课件23张PPT。动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段
（1）动物细胞培养；
（2）动物细胞融合；
（3）单克隆抗体；
（4）胚胎移植；
（5）核移植。
动物细胞培养 （1）培养液成分：水、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
（2）细胞来源：动物的胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织。
（3）工具酶：胰蛋白酶。
（4）过程（5）应用：
生产病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等生物制品，培养动物组织用于器官移植、药物生物病理以及药物病理研究等。 动物细胞融合 （1）基本原理：
细胞膜的流动性。
（2）诱导剂：
灭活的仙台病毒、PEG等。
（3）用途：
制备单克隆抗体。 （湖北，2004）动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有 （ ）
A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞 解析 所用的诱导方法略有不同：除了植物细胞融合所用的诱导方法外，动物细胞融合还常用灭活的仙台病毒做诱导剂。动物细胞融合和植物体细胞杂交，这两项细胞工程技术中都包含了细胞融合过程，两种细胞融合所用的技术手段基本相同，但不完全相同。动物细胞融合采用的原理是细胞膜的流动性，植物体细胞杂交采用的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性。动物细胞融合和植物体细胞杂交过程中均能产生杂种细胞，只不过是动物的杂种细胞在现有技术条件下，还不能发育成一个个体，它的全能性还不能表现出来，植物的杂种细胞就不一样了，植物的杂种细胞可以通过组织培养技术形成杂种植株。 D单克隆抗体 （1）过程： （2）应用：
疾病诊断、治疗和预防，如单抗诊断盒、生物导弹等。 单克隆抗体是指 （ ）
A．单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体
B．单个B淋巴细胞增殖产生的抗体
C．单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体
D．单个抗体通过克隆化，产生大量抗体
C（江苏高考题，2003）将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选） （ ）
A．B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体
C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体
D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
AC要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是
（ ）
A．在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖
B．在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体
C．每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应
D．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
D单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是 （ ）
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A．①②③④ B．①③⑤ C．②④ D．①③
A（1）细胞融合技术
细胞融合技术是指把两个细胞(可以是同种细胞，也可以是异种细胞)在融合剂的作用下，融合成一个细胞的技术，应用细胞融合技术进行细胞杂交，对培育新品种具有广阔的应用前景。
（2）细胞拆合技术也称为细胞核(包括细胞器)移植技术
是将细胞核和细胞质用某种方法拆开，然后再把分离的细胞核和细胞质重新组合成一个新细胞。 （3）细胞培养技术
细胞培养技术是将生物体内的某一组织分散成单个细胞，接种在人工配制的适于细胞生长发育的培养基，然后在适当的无菌的生长条件下(如一定的光照、温度或pH值等)进行培养，使细胞能够生长和不断增殖的技术。由于从组织中分离单细胞并分化成生物体的技术难度较大，目前多采用组织培养技术。如通过植物胚胎(成熟或未成熟胚)或器官(根尖、茎尖、叶原基、花药等)的离体培养，再生成新植株(试管苗)。这种方法能快速、大量繁殖一些有价值的苗林、花卉、药材和濒危植物等。 （4）胚胎移植技术 胚胎移植技术是将一个生物体内的胚胎移植到另一个生物体内繁殖的技术。这样可能大量繁殖优良的品种，先注射雌性激素在一雌性动物的体内，促使其大量排卵，然后在体外人工受精后发育成为胚胎后再植入其它同类动物的子宫内使其发育成为个体。大大提高了繁殖率。 （2004年高考理综生物部分（全国新课程卷Ⅰ）（河南、湖北、湖南等）第5题）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是 （ ）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓资金积累细胞融合
D．筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 B上图是单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：
（1）通过①过程得到的B淋巴细胞从小鼠体内分离出之前，应对小鼠进行的处理是_______________，该处理的实质是在小鼠体内发生________________________反应。
（2）骨髓瘤细胞与进行原代培养的细胞相比较，核内的结构发生的主要变化是___________________，从而违背了“程序性细胞死亡”规则，打破了细胞产生与死亡的动态平衡。
（3）培养瓶中的杂交瘤细胞在有丝分裂中期，核内DNA分子数：染色体数=_____ ______。
（4）试设想运用生物工程其它领域的技术制备单克隆抗体的一条途径：_________________ 。 （1）注射相应抗原 体液免疫
（2）遗传物质（原癌基因）发生了改变
（3） 2：1
（4）运用基因工程方法制造含有某种抗体的基因的工程菌进行发酵生产。 近年来，有人将巴龙霉素产生菌(A种)和高产但为营养缺陷型的变种菌(B种)进行细胞杂交，获得了巴龙霉素产量比原始菌株大5—6倍的新型菌种。试回答以下问题：
（1）在进行细胞融合时，首先应使用适当的酶去除菌体的细胞壁，然后用理化方法促使 融合。
（2）在这一细胞杂交过程中，能形成 种类型的融合细胞，合乎人们要求的是 (用字母表示)细胞。
(1)原生质体 （2）三 AB型
下图表示细胞融合技术的一些过程，请回答：
(1)由A、B两种细胞人工融合成C细胞的过程中，常用
作为诱导剂。融合过程包括 和 两方面，D细胞称为 细胞。
(2)若由D细胞培育成植株，可用——技术，这一培养过程要经过 和 两个阶段。目前，植物体细胞杂交还有许多理论和技术问题没有解决，如杂种植物还不能按照人们的需要表现出亲代的优良性状，从遗传学角度分析，其内在因素很可能是 。
(3)如需制备单克隆抗体，则D细胞应具有 和 的能力。 (1) PEG(聚乙二醇)(或灭活的病毒) 膜融合 核融合 杂种
(2)植物细胞培养脱分化再分化控制优良性状的基因还不能表达
(3)分泌特异性抗体大量增殖
（广东卷）5、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（ ）
A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断
B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C、可以利用基因工程技术生产
D、可以在生物体内生产，不能体外生产
D课件28张PPT。动物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程技术与植物细胞工程技术的原理基本相同常用的技术手段动物细胞培养核移植胚胎移植单克隆抗体动物细胞融合一、动物细胞培养动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶（分解弹性纤维、胶原蛋白）10代细胞传代培养无限传代遗传物质改变遗传物质未改变动物细胞培养的条件：
无菌、无毒的环境
培养液和所有培养用具进行无菌处理
措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液
营养
糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清
温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4
气体环境 O2 CO2 95％空气 5％的CO2思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体动物细胞培养技术的应用1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等2、获得烧伤病人植皮所需的细胞3、获得细胞用于检测有毒物质二、核移植技术克隆羊培育过程另一头绵羊的子宫体细胞核移植 胚胎细胞核移植供体细胞培养（MⅡ卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞受体细胞激活，完成减数分裂、发育胚胎移植思考讨论P49动物体细胞核移植技术
将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物体细胞核移植技术的应用前景
畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景
1加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育
2保护濒危物种，增加动物 的存活数量
3可作为生物反应器，生产医用蛋白
克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体
了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等体细胞核移植技术存在的问题胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％
克隆动物存在着健康问题
克隆动物的食品安全性问题存在争议
P50 思考与讨论二、动物细胞融合（细胞杂交）－2个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法
化学法仙台病毒
疱疹病毒
新城鸡瘟病毒离心振动电激聚乙二醇用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程动物细胞的融合与植物细胞之间融合植物细胞杂交与动物细胞杂交的比较细胞膜
流动性种间、属间、科间甚至动植物之间细胞融合都已获得成功读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。怎样才能获得单克隆抗体？仅用细胞培养技术可行吗？我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？ 单克隆抗体制备过程细胞融合、筛选足够数量的、能产生特定抗体的细胞群单克隆抗体思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。1、作为诊断试剂单克隆抗体的应用2、用于治疗疾病和运载药物
作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法
－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：乙甲abcdef(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过_______分裂形成的，其DNA含量是体细胞的 _______ ；c肯定是__ 细胞，乙的遗传性状与提供 ___________的绵羊 一致.减数一半体细胞核乙甲abcdef(2)产生 甲和乙的过程分别是—————和————
（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫———。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是————————————————————————（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是————-------------------------有性生殖克隆核移植卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能。黑毛乙甲abcdef（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术在细胞工程中叫——————
（6）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也有———
（7）在繁殖多莉羊的过程中，是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的关系是什么？——————————————胚胎移植全能性不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性状象d羊，发育也会受到f羊影响。再见胚胎移植技术试管动物（婴儿）培养过程受精卵课件45张PPT。专题2.2动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养（一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
（二）、原理细胞分裂增殖（三）、过程幼龄动物剪碎组织原代细胞培养细胞悬浮液归纳
过程取 的组织、器官细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞单个细胞加入 液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原代 培养1-10代细胞培养加 液40—50代细胞(细胞株)未无限传代（细胞系）已传代培养胰蛋白 酶 思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近1、无菌、无毒的环境
保证细胞顺利的生长增殖（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）（四）、动物细胞培养的条件2、营养3、温度和PH
培养室中控制,使之达到
36.5 ± 0.5℃, 7.2~7.4
培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）4、气体环境：
植物组织培养和动物细胞培养的比较全能性增殖蔗糖动物血清细胞株、细胞系细胞,某些蛋白质（五）、动物细胞培养技术的应用（3）细胞的生理、药理、病理研究
（1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植
（2） 基因工程的受体细胞
动物体细胞核移植技术和克隆动物（一）、动物细胞核移植的概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物：用核移植的方法得到的动物。细胞质细胞核细胞核移植多莉羊的培育过程克隆羊培育过程另一头绵羊的子宫１、动物的克隆与植物克隆一样吗？２、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么？动物克隆过程的实际是细胞核移植不思考题（二）、分类：细胞分化程度低，恢复
全能性容易 细胞分化程度高，恢复
全能性困难去核卵母细胞供体
细胞重组细胞代孕母牛C无性生殖（三）、体细胞的核移植过程
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变思考题3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞思考题4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？ 在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程，但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，同植物细胞一样，分化了的动物细胞核也具有全能性． 思考题5、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞；多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体细胞。6、讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？ 卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像供体动物，操作也方便思考题胚胎移植技术试管动物（婴儿）培养过程受精卵（五）、体细胞核移植技术存在的问题 1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。
2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出
现早衰等问题。
3、生产克隆动物费用昂贵。体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育
2、保护濒危物种，增加存活数量3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植总结二 动物体细胞核移植
技术和克隆动物）应用概念过程体细胞核移植胚胎细胞核移植 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 （ ）
A．获得不死性的细胞 B．10代以内细胞
C．原代细胞 D．传代细胞1、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养 AD课堂反馈练习3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）
A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白
B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散
C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中
D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变B4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）①无毒的环境 ②无菌的环境 ③培养基需要加入血清 ④温度与动物体温相似 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥ B、 ①②③④
C、①③④⑤⑥ D、 ①②③④⑥D5、动物细胞培养的特点 （ ）
①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞分化 ④接触抑制 ⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传1－10代
A、①②④⑥ B、②③④⑤
C、①③④⑥ D、③④⑤⑥A6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：
（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。
（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。
动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 ________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为__ 。
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用
处理，然后配置成 ，再分装。
`动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬浮液（湖北，2004）动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有 （ ）
A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞 解析 所用的诱导方法略有不同：除了植物细胞融合所用的诱导方法外，动物细胞融合还常用灭活的仙台病毒做诱导剂。动物细胞融合和植物体细胞杂交，这两项细胞工程技术中都包含了细胞融合过程，两种细胞融合所用的技术手段基本相同，但不完全相同。动物细胞融合采用的原理是细胞膜的流动性，植物体细胞杂交采用的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性。动物细胞融合和植物体细胞杂交过程中均能产生杂种细胞，只不过是动物的杂种细胞在现有技术条件下，还不能发育成一个个体，它的全能性还不能表现出来，植物的杂种细胞就不一样了，植物的杂种细胞可以通过组织培养技术形成杂种植株。 D谢谢细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。原代培养：将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：用胰蛋白酶将出现接触抑制的贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来，制成细胞悬液，分装到多个培养瓶中继续培养，这个过程叫传代培养。前景展望资料一： 培养的动物细胞还可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 资料二：人工关节——软骨再生1.第一次手术: 从病人关节软骨中未
受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。
2.分离山软骨细胞并经三星期的体外
培养，使细胞数增加约10～20倍。
3.第二次手术: 清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。
资料三：结果: 经过复健一年后即可恢复正常的生活。
