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第51讲 微生物的培养技术及应用
选择性必修3 生物技术与工程
第九单元 生物技术与工程
1．阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。
2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。
3．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。
4．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。
5．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。
一、培养基的配制
1．概念：人们按照微生物对________的不同需求，配制出供其________的营养基质。
2．种类
(1)按物理性质分—
考点1 微生物的基本培养技术
营养物质
生长繁殖
(2)按用途分—
3．营养组成
(1)营养组成：水、无机盐、碳源、____。
(2)需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
微生物 对培养基的需求
乳酸杆菌 添加______
霉菌 一般将培养基调至__性
细菌 一般将培养基调至__________性
厌氧微生物 提供____的条件
氮源
维生素
酸
中性或弱碱
无氧
(3)几种微生物的营养和能量来源
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 ___ NH4＋、NO3－等 光能
硝化 细菌 ___ NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖类等有机物 __ 有机物
酵母菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物
CO2
CO2
N2
1．(人教版选择性必修3 P10旁栏思考)培养基中加入氮源的作用是___________________________________________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
二、无菌技术
1．概念：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
2．关键：____________。
3．目的：______________________。
防止杂菌污染
获得纯净的微生物培养物
4．消毒与灭菌的比较
比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围
消毒 较为温和的__________或生物等方法 杀死物体表面或内部一部分微生物 煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体
化学药物消毒法 操作空间、操作者的衣物和手等
紫外线消毒法 接种室、接种箱或超净工作台
物理、化学
比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围
灭菌 强烈的理化方法 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 湿热灭菌法 培养基、容器等
干热灭菌法 玻璃器皿、金属用具等
灼烧灭菌法 接种工具等
5．其他操作
(1)做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与__________接触。
(2)为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在__________附近进行。
周围的物品
酒精灯火焰
2．(人教版选择性必修3 P10相关信息)利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是_______________________________________________
___________________________________________________________。
提示：有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解；微生物可分解污水、污泥中的有机物
6．酵母菌的纯培养
高压蒸汽灭菌
干热灭菌
平板划线法
倒置
未接种
28
3．(人教版选择性必修3 P12探究·实践)倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是________________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上，防止培养基水分过快蒸发
1．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素。 ( )
2．某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。培养基pH需偏碱性。 ( )
提示：乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性。
×
√
3．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。 ( )
提示：一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。
4．玻璃器皿、金属用具等可采用干热灭菌法。 ( )
×
√
微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。如图甲、乙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图。
(1)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应采用的检测方法是什么？
___________________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：将未接种的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生
(2)指出图甲所示的操作中较明显的一处错误是什么？在第二次划线前灼烧接种环，目的是什么？
___________________________________________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：最后一次(第四次)划线与第一次划线区域重叠。杀死上次划线后接种环上可能残余的菌种，保证下一次划线时的菌种直接来源于上一次划线的末端
(3)图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是__________________________(用字母和箭头表示)；找出图乙中一处错误的操作：__________(用字母表示)。
提示：A→B→G→F→E→C→D→H C
考向1 培养基的配制及无菌技术
1．(链接人教版选择性必修3 P9－10正文)下表为某培养基的配方，下列有关叙述正确的是( )
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水
含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基
B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基所培养微生物的同化作用类型是自养型
D．该培养基调节合适的pH后就可以用于接种菌种
√
B [从物理性质看该培养基不含凝固剂，属于液体培养基，从用途看该培养基含有指示剂，属于鉴别培养基，A错误；培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，蛋白胨来源于动物原料，含有有机氮等营养物质，故属于氮源的物质是蛋白胨，B正确；该培养基含有葡萄糖等有机碳源，培养的微生物属于异养型，C错误；该培养基调节合适的pH后还需要进行灭菌，灭菌结束倒平板完成后，才能用于接种菌种，D错误。]
2．(链接人教版选择性必修3 P11资料卡)获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列关于无菌操作的叙述，错误的是( )
A．超净工作台在使用前进行紫外线照射以杀死物体表面或空气中的微生物
B．无菌技术还应包括避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触
C．牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
D．灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
√
C [接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30 min，以杀死物体表面或空气中的微生物，A正确；无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，还应包括避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触，B正确；牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分，C错误；灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，D正确。]
考向2 微生物的纯培养
3．(链接人教版选择性必修3 P12探究·实践)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是( )
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦
C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
√
D [由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确，故选D。]
题后悟道 平板划线操作中几次灼烧接种环的目的
项目 第一次划线前灼烧 每次划线前灼烧 划线结束后灼烧
目的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种均来自上一次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者
4．(链接人教版选择性必修3 P12探究·实践)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种尿素分解菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是( )
A．倒平板后要间歇晃动培养皿，以保证培养基表面平整
B．培养皿中Ⅰ区的细菌数量较多，一般从Ⅱ区挑取单菌落
C．该实验结果存在单菌落，因此可达到菌种纯化的目的
D．培养基的pH可调至近酸性，其中尿素为唯一的氮源物质
√
C [倒平板后无须间歇晃动培养皿，A错误；培养皿中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量较多，一般从Ⅲ区挑取单菌落，B错误；该实验Ⅲ区有单菌落，挑取培养后可达到菌种纯化的目的，C正确；细菌培养基的pH应调至中性或弱碱性，其中尿素为唯一的氮源物质，可用于筛选尿素分解菌，D错误。]
一、选择培养基
考点2 微生物的选择培养和计数
抑制或阻止
NH3
尿素
二、微生物的选择培养
1．土壤取样
铲取土样，将样品装入纸袋中。
2．等比稀释
将10 g土样加入盛有____ mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
90
3．涂布平板
0.1
酒精
冷却
4．培养观察
(1)待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入______ ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。
(2)在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的______。
30～37
单菌落
1．(人教版选择性必修3 P18探究·实践)统计菌落种类和数目时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定。若培养时间不足或培养时间太长，分别会导致的结果是________________________、
___________________________________________________________。
提示：遗漏菌落的种类和数目 菌落粘连影响计数、培养基表面干燥脱水、微生物衰败，菌落特征不易观察
三、微生物的数量测定
1．稀释涂布平板法
(1)计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的______，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为_______的平板进行计数。
菌落数
30～300
(3)计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为_______、适于计数的平板。在__________下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出______。
(4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用______表示。
30～300
同一稀释度
平均值
菌落数
2．显微镜直接计数法
(1)计数原理：利用特定的__________或____________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(2)统计结果：一般是____数和____数的总和。
(3)优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。
细菌计数板
血细胞计数板
活菌
死菌
2．(人教版选择性必修3 P18相关信息)血细胞计数板常用于____________的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数；细菌计数板常用于____________的细菌等的计数。
提示：相对较大 相对较小
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
脲酶
尿素
中性
菌落数目稳定时
1．选择培养基四种常见制备方法或实例
(1)加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分)
[深化拓展]
(2)改变培养基的营养成分
(3)利用培养基“特定化学成分”分离
(4)通过某些“特殊环境”分离
2．两种纯化细菌的方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
纯化原理 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞
主要步骤 平板划线操作 系列稀释操作和涂布平板操作
接种工具 接种环 涂布器
平板示意图
能否用于计数 不能计数 可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板
共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征
1．选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。 ( )
提示：选择培养基可以筛选分离出某种微生物。
2．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。 ( )
提示：血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等。
×
×
3．若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固氮细菌，培养基的主要营养物质包括水和无机盐、淀粉。 ( )
4．某同学进行分离高产脲酶菌的实验设计时，认为可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌。 ( )
提示：产脲酶菌不能分解酚红指示剂。
×
√
5．为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落。 ( )
提示：土壤溶液稀释倍数足够高时，才能将聚集的细菌分散开，有助于在培养基表面形成单菌落。
×
为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A所示的实验。
(1)步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是__________________
__________________________________________________________。
提示：③的培养基中石油是唯一碳源
(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是______________________。
提示：接种时涂布不均匀
(3)在进行实验时，甲同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约200个菌落，但是其他同学在同样稀释度下只筛选出大约90个菌落，若甲同学的结果有问题，则可能的原因是什么？(答出一项即可)
___________________________________________________________。
提示：培养基被杂菌污染
(4)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是___________________________________________________________________________________。
提示：筛选出分解石油能力最好的细菌
考向1 微生物的选择培养
1．(链接人教版选择性必修3 P16思考·讨论)某科研小组欲从土壤中筛选能分解除草剂A(组成元素为C、H、O、N，在水中溶解度低，含除草剂A的固体培养基不透明)的细菌用于生产，实验流程如下图所示。下列相关叙述错误的是( )
A．从经常使用除草剂A的土壤取样比从其他土壤取样更容易筛选到除草剂A分解菌
B．培养基1为固体培养基，此操作的主要目的是增加除草剂A分解菌的数量
C．培养基2为选择培养基，其中以除草剂A作为唯一氮源便于分离除草剂A分解菌
D．挑选菌落时，透明圈直径与菌落直径比值越大，表明细菌分解除草剂A的能力越强
√
B [要想获得目的菌，应在富含该菌种的自然环境中筛选，故从经常使用除草剂A的土壤取样比从其他土壤取样更容易筛选到除草剂A分解菌，A正确；为扩大培养，实验中培养基1为液体培养基，其目的是增加目的菌(除草剂A分解菌)的数量，起到筛选作用，B错误；根据题干信息可知，某科研小组从土壤中筛选出能够将除草剂A分解的菌株，则应以除草剂A作为唯一氮源，在该培养基上只有目的菌能够生存，其他杂菌因为缺少氮源不能生存，C正确；挑选菌落时，透明圈直径与菌落直径比值越大，表明细菌分解除草剂A的能力越强，D正确。]
考向2 微生物的分离和计数
2．(链接人教版选择性必修3 P17图1-7)尿素是一种重要的农业肥料，尿素分解菌可合成脲酶，利用以尿素为唯一氮源的选择培养基可从土壤中分离尿素分解菌并进行计数，科研人员取0.1 g土壤分别稀释103～107倍，将0.1 mL不同稀释倍数的土壤稀释液接种在固体培养基上，在相同的培养条件下得到如下数据。下列叙述正确的是( )
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落 数/个 1号平板 478 367 270 26 5
2号平板 496 354 268 20 8
3号平板 509 332 272 29 3
A．利用稀释涂布平板法可将稀释液中的菌体完全分离，一个菌落对应一个菌体
B．该实验中稀释倍数为105的平板菌落数在30～300内，最适合用来统计活菌数
C．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌均为尿素分解菌
D．若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，则统计结果一般比实际活菌数少
√
B [利用稀释涂布平板法不可将稀释液中的菌体完全分离，可能会出现两个或多个菌体连在一起的现象，A错误；为保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，该实验中稀释倍数为105的平板菌落数在30～300内，最适合用来统计活菌数，B正确；以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，C错误；若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，不能区分活菌和死菌，则统计结果一般比实际活菌数多，D错误。]
3．(链接人教版选择性必修3 P20拓展应用T2)刚果红是一种染料，可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。从落叶较多的腐质土取10 g土壤，用无菌水稀释106倍后，取0.1 mL涂布到三个平板中(培养基配方：纤维素钠盐5～10 g、酵母膏1 g、土豆汁100 mL、KH2PO4 0.25 g、琼脂15 g、蒸馏水1 000 mL)培养，菌落数目稳定后加入刚果红染色，洗去浮色后对纤维素分解菌进行分离与计数，三个平板菌落数无显著差异，平均值为200个，出现透明圈的菌落数平均值为30。下列叙述正确的是( )
A．上述实验中使用的培养基为选择培养基
B．该培养基pH需要调为中性或者弱酸性
C．涂布的0.1 mL培养液中活菌数可能高于200个
D．10 g土样中纤维素分解菌的数目约为3.0×108个
√
C [要从土壤中将纤维素分解菌分离出来，应该将它们接种在以纤维素为唯一碳源的选择培养基上，根据题述实验中培养基的成分可知，该培养基不属于选择培养基，应该属于鉴别培养基，A错误；该培养基pH需要调为中性或者弱碱性，用以培养细菌，B错误；涂布的0.1 mL培养液中活菌数可能高于200个，因为记数的菌落中可能含有由聚集在一起的两个或两个以上的细胞长成的菌落，C正确；三个平板菌落的平均值为200个，其中出现透明圈的菌落数平均值为30，即有30个纤维素分解菌，则10 g土样中纤维素分解菌的数目约为30÷0.1×106×10＝3.0×109个，D错误。]
体验真题 感悟高考 · 有章可循
1．(2024·海南卷)某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是( )
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基＋甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基＋甲、乙2种氨基酸 无法生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①～⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
组别 培养条件 实验结果
④ 基础培养基＋甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基＋乙、丙2种氨基酸 正常生长
√
D [由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；由题意、表中信息可知：实验的自变量为添加的氨基酸种类，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；与组别①相比，在基础培养基中，添加的氨基酸中含有丙氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。]
2．(2024·浙江6月卷)脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是( )
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
√
B [根据题意可知，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确；脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，B错误；产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长繁殖，C正确；产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。]
3．(2024·全国甲卷)合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题：
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是________
___________________________________________________________
__________________________________________________________。
(2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为________个/mL。
前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌
5 000
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是_______________________________________________
__________________，冷却的目的是________________________。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是___，判断依据是______________________________________________________________________
(答出两点即可)。
杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染
防止温度过高杀死菌种
A
A消毒液活
细菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈__________色。
(紫)黑
[解析] (1)显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。(2)从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，即稀释了10倍，1 mL细菌原液中细菌浓度＝菌落数÷菌液体积×稀释倍数＝100÷0.2×10＝5 000个/mL。(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。(4)A消毒液活细菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A消毒液杀菌效果最好。(5)大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈(紫)黑色。
1．(2024·广东名校联盟模拟)固氮微生物可将空气中的氮气(N2)还原为氨，并转化为细胞中的含氮物质，是土壤中氮素的主要来源。表格是一个用于分离培养固氮微生物的培养基配方，其中甘露醇的分子式为C6H14O6，下列叙述中错误的是( )
课时数智作业(五十一) 微生物的培养技术及应用
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．甘露醇在培养基中的作用是调节渗透压
B．固氮微生物合成的氨属于初生代谢物
C．对该培养基先调节pH再进行湿热灭菌
D．该培养基为选择培养基，不含凝固剂
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
物质 名称 C6H14O6 K2HPO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O CaCO3 H2O
含量 20 g 0.2 g 0.2 g 0.2 g 0.1 g 5 g 1000 mL
A [甘露醇主要为该培养基提供碳源，A错误；固氮微生物合成的氨是固氮微生物生长所必需的，属于初生代谢物，B正确；为了防止调节pH过程中的杂菌污染，一般先调pH再进行湿热灭菌，C正确；分析培养基成分可知，培养基中没有氮源，不能够固氮的微生物在该培养基上不能生长，因此该培养基为选择培养基，没有加入琼脂，不含凝固剂，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
2．(2024·广东深圳一模)在“酵母菌纯培养”的实验课中，学生进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是( )
A．开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧
B．棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰
C．在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液
D．将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面连续划线
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D [接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，并需要在酒精灯火焰旁冷却才能接种，划线完毕后要将接种环进行灼烧，以防止杂菌污染，A正确；棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰，B正确；酒精灯火焰旁存在无菌区域，在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液，C正确；划线操作时，为了防止杂菌污染，培养皿盖不能完全打开，只能打开一条缝隙，操作时需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯火焰旁存在无菌区域，D错误。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
3．(2024·广东茂名一模)某研究小组为比较药物 AZA 和 CZA 对肺炎克雷伯菌的抑菌效果，用含有药物的滤纸片进行抑菌实验，结果如图，下列叙述错误的是( )
A．培养皿和培养基都要经过灭菌处理
B．倒平板操作应在酒精灯火焰旁进行
C．本实验是运用平板划线法进行接种的
D．AZA抑制肺炎克雷伯菌的效果更好
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
C [培养皿和培养基都要经过灭菌处理才能使用，A正确；倒平板时为了避免杂菌污染，故应在酒精灯火焰旁进行，B正确；分析题图可知本实验是运用稀释涂布平板法进行接种操作的，C错误；从图中可以看出，AZA的抑菌圈更大，说明对肺炎克雷伯菌的抑菌效果更好，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
4．(2024·广东佛山期中)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究人员将该菌的悬浮液与不含任何生长因子、但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，再将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。根据图示结果分析，该嗜热菌生长需要的生长因子是( )
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．甲和丙 B．乙和丙
C．甲和乙 D．甲、乙和丙
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
√
B [图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明该嗜热菌生长需要乙和丙，A、C、D错误，B正确。]
5．(2024·江苏扬州模拟)橄榄油的主要成分是甘油三酯。研究者利用“橄榄油平板透明圈法”筛选获得两株产脂肪酶的菌株X 和Y, 检测结果如表。下列相关叙述错误的是( )
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
酶活性(U·mL-1) 透明圈
空白 －
菌株X 6.9
菌株Y 7.7
A．培养基中的橄榄油可为微生物生长提供碳源
B．以上两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外
C．两菌株中，Y所产脂肪酶活性高，应首选为理想菌株
D．改变温度或pH，菌株X的透明圈可能会小于菌株Y的透明圈
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
C [橄榄油的主要成分是甘油三酯，培养基中的橄榄油可以提供微生物生长所需要的碳源，A正确；两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外，对培养基中的橄榄油进行分解，B正确；图中透明圈大小不仅与酶活性的大小成正比，也和产酶量相关，两菌株中，Y所产脂肪酶活性高，但X的透明圈更大，说明其酶产量更多，故Y不应首选为理想菌株，还应进行多次筛选，C错误；温度或pH会改变酶的活性，若改变温度或pH，菌株X的透明圈可能会小于菌株Y的透明圈，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
6．(2024·江苏泰州一模)某种物质A(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1 mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为2.4×108个。相关叙述正确的是
( )
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B．乙中需要加琼脂和物质A等，实验需设平行重复实验，无须另外设置空白对照
C．③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上
D．若乙平板上菌落数平均为240个，则接种的菌液的稀释倍数为105
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D [实验时，要从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株，则①为淤泥取样进行稀释，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，淤泥中有菌种，因此不能进行灭菌处理，A错误；乙为固体培养基，需要加琼脂和物质A等，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，且需要另外设置空白对照，检测培养基配制是否合格，B错误；③接种方法为稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，但是不能用涂布器蘸取菌液，应该将菌液用微量移液管加入培养基中，用涂布器进行均匀涂抹，C错误；若乙平板上长出的菌落数平均为240个，假设稀释倍数为a，根据摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为2.4×108个，在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，则有240×a÷0.1＝2.4×108，则稀释倍数a＝105，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
7．(2024·湖北武汉模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变而无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，数字代表培养基，A、B、C表示操作步骤。下列有关说法正确的是( )
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．①②为完全培养基，③④为基本培养基
B．A操作的目的是提高突变菌株的浓度
C．B操作可用涂布器蘸取菌液均匀地涂布在②表面
D．经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取E菌落进行纯化培养
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
B [由图可知，①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；紫外线可用于诱导突变，提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓度，B正确；B操作是先将菌液滴加到培养基的表面，再用涂布器均匀地涂布在②表面，C错误；D菌落在基本培养基中无法生长，而在完全培养基上能够生长，这说明D菌落是氨基酸营养缺陷型菌株，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
8．(2024·广东梅州一模)某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3 盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是( )
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．将细菌接种在固体培养基 X上可采用平板划线法
B．根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
C．配制的培养基需经湿热灭菌后调整pH，冷却后倒平板
D．固体培养基 X 对菜品中的细菌没有选择性
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D [据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用稀释涂布平板法接种而不能用平板划线法，A错误；在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，B错误；配制的培养基需调整pH后经湿热灭菌，冷却后倒平板，C错误；固体培养基没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
9．(11分)(2024·广东广州期末)为探究链霉素对大肠杆菌抗性的作用，某科研小组设计实验，先将对链霉素敏感的大肠杆菌原始菌种涂布在1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再涂布到5号培养基上，并重复以上步骤。请根据实验回答下列问题。
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
注：影印法指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种。
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
(1)实验中影印培养的目的是__________________________________
__________________________。比较2、3培养基与6、7培养基可以得出：与原始菌种相比，4号培养液中______________________________________。
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
在不含链霉素的培养基的众多菌落中，
选出含有抗链霉素菌的菌落
抗链霉素的大肠杆菌所占比
例增大(1分)
(2)如果将4号培养液稀释104倍后取0.1 mL涂布到5号培养基上，重复三次统计菌落数目分别为131、132、136个，则4号培养液中大肠杆菌的密度约为___________________。理论上，使用此方法比使用血细胞计数板直接计数的结果__________(填“大”“小”或“相 等”)，原因是_________________________________________________________________________________________________________。
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
1.33×107个/mL
小(1分)
血细胞计数板计数会把死菌也计入；当多个菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
(3)4号培养液中不含链霉素，一段时间后，4号培养液中大肠杆菌的数量减少了，原因是_________________________________________。
(4)通过本实验结果，可以得出结论：__________________________
__________________________________________________________。
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
营养物质大大减少，有害物质不断积累(1分)
链霉素在大肠杆菌抗链霉素
抗性的形成中起到选择作用
[解析] (1)将对链霉素敏感的大肠杆菌原始菌种涂布在1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再涂布到5号培养基上，并重复以上步骤，实验中影印培养的目的是在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落，3号与2号、7号与6号培养基中的菌落数的比值，是抗性菌落占全部菌落的比例，观察实验结果可知，与原始菌种相比，4号培养液中，抗链霉素的大肠杆菌所占比例增大。
题号
1
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6
8
7
9
(2)重复三次统计菌落数目分别为131、132、136个，则4号培养液中大肠杆菌的密度约为(131＋132＋136)÷3÷0.1×104＝1.33×107个/mL，血细胞计数板计数会把死菌也计入，用稀释涂布平板法计数，当多个菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，理论上，使用此方法比使用血细胞计数板直接计数的结果小。(3)培养大肠杆菌需要营养物质，大肠杆菌也会产生代谢废物，4号培养液中不含链霉素，一段时间后，4号培养液中大肠杆菌的数量减少的原因是营养物质大大减少，有害物质不断积累。(4)影印培养的目的是在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落，通过本实验结果，可以得出结论：链霉素在大肠杆菌抗链霉素抗性的形成中起到选择作用。
题号
1
3
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2
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7
9
(教师用书独具)
1．(2024·湖南株洲一模)L-天冬酰胺酶由细菌和真菌合成，可分解天冬酰胺释放出氨，然后与奈斯勒试剂反应呈棕色。为筛选获得L-天冬酰胺酶高产菌株，设计了如下固体培养基。固体培养基的主要成分有牛肉膏、蛋白胨、水、NaCl、琼脂、奈斯勒试剂。实验结果如下图。下列叙述错误的是( )
A．根据实验结果可知，接种时采用的是稀释涂布平板法
B．应选择菌落C作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养
C．该培养基从功能来看属于选择培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏
D．无菌技术还可以避免操作者被有害微生物感染，实验结束后的培养基不能直接丢弃
√
C [从接种结果来看，菌落分布较为均匀，应该采用的是稀释涂布平板法，A正确；菌落B和菌落C周围棕色圈的直径相同，但C的菌落直径更小，因此菌落C的单个细胞产生的L-天冬酰胺酶更多，应选择菌落C作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养，B正确；培养基中有奈斯勒试剂，若微生物能产生L-天冬酰胺酶则菌落周围会出现棕色圈，因此该培养基从功能来看属于鉴别培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏和蛋白胨，C错误；实验结束后为避免环境污染，培养基在丢弃前要进行灭菌处理，D正确。]
2．(2024·湖北黄冈模拟)测定水样是否符合饮用水的卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的总数。大肠杆菌在含有伊红—亚甲蓝的固体培养基上长出的菌落呈紫黑色。滤膜法测定大肠杆菌数目的流程如下：用滤膜过滤待测水样或其稀释液→水样或稀释液中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红—亚甲蓝琼脂平板上培养→统计滤膜上菌落数目。下图为将待测水样稀释10倍后取100 mL稀释液时的测定结果。下列相关叙述正确的是( )
A．伊红—亚甲蓝琼脂培养基属于选择培养基
B．图中1 L待测水样中含大肠杆菌约1 700个
C．为减小误差，应对所有实验组平板进行计数并取平均值
D．为防止杂菌污染，过滤装置和培养基使用前需干热灭菌
√
B [伊红—亚甲蓝琼脂培养基属于鉴别培养基，A错误；图中滤膜上菌落数目为17个，该图为将待测水样稀释10倍后取100 mL稀释液时的测定结果，因此1 L待测水样中含大肠杆菌约17÷0.1×10＝1 700个，B正确；为减小误差，一般需对实验组菌落数为30～300的平板进行计数并取平均值，C错误；培养基应湿热灭菌，常采用高压蒸汽灭菌法，D错误。]
谢 谢 ！第51讲 微生物的培养技术及应用
1．阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。 2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。 3．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。 4．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。 5．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。
考点1 微生物的基本培养技术
一、培养基的配制
1．概念：人们按照微生物对____________的不同需求，配制出供其____________的营养基质。
2．种类
3．营养组成
(1)营养组成：水、无机盐、碳源、__________。
(2)需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
微生物 对培养基的需求
乳酸杆菌 添加____________
霉菌 一般将培养基调至________性
细菌 一般将培养基调至______________性
厌氧微生物 提供________的条件
(3)几种微生物的营养和能量来源
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 ________ NH＋4、 NO－3等 光能
硝化 细菌 ________ NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖类等有机物 ________ 有机物
酵母菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物
1．(人教版选择性必修3 P10旁栏思考)培养基中加入氮源的作用是_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
二、无菌技术
1．概念：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
2．关键：________________。
3．目的：________________________。
4．消毒与灭菌的比较
比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围
消毒 较为温 和的__ ______ 或生物 等方法 杀死物 体表面 或内部 一部分 微生物 煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体
化学药物 消毒法 操作空间、操作者的衣物和手等
紫外线 消毒法 接种室、接种箱或超净工作台
灭菌 强烈的 理化 方法 杀死物 体内外 所有的 微生物， 包括芽 孢和 孢子 湿热灭 菌法 培养基、容器等
干热灭 菌法 玻璃器皿、金属用具等
灼烧灭 菌法 接种工具等
5．其他操作
(1)做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与______________接触。
(2)为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在____________附近进行。
2．(人教版选择性必修3 P10相关信息)利用某些微生物可以净化污水、污泥，原因是_______________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
6．酵母菌的纯培养
3．(人教版选择性必修3 P12探究·实践)倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是___________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
1．培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素。 ( )
2．某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。培养基pH需偏碱性。 ( )
3．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。 ( )
4．玻璃器皿、金属用具等可采用干热灭菌法。 ( )
微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。如图甲、乙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图。
(1)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应采用的检测方法是什么？
。
(2)指出图甲所示的操作中较明显的一处错误是什么？在第二次划线前灼烧接种环，目的是什么？
。
(3)图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是 (用字母和箭头表示)；找出图乙中一处错误的操作： (用字母表示)。
培养基的配制及无菌技术
1．(链接人教版选择性必修3 P9－10正文)下表为某培养基的配方，下列有关叙述正确的是( )
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水
含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基
B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基所培养微生物的同化作用类型是自养型
D．该培养基调节合适的pH后就可以用于接种菌种
2．(链接人教版选择性必修3 P11资料卡)获得纯净微生物培养物的关键是防止外来杂菌入侵。下列关于无菌操作的叙述，错误的是( )
A．超净工作台在使用前进行紫外线照射以杀死物体表面或空气中的微生物
B．无菌技术还应包括避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触
C．牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
D．灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
微生物的纯培养
3．(链接人教版选择性必修3 P12探究·实践)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是( )
A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦
C．①②⑦⑧ D．①③④⑤
平板划线操作中几次灼烧接种环的目的
项目 第一次划 线前灼烧 每次划线 前灼烧 划线结束 后灼烧
目的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种均来自上一次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者
4．(链接人教版选择性必修3 P12探究·实践)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种尿素分解菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是( )
A．倒平板后要间歇晃动培养皿，以保证培养基表面平整
B．培养皿中Ⅰ区的细菌数量较多，一般从Ⅱ区挑取单菌落
C．该实验结果存在单菌落，因此可达到菌种纯化的目的
D．培养基的pH可调至近酸性，其中尿素为唯一的氮源物质
考点2 微生物的选择培养和计数
一、选择培养基
二、微生物的选择培养
1．土壤取样
铲取土样，将样品装入纸袋中。
2．等比稀释
将10 g土样加入盛有________ mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
3．涂布平板
4．培养观察
(1)待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入____________ ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。
(2)在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的____________。
1．(人教版选择性必修3 P18探究·实践)统计菌落种类和数目时要每隔24 h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定。若培养时间不足或培养时间太长，分别会导致的结果是________________________、_____________________________
____________________________________________________________________。
三、微生物的数量测定
1．稀释涂布平板法
(1)计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的__________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为____________的平板进行计数。
(3)计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为____________、适于计数的平板。在______________下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出____________。
(4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用____________表示。
2．显微镜直接计数法
(1)计数原理：利用特定的____________或______________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(2)统计结果：一般是__________数和______________数的总和。
(3)优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。
2．(人教版选择性必修3 P18相关信息)血细胞计数板常用于____________的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数；细菌计数板常用于____________的细菌等的计数。
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
[深化拓展]
1．选择培养基四种常见制备方法或实例
(1)加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分)
(2)改变培养基的营养成分
(3)利用培养基“特定化学成分”分离
(4)通过某些“特殊环境”分离
2．两种纯化细菌的方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
纯化原理 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞
主要步骤 平板划线操作 系列稀释操作和涂布平板操作
接种工具 接种环 涂布器
平板示 意图
能否用 于计数 不能计数 可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板
共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征
1．选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。 ( )
2．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。 ( )
3．若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固氮细菌，培养基的主要营养物质包括水和无机盐、淀粉。 ( )
4．某同学进行分离高产脲酶菌的实验设计时，认为可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌。 ( )
5．为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展相关实验。土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落。 ( )
为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A所示的实验。
(1)步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是
。
(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是 。
(3)在进行实验时，甲同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约200个菌落，但是其他同学在同样稀释度下只筛选出大约90个菌落，若甲同学的结果有问题，则可能的原因是什么？(答出一项即可)
。
(4)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是 。
微生物的选择培养
1．(链接人教版选择性必修3 P16思考·讨论)某科研小组欲从土壤中筛选能分解除草剂A(组成元素为C、H、O、N，在水中溶解度低，含除草剂A的固体培养基不透明)的细菌用于生产，实验流程如下图所示。下列相关叙述错误的是( )
A．从经常使用除草剂A的土壤取样比从其他土壤取样更容易筛选到除草剂A分解菌
B．培养基1为固体培养基，此操作的主要目的是增加除草剂A分解菌的数量
C．培养基2为选择培养基，其中以除草剂A作为唯一氮源便于分离除草剂A分解菌
D．挑选菌落时，透明圈直径与菌落直径比值越大，表明细菌分解除草剂A的能力越强
微生物的分离和计数
2．(链接人教版选择性必修3 P17图1-7)尿素是一种重要的农业肥料，尿素分解菌可合成脲酶，利用以尿素为唯一氮源的选择培养基可从土壤中分离尿素分解菌并进行计数，科研人员取0.1 g土壤分别稀释103～107倍，将0.1 mL不同稀释倍数的土壤稀释液接种在固体培养基上，在相同的培养条件下得到如下数据。下列叙述正确的是( )
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数/个 1号平板 478 367 270 26 5
2号平板 496 354 268 20 8
3号平板 509 332 272 29 3
A．利用稀释涂布平板法可将稀释液中的菌体完全分离，一个菌落对应一个菌体
B．该实验中稀释倍数为105的平板菌落数在30～300内，最适合用来统计活菌数
C．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的菌均为尿素分解菌
D．若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，则统计结果一般比实际活菌数少
3．(链接人教版选择性必修3 P20拓展应用T2)刚果红是一种染料，可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。从落叶较多的腐质土取10 g土壤，用无菌水稀释106倍后，取0.1 mL涂布到三个平板中(培养基配方：纤维素钠盐5～10 g、酵母膏1 g、土豆汁100 mL、KH2PO40.25 g、琼脂15 g、蒸馏水1 000 mL)培养，菌落数目稳定后加入刚果红染色，洗去浮色后对纤维素分解菌进行分离与计数，三个平板菌落数无显著差异，平均值为200个，出现透明圈的菌落数平均值为30。下列叙述正确的是( )
A．上述实验中使用的培养基为选择培养基
B．该培养基pH需要调为中性或者弱酸性
C．涂布的0.1 mL培养液中活菌数可能高于200个
D．10 g土样中纤维素分解菌的数目约为3.0×108个
1．(2024·海南卷)某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是( )
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基＋甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基＋甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基＋甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基＋乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①～⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
2．(2024·浙江6月卷)脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是( )
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
3．(2024·全国甲卷)合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题：
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是_____________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为________个/mL。
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
__________________，冷却的目的是________________________。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是______，判断依据是________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈__________色。
[夯实必备知识]自主诊断
考点1
一、1．营养物质 生长繁殖 3．(1)氮源 (2)维生素 酸 中性或弱碱 无氧 (3)CO2 CO2 N2
二、2．防止杂菌污染 3．获得纯净的微生物培养物 4．物理、化学 5．(1)周围的物品 (2)酒精灯火焰 6．高压蒸汽灭菌 干热灭菌 平板划线法 倒置 未接种 28
考点2
一、抑制或阻止 NH3 尿素
二、2.90 3.0．1 酒精 冷却 4．(1)30～37
(2)单菌落
三、1．(1)菌落数 (2)30～300 (3)30～300 同一稀释度 平均值 (4)菌落数 2．(1)细菌计数板 血细胞计数板 (2)活菌 死菌
四、脲酶 尿素 中性 菌落数目稳定时
第51讲 微生物的培养技术及应用
考点1
教材隐性知识
1．提示：培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
2．提示：有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解；微生物可分解污水、污泥中的有机物
3．提示：防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上，防止培养基水分过快蒸发
澄清概念
1．√
2．×提示：乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性。
3．×提示：一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。
4．√
达成学科素养
提示：(1)将未接种的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生
(2)最后一次(第四次)划线与第一次划线区域重叠。杀死上次划线后接种环上可能残余的菌种，保证下一次划线时的菌种直接来源于上一次划线的末端
(3)A→B→G→F→E→C→D→H C
评价迁移应用
1．B [从物理性质看该培养基不含凝固剂，属于液体培养基，从用途看该培养基含有指示剂，属于鉴别培养基，A错误；培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，蛋白胨来源于动物原料，含有有机氮等营养物质，故属于氮源的物质是蛋白胨，B正确；该培养基含有葡萄糖等有机碳源，培养的微生物属于异养型，C错误；该培养基调节合适的pH后还需要进行灭菌，灭菌结束倒平板完成后，才能用于接种菌种，D错误。]
2．C [接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30 min，以杀死物体表面或空气中的微生物，A正确；无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，还应包括避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触，B正确；牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分，C错误；灼烧灭菌的对象可以是金属用具和玻璃器皿，在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，D正确。]
3．D [由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确，故选D。]
4．C [倒平板后无须间歇晃动培养皿，A错误；培养皿中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量较多，一般从Ⅲ区挑取单菌落，B错误；该实验Ⅲ区有单菌落，挑取培养后可达到菌种纯化的目的，C正确；细菌培养基的pH应调至中性或弱碱性，其中尿素为唯一的氮源物质，可用于筛选尿素分解菌，D错误。]
考点2
教材隐性知识
1．提示：遗漏菌落的种类和数目 菌落粘连影响计数、培养基表面干燥脱水、微生物衰败，菌落特征不易观察
2．提示：相对较大 相对较小
澄清概念
1．×提示：选择培养基可以筛选分离出某种微生物。
2．×提示：血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等。
3．√
4．×提示：产脲酶菌不能分解酚红指示剂。
5．×提示：土壤溶液稀释倍数足够高时，才能将聚集的细菌分散开，有助于在培养基表面形成单菌落。
达成学科素养
提示：(1)③的培养基中石油是唯一碳源
(2)接种时涂布不均匀
(3)培养基被杂菌污染
(4)筛选出分解石油能力最好的细菌
评价迁移应用
1．B [要想获得目的菌，应在富含该菌种的自然环境中筛选，故从经常使用除草剂A的土壤取样比从其他土壤取样更容易筛选到除草剂A分解菌，A正确；为扩大培养，实验中培养基1为液体培养基，其目的是增加目的菌(除草剂A分解菌)的数量，起到筛选作用，B错误；根据题干信息可知，某科研小组从土壤中筛选出能够将除草剂A分解的菌株，则应以除草剂A作为唯一氮源，在该培养基上只有目的菌能够生存，其他杂菌因为缺少氮源不能生存，C正确；挑选菌落时，透明圈直径与菌落直径比值越大，表明细菌分解除草剂A的能力越强，D正确。]
2．B [利用稀释涂布平板法不可将稀释液中的菌体完全分离，可能会出现两个或多个菌体连在一起的现象，A错误；为保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，该实验中稀释倍数为105的平板菌落数在30～300内，最适合用来统计活菌数，B正确；以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，C错误；若在显微镜下利用细菌计数板直接计数，不能区分活菌和死菌，则统计结果一般比实际活菌数多，D错误。]
3．C [要从土壤中将纤维素分解菌分离出来，应该将它们接种在以纤维素为唯一碳源的选择培养基上，根据题述实验中培养基的成分可知，该培养基不属于选择培养基，应该属于鉴别培养基，A错误；该培养基pH需要调为中性或者弱碱性，用以培养细菌，B错误；涂布的0.1 mL培养液中活菌数可能高于200个，因为记数的菌落中可能含有由聚集在一起的两个或两个以上的细胞长成的菌落，C正确；三个平板菌落的平均值为200个，其中出现透明圈的菌落数平均值为30，即有30个纤维素分解菌，则10 g土样中纤维素分解菌的数目约为30÷0.1×106×10＝3.0×109个，D错误。]
体验真题
1．D [由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；由题意、表中信息可知：实验的自变量为添加的氨基酸种类，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；与组别①相比，在基础培养基中，添加的氨基酸中含有丙氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。]
2．B [根据题意可知，脲酶被去除镍后失去活性，说明镍是组成脲酶的重要元素，A正确；脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，B错误；产脲酶细菌可利用NH4Cl里的氮源进行代谢活动，因此产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长繁殖，C正确；产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D正确。]
3．(1)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌 (2)5 000 (3)杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 防止温度过高杀死菌种 (4)A A消毒液活细菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高 (5)(紫)黑
17 / 17课时数智作业(五十一) 微生物的培养技术及应用
1．(2024·广东名校联盟模拟)固氮微生物可将空气中的氮气(N2)还原为氨，并转化为细胞中的含氮物质，是土壤中氮素的主要来源。表格是一个用于分离培养固氮微生物的培养基配方，其中甘露醇的分子式为C6H14O6，下列叙述中错误的是( )
物质名称 C6H14O6 K2HPO4 MgSO4·7H2O NaCl CaSO4·2H2O CaCO3 H2O
含量 20 g 0.2 g 0.2 g 0.2 g 0.1 g 5 g 1 000 mL
A．甘露醇在培养基中的作用是调节渗透压
B．固氮微生物合成的氨属于初生代谢物
C．对该培养基先调节pH再进行湿热灭菌
D．该培养基为选择培养基，不含凝固剂
2．(2024·广东深圳一模)在“酵母菌纯培养”的实验课中，学生进行平板划线的实践操作。下列叙述错误的是( )
A．开始接种前和划线完毕后都要将接种环进行灼烧
B．棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰
C．在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液
D．将皿盖完全打开后用接种环在培养基表面连续划线
3．(2024·广东茂名一模)某研究小组为比较药物 AZA 和 CZA 对肺炎克雷伯菌的抑菌效果，用含有药物的滤纸片进行抑菌实验，结果如图，下列叙述错误的是( )
A．培养皿和培养基都要经过灭菌处理
B．倒平板操作应在酒精灯火焰旁进行
C．本实验是运用平板划线法进行接种的
D．AZA抑制肺炎克雷伯菌的效果更好
4．(2024·广东佛山期中)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究人员将该菌的悬浮液与不含任何生长因子、但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒平板，然后在平板上划分数区，再将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。根据图示结果分析，该嗜热菌生长需要的生长因子是( )
A．甲和丙 B．乙和丙
C．甲和乙 D．甲、乙和丙
5．(2024·江苏扬州模拟)橄榄油的主要成分是甘油三酯。研究者利用“橄榄油平板透明圈法”筛选获得两株产脂肪酶的菌株X 和Y, 检测结果如表。下列相关叙述错误的是( )
酶活性(U·mL-1) 透明圈
空白 －
菌株X 6.9
菌株Y 7.7
A．培养基中的橄榄油可为微生物生长提供碳源
B．以上两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外
C．两菌株中，Y所产脂肪酶活性高，应首选为理想菌株
D．改变温度或pH，菌株X的透明圈可能会小于菌株Y的透明圈
6．(2024·江苏泰州一模)某种物质A(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1 mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为2.4×108个。相关叙述正确的是( )
A．实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B．乙中需要加琼脂和物质A等，实验需设平行重复实验，无须另外设置空白对照
C．③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上
D．若乙平板上菌落数平均为240个，则接种的菌液的稀释倍数为105
7．(2024·湖北武汉模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变而无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，数字代表培养基，A、B、C表示操作步骤。下列有关说法正确的是( )
A．①②为完全培养基，③④为基本培养基
B．A操作的目的是提高突变菌株的浓度
C．B操作可用涂布器蘸取菌液均匀地涂布在②表面
D．经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取E菌落进行纯化培养
8．(2024·广东梅州一模)某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3 盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是( )
A．将细菌接种在固体培养基 X上可采用平板划线法
B．根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
C．配制的培养基需经湿热灭菌后调整pH，冷却后倒平板
D．固体培养基 X 对菜品中的细菌没有选择性
9．(11分)(2024·广东广州期末)为探究链霉素对大肠杆菌抗性的作用，某科研小组设计实验，先将对链霉素敏感的大肠杆菌原始菌种涂布在1号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素的4号培养液中，培养后再涂布到5号培养基上，并重复以上步骤。请根据实验回答下列问题。
注：影印法指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种。
(1)实验中影印培养的目的是_________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
比较2、3培养基与6、7培养基可以得出：与原始菌种相比，4号培养液中______________________________________。
(2)如果将4号培养液稀释104倍后取0.1 mL涂布到5号培养基上，重复三次统计菌落数目分别为131、132、136个，则4号培养液中大肠杆菌的密度约为___________________。理论上，使用此方法比使用血细胞计数板直接计数的结果
_________(填“大”“小”或“相等”)，原因是____________________________
____________________________________________________________________。
(3)4号培养液中不含链霉素，一段时间后，4号培养液中大肠杆菌的数量减少了，原因是_______________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(4)通过本实验结果，可以得出结论：_____________________________________
____________________________________________________________________。
课时数智作业(五十一)
1．A [甘露醇主要为该培养基提供碳源，A错误；固氮微生物合成的氨是固氮微生物生长所必需的，属于初生代谢物，B正确；为了防止调节pH过程中的杂菌污染，一般先调pH再进行湿热灭菌，C正确；分析培养基成分可知，培养基中没有氮源，不能够固氮的微生物在该培养基上不能生长，因此该培养基为选择培养基，没有加入琼脂，不含凝固剂，D正确。]
2．D [接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，并需要在酒精灯火焰旁冷却才能接种，划线完毕后要将接种环进行灼烧，以防止杂菌污染，A正确；棉塞拔出后和塞上前装有培养液的试管口都要通过火焰，B正确；酒精灯火焰旁存在无菌区域，在酒精灯火焰附近用接种环蘸取一环菌液，C正确；划线操作时，为了防止杂菌污染，培养皿盖不能完全打开，只能打开一条缝隙，操作时需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯火焰旁存在无菌区域，D错误。]
3．C [培养皿和培养基都要经过灭菌处理才能使用，A正确；倒平板时为了避免杂菌污染，故应在酒精灯火焰旁进行，B正确；分析题图可知本实验是运用稀释涂布平板法进行接种操作的，C错误；从图中可以看出，AZA的抑菌圈更大，说明对肺炎克雷伯菌的抑菌效果更好，D正确。]
4．B [图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明该嗜热菌生长需要乙和丙，A、C、D错误，B正确。]
5．C [橄榄油的主要成分是甘油三酯，培养基中的橄榄油可以提供微生物生长所需要的碳源，A正确；两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外，对培养基中的橄榄油进行分解，B正确；图中透明圈大小不仅与酶活性的大小成正比，也和产酶量相关，两菌株中，Y所产脂肪酶活性高，但X的透明圈更大，说明其酶产量更多，故Y不应首选为理想菌株，还应进行多次筛选，C错误；温度或pH会改变酶的活性，若改变温度或pH，菌株X的透明圈可能会小于菌株Y的透明圈，D正确。]
6．D [实验时，要从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株，则①为淤泥取样进行稀释，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，淤泥中有菌种，因此不能进行灭菌处理，A错误；乙为固体培养基，需要加琼脂和物质A等，为了提高准确度，实验需设平行重复实验，且需要另外设置空白对照，检测培养基配制是否合格，B错误；③接种方法为稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，但是不能用涂布器蘸取菌液，应该将菌液用微量移液管加入培养基中，用涂布器进行均匀涂抹，C错误；若乙平板上长出的菌落数平均为240个，假设稀释倍数为a，根据摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为2.4×108个，在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，则有240×a÷0.1＝2.4×108，则稀释倍数a＝105，D正确。]
7．B [由图可知，①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；紫外线可用于诱导突变，提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓度，B正确；B操作是先将菌液滴加到培养基的表面，再用涂布器均匀地涂布在②表面，C错误；D菌落在基本培养基中无法生长，而在完全培养基上能够生长，这说明D菌落是氨基酸营养缺陷型菌株，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。]
8．D [据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用稀释涂布平板法接种而不能用平板划线法，A错误；在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，B错误；配制的培养基需调整pH后经湿热灭菌，冷却后倒平板，C错误；固体培养基没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，D正确。]
9．(除标注外，每空2分，共11分)(1)在不含链霉素的培养基的众多菌落中，选出含有抗链霉素菌的菌落 抗链霉素的大肠杆菌所占比例增大(1分) (2)1.33×107个/mL 小(1分) 血细胞计数板计数会把死菌也计入；当多个菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (3)营养物质大大减少，有害物质不断积累(1分) (4)链霉素在大肠杆菌抗链霉素抗性的形成中起到选择作用
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