了遗传物质的交流，C错误；
D、虽然混合培养后接种到基本培养基上长出了大肠杆菌菌落，但这并不意味着混合培养获得的所有大肠杆菌都能在基本培养基中生长。只有那些通过相互提供缺失营养物质而恢复了生长能力的突变体或重组体才能在基本培养基上生长，D错误。
故选B。
二、多选题
11．植酸酶能催化分解植酸磷，从而提高植物性物料中磷的利用率。科研人员从土壤中分离出5种能够产生植酸酶的细菌菌株，分别为a、b、c、d和e。植酸磷被分解后培养基上会出现透明圈，分离的操作过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．可用干热灭菌法对土壤样品进行灭菌
B．该实验采用了平板划线法进行接种和计数
C．经过图示的操作，土壤样品被稀释了10 倍
D．e细菌植酸酶的活性比a细菌植酸酶的高
【答案】BD
【分析】题意分析，由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊，产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。
【详解】A、干热灭菌法适用于能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等，土壤样品中含有各种微生物和有机物，不能用干热灭菌法进行灭菌，否则会破坏土壤中的微生物和有机物，A正确；
B、平板划线法可以用于分离纯化微生物，但不能用于计数，用于计数的方法通常是稀释涂布平板法，B错误；
C、土壤样品经过一系列稀释操作，最终取了0.1mL进行涂布培养，1g土壤添加到99mL无菌水中，稀释了100倍，以后每次稀释10倍，经过3次稀释，土壤样品被稀释了105倍，C正确；
D、e细菌形成的透明圈比a细菌形成的透明圈大，说明e细菌分解植酸磷的能力更强，即e细菌植酸酶的活性比a细菌植酸酶的高，D错误。
故选BD。
12．为证明青霉素在某种细菌产生抗药性过程中所起的作用是选择而非诱变，实验方案如图所示。图中③平板影印是指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种的方法。下列叙述正确的是（ ）
A．进行扩大培养的培养基配制过程不添加琼脂，但需进行干热灭菌
B．②过程接种方法为稀释涂布平板法，此法可用于微生物的分离和计数
C．B组培养基中应添加青霉素，且培养过程中应进行倒置培养
D．该实验结果说明青霉素起到了选择作用
【答案】BCD
【分析】微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、进行扩大培养若为液体培养基则可不添加琼脂，通常采用高压蒸汽灭菌，而非干热灭菌，A正确；
B、②过程接种方法为稀释涂布平板法，该方法可用于微生物的分离和计数，B正确；
C、B 组培养基中应添加青霉素，以观察青霉素对细菌的作用，培养过程中倒置培养可以防止污染，C正确；
D、从实验设计和结果可以看出，青霉素起到了选择作用，使得原本就具有抗药性的细菌存活下来，D错误。
故选BCD。
13．在一系列微生物的作用下，黑茶（中国边疆游牧民族的主要饮品）会产生一种对人体非常有益的金黄色颗粒“金花”。研究人员对“金花”中的微生物进行了分离和鉴定，过程如图。下列说法正确的是（ ）
A．向“金花”样品中加入蒸馏水制成样品悬液
B．稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果可能比实际值偏小
C．涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化
D．可通过生态组测序对菌种进行准确鉴定
【答案】BCD
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、向“金花”样品中加入无菌水制成样品悬液，而不是蒸馏水，A正确；
B、稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果可能比实际值偏小，这是因为当两个或多个菌落长在一起时，只能计为一个菌落，B正确；
C、涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化，平板划线时，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，达到纯化的目的，C正确；
D、菌种鉴定有多种方法，生态组测序进行菌种鉴定的结果比传统生化鉴定更为直接，鉴定结果也更为可靠，D错误。
故选BCD。
14．袋装酸奶的包装上通常都会注明“胀袋勿食”。某同学选择一袋过期的胀袋密封酸奶，按图中的操作流程进行实验，研究其中某微生物的生长情况。下列有关叙述不正确的是（ ）
A．酸奶“胀袋”可能是由于混入了醋酸菌等厌氧菌
B．培养皿中倒入培养基后要保证一直水平正放
C．可通过观察固体培养基上生长的菌落的形状、大小和颜色等特征初步鉴定菌种
D．若3个平板的平均菌落数是180个，则1mL酸奶中某微生物数目为9×105个
【答案】ABD
【分析】菌落是指由一个微生物细包或一堆同种细包在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细包群体。菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等，每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征，不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。
【详解】A、酸奶“胀袋”可能是由于混入了代谢会产生气体的微生物，醋酸菌属于好氧菌，A正确；
B、培养皿中倒入培养基后，待培养基冷却凝固后应倒置，B错误；
C、每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征，不同种或同种细菌在不同的培养条件下，菌落特征是不同的，故可通过观察固体培养基上生长的菌落形状、大小和颜色等特征初步鉴定菌种，C正确；
D、图中显示酸奶稀释倍数为104、取0.2 mL接种，可以计算1mL酸奶中某微生物数量为180÷0.2×104=9×106个，D错误。
故选ABD。
15．某小组用传统酱油为样品，使用了两个不同的接种方法练习菌落数目统计，方法1是将菌液和培养基一起倒入平板中混合均匀，方法2为稀释涂布平板法，部分实验流程如下图，两种方法计数结果如下表，下列有关说法正确的是（ ）
培养时间/h 24 48 72
方法1平板上平均菌落数 47 92 92
方法2平板上平均菌落数 170 190 190
A．实验中，平板上生出的菌落都属于同一种微生物
B．方法1菌落数较少的原因之一可能是部分不耐热菌死亡
C．根据方法2菌落数可推算样品中微生物密度为1.9×106个/ml
D．根据实验结果可得知，该品种酱油微生物严重超标，不可食用
【答案】BCD
【分析】微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、实验中，平板上生出的菌落不一定都属于同一种微生物，A正确；
B、方法1是将菌液和培养基一起倒入平板中混合均匀，培养基温度高，可能是部分不耐热菌死亡使得菌落数较少，B正确；
C、根据方法2菌落数可推算样品菌落数为190÷0.1×103=1.9×106个/ml，C正确；
D、 合格的酱油产品其杂菌数不应超过5万个/毫升，根据实验结果可得知，该品种酱油微生物严重超标，不可食用，D错误。
故选BCD。
三、非选择题
16．有机农药苯磺隆是一种强效除草剂，长期使用会严重污染环境；研究发现，苯磺隆能被土壤中某种微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示，请回答相关问题：
(1)微生物的培养基一般都应该含有的成分有水、无机盐和 四类，此外，培养基还要满足微生物生长对pH、 以及氧气的要求。土壤有“微生物的天然培养基”之称，为了获取能降解苯磺隆的菌种，选择的土壤样品应来自 。
(2)图甲中选择培养的目的是 ；在划线纯化操作时，划线工具使用前后都要进行 灭菌。
(3)若要检测土样中的细菌含量，应采用 法进行接种。运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小，原因是 。
(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液作图乙所示实验，该实验设计不合理之处是因为 。
【答案】(1) 碳源、氮源 特殊营养物质 被苯磺隆严重污染的土壤
(2) 增加样品中目的菌的浓度 灼烧
(3) 稀释涂布平板 两个或多个细包连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
(4)缺乏对照而无说服力
【分析】题图分析，图甲中：首先用选择培养基从土壤中筛选出菌种，再采用平板划线法纯化出相应的菌种；图乙中：通过测定苯磺隆的浓度测定其降解率。
【详解】（1）微生物的各种培养基配方一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养，此外，培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。根据题意可知，“苯磺隆能被土壤中某种微生物降解”，因此为了获取能降解苯磺隆的菌种，选择的土壤样品应来自被苯磺隆严重污染的土壤。
（2）图甲中选择培养使用的是液体培养基，选择培养的目的是增加目的菌落的菌浓度，以便获得更多的目的菌，使用平板划线法对微生物进行纯合培养时，划线所用工具在使用前后都要进行灼烧灭菌。
（3）若要检测土样中的细菌含量，应采用稀释涂布平板进行接种。当两个或多个细包连在一起时，只能观察计数为一个菌落，因此运用稀释涂布平板法统计时，其结果往往较实际值偏小。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，然后取上清液。由此可判定该实验的假设为目的菌株通过分泌某种物质来降解苯磺隆，但尚未设置不加入该物质的对照组实验，故该实验没有说服力。
17．一次性口罩主要成分是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维。研究人员欲从合适的土壤样品中筛选出能高效降解一次性口罩的细菌，设计了如图1所示的流程。请回答下列问题：
(1)图1中“甲”指的是 ，目的是提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度，此过程使用的培养基中应以 （填化合物名称）为唯一碳源，为增大菌体与培养基的接触面积，从物理性质看，该培养基应是 。
(2)将分离纯化得到的不同菌种分别接种到鉴别培养基上，鉴别培养基中加入了能与聚丙烯纤维结合的显色染色剂。设不同菌种的菌落面积为s，菌落周围透明圈的面积为S，选择S/s的比值 的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。
(3)欲估算某土壤样品中有多少能高效降解一次性口罩的目的菌，接种平板时应用 法。根据图2操作能计算出1g该土壤中约有 个高效降解一次性口罩的目的菌。
【答案】(1) 选择培养（或扩大培养、富集培养） 聚丙烯纤维 液体培养基
(2)大
(3) 稀释涂布平板 6.8×107
【分析】各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】（1）从目的用途看，为了提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度，图中“甲”指的是选择培养（或扩大培养、富集培养）；本实验目的是筛选出能高效降解一次性口罩的细菌，一次性口罩主要成分是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维，故在选择培养时培养基中应以聚丙烯纤维为唯一碳源；液体培养基可扩大培养，为增大菌体与培养基的接触面积，培养基应是液体培养基。
（2）由于目的是筛选高效降解一次性口罩的微生物，故最适合作为选择土壤样品的指标是一次性口罩的腐烂程度，设不同菌种的菌落面积为s，菌落周围透明圈的面积为S，选择S/s的比值大的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。
（3）微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中能够用于计数的是稀释涂布平板法；计数时应选择菌落数在30-300之间的进行统计，据图可知，符合要求的菌落数有62、 68、 74，且共稀释了105倍，算出1g该土壤中约有（62＋68＋74）0.1×105=6.8×107个。
18．磷是植物生长的重要元素，施入土中的磷大多数与Ca2+等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见下图，请回答下列问题：
(1)经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则每克土样中的活菌数为 个。运用这种方法统计的结果往往比实际值 ，原因是 。
(2)步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较 的菌落。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据 对细菌进行初步的鉴定和分类。
(3)常采用 法对高效解磷菌进行分离和计数，要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置 作为对照。
(4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基中，并在37℃、200r·min-1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到曲线：
用摇床进行培养的好处是 （写出两点）。结果表明最优良的解磷菌株是 。
(5)纯化菌种时，也可按下图所示接种方法，接种环需要灼烧 次。
【答案】(1) 3.8×106 偏小 一个菌落可能来自于两个或多个细包
(2) 大 菌落（的形状、大小、颜色等）特征
(3) 稀释涂布平板 接种了等量微生物的牛肉膏蛋白胨培养基
(4) 增加培养液中的溶氧量、使菌株与培养液充分接触，有利于物质交换 ③. M-3-01
(5)5
【分析】微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等。筛选目的微生物必须使用选择培养基。从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。
【详解】（1）步骤③进行了3次稀释，每次稀释了10倍，则共将土壤悬浮液稀释了1000倍。（39+38+37）÷3÷0.1×104=3.8×106个。由于两个或多个细包连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。
（2）溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大，说明细菌分解磷酸盐的能力较强，所以选择溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大的菌落。不同的微生物具有特定的菌落特征，所以可通过观察菌落的形状、大小、颜色等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。
（3）常采用稀释涂布平板法对高效解磷菌进行分离和计数，若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种了的没有选择作用的细菌通用的牛肉高蛋白胨培养基作对照。
（4）摇床培养是实验室培养需氧微生物的常用方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有机呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，有利于物质交换，提高营养物质的利用率。根据实验曲线图，培养相同时间后，M-3-01的上清液中可溶性磷含量较高，可知M-3-01实际溶解磷能力最强。
（5）由图观察可知，纯化菌种时，采用图示方法接种时，由于每次划线前后都要灼烧接种环，而图中共有4个划线区域，故接种环需要灼烧5次。
一、单选题
1．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基-甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基-甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
【答案】A
【分析】实验的自变量为培养条件（基础培养基中是否添加氨基酸及添加氨基酸的种类），因变量为粗糙脉孢霉突变株的生长状况，其他的培养条件为无关变量，应该保持相同且适宜。
【详解】A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；
B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；
C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；
D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。
故选A。
2．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的生态
B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细包数量的变化
【答案】A
【分析】1、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。
2、 产品不同，分离提纯的方法般不同。（1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；（2） 如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。
3、 发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。
4、 发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强， 因而可以得到较为专的产物。
【详解】A、生态表达的产物是蛋白质，而井冈霉素是JGs发酵生产的一种氨基寡糖类抗生素，A正确；
B、JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程会影响JGs的数量，进而影响井冈霉素的产量，B错误；
C、在一定范围内提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量，但若浓度过大，反而会降低井冈霉素的产量，C错误；
D、JGs是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分，因此稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细包数量的变化，D错误。
故选A。
3．（2024·湖南·高考真题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（ ）
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦ C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
【答案】A
【分析】微生物平板划线和培养的过程中要保证始终没有杂菌的污染，接种环、培养基、试管等都需要进行灭菌，实验操作过程应该在酒精灯火焰旁进行。
【详解】由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。
①③④⑤正确，故选A。
4．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3种酶X、Y和Z，trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码生态突变的色氨酸依赖型突变体。已知3种酶均不能进出细包，而色氨酸合成途径的中间产物积累到一定程度时可分泌到胞外。将这3种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。据图分析，3种酶在该合成途径中的作用顺序为（ ）
A．X→Y→Z B．Z→Y→X C．Y→X→Z D．Z→X→Y
【答案】A
【分析】由图可知，接种时，相当于在培养基表面划了一个三角形的三条边。左边那条边线是用trpY突变型菌液划线接种的，右边那个边是用trpX突变型菌液接种的，最下面那个边是用trpZ突变型菌液划线接种的。最终结果是，trpY那条接种线左下方出现了又黑又粗的明显的菌落，trpX那条接种线两头出现了明显的菌落，而trpZ那条接种线，没有长出明显的菌落，。
【详解】ABCD、添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显的菌落。trpX、trpY和trpZ分别为相应酶的编码生态突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX不能为trpY和trpZ提供原料，trpY不能为trpZ提供原料，trpZ可以为trpX、trpY的生长提供原料，推测3种酶在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。
故选A。
5．（2023·河北·高考真题）为筛选能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，下列相关实验设计错误的是（ ）
A．从酸奶和泡菜中采样分离乳酸菌 B．平板倒置培养为筛选乳酸菌创造无氧环境
C．对目的菌株进行胆固醇降解能力的测定 D．检测目的菌株对消化道环境的耐受力
【答案】B
【分析】筛选目的菌株应从富含目的菌的环境中去取样。倒平板后及平板微生物培养时需要倒置培养，微生物初步筛选后还要进行相关实验以检测目的菌的发酵能力或特性。
【详解】A、筛选目的菌时应从富含目的菌的环境中去取样，酸奶和泡菜中富含乳酸菌，可以从中采样进行分离纯化，A正确；
B、平板倒置培养是为了防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，不是创造无氧环境，B错误；
C、筛选的是能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，所以，初步筛选后，还需要进一步进行目的菌胆固醇降解能力的测定，以获得符合要求的乳酸菌，C正确；
D、因筛选出的目的菌是在肠道发挥作用，所以，还需要检测目的菌株对消化道环境的耐受力，D错误。
故选B。
6．（2023·辽宁·高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m ）。下列叙述错误的是（ ）
A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理
B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置
C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值
D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高
【答案】A
【分析】稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细包繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细包。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细包分散开，使成单个细包存在（否则一个菌落就不只是代表一个细包），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细包生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
【详解】A、为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确；
B、纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确；
C、微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确；
D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细包连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。
故选A。
7．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
【答案】A
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
2、按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
3、消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A正确；
B、平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；
C、使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；
D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D错误。
故选A。
8．（2023·广东·高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（ ）
A．a点时取样、尿素氮源培养基
B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
【答案】A
【分析】筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，要用角蛋白氮源培养基。
【详解】研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，所以D错误，ABC错误。
故选A。
二、多选题
9．（2024·吉林·高考真题）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是（ ）
A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
【答案】BD
【分析】1、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技 术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌。
2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来 统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养 基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活 菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含 有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30 300 的平板进行计数。
【详解】A、题干信息：某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，故在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从未感病植株上采集样品，A正确；
B、获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染；将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测，B错误；
C、题图可知，样品研磨后进行了稀释涂布，可见将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落，C正确；
D、题图抗性检测可知，判断内生菌的抗性效果需设置对照组和实验组，对照组不接种内生菌得到病原菌菌斑，实验组接种内生菌得到病原菌菌斑，然后比较对照组和实验组的菌斑大小，实验组病原菌菌斑越小表明内生菌抗性效果越好，D错误。
故选BD。
三、非选择题
10．（2024·江西·高考真题）聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）是一种聚酯塑料，会造成环境污染。磷脂酶可催化PET降解。为获得高产磷脂酶的微生物，研究人员试验了2种方法。回答下列问题：
(1)方法1从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯（一种磷脂类物质）为唯一碳源制备 培养基，可提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有 、 、 等营养物质。
(2)方法2采用 技术定向改造现有微生物，以获得高产磷脂酶的微生物。除了编码磷脂酶的生态外，该技术还需要 、 、 等“分子工具”。
(3)除了上述2种方法之外，还可以通过 技术非定向改造现有微生物，筛选获得能够高产磷脂酶的微生物。
(4)将以上获得的微生物接种到鉴别培养基（在牛肉膏蛋白胨液体培养基中添加2%的琼脂粉和适量的卵黄磷脂）平板上培养，可以通过观察卵黄磷脂水解圈的大小，初步判断微生物产磷脂酶的能力，但不能以水解圈大小作为判断微生物产磷脂酶能力的唯一依据。从平板制作的角度分析，其原因可能是 。
【答案】(1) 选择 水 无机盐 氮源
(2) 生态工程（或转生态） 限制酶 DNA连接酶 载体（或质粒）
(3)诱变育种
(4)不同平板中培养基量的差异以及平板内和平板间培养基厚度不均匀
【分析】1、培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；
2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
【详解】（1）方法1从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯为唯一碳源制备选择培养基，在该培养基中只有能利用磷脂酰乙醇酯的微生物能生长，其他微生物的生长被抑制，进而获得筛选出所需要的微生物，为了提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有水分、无机盐和
(5)黑
【分析】平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细包繁殖而来的肉眼可见的子细包群体，这就是菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
【详解】（1）显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。
（2）从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，即稀释了10倍，1mL细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷200 μL）×10个=5000个。
（3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。
（4）A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。
（5）大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈黑色。
12．（2023·北京·高考真题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细包内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。
(2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
(4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。
【答案】(1)氮源、碳源
(2)A菌能在培养平板中生长繁殖
(3) 稀释 溶菌圈
(4)假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂
【分析】微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
【详解】（1）蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。
（2）将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。
（3）将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。
（4）根据实验实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。
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