高中生物选修I《生物技术实践》测试题
1、2015年与我国女科学家屠呦呦平分诺贝尔生理学或医学奖的是爱尔兰科学家威廉一坎贝
尔和日本药物科学博士聪大村，他们二人的贡献是发现了一种新的药物，名为阿维菌素，其衍生产品降低了河盲症和淋巴丝虫病的发病率，同时还能有效对抗其他寄生虫病，治疗效果显著。聪大村从土壤样品中分离链霉菌的新菌株，在实验室内通过成千上万链霉菌培养物筛选出一些较有发展前途的菌株，这就是阿维菌素的来源。
(1)制备链霉菌培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是 和灭菌，对
培养基进行灭菌的常用方法是 。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒
置，其主要原因是
(2)图①是在纯化过程中通过 法分离培养的结果，在培养
基上接种时接种环需通过灼烧灭菌，完成图中划线操作，
共需要灼烧接种环 次。图②表示的是用
法接种培养后得到的结果。
(3)在纯化过程中，在固体培养基上划线分离时，经培养，在
划线的末端出现菌落，表明菌已分离。在此过程中，正确的操作是
A．每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次
B．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种
C．在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
2、用水蒸气蒸馏法从薄荷叶中提取薄荷油的装置图，请据图补充完成下面的实验并回答有关问题。
(1)实验步骤：
①安装好如图所示的装置，特别要注意将冷凝器夹好。
②将薄荷叶尽量剪碎，取适量的薄荷叶放入________瓶内。
③向________瓶内加水，至容积的________左右。为防止出现水碱，可加入数滴稀硫酸。
此时应向瓶中放入几粒________以防暴沸。
④向冷凝器中通入________。
⑤放好连接管，将连接管的出口放在接收瓶中。接收瓶口上盖一小块铝箔或牛皮纸。
⑥将蒸汽发生器加热，至瓶中的水沸腾，然后调节火的大小，以维持水稳定的沸腾为宜。
⑦当接收瓶内漂在水上的油状物(即精油)不再增多时即可停止实验。
(2)回答有关问题：
①A蒸馏瓶通入B蒸馏瓶中的连接管为什么插入蒸馏瓶底部？
②冷凝器的作用是____________________________________________________。
③接收瓶口上盖一小块铝箔或牛皮纸，其目的是___________________________。
3、植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。
（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：
酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液 水
培养基甲 + + + + - + +
培养基乙 + + + - + + +
注：“+”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；
4、下图为某工厂设计的芦柑加工工艺流程，请分析回答：
(1)为提高出汁率，过程②可使用 酶处理，该酶是一类酶的总称，包括半乳糖醛酸酶、 酶，为提高该酶的利用率常采用 技术；过程③常常接种的菌种是 ，并且需要严格控制氧分压。
(2)芦柑果皮可用来提取香精油，过程④最好采用的方法是 法。为提高出油率，材料需经过石灰水 处理，然后漂洗。
(3)现获得一株无子突变芦柑，研究人员要在较短时间内获得大量突变植株，最好采用
的方法，该过程中需要对外植体进行 处理。在上述过程中，所用到的培养基及器材都需要严格灭菌，工作台需要用 擦拭。培养基中除基本营养成分之外，还需要添加 。
5、腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的实验流程示意图。请回答下列相关问题：
(1)从微生物培养的角度分析，豆腐璇是毛霉等微生物的培养基，按照其状态称为_______培养基。现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以____________________________________________。
(2)腐乳制作过程中，加盐的作用是_______________和__________________。
(3)为了成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)，其生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_________和_________，实验中需要振荡培养，原因是_____________。
(4)采用固体培养基培养时，常采用_________接种，获得单菌落后继续筛选。
(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行__________处理后，才能扔掉。
6、苹果醋具有营养丰富，增强机体免疫力，护肤养肝等多种功效，以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图如下图1，请分析回答：
图1
图2
(1)过程甲中使用的微生物是 ，发酵温度控制在18℃～25℃，经过10～12天后，样液中是否产生酒精，可以用 来检验。
(2)利用苹果酒制作苹果醋的化学反应方程式是 。
(3)过程乙中使用的醋酸菌可以从食醋中分离纯化获得，下图操作是分离纯化过程中利用 法进行接种，在操作过程中应注意的事项有下列哪几项____________（填序号）。
①每次划线前和结束时都需要灼烧接种环；②灼烧接种环后，待其冷却后再划线；③第二次及以后的划线，要从上一次划线的末端划线；④最后一次划线不能和首次划的线相接触。
(4)为了保持菌种的纯净，对于长期需要保存的菌种，可以采用 的方法。
(5)某同学尝试自己利用图2装置制果醋，制作过程中进气口应 ，排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是 。
7、已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：
（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用于 染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用 （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。
（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 法进行计数。
（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、
40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中， ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕 ℃设计后续实验。
8、解磷微生物能分解有机磷，可降低水体富营养化程度。下图是从湖泊污泥中筛选解磷微生物的过程示意图，下表是分离纯化的结果。请回答下列问题：
记录项目：透明圈直径/菌落直径
菌落编号 1 2 3
48小时 1.6 2.8 3.0
72小时 2.2 1.2 5.0
96小时 2.3 1.2 4.2
(1)培养基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及无菌卵黄液，其中_________主要提供有机磷。从土壤中富集解磷微生物时，应选用_________(固体/液体)培养基。
(2)在倒平板前，应对玻璃器皿和培养基灭菌，灭菌方法是______________________。
配制成l0-1浓度稀释液时，用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有_________mL无菌水的试管中，并依次配制10-2～10-10的梯度稀释液。
(3)过程②、③为菌种分离纯化的过程，接种方法分别为____________、____________。
(4)分析菌种的分离纯化结果，应选择为_____号菌落进行扩大生产，原因是_________。
9、办公和学习产生大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的能源乙醇。下图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题：
（1）图中①环节所需的微生物若来自土壤，要统计土壤样品中该活菌的数目，宜采用 法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大约推测出样品中的活菌数。
（2）分解废纸中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。
（3）④接种的微生物是 ，为降低乙醇生产成本，可利用 技术使酶能够重复使用。
（4）纸张加工过程中，有时要加入一些由植物芳香油制成的香精，芳香油的提取方法有
等（至少写出2种）；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶于有机溶剂的特点，可以考虑使用 法提取植物色素。
10、人们使用含有机锡(如三丁基锡)的油漆涂于船只、海洋建筑物等的表面，有效防止了海洋生物附着生长。但近年来研究发现油漆中的有机锡可释放入海洋，对多种生物造成毒害。有关该污染物的研究如下，请回答：
（1）较低浓度的有机锡即能抑制软体动物雌性个体的雌性激素合成，这些雌性个体的繁殖功能会 。该污染物通过 的富集作用可能对鱼类、鸟类甚至人类造成危害。
（2）有机锡污染导致某海域一种鱼的年龄组成发生下图所示的改变，预测该种群数量的变化趋势是 。
（3）若想探究海洋底泥中是否存在分解三丁基锡的细菌，以便用于今后的生态修复，
应将海洋底泥稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于 培养基。
（4）在微生物培养过程中常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和 。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有 和 两种。
（5）细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为__________。为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。
11、黄花蒿（中药名：青蒿）是菊科蒿属的一种植物。从该植物中提取的青蒿素是一种无色
的有机物，对治疗疟疾有速效和低毒的特点。为获得大量叶片大、青蒿索含量高的植株，可对高品质黄花蒿利用组织培养进行繁殖。回答下列相关问题：
(1)用于离体培养的黄花蒿芽尖组织片段叫。
(2)若在培养过程中发现愈伤组织只分裂而不分化出芽和根，则可能原因有：①细胞分
裂素用量与生长素用量的比值 ；②激素使用顺序不当，先使用了 。
(3)若接种2天后，发现培养基中植物茎尖边缘局部污染，原因可能是 。
(4)黄花蒿中的某挥发性药用成分化学性质稳定，易溶于有机溶剂，可采用
法提取。在提取过程中，油水化合物可加入NaCl，其目的是 。当原料量等其他条件
一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是 。
12、在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明）。
(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行 处理。
(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是：固体培养基且 。若需要调节培养基pH,，应该在各种成分都溶化后且分装 （填“前”或“后”）进行。
(3)在划线前，接种环应该在酒精灯火焰上 。培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是 或有氧条件抑制了这些细菌的生长。
(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是 ，有透 明带菌落利用的氮源主要是 ，据此可筛选出目的菌。
(5 )A细菌和B细菌都能降解该除草剂，研究发现以每克菌体计算，A细菌降解该除草剂的能力比B细菌要强，对此现象合理的假设是
13、废纸主要成分是木质纤维。左下图是工业上利用废纸生产乙醇的基本工作流程。回答下列问题。
（1）自然界中①环节需要的微生物大多分布在 的环境中。
②中获得的酶是 酶。
（2）若从土壤中分离出上述微生物，应以 为唯一碳源的培养基进行培养，并加入 形成红色复合物进行筛选，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。
（3）接种后一个平板经培养后的菌落分布如右上图所示，推测接种时可能的操作失误是
。向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是 。
（4）生产中可以满足④环节的常见菌种是 。玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可为该微生物的生长提供 。从玉米胚芽中提取的胚芽油不易挥发，宜选用 法从玉米胚芽中提取。
14、微生物培养与分离技术是生物中重要的实验技术。根据有关的微生物知识，回答下列问题：
（1）培养基的制备需经过计算、称量、溶化和 、 等过程。上述过程中，需要在超净工作台上操作的是 。
（2）纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是 和 ；在对培养液中酵母菌的种群数量进行统计时，计数的方法是 。
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应选择尿素作为唯一 ；培养基中加入指示剂 以鉴定其中是否含有能分解尿素的细菌。
（4）若要筛选分解纤维素的细菌，在土壤取样、选择培养后，需进行 和 操作，通过染色并观察 的有无挑选出所需菌种。
15、自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中的铵盐，对水体有一定的净化作用。请回答。
（1）培养硝化细菌时，将含固体培养基的培养皿倒置的目的是 。培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供 ，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于 培养基。
（2）硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的 。若实验组每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行 处理。
（3）实验：探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小。
取含铵盐的液体培养基均分成 等分，其pH值可依次调节为 ，培养相同时间后，可通过测定培养基中的 来判断硝化细菌分解能力的大小。
16、运用学过的知识，回答有关现代技术实践的问题：
（1）在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成此现象的生物是 ．腐乳外部有一层致密的“皮”，这是 的匍匐菌丝形成的．制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是 繁殖形成的．
（2）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是 ；一般对配制的培养基采用 法灭菌．
（3）提取洋葱DNA时,要在切碎的洋葱中加入一定的 ,并进行充分地搅拌和研磨,待过滤后再收集研磨液．
（4）下图为花粉植株的培育途径
为了挑选到单核期的花药，通常选择 的月季花蕾．选择花药时一般通过镜检确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色．图中通过花药培养产生花粉植株，有两种途径，这两种途径之间没有并没有绝对的界限，主要取决于培养基中 。
17、糖皮质激素（GC）在临床上常用被用作免疫抑制剂，但长时间使用会导致体内糖皮质激素受体（GR）基因表达水平降低，GR含量较少；人参皂苷能够缓解“GC抵抗现象”，它主要存在于人参植株的根须中，但是含量较低，采用植物组织培养的方法可获取大量的人参皂苷。回答下列问题：
（1）植物组织培养常用的培养基是 。配置诱导愈伤组织的固体培养分装后要进行 ；接种前要对人参根进行 。
（2）培养初期，可用少量 酶处理愈伤组织，获取单细胞或小细胞团，在液体培养基中进行悬浮培养，可有效提高人参皂苷合成量。
（3）人参皂苷易溶于亲水性有机溶剂，从培养物干粉中提取人参皂苷可用 的方法，操作时应采用 加热。
（4）研究人员从人参皂苷中分离出了Rb1、Rg1、Rh1三种物质。为研究这三种物质缓解GC抵抗现象的效果，研究人员利用体外培养的人体细胞进行相关实验，结果见下表：
实验结果说明能够缓解GC抵抗现象的人参细胞提取物是 。Rg1可能是通过抑制GR基因表达的 过程，使GC抵抗现象加重。
18、运用植物组织培养技术，可以实现优良品种的快速繁殖，培育出大量不含病毒的幼
苗，实现花卉的连续生产，请回答下列有关问题：
(1)进行组织培养时，常用 培养基，该培养基与微生物培养基的不同点在于成分更多为无机盐，在应用时常常添加____ 。
(2)愈伤组织细胞的特点：排列疏松无规则，高度 化的呈___ _状态
的薄壁细胞。
(3)培育被子植物花粉植株一般有两种途径：脱分化成____ 或愈伤组织，再
经过诱导分化出________和根，进而发育成幼苗。
(4)确定花粉的发育时期，常用的染色方法有____ 法和 法。
19、请回答下列与生物技术实践相关的问题。
（1）自古酒就与人类生活息息相关。在图所示两发酵瓶中装
入等量的葡萄汁，其中装置__________更适用于果酒制
作，果酒制作中发酵旺盛期___________产量很大，需进
行定期排气。果酒发酵是否成功可用____________对发
酵产物酒精进行检验确认。
（2）对于植物有效成分的提取，适用于玫瑰油、薄荷油等化
学性质稳定、难溶于水、挥发性强的芳香油的提取方法
为______________，在提取过程中，加入___________可吸收精油中残留的水分。
（3）微生物培养后期进行菌落统计时，除了________计数法，还可用________法培养细菌进行间接活菌计数。
（4）植物组织培养的培养基中添加了________等无机营养，为植物细胞生活提供了必需的无机盐。
20、人们的日常生活与传统发酵技术密切相关。请回答下列相关问题：
(1)腐乳制作中主要利用了微生物产生的 酶和脂肪酶。
(2)在制作果醋、腐乳、泡菜的过程中需要提供充足氧气的是 。在发酵产物制作
过程中都需要培养微生物，为防止杂菌污染，需要对培养液（基）和培养器皿进行
____（填“消毒”或“灭菌”）。
(3)利用酵母菌酿酒时，一开始持续通入空气，导致酵母菌数量 （填“增多”、“不
变”或“减少”），然后再密封，使酒精 （填“增产”、“减产”或“不产生”）.
(4)果酒发酵后是否有酒精产生，可以用 来检验，在酸性条件下呈现灰绿色。
(5)纯化果酒制作的菌种时，利用 （固体、液体）培养基。接种时常用的方法有平板划线法和 法。
21、纤维素酶在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。目前，利用微生物提高纤维素酶
产量是主要发展方向。如下图，用紫外线照射含有纤维素分解菌的土样，分离、培养，再检测各菌株的纤维素酶的产生量。请回答下列相关问题：
(1)从自然界获取纤维素分解菌，采集土样时应选择 的环境。
(2)紫外线照射的目的是 ，A0组未经紫外线处理，其作用是作为
(3)经高压灭菌锅灭菌的培养基，需要冷却后才能用来倒平板。常用于估计培养基已
冷却到50℃左右的简便方法为 。
(4)上述培养皿中的培养基除含有水和无机盐、酵母膏、水解酪素、琼脂等外，还应有
，目的是选择纤维素分解菌。
(5)上述检测结果如下左图所示。由图可知， 组酶活力与Ao组相同，最可能
的原因是 。
(6)若用刚果红染色法比较纤维素分解菌产生纤维素酶的量的多少，可通过观察平板
培养基上以纤维素分解菌为中心的透明环（如上右图）来比较。其中与A1对应的是图中的 。
(7)若要保证上右图透明圈中均为单个细胞形成的菌落，操作要求是 。
22、I．下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
（1）依物理性质划分，该培养基属于_________培养基；依用途划分，则属于_________
培养基。
（2）依培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是_________。
（3）如要鉴定自来水中的大肠杆茵是否超标，至少要加入_________、_________和
_________，除去_________。
Ⅱ．请利用相关的知识回答下列问题：
（1）实验材料的选择直接关系到实验的成败。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部_________的侧枝；月季的花药培养时间一般选在月季的_________期，一般来说，选择_________期的花粉，花药培养成功率最高。
（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和_________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用_________方式加热以防温度过高。
23、近几年我国柑橘大丰收，提取橘皮精油是提高其经济价值的重要途径。请分析回答提取过程的有关问题：
(1)提取橘皮精油，常采用 法而不用蒸馏法，原因是
(2)提取橘皮精油时，为了提高出油率，首先将橘皮____，并用石灰水浸泡。
(3)压榨过程，为了使橘皮油易与水分离，常加入 并调节pH至7～8。
(4)得到压榨液后，过滤除去固体物和残渣，然后 进一步除去质量较小的残留固体
物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来。此时，橘皮油中含有少量的水和果醋，需在5℃～10℃下 ，使杂质沉淀，用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分通
过____过滤，____合并后成为最终的橘皮精油。
24、为了探究6-BA和NAA对月季愈伤组织诱导的影响，某研究小组在MS培养基中加入6-BA和NAA，配制成6种培养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的枝条外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计诱导成功率（每组处理中诱导出的愈伤组织数量/每组处理中外植体总数×100%）和愈伤组织的总重量，结果如下表：
培养基编号 浓度（mg/L） 诱导成功率（%） 愈伤组织总重量（g/瓶）
NAA 6-BA
1 0.5 0 28 0.0015
2 0.5 88 0.3457
3 1.0 92 0.7808
4 1.5 94 0.9706
5 2.0 92 0.8356
6 2.5 92 0.6258
请回答下列问题：
本实验所选择的是月季当年生枝条，在用洗衣粉刷洗后，还需要使用酒精和
消毒后才能用于接种。接种时要注意方向，不要 。
（2）本实验的自变量是 ，因变量是 ，自变量的取值范围是 。
（3）实验所用培养基的主要成分有大量元素、微量元素、 和植物激素。从实验结果可知，对月季愈伤组织诱导最佳的培养基是 号。在使用NAA的前提下，适当添加6-BA能够 愈伤组织诱导成功率。
（4）为了诱导该月季试管苗生根，培养基中一般减少甚至不加入 （填“ 6-BA” 或“NAA”）
25、土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验：
实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如右图），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。
实验步骤：
步骤1 取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h。
步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如下表）。
菌株 透明圈直径（D） 菌落直径（d） D/d
M-3-01 18.8 12.3 1.5
B3-5-6 20.7 8.0 2.6
T1-4-01 9.1 6.5 1.4
分析回答：
（1）从物理形态看，培养基A属于 培养基。培养基中磷源应该是 。
（2）步骤1中接种方法是 ，步骤2中接种环的灭菌方法是 。
（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是 。
（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基B中，并在37℃、200 r·min-1 摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到右图所示曲线。
①用摇床进行培养的好处是
。
②结果表明最优良的解磷菌株是 。
26、办公和学习产生大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的能源乙醇。下图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题：
（1）图中①环节所需的微生物若来自土壤，要统计土壤样品中该活菌的数目，宜采用
法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大约推测出样品中的活菌数。
（2）分解废纸中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。
（3）④接种的微生物是 ，为降低乙醇生产成本，可利用 技术使酶能够重复使用。
（4）纸张加工过程中，有时要加入一些由植物芳香油制成的香精，芳香油的提取方法有 （请写出3种）等；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶于有机溶剂的特 点，可以考虑使用 法提取植物色素。
27、三孢布拉氏霉茵β-胡萝卜素含量高、易于培养等特点而广泛应用于工业化β-胡萝卜素的生产。请回答下列问题：
(1)用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉茵，进行梯度稀释时一般是将1ml菌液移入盛有______ml无菌水的试管中。常用 法进行活菌计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于______。但统计的菌落数往往______________（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数。
(2)不同的材料选用的提取方法不同，根据胡萝卜素具有_______的特点，常用 法提取胡萝卜素，其效率主要取决于__________________。
(3)右图为提取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带_______为β-胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因是在操作过程中
① （A.萃取温度高，时间长 B.干燥温度高，时间长）；
② （A.未经浓缩蒸馏 B.点样太快，样点小）。
28、利用微生物用纤维素生产乙醇可以采用下面的基本流程进行，请回答：
(1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在 ________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以_______为碳源的培养基上，再用___________从培养基上选出所需菌种。
(2)为确定①环节得到的是不是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，其发酵方法有液体发酵和_______发酵。对纤维酶的测定方法是采用这种酶分解滤纸等纤维素后产生的_________进行定量测量。确定了所需要的微生物后，就可进行图中_____ 、____ 环节，以获得进行酒精发酵的原料。
(3)生产中可以满足④环节的常用菌种是________，为了确保获得较纯净的乙醇，发酵过程需保持___________环境。
29、工业化生产葡萄酒的原理与教材果酒制作的原理是一致的，但其工艺流程要求更高。思考并回答下列问题：
（1）最早的酵母菌都来自自然界，从土壤中分离得到酵母菌菌种时，土壤样品应来自 ，选择培养基应该以 作为唯一的碳源。若检测酒精产量高低，可以在菌落上滴加酸性 溶液，观察其颜色深浅。
（2）为了确保从土壤成功分离出酵母菌，获得土壤溶液后，首先要进行适当倍数的 ，再进行 的接种操作。
（3）接种环在使用前要先灼烧，其目的是 。平板划线操作中，每次划线之间也要灼烧接种环，其目的是 ，第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，其原因是 。
（4）微生物的培养基为微生物生长提供的营养成分往往包括 五大类。制作果酒时，酵母菌的培养基是 。
（5）通过改良菌种提高产品质量和产量，传统的育种方法是 ，现代高科技的育种方法是 。
30、某研究人员将大肠杆菌JA122菌株接种到以葡萄糖为碳源的培养基中，在适宜条件下
连续培养多代，然后取样分析其中存在的新菌株。请回答下列问题：
(1)用于培养JA122大肠杆菌的培养基中除了葡萄糖作为碳源外，还应该含有 ，要观
察J A122大肠杆菌的菌落特征，则需在以上培养基中加入____。
(2)若要对JA122大肠杆菌计数，接种方法为 ，接种时接种工具要 后再使用。
(3)样品中共发现CV101、CV103、CV116三种新菌株，均能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长。
①鉴定CV101、CV103、CV116是新菌株的依据是菌落 。
②对三种菌株的代谢差异进行分析发现，CV103对葡萄糖吸收率最高，代谢终产物是醋酸盐。进一步研究表明，CV101可以在经灭菌处理后的培养过CV103的培养基中生长，据此作出的推测是： 。
③某同学设计了以下实验来验证以上推测。
第1步：配制以 为唯一碳源的培养基；
第2步：将CV101和CV103菌株分别接种到新配制的培养基中培养一段时间，并观察记录菌株的生长情况。
预期实验结果及可得出的结论： 。
31、请回答相关问题：
（l）离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常用的一种培养基是 ，其制备过程为：配制 →配制培养基→灭菌。
（2）材料的选择与培养基的组成是诱导花粉植株的主要影响因素。
①一般来说，花粉处于 期的花药培养成功率最高。选择花药时，一般要通过
来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。
②培养基中生长素与细胞分裂素用量比值适中时，能促进 的形成。
（3）用消毒后的花蕾剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从 产生愈伤组织。
（4）一般经过20一30d培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到 上，以便获得再生植株。在花药培养中，特别是通过愈伤组织
形成的花粉植株，常会发生 变化。因此还需要对培养出来的植株作进一步的
鉴定和筛选。
32、卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因（雄性不育基因）转入葡萄细胞，利用卡那霉素和头孢霉素，通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答：
（1）构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成 以便鉴定是否混有杂菌，再用 将农杆菌转移至LB 培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是 、 。
（2）将经过 的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出（此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上）并接种到固体培养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现 和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是 （A．抑制葡萄细胞脱分化 B．促进葡萄细胞再分化 C．杀灭农杆菌 D．促进农杆菌生长）。
（3）将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出 后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着
作用，植物克隆的技术基础是 。
（4）在卡那霉素培养基中，由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的 基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。
（5）最后，对转基因试管苗还需进行逐渐 湿度的锻炼，使之适应自然环境。
让豆腐上
长出毛酶
加盐
腌制
加卤汤
装瓶
密封
腌制
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- 14 -高中生物选修I《生物技术实践》
测试题答案
1、（1）调整pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的泠凝水落入培养基造成污染
（2）平板划线（1分） 4 稀释涂布平板
（3）不连续单个菌落 C
2、(1)②B ③A 2/3 沸石或碎玻璃、碎砖瓦 ④自来水
(2)①让水蒸气由下而上进行蒸馏。
②使混合气体冷却分层
③薄荷油具有挥发性，以减少薄荷油的散失。
水蒸气蒸馏法的原理是利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后混合物又重新分出油层和水层。用水蒸气蒸馏法提取芳香油时，原料放入B瓶中，通入水蒸气的玻璃管达到瓶底，让水蒸气由下而上进行蒸馏；A瓶中水量不能加满，约占2/3就行，为防止水暴沸，可向A瓶内放入几粒沸石或碎玻璃、碎砖瓦等；薄荷油具有挥发性，因此要在收集瓶口盖一小块铝箔或牛皮纸。
3、（1）纤维二糖 葡萄糖
（2）红色 透明圈
（3）不能 液体培养基不能分离单菌落
不能 乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
4、（1）果胶 果胶分解酶和果胶酯酶 固定化酶 酵母菌
（2）压榨 浸泡
（3）植物组织培养 消毒
（4）70%的酒精 植物激素
5、（1）固体 避免其他菌种污染，保证产品的质量
（2）析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬 抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质
（3）尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气
（4）稀释涂布平板法（或平板划线法）
（5）灭菌
6、(1)酵母菌(1分) (酸性)重铬酸钾溶液
(2)C2H5OH+O2CH3COOH+H2O(酶和能量可加相应位置)
(3)平板划线 ①②③④
(4)甘油管藏
(5)充入空气 防止空气中微生物的污染
7、（1）苏丹Ⅲ（或苏丹IV） 萃取法
（2）油脂
（3）血细胞计数板 稀释涂布平板
（4）45 40
解析：（1）油脂可被苏丹Ⅲ染液或者苏丹IV染液染成橘黄色或红色。由于不易挥发，故采用萃取法。
（2）脂肪酶的微生物B可以分解脂肪，故可以以脂肪为碳源的固体培养基进行培养，不产生脂肪酶的微生物无法生存。
（3）微生物B的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，活菌用稀释涂布平板法。
（4）45℃降解10g油脂所需酶量最大，故酶活性最小；40℃温度下降解10g油脂所需酶量最小，故酶活性最大，围绕40℃温度进行后续实验设计。
8、（1）卵黄 液体
（2）高压蒸汽灭菌 9
（3）稀释涂布平板法 平板划线法
（4）3 透明圈/菌落大，解磷能力强（具有相对较大的透明圈，解磷能力强）
解析：(1)卵黄中含有较多卵磷脂，主要提供有机磷。富集培养用液体培养基培养时间短，容易分离收集。(2)玻璃器皿和培养基用高压蒸汽灭菌，梯度稀释时，取某一稀释度的菌液移入盛有9mL无菌水的试管中。（3）从图示看，②是稀释涂布平板法，③是平板划线法接种。(4) 透明圈/菌落大，说明解磷能力强，3号解磷能力最强。
9、（1）稀释涂布平板法 菌落数
（2）纤维二糖 葡萄糖
（3）酵母菌 固定化酶（固定化细胞）
（4）蒸馏、压榨、萃取 萃取
解析：（1）对微生物计数，宜采用稀释涂布平板法法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数就能大约推测出样品中的活菌数。
（2）纤维素酶为复合酶，由3种组分组成的，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。
（3）乙醇可通过酵母菌来生产。为降低乙醇生产成本，可利用固定化酶（固定化细胞）技术使酶能够重复使用。
（4）芳香油的提取有蒸馏、压榨、萃取等方法；可以根据植物色素易溶于有机溶剂的特点，可以考虑使用萃取法提取植物色素。
10、（1）下降 食物链
（2）下降
（3）三丁基锡 选择
（4）高压蒸汽灭菌 稀释涂布平板法 平板划线法
（5）种群 强
11、（1）外植体（2分）
（2）适中（2分） 生长素（2分）
（3）植物茎尖消毒不彻底（2分）
（4）水蒸气蒸馏（2分） 加速油水分层（2分） 在一定的时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加（3分）
12、(1) 稀释（1分） (2) 以除草剂作唯一氮源 前
(3) 灼烧灭菌 培养基中缺少这些细菌可利用的氮源
(4) 氮气 该除草剂 (5)A细菌酶活性更强（或A细菌酶量更多）
13、（1）富含纤维素（或“落叶较多”等）（2分） 纤维素
（2）纤维素 刚果红（CR） 透明圈
（3）涂布不均匀（3分） 避免培养基污染棉塞（2分）
（4）酵母菌 碳源 压榨（或萃取）（2分）
14、（1）灭菌 倒平板 倒平板
（2）平板划线法（2分） 稀释涂布平板法（2分）
显微直接计数法（或血细胞计数板计数法）
（3）氮源 酚红
（4）梯度稀释（2分，只写稀释扣1分） 涂布平板 菌落周围透明圈（2分）
15、（1）防止冷凝形成水滴污染培养基 氮源（能量和氮源） 选择
（2）无菌水 适当的稀释
（3）3 5、7、9（或6、7、8）、（或5 5、6、7、8、9 ）
铵盐的剩余量（1分）
16、（1）醋酸菌（2分） 毛霉（1分） 酵母菌（2分）
（2）先调PH值后灭菌（每空2分） 高压蒸汽灭菌 （每空2分）
（3）洗涤剂和食盐 （每空2分）
（4）完全未开放的 （每空2分） 激素的种类及其浓度配比（每空2分）
17、（1）MS培养液 灭菌 消毒 （2）纤维素（或果胶）
（3）萃取 隔水 （4）Rb1和Rh1 翻译（1分）
18、（1）MS 植物激素（写全生长素和细胞分裂素也给分）
（2）液泡 无定形 （3）胚状体 丛芽
（4）醋酸洋红（2分）
焙花青-铬矾（1分，无“-”也给分，写不全不给分，错别字不给分）
19、(1) 2（1分） CO2 重铬酸钾
(2)水蒸气蒸馏法 无水硫酸钠
(3)显微镜直接 稀释涂布平板
(4)大量元素和微量元素
20、（1）蛋白（1分） （2）制作果醋（2分） 灭菌（2分）
（3）增多（2分）增产（2分） （4）重铬酸钾（2分）
（5）固体（2分）稀释涂布平板（2分）
21、(1)富含纤维素（2分）
(2)诱发基因突变，提高突变频率，获得高产的纤维素分解菌（2分） 对照
(3)用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手（2分）
(4)纤维素（2分） (5)A5没有发生基因突变（2分）
(6)④ (7)菌液稀释度足够高，使纤维素分解菌分散成单个细胞（2分）
22、I．（1）液体 选择 （2）异养 （3）琼脂 伊红和美蓝 青霉素
II．（1）新萌生 初花 单核
（2）水分 水浴（２分）
23、（1）压榨 水中蒸馏回导致原料焦糊或有效成分水解等问题
（2）干燥去水
（3）（相当于橘皮质量0.25%的）NaHCO3和5%Na2SO4
（4）离心 静置（5—7天） 滤纸 滤液与吸出的上层橘柚
24、（1）氯化汞 倒插/插倒/倒置
（2）6-BA的浓度 诱导成功率和愈伤组织总重量（2分）（只答一点不给分） 0-2.5mg/L（2分，不写单位扣1分）
（3）有机物（2分，写具体有机物不给分） 4（2分） 提高（促进、增加等同义词均可）（2分）
（4）6-BA（2分）
【命题立意】考查学生的理解能力。
【试题解析】（1）外植体消毒一般采用酒精和氯化汞，接种时要注意方向不要倒插。
（2）该实验中人为改变的变量（即自变量）为6-BA的浓度，自变量的取值范围为0-2.5mg/L。由于此自变量的改变导致了愈伤组织诱导成功率和愈伤组织的总重量均发生了改变。
（3）实验所用的培养基，其主要成分有大量元素、微量元素、有机物和植物激素。4号培养基愈伤组织诱导成功率和愈伤组织总重量都最大。在使用NAA的前提下，添加6-BA都比不添加的组诱导成功率高。
（4）6-BA为细胞分裂素类激素，诱导生根时细胞分裂素比例较低甚至可以不用添加（选修1教材p36左上角中诱导菊花生根的培养基中并未加入细胞分裂素及其类似物）。
25、（1）固体 难溶性磷酸盐 （2）稀释涂布平板法 灼烧
（3）B3-5-6
（4）①增加培养液中的溶氧量；使菌株与培养液充分接触，有利于物质的交换
②M-3-01
26、（1）稀释涂布平板法 菌落数
（2）纤维二糖 葡萄糖
（3）酵母菌 固定化酶（固定化细胞）（2分）
（4）蒸馏、压榨、萃取（2分,答全才能给） 萃取
27、(1)9（1分） 稀释涂布平板法(稀释液中的)(1分)
一个活菌(1分) 少于(1分)
(2)易溶于有机溶剂 （有机溶剂）萃取 萃取剂的性质和用量
(3)Ⅰ(1分) ①B ②A
28、（1）富含纤维素（落叶较多） 纤维素 刚果红
（2）固体 葡萄糖 ② ③
（3）酵母菌 缺氧、呈酸性（2分）
29、（1）葡萄园 葡萄糖 重铬酸钾
（2）稀释 平板划线（或涂布平板）（“稀释涂布平板”不得分）
（3）灭菌 杀死残留在接种环上的微生物 微生物的数量最少
（4）水、无机盐、碳源、氮源和特殊营养物质 葡萄汁
（5）选择育种 诱变育种、基因工程育种
30、 (1)氮源、无机盐、水（有错误不给分，答出生长因子不扣分） 琼脂（1分）
(2)稀释涂布平板法（1分） 灼烧、冷却（1分，答案不完整不给分）
(3)①形状、大小、隆起程度和颜色（回答其中两个或三个给1分，有错误不给分）
②CV101菌株能以CV103菌株产生的醋酸盐为碳源（2分）
③醋酸盐（1分） 如果CV101菌株能生长，CV103菌株不能生长，则说明上述推测是成立的；否则不成立 （1+1=2分）
31、
32、(1)单菌落 接种环 液体 限制性核酸内切酶 DNA连接酶
(2)消毒 愈伤 C（2分）
(3)丛状苗 筛选 植物组织培养
(4) β―葡糖苷酸酶
(5)降低
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