【高考押题卷】2025年高考生物核心考点考前冲刺 发酵工程（含解析）
文档属性
| 名称 | 【高考押题卷】2025年高考生物核心考点考前冲刺 发酵工程（含解析） |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 1.2MB | ||
| 资源类型 | 试卷 | ||
| 版本资源 | 通用版 | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2025-06-01 11:17:27 | ||
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文档简介
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高考冲刺押题预测 发酵工程
一．选择题（共16小题）
1．（2024秋 顺义区期末）中国是酿酒历史最古老的国家之一，家酿葡萄酒和工业化生产啤酒的过程均需要（ ）
A．利用醋酸菌无氧呼吸的原理
B．接种人工选育的单一菌种
C．为发酵过程提供适宜的温度
D．对发酵产物进行分离和提纯
2．（2024 邹城市校级模拟）蓝莓果实的主要抗氧化活性成分为花色苷和多酚类物质，具有保护眼睛、抗氧化、消炎、增强记忆、增强免疫和抗癌等多种作用，因此利用蓝莓酿造的蓝莓酒具有较好的保健功能。酿造蓝莓酒的工艺流程为新鲜蓝莓→榨汁→接种→发酵→过滤→蓝莓酒→储存。下列叙述错误的是（ ）
A．蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度
C．接种后需要持续通入无菌空气以加快发酵进程
D．若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理
3．（2024 六合区校级二模）将大肠杆菌培养在含有葡萄糖培养液中，在时间0时，将含大肠杆菌的培养液均分为四组，处理见下表。混匀处理6小时后，将经不同处理的培养液分别涂布在四组不同的平板上，每组涂12个，在37℃下培养24小时，计数每组平板中菌落的平均数。结果如下表所示：下列有关说法，正确的是（ ）
组别 组1 组2 组3 组4
培养液处理 只有葡萄糖 葡萄糖+物质A 葡萄糖+物质B 葡萄糖+物质A+物质B
平板的菌落平均数 长满菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1是对照组，2、3、4组为实验组
B．物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且物质B的抑制作用强于物质A
C．物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来
D．可在培养液（基）中加入酚红试剂鉴别大肠杆菌
4．（2024 河南模拟）黄豆酱是人们喜爱的传统美食，早在春秋时期就有制作方法的相关记载。它以黄豆为主要原料，经米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵而成。劳动人民在制作过程中不断改进发酵技术，总结出以下经验。下列叙述错误的是（ ）
①选用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆与米曲霉混合堆积
③将初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料摊薄，并适当通风
④在装坛时，添加适量食盐
⑤发酵过程中，需保持发酵坛密封
⑥发酵过程中，需定期搅拌
A．①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于发酵坛上部而米曲霉集中于下部
5．（2024 安顺模拟）刺梨是贵州主要特产水果，富含超氧化物歧化酶和大量的维生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用发酵工程生产刺梨果酒和果醋的主要流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌
B．发酵Ⅰ和发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程
D．发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等
6．（2023秋 颍州区校级期末）我国是最早生产酱油的国家。制曲是酱油生产的重要工序之一，其主要目的是给黑曲霉创造最佳条件，使其生长繁殖并分泌和积累相应的酶，制曲设备示意图如图。下列叙述错误的是（ ）
A．黑曲霉不仅可以用于生产酱油，还可以用于生产柠檬酸
B．酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标
C．将曲料摊铺在帘架上有利于控制微生物生长的温度
D．该制曲过程主要的发酵产物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物质
7．（2023秋 颍州区校级期末）无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．生物技术实验中，所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C．配置动物细胞培养基时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D．易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
8．（2023秋 亭湖区校级期末）下列相关说法中，错误的是（ ）
A．利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作过程中，毛霉将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
D．在啤酒生产的主发酵阶段和后发酵阶段，需将温度保持在酵母菌的最适生长温度
9．（2023秋 延边州期末）传统发酵食品的制作中，所对应产物的产生场所，正确的是（ ）
A．制作果酒时，酵母菌产生H2O的场所是线粒体基质
B．制作泡菜时，乳酸菌产生乳酸的场所是细胞质基质
C．制作泡菜时，乳酸菌产生CO2的场所是细胞质基质
D．制作果醋时，醋酸杆菌产生CO2的场所是线粒体基质
10．（2023秋 济宁期末）我国早在9000年前就可以运用发酵技术获得产品，为生活增添丰富的色彩。下列说法正确的是（ ）
A．制作果酒时，可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率
B．利用酵母菌酒精发酵进行传统酿酒过程中，需一直保持无氧的条件
C．泡菜坛装八成满可以防止发酵过程中酵母菌、乳酸菌等产生的CO2使发酵液溢出
D．腐乳鲜美的味道主要由曲霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸引起
11．（2023秋 济宁期末）味精是一种鲜味剂，利用发酵技术生产味精的主要过程为原料→淀粉糖化→通气发酵→发酵产物提取→味精制造→包装。下列说法错误的是（ ）
A．生产味精需要的谷氨酸棒状杆菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行
C．发酵时需将发酵液的pH调节为中性或弱酸性
D．从发酵液中获得谷氨酸需要采取提取、分离和纯化措施
12．（2024春 郫都区校级期中）发酵工程可实现发酵产品的大规模生产，如图为发酵工程的基本环节，相关叙述正确的是（ ）
A．①、②可以是诱变育种或基因工程育种
B．③是发酵工程的中心环节
C．产物浓度的检测必须在发酵结束后进行
D．发酵条件为室温和近中性的pH等
13．（2024秋 河南月考）科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①______（接种方法）接种后培养→将周边出现②______的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的纯培养步骤如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．步骤①需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂
C．步骤③接种时，若在平板上划线4个区，需蘸取酵母菌液4次
D．步骤④培养前需在培养皿皿盖上做好标记
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小组欲利用以下培养基从土壤中分离某种微生物，下列对该实验的后续操作及结果分析正确的是（ ）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸馏水 琼脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培养基先分装到锥形瓶后再进行高压蒸汽灭菌
B．该培养基灭菌后需冷却至40℃再进行倒平板操作
C．用无菌水将土样进行系列稀释，在最后一次稀释后进行涂布接种
D．该无氮培养基可用于硝化细菌等固氮菌的分离与计数
16．（2024秋 如皋市期中）关于消毒和灭菌的叙述，错误的是（ ）
A．利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，属于生物消毒
B．利用紫外线消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．对培养基灭菌时，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度
D．对涂布器灭菌，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧
二．解答题（共4小题）
17．（2024 息县模拟）（一）某食品公司得到一种高效酿酒的酵母菌菌株，并设计方案获得发酵产物。
（1）对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 （A．马铃薯蔗糖培养基；B．MS培养基；C．LB培养基；D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 。
（2）欲知道这种微生物的繁殖速度，可用涂布分离法或 对酵母菌进行计数。对培养到某一时期的培养液制备成10﹣5的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为 个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 （填“a”或“b”）。
（3）该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短和 不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 （填物质）。
（二）目前我国新冠病毒核酸检测的方法是RT﹣PCR，如图为RT﹣PCR（逆转录荧光PCR技术）的原理：PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光（荧光强度与探针水解量成正相关）。
请回答下列问题：
（4）PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是 。RT﹣PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加 酶。除了加酶，解开cDNA双螺旋的方法还有 。
（5）对新冠病毒进行检测时，探针是一段与 相同的核苷酸序列。
（6）通过荧光检测到荧光信号，则可判定该检测样本为 性（选填“阳”、“阴”），在相同PCR循环次数条件下，荧光强度与病毒数量呈 。
（7）为了在没有条件进行核酸检测前及早发现新冠病毒，我国于2022年3月11日推出新冠病毒抗原检测试剂盒作为核酸检测的补充措施，该试剂盒的检测原理是 。试剂盒中的探针应采用 技术生产。
18．（2023秋 宣威市校级期末）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中给微生物持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，某些细菌（如透明颤菌）细胞中也存在。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了如图所示的方案。回答下列问题：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指该菌株在缺少该种氨基酸的培养基上会暂停生长
（1）上图步骤②采用的接种方法是 ，步骤③往培养基中添加的某种物质是 。得到的平板中菌落较 （填“大”或“小”）的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的 ，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的 。
（3）简述图甲步骤⑧从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路： 。
（4）除了上述方案，请再提出一种将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段 。
19．（2023秋 杞县校级期末）回答下列（一）、（二）小题：
（一）如图1是谷氨酸发酵装置示意图，谷氨酸工业上常用谷氨酸棒状杆菌在30℃下发酵获得；如图2是谷氨酸生产的机理，谷氨酸棒状杆菌以葡萄糖为底物进行了如下过程。据图分析，回答下列问题：
（1）如图1中1、2处是发酵罐夹层中冷凝水的进出口，水在发酵罐夹层流动的作用是 。如图1中3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的 。
（2）谷氨酸棒杆菌进行以硫酸二乙酯和紫外线相结合的复合诱变，经选育得到高产突变株LG﹣01．将其接种在含葡萄糖液体培养基中，于30℃下培养48h。摇匀并取培养液稀释107倍后，向四个培养基分别涂布0.1mL该培养液，四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，则稀释前菌液的菌体为 个/mL，计算得到的值比实际值 。
（3）发酵结束后可用接种环蘸取发酵液进行 ，从而纯化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落。此外，此过程需确保培养基的pH环境为 。
（二）甜菜是我国重要的糖料作物之一，为提高甜菜的光合效率和产量。科研工作者构建携带SBPase基因（编码卡尔文循环的关键酶）的表达载体，如图3为重组质粒示意图，通过基因工程对甜菜进行遗传改造。回答下列问题：
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经 鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性内切核酸酶切割 ，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接。经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）获取抗性植株：将含有重组质粒的农杆菌侵染甜菜叶柄并共培养一段时间后，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是 ，再转入含有 的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意 。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含 的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测 。在整个过程中，反应体系中的酶有 。
20．（2024 西湖区校级模拟）反硝化细菌是一类能将硝态氮（N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7.2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 ，富集培养的目的是 。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用 （填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH＝6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 ，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5～7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量N等指标，结果如图所示：
①本研究的目的是 。
②当投菌量达到 时，反硝化效果最好，N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 （答1点）。
高考冲刺押题预测 发酵工程
参考答案与试题解析
一．选择题（共16小题）
1．（2024秋 顺义区期末）中国是酿酒历史最古老的国家之一，家酿葡萄酒和工业化生产啤酒的过程均需要（ ）
A．利用醋酸菌无氧呼吸的原理
B．接种人工选育的单一菌种
C．为发酵过程提供适宜的温度
D．对发酵产物进行分离和提纯
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】发障工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产物的分离、提纯等方面。
【解答】解：A、家酿葡萄酒和工业化生产啤酒利用的是酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理，A错误；
B、家酿葡萄酒不需要接种人工选育的单一菌种，B错误；
C、家酿葡萄酒和工业化生产啤酒均需要为发酵过程提供适宜的温度，C正确；D、家酿葡萄酒不需要对发酵产物进行分离和提纯，D错误。
故选：C。
【点评】本题考查传统发酵技术和发酵工程的相关知识，要求考生识记相关的制作原理和流程，意在考查考生的识记和分析能力。
2．（2024 邹城市校级模拟）蓝莓果实的主要抗氧化活性成分为花色苷和多酚类物质，具有保护眼睛、抗氧化、消炎、增强记忆、增强免疫和抗癌等多种作用，因此利用蓝莓酿造的蓝莓酒具有较好的保健功能。酿造蓝莓酒的工艺流程为新鲜蓝莓→榨汁→接种→发酵→过滤→蓝莓酒→储存。下列叙述错误的是（ ）
A．蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度
C．接种后需要持续通入无菌空气以加快发酵进程
D．若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。
【解答】解：A、果酒的制作离不开酵母菌，在蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌，A正确；
B、糖可作为酒精发酵的原料，因此对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度，B正确；
C、酵母菌为兼性厌氧菌，酿酒初期需要氧气促进酵母菌的生长、繁殖，后期酵母菌需在无氧环境中进行酒精发酵，C错误；
D、若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理，排除果酒原有颜色的干扰，D正确。
故选：C。
【点评】本题主要考查果酒的制作等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
3．（2024 六合区校级二模）将大肠杆菌培养在含有葡萄糖培养液中，在时间0时，将含大肠杆菌的培养液均分为四组，处理见下表。混匀处理6小时后，将经不同处理的培养液分别涂布在四组不同的平板上，每组涂12个，在37℃下培养24小时，计数每组平板中菌落的平均数。结果如下表所示：下列有关说法，正确的是（ ）
组别 组1 组2 组3 组4
培养液处理 只有葡萄糖 葡萄糖+物质A 葡萄糖+物质B 葡萄糖+物质A+物质B
平板的菌落平均数 长满菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1是对照组，2、3、4组为实验组
B．物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且物质B的抑制作用强于物质A
C．物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来
D．可在培养液（基）中加入酚红试剂鉴别大肠杆菌
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】数据表格；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
【分析】伊红﹣亚甲蓝琼脂培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽。
【解答】解：A、研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1、2、3均为对照组，组4为实验组，A错误；
B、组2、组3与组1对比可知，物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且作用相当，甚至物质A的抑制作用稍强于物质B，B错误；
C、组4与组2、组3对比可知，当物质A与物质B同时存在时，菌落要比物质A、物质B单独存在要多，说当物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来，C正确；
D、鉴别大肠杆菌可使用的试剂是伊红﹣亚甲蓝试剂，D错误。
故选：C。
【点评】本题考查了微生物的选择培养，需要学生掌握选择培养基的配制。
4．（2024 河南模拟）黄豆酱是人们喜爱的传统美食，早在春秋时期就有制作方法的相关记载。它以黄豆为主要原料，经米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵而成。劳动人民在制作过程中不断改进发酵技术，总结出以下经验。下列叙述错误的是（ ）
①选用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆与米曲霉混合堆积
③将初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料摊薄，并适当通风
④在装坛时，添加适量食盐
⑤发酵过程中，需保持发酵坛密封
⑥发酵过程中，需定期搅拌
A．①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于发酵坛上部而米曲霉集中于下部
【考点】制作泡菜；果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】米曲霉是真菌的一种，米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶（如蛋白酶和脂肪酶）中能将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分。
【解答】解：A、米曲霉能够分泌蛋白酶能够将黄豆酱中的蛋白质分解，而食盐一方面可以抑制杂菌生长，一方面可以调味，故①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质，A正确；
B、米曲霉是好氧菌，且能够分泌蛋白酶将黄豆酱中的蛋白质分解，故②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率，B正确；
C、米曲霉是好氧菌，而酵母菌也可以进行有氧呼吸，故③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖，C正确；
D、乳酸菌属于厌氧菌，米曲霉是好氧菌，故⑤中米曲霉主要集中于发酵坛上部而乳酸菌集中于下部，D错误。
故选：D。
【点评】本题主要考传统发酵技术的应用等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握情况。
5．（2024 安顺模拟）刺梨是贵州主要特产水果，富含超氧化物歧化酶和大量的维生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用发酵工程生产刺梨果酒和果醋的主要流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌
B．发酵Ⅰ和发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程
D．发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】模式图；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】C
【分析】发酵Ⅰ阶段发酵的菌种主要是酵母菌。在发酵Ⅱ阶段，发酵菌种主要是醋酸菌，醋酸菌为需氧菌，可将酒精转化为乙醛，乙醛再转化为醋酸。
【解答】解：A、培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌，避免杂菌污染，A正确；
B、发酵Ⅰ的微生物代谢类型为异养兼性厌氧菌，发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型为异养需氧型，B正确；
C、利用刺梨表面的微生物有杂菌且相应的微生物数量少，则可需要接种相应的菌种进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程，C错误；
D、发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等，D正确。
故选：C。
【点评】本题主要考查果酒、果醋的制作等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握。
6．（2023秋 颍州区校级期末）我国是最早生产酱油的国家。制曲是酱油生产的重要工序之一，其主要目的是给黑曲霉创造最佳条件，使其生长繁殖并分泌和积累相应的酶，制曲设备示意图如图。下列叙述错误的是（ ）
A．黑曲霉不仅可以用于生产酱油，还可以用于生产柠檬酸
B．酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标
C．将曲料摊铺在帘架上有利于控制微生物生长的温度
D．该制曲过程主要的发酵产物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物质
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】D
【分析】鼓风机应不断通入经过滤的新鲜空气，为米曲霉的生长提供足量的氧气，为米曲霉生长创做条件，以便其大量繁殖，积累相应的酶。
【解答】解：A、以大豆为主要原料，利用黑曲霉，经一系列步骤可以生产酱油，柠檬酸也是由黑曲霉发酵制得的，A正确；
B、发酵的主要目的是使黑曲霉充分生长繁殖并分泌和积累相应的酶，所以酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标，B正确；
C、微生物的生长需要适宜的温度，曲料摊铺在帘架上可以及时散热，有利于控制微生物生长的温度，C正确；
D、葡萄糖是发酵的底物，不是产物，D错误。
故选：D。
【点评】本题主要考查发酵工程等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
7．（2023秋 颍州区校级期末）无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．生物技术实验中，所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C．配置动物细胞培养基时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D．易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
【考点】无菌技术 常用的消毒和灭菌方法．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】D
【分析】1、微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵。
2、实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。
【解答】解：A、生物技术实验中，要对所有培养基和培养皿消毒，但是生物材料要根据实际情况来，比如说植物组织培养，外植体只能消毒，不能灭菌，A错误；
B、一般消毒用的是70%的酒精，B错误；
C、抗生素只能杀灭细菌和一部分真菌，不能达到无菌的效果，C错误；
D、易分解的活性物质应该用过滤灭菌，无菌条件下加入无菌培养基，D正确。
故选：D。
【点评】本题主要考查无菌技术等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
8．（2023秋 亭湖区校级期末）下列相关说法中，错误的是（ ）
A．利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作过程中，毛霉将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
D．在啤酒生产的主发酵阶段和后发酵阶段，需将温度保持在酵母菌的最适生长温度
【考点】果酒、果醋的制作；发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；发酵与传统发酵技术．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】D
【分析】1、果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精发酵，果醋的制作利用的是醋酸菌将酒精转变成醋酸的代谢，腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶类，泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸发酵。传统的发酵技术都巧妙的利用了天然菌种，都为特定的菌种提供了良好的生存条件，最终的发酵产物不是单一的组分，而是成分复杂的混合物。
2、果酒用到的葡萄应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。
【解答】解：A、乳酸菌在无氧的条件下将有机物分解为乳酸，利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品，A正确；
B、毛霉会分泌蛋白酶，在腐乳制作过程中，可以将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸，B正确；
C、果酒发酵过程中，酵母菌在无氧条件下产生乙醇，在酸性缺氧的条件下，其他杂菌不能生长，所以乙醇既是果酒发酵的产物，在葡萄糖缺乏，氧气充足的条件下，醋酸菌可以将乙醇氧化为醋酸，所以也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖，C正确；
D、在啤酒生产的主发酵阶段需将温度保持在酵母菌的最适生长温度，后发酵阶段需将温度保持在低温，也就是发酵温度，D错误。
故选：D。
【点评】本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力、运用所学知识综合分析问题的能力。
9．（2023秋 延边州期末）传统发酵食品的制作中，所对应产物的产生场所，正确的是（ ）
A．制作果酒时，酵母菌产生H2O的场所是线粒体基质
B．制作泡菜时，乳酸菌产生乳酸的场所是细胞质基质
C．制作泡菜时，乳酸菌产生CO2的场所是细胞质基质
D．制作果醋时，醋酸杆菌产生CO2的场所是线粒体基质
【考点】果酒、果醋的制作；制作泡菜．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】B
【分析】（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C6H12O6+6O2+12H2O6CO2+12H2O+能量
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量
（2）利用醋酸菌制作果醋的原理
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
C6H12O6+2O2CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+能量
C2H5OH+O2CH3COOH（醋酸）+H2O+能量
【解答】解：A、在制作果酒时，酵母菌进行有氧呼吸产生H2O的场所是线粒体内膜，而不是线粒体基质，A错误；
B、制作泡菜时，乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，无氧呼吸的场所是细胞质基质，B正确；
C、乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，不产生CO2，C错误；
D、醋酸杆菌属于原核生物，没有线粒体，其进行有氧呼吸产生CO2的场所是细胞质基质，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查传统发酵食品的制作等相关知识，意在考查学生的识记能力和熟练应用的能力。
10．（2023秋 济宁期末）我国早在9000年前就可以运用发酵技术获得产品，为生活增添丰富的色彩。下列说法正确的是（ ）
A．制作果酒时，可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率
B．利用酵母菌酒精发酵进行传统酿酒过程中，需一直保持无氧的条件
C．泡菜坛装八成满可以防止发酵过程中酵母菌、乳酸菌等产生的CO2使发酵液溢出
D．腐乳鲜美的味道主要由曲霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸引起
【考点】果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术；制作泡菜．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】A
【分析】1、制作泡菜的注意事项：
（1）盐水煮沸，一是为了消除杂菌，二是为了除去水中的氧气，冷却再用是为了避免高温杀死坛中蔬菜表面的乳酸菌；
（2）加水密封是为了阻止外面的空气再进入泡菜坛，为乳酸菌发酵制作泡菜创造无氧的环境条件。若此过程中进入大量氧气，可能导致乳酸菌死亡而好氧菌大量繁殖，使菜腐烂；
（3）菜料只能装八成满的原因：初期会有气体产生；要往坛中加盐水没过菜料，所以不能加菜料太满。
2、制作果酒和果醋的注意事项：
（1）发酵瓶和榨计机都要用体积分数为70%的酒精消毒；
（2）葡萄要先冲洗再去枝梗，以免去枝梗时葡萄破碎，增加被杂菌污染的风险；
（3）瓶中留有空间为酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖提供氧气。果酒发酵过程中会产生大量CO2导致瓶内气压升高，需拧松瓶盖放气，但不要完全打开，否则可能会被杂菌污染。
【解答】解：A、制作果酒时，果酒中除了酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等微生物；乳酸菌可能分解果酒中的糖、甘油、酒石酸等，从而使果酒变质；可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率，A正确；
B、利用酵母菌酿制果酒时，初始阶段可往装置中通入一定量空气，使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，后期再密封发酵使酵母菌进行无氧呼吸，产生酒精，B错误；
C、泡菜发酵时，发酵初期酵母菌等的活动会产生气体，使体积膨胀，故泡菜坛装八成满可防止发酵液溢出，乳酸菌只进行无氧呼吸（乳酸发酵）不产生二氧化碳，C错误；
D、多种微生物参与了豆腐的发酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉；腐乳发酵时，发挥主要作用是毛霉，毛霉通过分泌脂肪酶和蛋白酶（不是胰蛋白酶）将豆腐块中的大分子物质分解为易于被人体吸收的小分子物质，有些氨基酸具有特殊的气味而表现出腐乳的风味，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查传统发酵技术的应用的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。
11．（2023秋 济宁期末）味精是一种鲜味剂，利用发酵技术生产味精的主要过程为原料→淀粉糖化→通气发酵→发酵产物提取→味精制造→包装。下列说法错误的是（ ）
A．生产味精需要的谷氨酸棒状杆菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行
C．发酵时需将发酵液的pH调节为中性或弱酸性
D．从发酵液中获得谷氨酸需要采取提取、分离和纯化措施
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】C
【分析】在谷氨酸生产过程中，谷氨酸在细胞内大量积累，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致谷氨酸合成受阻。在发酵过程中，应采用一定手段（如控制磷脂的合成或使细胞膜受损）改变细胞膜的通透性，使谷氨酸迅速排放到细胞外面，从而解除谷氨酸对谷氨酸脱氧酶的抑制作用，提高谷氨酸产量。
【解答】解：A、常用的谷氨酸棒状杆菌为好氧菌，因此培养基中需严格控制溶解氧、通气量等发酵条件，以保证谷氨酸棒状杆菌代谢正常进行，A正确；
B、淀粉的糖化作用是在发酵过程中继续利用微生物所分泌的淀粉酶将碳水化合物分解成葡萄糖、麦芽糖、糊精等，淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行，B正确；
C、谷氨酸棒状杆菌在发酵过程中要严格控制发酵液的pH。在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，C错误；
D、发酵结束后，要想获得纯净谷氨酸，应对发酵液进行分离和纯化，D正确。
故选：C。
【点评】本题考查发酵工程的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。
12．（2024春 郫都区校级期中）发酵工程可实现发酵产品的大规模生产，如图为发酵工程的基本环节，相关叙述正确的是（ ）
A．①、②可以是诱变育种或基因工程育种
B．③是发酵工程的中心环节
C．产物浓度的检测必须在发酵结束后进行
D．发酵条件为室温和近中性的pH等
【考点】发酵工程的基本环节．
【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】A
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。
【解答】解：A、优良菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，因此①、②可以是诱变育种或基因工程育种，A正确；
B、③是培养基的灭菌，发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，B错误；
C、在发酵过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度，以了解发酵进程，同时要严格控制发酵条件，如温度、pH、溶解氧，故可能需要适时添加营养物质等，C错误；
D、不同微生物的最适温度和pH值有所不同，因此不同发酵过程温度和pH也有所不同，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查发酵工程的基本环节，要求考生能够结合所学知识准确判断各选项，属于识记和理解层次的考查。
13．（2024秋 河南月考）科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①______（接种方法）接种后培养→将周边出现②______的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】B
【分析】微生物的营养物质：主要包括水、碳源、氮源、能源、无机盐等，这些物质能够满足微生物的生长、繁殖和参与各种生理活动，促进合成新的细胞和物质，同时将代谢废物排出。
【解答】解：A、表中所示培养基中为微生物的生长提供氮源的物质是牛肉膏和蛋白胨，A正确；
B、若筛选的是产酯化酶的霉菌（真菌），应将培养基在用高压蒸汽灭菌法灭菌前调至酸性，B错误；
C、表中①可代表稀释涂布平板法，聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，因此若被筛选的微生物能分泌酯化酶，则在其菌落的周围会产生透明圈，因此②处应填透明圈，C正确；
D、利用平板划线法分离得到单菌落的原理是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落，D正确。
故选：B。
【点评】本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，学生具备运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的纯培养步骤如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．步骤①需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂
C．步骤③接种时，若在平板上划线4个区，需蘸取酵母菌液4次
D．步骤④培养前需在培养皿皿盖上做好标记
【考点】微生物的纯培养．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】B
【分析】平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
【解答】解：A、步骤①配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯火焰旁主要是进行无菌操作的区域，如接种等操作，A错误；
B、步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂，同时也能防止皿盖上的水珠滴落到培养基上造成污染，B正确；
C、步骤③接种时，若在平板上划线4个区，只需蘸取酵母菌液1次，然后通过多次划线逐步稀释菌液，C错误；
D、步骤④培养前需在培养皿底部做好标记，而不是皿盖上，因为如果标记在皿盖上，在培养过程中，皿盖可能会被拿下来放置在不同位置，容易造成标记混乱，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查微生物的培养等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小组欲利用以下培养基从土壤中分离某种微生物，下列对该实验的后续操作及结果分析正确的是（ ）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸馏水 琼脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培养基先分装到锥形瓶后再进行高压蒸汽灭菌
B．该培养基灭菌后需冷却至40℃再进行倒平板操作
C．用无菌水将土样进行系列稀释，在最后一次稀释后进行涂布接种
D．该无氮培养基可用于硝化细菌等固氮菌的分离与计数
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】数据表格；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】A
【分析】1、微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等。有些微生物还需要特殊的营养物质，如维生素、生长因子等。
2、培养基中含有琼脂的一般为固体培养基。
3、选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
【解答】解：A、为有效灭菌并防止分装时培养基污染，配制好的培养基先分装到锥形瓶后，再进行高压蒸汽灭菌，A正确；
B、该培养基灭菌后需冷却至50℃再进行倒平板操作，B错误；
C、用无菌水将土样进行系列稀释，选用一定稀释范围的样液进行涂布接种，C错误；
D、硝化细菌不是固氮菌，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查微生物培养的相关知识，难度适中。
16．（2024秋 如皋市期中）关于消毒和灭菌的叙述，错误的是（ ）
A．利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，属于生物消毒
B．利用紫外线消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．对培养基灭菌时，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度
D．对涂布器灭菌，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧
【考点】无菌技术 常用的消毒和灭菌方法．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】B
【分析】实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。
（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【解答】解：A、利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，这属于生物消毒的一种方式，A正确；
B、紫外线消毒的原理是破坏微生物的核酸结构等，而喷洒消毒液后可能会在物体表面形成一层膜等情况，反而可能影响紫外线的穿透，不能加强消毒效果，B错误；
C、对培养基灭菌时，干热灭菌需要在160﹣170℃保持1﹣2小时，湿热灭菌一般是121℃保持15﹣30分钟，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度，C正确；
D、对涂布器灭菌时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧，防止酒精燃烧引发危险，D正确。
故选：B。
【点评】本题主要考查无菌技术等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
二．解答题（共4小题）
17．（2024 息县模拟）（一）某食品公司得到一种高效酿酒的酵母菌菌株，并设计方案获得发酵产物。
（1）对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 A （A．马铃薯蔗糖培养基；B．MS培养基；C．LB培养基；D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 浓度和比例（配比） 。
（2）欲知道这种微生物的繁殖速度，可用涂布分离法或 血细胞计数板（或显微镜计数法） 对酵母菌进行计数。对培养到某一时期的培养液制备成10﹣5的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为 3.2×107 个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 a （填“a”或“b”）。
（3）该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短和 发酵条件、发酵底物 不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 醋酸 （填物质）。
（二）目前我国新冠病毒核酸检测的方法是RT﹣PCR，如图为RT﹣PCR（逆转录荧光PCR技术）的原理：PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光（荧光强度与探针水解量成正相关）。
请回答下列问题：
（4）PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是 半保留复制 。RT﹣PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加 逆转录酶 酶。除了加酶，解开cDNA双螺旋的方法还有 加热 。
（5）对新冠病毒进行检测时，探针是一段与 目的基因中特定的核苷酸序列 相同的核苷酸序列。
（6）通过荧光检测到荧光信号，则可判定该检测样本为 阳 性（选填“阳”、“阴”），在相同PCR循环次数条件下，荧光强度与病毒数量呈 正相关 。
（7）为了在没有条件进行核酸检测前及早发现新冠病毒，我国于2022年3月11日推出新冠病毒抗原检测试剂盒作为核酸检测的补充措施，该试剂盒的检测原理是 抗原抗体的特异性结合 。试剂盒中的探针应采用 单克隆抗体 技术生产。
【考点】微生物的数量测定；发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；PCR技术；理解能力．
【答案】（1）A 浓度和比例（配比）
（2）血细胞计数板##或显微镜计数法 3.2×107 a
（3）发酵条件、发酵底物 醋酸
（4）半保留复制 逆转录酶 加热
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）阳 正相关
（7）抗原抗体的特异性结合 单克隆抗体
【分析】1、酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进行酒精发酵，其反应式为：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。温度是影响酵母菌生长的重要因素，酿酒酵母的最适生长温度约为28℃，发酵时，将温度控制在18～30℃进行发酵。
2、人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质﹣培养基，培养基中一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氯源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。
3、微生物的计数方法包括稀释涂布平板法和利用显微镜进行直接计数。
4、稀释涂布平板法需要将样品进行系列梯度稀释，为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
5、利用显微镜进行直接计数是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。
6、逆转录是指在逆转录酶的催化下，以RNA为模板将四种脱氧核苷酸合成为DNA的过程。
7、PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。PCR反应的条件为需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶；同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
【解答】解：（1）由分析可知，酵母菌主要以糖类底物进行呼吸作用产生酒精，因此比较适合的培养为以糖类为碳源的培养基，即A马铃薯蔗糖培养基。除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的浓度和比例，以确保微生物能正常生存和发酵产品的品质。
（2）由分析可知，微生物的计数方法有稀释涂布平板法和利用显微镜进行直接计数，显微镜计数法需要使用血细胞计数板对微生物进行计数。根据题意分析，培养液中酵母菌数量为。利用培养皿培养微生物时，需要将培养皿倒置培养，即a所示状况。
（3）在发酵过程中，培养液中的微生物数量、产物浓度，培养液的营养组分，以及温度、pH和溶解氧等发酵条件，不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。因此，发酵食品会因为发酵时间的长短、发酵条件、发酵底物的不同观使其风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为醋酸菌繁殖产生了醋酸所致。
（4）由分析可知，PCR技术与DNA体内复制的复制方式都是半保留复制。RT﹣PCR过程为逆转录过程，需向装置中添加逆转录酶，以RNA为模板合成cDNA。DNA体内复制中解开DNA双螺旋的是利用解旋酶，在PCR中则是利用加热解开双螺旋。
（5）由图可知，利用探针对新冠病毒进行检测的原理是碱基互补配对和DNA复制，当存在病毒时，以病毒的遗传物质RNA逆转录合成cDNA，探针能与该cDNA通过碱基互补配对结合，当cDNA进行复制时，会水解探针，因此探针是一段与目的基因（病毒的基因）中特定核苷酸序列相同的核苷酸序列。
（6）若检测到荧光信号，说明探针与被检测物结合后被水解，则可判定该检测样本为阳性，在相同PCR循环次数条件下，病毒数量越多，复制时水解的探针越多，则荧光强度越强，即荧光强度与病毒数量呈正相关。
（7）分析题意可知，新冠病毒抗原检测试剂盒的原理是抗原与抗体的特异性结合。与传统方法生产的抗体相比，单克隆抗体具有纯度高、特异性强的特点，因此试剂盒中的探针应采用单克隆抗体技术生产。
故答案为：
（1）A 浓度和比例（配比）
（2）血细胞计数板##或显微镜计数法 3.2×107 a
（3）发酵条件、发酵底物 醋酸
（4）半保留复制 逆转录酶 加热
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）阳 正相关
（7）抗原抗体的特异性结合 单克隆抗体
【点评】本题主要考查微生物的培养与计数和PCR技术等知识，意在考查学生知识的掌握情况和理解水平，利用知识分析解决问题能力，要求学生熟练掌握知识点，形成知识网络，能根据具体题境利用相关知识解决问题。
18．（2023秋 宣威市校级期末）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中给微生物持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，某些细菌（如透明颤菌）细胞中也存在。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了如图所示的方案。回答下列问题：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指该菌株在缺少该种氨基酸的培养基上会暂停生长
（1）上图步骤②采用的接种方法是 稀释涂布平板法 ，步骤③往培养基中添加的某种物质是 硫氨酸 。得到的平板中菌落较 小 （填“大”或“小”）的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的 免疫活性物质 ，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的 蜗牛酶、溶菌酶 。
（3）简述图甲步骤⑧从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路： 用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株 。
（4）除了上述方案，请再提出一种将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段 利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌 。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用；免疫系统的组成．
【专题】正推法；免疫调节；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】（1）稀释涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物质 蜗牛酶、溶菌酶（顺序不可调换）
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株
（4）利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌
【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。
【解答】解：（1）图中平板上的菌落分布比较均匀，该步骤②采用的接种方法是稀释涂布平板法。经过步骤③之后首先得到甲硫氨酸营养缺陷菌株，所以步骤③往培养基中添加的某种物质是甲硫氨酸，起到筛选菌株的作用；得到的平板中菌落较小的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株，因为该营养缺陷型菌株生长缓慢，繁殖能力比天然菌株差一些。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的免疫活性物质。蜗牛以植物和真菌为食，可推测其消化道中的酶可以分解真菌的细胞壁，而溶菌酶可以分解细菌的细胞壁，故处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的蜗牛酶、溶菌酶。
（3）处理⑧的目的是要筛选得到杂种菌株，可以根据两种“亲本”菌种的特点，采取双营养缺陷的培养基进行筛选。方案为：用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株。
（4）颤菌属于原核生物，青霉菌属于真核生物，除了上述方案，将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段是：利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌。
故答案为：
（1）稀释涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物质 蜗牛酶、溶菌酶
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株
（4）利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌
【点评】本题考查免疫调节、基因工程和发酵工程的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。
19．（2023秋 杞县校级期末）回答下列（一）、（二）小题：
（一）如图1是谷氨酸发酵装置示意图，谷氨酸工业上常用谷氨酸棒状杆菌在30℃下发酵获得；如图2是谷氨酸生产的机理，谷氨酸棒状杆菌以葡萄糖为底物进行了如下过程。据图分析，回答下列问题：
（1）如图1中1、2处是发酵罐夹层中冷凝水的进出口，水在发酵罐夹层流动的作用是 降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 。如图1中3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的 通透性 。
（2）谷氨酸棒杆菌进行以硫酸二乙酯和紫外线相结合的复合诱变，经选育得到高产突变株LG﹣01．将其接种在含葡萄糖液体培养基中，于30℃下培养48h。摇匀并取培养液稀释107倍后，向四个培养基分别涂布0.1mL该培养液，四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，则稀释前菌液的菌体为 3.3×109 个/mL，计算得到的值比实际值 低 。
（3）发酵结束后可用接种环蘸取发酵液进行 平板划线 ，从而纯化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落。此外，此过程需确保培养基的pH环境为 中性偏碱 。
（二）甜菜是我国重要的糖料作物之一，为提高甜菜的光合效率和产量。科研工作者构建携带SBPase基因（编码卡尔文循环的关键酶）的表达载体，如图3为重组质粒示意图，通过基因工程对甜菜进行遗传改造。回答下列问题：
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经 凝胶电泳 鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性内切核酸酶切割 质粒和SBPase基因 ，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接。经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）获取抗性植株：将含有重组质粒的农杆菌侵染甜菜叶柄并共培养一段时间后，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是 杀灭农杆菌 ，再转入含有 卡那霉素 的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意 抗生素的种类、剂量及作用时间等 。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含 SBPase基因 的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测 SBPase基因的表达情况 。在整个过程中，反应体系中的酶有 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶 。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】图文信息类简答题；微生物的分离、培养和应用；解决问题能力．
【答案】（1）降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板划线 中性偏碱
（4）凝胶电泳 质粒和SBPase基因
（5）杀灭农杆菌 卡那霉素 抗生素的种类、剂量及作用时间等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表达情况 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶
【分析】1、谷氨酸生产所用菌种是好氧菌，通风和搅拌不仅会影响对氮源和碳源的利用率，而且会影响发酵周期和谷氨酸的合成量，尤其是发酵后期，加大通气量有利于谷氨酸的合成。当菌体生长到稳定期，适当提高温度有利于生产谷氨酸。在发酵过程中，随着营养物质的利用，代谢产物的积累，培养液的pH会不断变化。
2、基因工程是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种。
【解答】解：（1）在利用发酵罐进行发酵的过程中，由于微生物的呼吸作用以及搅拌等都能产生大量的热，使发酵液温度升高，为防止温度过高降低酶的活性，而降低谷氨酸产量，采取了水在发酵罐表层中流动而降温的措施。3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的通透性。
（2）四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，第二个数值明显错误应去掉，计算平均菌落数为33个，则稀释前菌液的菌体为33÷0.1×107＝3.3×109，由于当几个细胞连在一起时观察到的是单个菌落，计算得到的值比实际值偏小。
（3）要化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落平板划线，此过程需确保培养基的pH环境为中性偏碱。
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经电泳鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段，然后使用限制性内切核酸酶切割SBPase基因和质粒，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接，经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）重组质粒的标记基因是卡那霉素抗性基因，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是杀死甜菜叶柄中的农杆菌，再转入含有卡那霉素的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意：注意抗生素的种类、剂量及作用时间等。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含目的基因的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测阳性无菌苗叶片中的目的基因是否转录出mRNA。在整个过程中，反应体系中的酶有逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶。
故答案为：
（1）降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板划线 中性偏碱
（4）凝胶电泳 质粒和SBPase基因
（5）杀灭农杆菌 卡那霉素 抗生素的种类、剂量及作用时间等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表达情况 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶
【点评】本题考查基因工程与发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
20．（2024 西湖区校级模拟）反硝化细菌是一类能将硝态氮（N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7.2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 KNO3 ，富集培养的目的是 对反硝化细菌进行扩增 。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用 涂布器 （填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH＝6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 设置重复，取平均值，减少实验误差 ，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显 蓝 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5～7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低 。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量N等指标，结果如图所示：
①本研究的目的是 探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 。
②当投菌量达到 5% 时，反硝化效果最好，N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢 （答1点）。
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】图像坐标类简答题；微生物的分离、培养和应用．
【答案】（1）KNO3 对反硝化细菌进行扩增
（2）涂布器 设置重复，取平均值，减少实验误差 蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4）探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 5% 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
【分析】微生物接种常用的两种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后，可形成单菌落。
【解答】解：（1）培养基的成分主要包括碳源、氮源、水、无机盐等，培养基中KNO3含有N，可以提供氮源。富集培养的目的是对反硝化细菌进行扩增，增加目的菌落的数量。
（2）稀释涂布平板法用到涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了设置重复，取平均值，减少实验误差；分析题干，反硝化细菌可以产生碱性物质，BTB是酸碱指示剂碱性条件下为蓝色，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显蓝色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）反硝化细菌和其他微生物都能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低，因此不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌。
（4）①分析题干，该实验的自变量是菌株N1的接种量，因变量是反硝化效果，因此可知，本研究的目的是探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响。
②分析图，当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，—N和总脱氮率反而下降，因为投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢。
故答案为：
（1）KNO3 对反硝化细菌进行扩增
（2）涂布器 设置重复，取平均值，减少实验误差 蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4）探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 5% 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
【点评】本题考查了微生物的培养和分离的相关知识，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。
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高考冲刺押题预测 发酵工程
一．选择题（共16小题）
1．（2024秋 顺义区期末）中国是酿酒历史最古老的国家之一，家酿葡萄酒和工业化生产啤酒的过程均需要（ ）
A．利用醋酸菌无氧呼吸的原理
B．接种人工选育的单一菌种
C．为发酵过程提供适宜的温度
D．对发酵产物进行分离和提纯
2．（2024 邹城市校级模拟）蓝莓果实的主要抗氧化活性成分为花色苷和多酚类物质，具有保护眼睛、抗氧化、消炎、增强记忆、增强免疫和抗癌等多种作用，因此利用蓝莓酿造的蓝莓酒具有较好的保健功能。酿造蓝莓酒的工艺流程为新鲜蓝莓→榨汁→接种→发酵→过滤→蓝莓酒→储存。下列叙述错误的是（ ）
A．蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度
C．接种后需要持续通入无菌空气以加快发酵进程
D．若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理
3．（2024 六合区校级二模）将大肠杆菌培养在含有葡萄糖培养液中，在时间0时，将含大肠杆菌的培养液均分为四组，处理见下表。混匀处理6小时后，将经不同处理的培养液分别涂布在四组不同的平板上，每组涂12个，在37℃下培养24小时，计数每组平板中菌落的平均数。结果如下表所示：下列有关说法，正确的是（ ）
组别 组1 组2 组3 组4
培养液处理 只有葡萄糖 葡萄糖+物质A 葡萄糖+物质B 葡萄糖+物质A+物质B
平板的菌落平均数 长满菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1是对照组，2、3、4组为实验组
B．物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且物质B的抑制作用强于物质A
C．物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来
D．可在培养液（基）中加入酚红试剂鉴别大肠杆菌
4．（2024 河南模拟）黄豆酱是人们喜爱的传统美食，早在春秋时期就有制作方法的相关记载。它以黄豆为主要原料，经米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵而成。劳动人民在制作过程中不断改进发酵技术，总结出以下经验。下列叙述错误的是（ ）
①选用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆与米曲霉混合堆积
③将初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料摊薄，并适当通风
④在装坛时，添加适量食盐
⑤发酵过程中，需保持发酵坛密封
⑥发酵过程中，需定期搅拌
A．①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于发酵坛上部而米曲霉集中于下部
5．（2024 安顺模拟）刺梨是贵州主要特产水果，富含超氧化物歧化酶和大量的维生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用发酵工程生产刺梨果酒和果醋的主要流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌
B．发酵Ⅰ和发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程
D．发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等
6．（2023秋 颍州区校级期末）我国是最早生产酱油的国家。制曲是酱油生产的重要工序之一，其主要目的是给黑曲霉创造最佳条件，使其生长繁殖并分泌和积累相应的酶，制曲设备示意图如图。下列叙述错误的是（ ）
A．黑曲霉不仅可以用于生产酱油，还可以用于生产柠檬酸
B．酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标
C．将曲料摊铺在帘架上有利于控制微生物生长的温度
D．该制曲过程主要的发酵产物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物质
7．（2023秋 颍州区校级期末）无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．生物技术实验中，所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C．配置动物细胞培养基时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D．易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
8．（2023秋 亭湖区校级期末）下列相关说法中，错误的是（ ）
A．利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作过程中，毛霉将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
D．在啤酒生产的主发酵阶段和后发酵阶段，需将温度保持在酵母菌的最适生长温度
9．（2023秋 延边州期末）传统发酵食品的制作中，所对应产物的产生场所，正确的是（ ）
A．制作果酒时，酵母菌产生H2O的场所是线粒体基质
B．制作泡菜时，乳酸菌产生乳酸的场所是细胞质基质
C．制作泡菜时，乳酸菌产生CO2的场所是细胞质基质
D．制作果醋时，醋酸杆菌产生CO2的场所是线粒体基质
10．（2023秋 济宁期末）我国早在9000年前就可以运用发酵技术获得产品，为生活增添丰富的色彩。下列说法正确的是（ ）
A．制作果酒时，可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率
B．利用酵母菌酒精发酵进行传统酿酒过程中，需一直保持无氧的条件
C．泡菜坛装八成满可以防止发酵过程中酵母菌、乳酸菌等产生的CO2使发酵液溢出
D．腐乳鲜美的味道主要由曲霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸引起
11．（2023秋 济宁期末）味精是一种鲜味剂，利用发酵技术生产味精的主要过程为原料→淀粉糖化→通气发酵→发酵产物提取→味精制造→包装。下列说法错误的是（ ）
A．生产味精需要的谷氨酸棒状杆菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行
C．发酵时需将发酵液的pH调节为中性或弱酸性
D．从发酵液中获得谷氨酸需要采取提取、分离和纯化措施
12．（2024春 郫都区校级期中）发酵工程可实现发酵产品的大规模生产，如图为发酵工程的基本环节，相关叙述正确的是（ ）
A．①、②可以是诱变育种或基因工程育种
B．③是发酵工程的中心环节
C．产物浓度的检测必须在发酵结束后进行
D．发酵条件为室温和近中性的pH等
13．（2024秋 河南月考）科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①______（接种方法）接种后培养→将周边出现②______的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的纯培养步骤如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．步骤①需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂
C．步骤③接种时，若在平板上划线4个区，需蘸取酵母菌液4次
D．步骤④培养前需在培养皿皿盖上做好标记
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小组欲利用以下培养基从土壤中分离某种微生物，下列对该实验的后续操作及结果分析正确的是（ ）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸馏水 琼脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培养基先分装到锥形瓶后再进行高压蒸汽灭菌
B．该培养基灭菌后需冷却至40℃再进行倒平板操作
C．用无菌水将土样进行系列稀释，在最后一次稀释后进行涂布接种
D．该无氮培养基可用于硝化细菌等固氮菌的分离与计数
16．（2024秋 如皋市期中）关于消毒和灭菌的叙述，错误的是（ ）
A．利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，属于生物消毒
B．利用紫外线消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．对培养基灭菌时，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度
D．对涂布器灭菌，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧
二．解答题（共4小题）
17．（2024 息县模拟）（一）某食品公司得到一种高效酿酒的酵母菌菌株，并设计方案获得发酵产物。
（1）对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 （A．马铃薯蔗糖培养基；B．MS培养基；C．LB培养基；D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 。
（2）欲知道这种微生物的繁殖速度，可用涂布分离法或 对酵母菌进行计数。对培养到某一时期的培养液制备成10﹣5的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为 个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 （填“a”或“b”）。
（3）该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短和 不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 （填物质）。
（二）目前我国新冠病毒核酸检测的方法是RT﹣PCR，如图为RT﹣PCR（逆转录荧光PCR技术）的原理：PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光（荧光强度与探针水解量成正相关）。
请回答下列问题：
（4）PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是 。RT﹣PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加 酶。除了加酶，解开cDNA双螺旋的方法还有 。
（5）对新冠病毒进行检测时，探针是一段与 相同的核苷酸序列。
（6）通过荧光检测到荧光信号，则可判定该检测样本为 性（选填“阳”、“阴”），在相同PCR循环次数条件下，荧光强度与病毒数量呈 。
（7）为了在没有条件进行核酸检测前及早发现新冠病毒，我国于2022年3月11日推出新冠病毒抗原检测试剂盒作为核酸检测的补充措施，该试剂盒的检测原理是 。试剂盒中的探针应采用 技术生产。
18．（2023秋 宣威市校级期末）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中给微生物持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，某些细菌（如透明颤菌）细胞中也存在。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了如图所示的方案。回答下列问题：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指该菌株在缺少该种氨基酸的培养基上会暂停生长
（1）上图步骤②采用的接种方法是 ，步骤③往培养基中添加的某种物质是 。得到的平板中菌落较 （填“大”或“小”）的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的 ，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的 。
（3）简述图甲步骤⑧从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路： 。
（4）除了上述方案，请再提出一种将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段 。
19．（2023秋 杞县校级期末）回答下列（一）、（二）小题：
（一）如图1是谷氨酸发酵装置示意图，谷氨酸工业上常用谷氨酸棒状杆菌在30℃下发酵获得；如图2是谷氨酸生产的机理，谷氨酸棒状杆菌以葡萄糖为底物进行了如下过程。据图分析，回答下列问题：
（1）如图1中1、2处是发酵罐夹层中冷凝水的进出口，水在发酵罐夹层流动的作用是 。如图1中3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的 。
（2）谷氨酸棒杆菌进行以硫酸二乙酯和紫外线相结合的复合诱变，经选育得到高产突变株LG﹣01．将其接种在含葡萄糖液体培养基中，于30℃下培养48h。摇匀并取培养液稀释107倍后，向四个培养基分别涂布0.1mL该培养液，四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，则稀释前菌液的菌体为 个/mL，计算得到的值比实际值 。
（3）发酵结束后可用接种环蘸取发酵液进行 ，从而纯化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落。此外，此过程需确保培养基的pH环境为 。
（二）甜菜是我国重要的糖料作物之一，为提高甜菜的光合效率和产量。科研工作者构建携带SBPase基因（编码卡尔文循环的关键酶）的表达载体，如图3为重组质粒示意图，通过基因工程对甜菜进行遗传改造。回答下列问题：
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经 鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性内切核酸酶切割 ，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接。经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）获取抗性植株：将含有重组质粒的农杆菌侵染甜菜叶柄并共培养一段时间后，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是 ，再转入含有 的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意 。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含 的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测 。在整个过程中，反应体系中的酶有 。
20．（2024 西湖区校级模拟）反硝化细菌是一类能将硝态氮（N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7.2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 ，富集培养的目的是 。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用 （填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH＝6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 ，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5～7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量N等指标，结果如图所示：
①本研究的目的是 。
②当投菌量达到 时，反硝化效果最好，N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 （答1点）。
高考冲刺押题预测 发酵工程
参考答案与试题解析
一．选择题（共16小题）
1．（2024秋 顺义区期末）中国是酿酒历史最古老的国家之一，家酿葡萄酒和工业化生产啤酒的过程均需要（ ）
A．利用醋酸菌无氧呼吸的原理
B．接种人工选育的单一菌种
C．为发酵过程提供适宜的温度
D．对发酵产物进行分离和提纯
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】发障工程一般包括菌种的选育、扩大培养、培养基的配制、灭菌、接种、发酵、产物的分离、提纯等方面。
【解答】解：A、家酿葡萄酒和工业化生产啤酒利用的是酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理，A错误；
B、家酿葡萄酒不需要接种人工选育的单一菌种，B错误；
C、家酿葡萄酒和工业化生产啤酒均需要为发酵过程提供适宜的温度，C正确；D、家酿葡萄酒不需要对发酵产物进行分离和提纯，D错误。
故选：C。
【点评】本题考查传统发酵技术和发酵工程的相关知识，要求考生识记相关的制作原理和流程，意在考查考生的识记和分析能力。
2．（2024 邹城市校级模拟）蓝莓果实的主要抗氧化活性成分为花色苷和多酚类物质，具有保护眼睛、抗氧化、消炎、增强记忆、增强免疫和抗癌等多种作用，因此利用蓝莓酿造的蓝莓酒具有较好的保健功能。酿造蓝莓酒的工艺流程为新鲜蓝莓→榨汁→接种→发酵→过滤→蓝莓酒→储存。下列叙述错误的是（ ）
A．蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度
C．接种后需要持续通入无菌空气以加快发酵进程
D．若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。
【解答】解：A、果酒的制作离不开酵母菌，在蓝莓酒发酵过程中起主要作用的微生物是酵母菌，A正确；
B、糖可作为酒精发酵的原料，因此对蓝莓汁进行糖度调整可改变蓝莓酒的酒精度，B正确；
C、酵母菌为兼性厌氧菌，酿酒初期需要氧气促进酵母菌的生长、繁殖，后期酵母菌需在无氧环境中进行酒精发酵，C错误；
D、若利用酸性重铬酸钾检测酒精度，需先对蓝莓酒进行脱色处理，排除果酒原有颜色的干扰，D正确。
故选：C。
【点评】本题主要考查果酒的制作等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
3．（2024 六合区校级二模）将大肠杆菌培养在含有葡萄糖培养液中，在时间0时，将含大肠杆菌的培养液均分为四组，处理见下表。混匀处理6小时后，将经不同处理的培养液分别涂布在四组不同的平板上，每组涂12个，在37℃下培养24小时，计数每组平板中菌落的平均数。结果如下表所示：下列有关说法，正确的是（ ）
组别 组1 组2 组3 组4
培养液处理 只有葡萄糖 葡萄糖+物质A 葡萄糖+物质B 葡萄糖+物质A+物质B
平板的菌落平均数 长满菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1是对照组，2、3、4组为实验组
B．物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且物质B的抑制作用强于物质A
C．物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来
D．可在培养液（基）中加入酚红试剂鉴别大肠杆菌
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】数据表格；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
【分析】伊红﹣亚甲蓝琼脂培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽。
【解答】解：A、研究物质A和B对大肠杆菌的共同作用时，组1、2、3均为对照组，组4为实验组，A错误；
B、组2、组3与组1对比可知，物质A和物质B均能抑制大肠杆菌的生长，且作用相当，甚至物质A的抑制作用稍强于物质B，B错误；
C、组4与组2、组3对比可知，当物质A与物质B同时存在时，菌落要比物质A、物质B单独存在要多，说当物质A与物质B同时存在时，有些原来不能存活的大肠杆菌存活下来，C正确；
D、鉴别大肠杆菌可使用的试剂是伊红﹣亚甲蓝试剂，D错误。
故选：C。
【点评】本题考查了微生物的选择培养，需要学生掌握选择培养基的配制。
4．（2024 河南模拟）黄豆酱是人们喜爱的传统美食，早在春秋时期就有制作方法的相关记载。它以黄豆为主要原料，经米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵而成。劳动人民在制作过程中不断改进发酵技术，总结出以下经验。下列叙述错误的是（ ）
①选用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆与米曲霉混合堆积
③将初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料摊薄，并适当通风
④在装坛时，添加适量食盐
⑤发酵过程中，需保持发酵坛密封
⑥发酵过程中，需定期搅拌
A．①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于发酵坛上部而米曲霉集中于下部
【考点】制作泡菜；果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】米曲霉是真菌的一种，米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶（如蛋白酶和脂肪酶）中能将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分。
【解答】解：A、米曲霉能够分泌蛋白酶能够将黄豆酱中的蛋白质分解，而食盐一方面可以抑制杂菌生长，一方面可以调味，故①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质，A正确；
B、米曲霉是好氧菌，且能够分泌蛋白酶将黄豆酱中的蛋白质分解，故②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率，B正确；
C、米曲霉是好氧菌，而酵母菌也可以进行有氧呼吸，故③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖，C正确；
D、乳酸菌属于厌氧菌，米曲霉是好氧菌，故⑤中米曲霉主要集中于发酵坛上部而乳酸菌集中于下部，D错误。
故选：D。
【点评】本题主要考传统发酵技术的应用等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握情况。
5．（2024 安顺模拟）刺梨是贵州主要特产水果，富含超氧化物歧化酶和大量的维生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用发酵工程生产刺梨果酒和果醋的主要流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌
B．发酵Ⅰ和发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程
D．发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等
【考点】果酒、果醋的制作．
【专题】模式图；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】C
【分析】发酵Ⅰ阶段发酵的菌种主要是酵母菌。在发酵Ⅱ阶段，发酵菌种主要是醋酸菌，醋酸菌为需氧菌，可将酒精转化为乙醛，乙醛再转化为醋酸。
【解答】解：A、培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌，避免杂菌污染，A正确；
B、发酵Ⅰ的微生物代谢类型为异养兼性厌氧菌，发酵Ⅱ利用的微生物代谢类型为异养需氧型，B正确；
C、利用刺梨表面的微生物有杂菌且相应的微生物数量少，则可需要接种相应的菌种进行发酵Ⅰ和Ⅱ过程，C错误；
D、发酵的不同时期要严格控制发酵温度、pH和溶氧量等，D正确。
故选：C。
【点评】本题主要考查果酒、果醋的制作等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握。
6．（2023秋 颍州区校级期末）我国是最早生产酱油的国家。制曲是酱油生产的重要工序之一，其主要目的是给黑曲霉创造最佳条件，使其生长繁殖并分泌和积累相应的酶，制曲设备示意图如图。下列叙述错误的是（ ）
A．黑曲霉不仅可以用于生产酱油，还可以用于生产柠檬酸
B．酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标
C．将曲料摊铺在帘架上有利于控制微生物生长的温度
D．该制曲过程主要的发酵产物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物质
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】D
【分析】鼓风机应不断通入经过滤的新鲜空气，为米曲霉的生长提供足量的氧气，为米曲霉生长创做条件，以便其大量繁殖，积累相应的酶。
【解答】解：A、以大豆为主要原料，利用黑曲霉，经一系列步骤可以生产酱油，柠檬酸也是由黑曲霉发酵制得的，A正确；
B、发酵的主要目的是使黑曲霉充分生长繁殖并分泌和积累相应的酶，所以酶及微生物的种类和数量是鉴定成曲质量的指标，B正确；
C、微生物的生长需要适宜的温度，曲料摊铺在帘架上可以及时散热，有利于控制微生物生长的温度，C正确；
D、葡萄糖是发酵的底物，不是产物，D错误。
故选：D。
【点评】本题主要考查发酵工程等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
7．（2023秋 颍州区校级期末）无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．生物技术实验中，所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C．配置动物细胞培养基时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D．易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
【考点】无菌技术 常用的消毒和灭菌方法．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】D
【分析】1、微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵。
2、实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。
【解答】解：A、生物技术实验中，要对所有培养基和培养皿消毒，但是生物材料要根据实际情况来，比如说植物组织培养，外植体只能消毒，不能灭菌，A错误；
B、一般消毒用的是70%的酒精，B错误；
C、抗生素只能杀灭细菌和一部分真菌，不能达到无菌的效果，C错误；
D、易分解的活性物质应该用过滤灭菌，无菌条件下加入无菌培养基，D正确。
故选：D。
【点评】本题主要考查无菌技术等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
8．（2023秋 亭湖区校级期末）下列相关说法中，错误的是（ ）
A．利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作过程中，毛霉将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
D．在啤酒生产的主发酵阶段和后发酵阶段，需将温度保持在酵母菌的最适生长温度
【考点】果酒、果醋的制作；发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；发酵与传统发酵技术．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】D
【分析】1、果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精发酵，果醋的制作利用的是醋酸菌将酒精转变成醋酸的代谢，腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶类，泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸发酵。传统的发酵技术都巧妙的利用了天然菌种，都为特定的菌种提供了良好的生存条件，最终的发酵产物不是单一的组分，而是成分复杂的混合物。
2、果酒用到的葡萄应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。
【解答】解：A、乳酸菌在无氧的条件下将有机物分解为乳酸，利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品，A正确；
B、毛霉会分泌蛋白酶，在腐乳制作过程中，可以将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸，B正确；
C、果酒发酵过程中，酵母菌在无氧条件下产生乙醇，在酸性缺氧的条件下，其他杂菌不能生长，所以乙醇既是果酒发酵的产物，在葡萄糖缺乏，氧气充足的条件下，醋酸菌可以将乙醇氧化为醋酸，所以也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖，C正确；
D、在啤酒生产的主发酵阶段需将温度保持在酵母菌的最适生长温度，后发酵阶段需将温度保持在低温，也就是发酵温度，D错误。
故选：D。
【点评】本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力、运用所学知识综合分析问题的能力。
9．（2023秋 延边州期末）传统发酵食品的制作中，所对应产物的产生场所，正确的是（ ）
A．制作果酒时，酵母菌产生H2O的场所是线粒体基质
B．制作泡菜时，乳酸菌产生乳酸的场所是细胞质基质
C．制作泡菜时，乳酸菌产生CO2的场所是细胞质基质
D．制作果醋时，醋酸杆菌产生CO2的场所是线粒体基质
【考点】果酒、果醋的制作；制作泡菜．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】B
【分析】（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C6H12O6+6O2+12H2O6CO2+12H2O+能量
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量
（2）利用醋酸菌制作果醋的原理
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
C6H12O6+2O2CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+能量
C2H5OH+O2CH3COOH（醋酸）+H2O+能量
【解答】解：A、在制作果酒时，酵母菌进行有氧呼吸产生H2O的场所是线粒体内膜，而不是线粒体基质，A错误；
B、制作泡菜时，乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，无氧呼吸的场所是细胞质基质，B正确；
C、乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，不产生CO2，C错误；
D、醋酸杆菌属于原核生物，没有线粒体，其进行有氧呼吸产生CO2的场所是细胞质基质，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查传统发酵食品的制作等相关知识，意在考查学生的识记能力和熟练应用的能力。
10．（2023秋 济宁期末）我国早在9000年前就可以运用发酵技术获得产品，为生活增添丰富的色彩。下列说法正确的是（ ）
A．制作果酒时，可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率
B．利用酵母菌酒精发酵进行传统酿酒过程中，需一直保持无氧的条件
C．泡菜坛装八成满可以防止发酵过程中酵母菌、乳酸菌等产生的CO2使发酵液溢出
D．腐乳鲜美的味道主要由曲霉分解蛋白质产生的小分子肽和氨基酸引起
【考点】果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术；制作泡菜．
【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】A
【分析】1、制作泡菜的注意事项：
（1）盐水煮沸，一是为了消除杂菌，二是为了除去水中的氧气，冷却再用是为了避免高温杀死坛中蔬菜表面的乳酸菌；
（2）加水密封是为了阻止外面的空气再进入泡菜坛，为乳酸菌发酵制作泡菜创造无氧的环境条件。若此过程中进入大量氧气，可能导致乳酸菌死亡而好氧菌大量繁殖，使菜腐烂；
（3）菜料只能装八成满的原因：初期会有气体产生；要往坛中加盐水没过菜料，所以不能加菜料太满。
2、制作果酒和果醋的注意事项：
（1）发酵瓶和榨计机都要用体积分数为70%的酒精消毒；
（2）葡萄要先冲洗再去枝梗，以免去枝梗时葡萄破碎，增加被杂菌污染的风险；
（3）瓶中留有空间为酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖提供氧气。果酒发酵过程中会产生大量CO2导致瓶内气压升高，需拧松瓶盖放气，但不要完全打开，否则可能会被杂菌污染。
【解答】解：A、制作果酒时，果酒中除了酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等微生物；乳酸菌可能分解果酒中的糖、甘油、酒石酸等，从而使果酒变质；可通过控制发酵的温度、发酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒变质的概率，A正确；
B、利用酵母菌酿制果酒时，初始阶段可往装置中通入一定量空气，使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，后期再密封发酵使酵母菌进行无氧呼吸，产生酒精，B错误；
C、泡菜发酵时，发酵初期酵母菌等的活动会产生气体，使体积膨胀，故泡菜坛装八成满可防止发酵液溢出，乳酸菌只进行无氧呼吸（乳酸发酵）不产生二氧化碳，C错误；
D、多种微生物参与了豆腐的发酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉；腐乳发酵时，发挥主要作用是毛霉，毛霉通过分泌脂肪酶和蛋白酶（不是胰蛋白酶）将豆腐块中的大分子物质分解为易于被人体吸收的小分子物质，有些氨基酸具有特殊的气味而表现出腐乳的风味，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查传统发酵技术的应用的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。
11．（2023秋 济宁期末）味精是一种鲜味剂，利用发酵技术生产味精的主要过程为原料→淀粉糖化→通气发酵→发酵产物提取→味精制造→包装。下列说法错误的是（ ）
A．生产味精需要的谷氨酸棒状杆菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行
C．发酵时需将发酵液的pH调节为中性或弱酸性
D．从发酵液中获得谷氨酸需要采取提取、分离和纯化措施
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】C
【分析】在谷氨酸生产过程中，谷氨酸在细胞内大量积累，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致谷氨酸合成受阻。在发酵过程中，应采用一定手段（如控制磷脂的合成或使细胞膜受损）改变细胞膜的通透性，使谷氨酸迅速排放到细胞外面，从而解除谷氨酸对谷氨酸脱氧酶的抑制作用，提高谷氨酸产量。
【解答】解：A、常用的谷氨酸棒状杆菌为好氧菌，因此培养基中需严格控制溶解氧、通气量等发酵条件，以保证谷氨酸棒状杆菌代谢正常进行，A正确；
B、淀粉的糖化作用是在发酵过程中继续利用微生物所分泌的淀粉酶将碳水化合物分解成葡萄糖、麦芽糖、糊精等，淀粉的糖化分解有利于发酵过程的充分进行，B正确；
C、谷氨酸棒状杆菌在发酵过程中要严格控制发酵液的pH。在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，C错误；
D、发酵结束后，要想获得纯净谷氨酸，应对发酵液进行分离和纯化，D正确。
故选：C。
【点评】本题考查发酵工程的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。
12．（2024春 郫都区校级期中）发酵工程可实现发酵产品的大规模生产，如图为发酵工程的基本环节，相关叙述正确的是（ ）
A．①、②可以是诱变育种或基因工程育种
B．③是发酵工程的中心环节
C．产物浓度的检测必须在发酵结束后进行
D．发酵条件为室温和近中性的pH等
【考点】发酵工程的基本环节．
【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】A
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。
【解答】解：A、优良菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，因此①、②可以是诱变育种或基因工程育种，A正确；
B、③是培养基的灭菌，发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，B错误；
C、在发酵过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度，以了解发酵进程，同时要严格控制发酵条件，如温度、pH、溶解氧，故可能需要适时添加营养物质等，C错误；
D、不同微生物的最适温度和pH值有所不同，因此不同发酵过程温度和pH也有所不同，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查发酵工程的基本环节，要求考生能够结合所学知识准确判断各选项，属于识记和理解层次的考查。
13．（2024秋 河南月考）科研人员计划从含多种微生物的白酒大曲中分离筛选出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒酿造。白酒大曲中产酯化酶微生物初步筛选时所用培养基成分与操作步骤如表所示。下列叙述错误的是（ ）
培养基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，产生透明物质）
操作步骤 将白酒大曲块粉碎制成菌悬液→利用①______（接种方法）接种后培养→将周边出现②______的菌落挑出→重新划线接种至分离纯化平板培养基上→多次重复纯化至得到不同形态的单菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为微生物生长提供氮源
B．筛选产酯化酶的霉菌时，应将培养基在灭菌前调至中性或弱碱性
C．表中①可代表稀释涂布平板法，②处应填透明圈
D．通过划线操作可将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】B
【分析】微生物的营养物质：主要包括水、碳源、氮源、能源、无机盐等，这些物质能够满足微生物的生长、繁殖和参与各种生理活动，促进合成新的细胞和物质，同时将代谢废物排出。
【解答】解：A、表中所示培养基中为微生物的生长提供氮源的物质是牛肉膏和蛋白胨，A正确；
B、若筛选的是产酯化酶的霉菌（真菌），应将培养基在用高压蒸汽灭菌法灭菌前调至酸性，B错误；
C、表中①可代表稀释涂布平板法，聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯会使培养基呈现乳白色，酯化酶可催化乳白色的物质反应，因此若被筛选的微生物能分泌酯化酶，则在其菌落的周围会产生透明圈，因此②处应填透明圈，C正确；
D、利用平板划线法分离得到单菌落的原理是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落，D正确。
故选：B。
【点评】本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，学生具备运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的纯培养步骤如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．步骤①需要在酒精灯火焰旁进行
B．步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂
C．步骤③接种时，若在平板上划线4个区，需蘸取酵母菌液4次
D．步骤④培养前需在培养皿皿盖上做好标记
【考点】微生物的纯培养．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】B
【分析】平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
【解答】解：A、步骤①配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯火焰旁主要是进行无菌操作的区域，如接种等操作，A错误；
B、步骤②培养基凝固后将平板倒置，可减缓培养基中水分蒸发，避免过快干裂，同时也能防止皿盖上的水珠滴落到培养基上造成污染，B正确；
C、步骤③接种时，若在平板上划线4个区，只需蘸取酵母菌液1次，然后通过多次划线逐步稀释菌液，C错误；
D、步骤④培养前需在培养皿底部做好标记，而不是皿盖上，因为如果标记在皿盖上，在培养过程中，皿盖可能会被拿下来放置在不同位置，容易造成标记混乱，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查微生物的培养等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小组欲利用以下培养基从土壤中分离某种微生物，下列对该实验的后续操作及结果分析正确的是（ ）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸馏水 琼脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培养基先分装到锥形瓶后再进行高压蒸汽灭菌
B．该培养基灭菌后需冷却至40℃再进行倒平板操作
C．用无菌水将土样进行系列稀释，在最后一次稀释后进行涂布接种
D．该无氮培养基可用于硝化细菌等固氮菌的分离与计数
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】数据表格；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】A
【分析】1、微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等。有些微生物还需要特殊的营养物质，如维生素、生长因子等。
2、培养基中含有琼脂的一般为固体培养基。
3、选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
【解答】解：A、为有效灭菌并防止分装时培养基污染，配制好的培养基先分装到锥形瓶后，再进行高压蒸汽灭菌，A正确；
B、该培养基灭菌后需冷却至50℃再进行倒平板操作，B错误；
C、用无菌水将土样进行系列稀释，选用一定稀释范围的样液进行涂布接种，C错误；
D、硝化细菌不是固氮菌，D错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查微生物培养的相关知识，难度适中。
16．（2024秋 如皋市期中）关于消毒和灭菌的叙述，错误的是（ ）
A．利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，属于生物消毒
B．利用紫外线消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果
C．对培养基灭菌时，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度
D．对涂布器灭菌，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧
【考点】无菌技术 常用的消毒和灭菌方法．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】B
【分析】实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。
（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【解答】解：A、利用微生物寄生于多种细菌体内使细菌裂解，这属于生物消毒的一种方式，A正确；
B、紫外线消毒的原理是破坏微生物的核酸结构等，而喷洒消毒液后可能会在物体表面形成一层膜等情况，反而可能影响紫外线的穿透，不能加强消毒效果，B错误；
C、对培养基灭菌时，干热灭菌需要在160﹣170℃保持1﹣2小时，湿热灭菌一般是121℃保持15﹣30分钟，干热灭菌比湿热灭菌需要更高的灭菌温度，C正确；
D、对涂布器灭菌时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再放在火焰上灼烧，防止酒精燃烧引发危险，D正确。
故选：B。
【点评】本题主要考查无菌技术等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和熟练应用的能力。
二．解答题（共4小题）
17．（2024 息县模拟）（一）某食品公司得到一种高效酿酒的酵母菌菌株，并设计方案获得发酵产物。
（1）对于酵母菌的培养，比较适合它的培养基为 A （A．马铃薯蔗糖培养基；B．MS培养基；C．LB培养基；D．牛肉汤培养基），除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的 浓度和比例（配比） 。
（2）欲知道这种微生物的繁殖速度，可用涂布分离法或 血细胞计数板（或显微镜计数法） 对酵母菌进行计数。对培养到某一时期的培养液制备成10﹣5的稀释液，每次取0.1mL进行涂布分离，三个培养皿生长的菌落数依次为35个、32个、29个，则培养液中的酵母菌数量为 3.2×107 个/mL。在恒温培养箱培养时，培养皿的放置方式如图 a （填“a”或“b”）。
（3）该酵母菌的发酵食品也会因为发酵时间的长短和 发酵条件、发酵底物 不同，而形成不同的代谢产物，使发酵食品的风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为产生了 醋酸 （填物质）。
（二）目前我国新冠病毒核酸检测的方法是RT﹣PCR，如图为RT﹣PCR（逆转录荧光PCR技术）的原理：PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光（荧光强度与探针水解量成正相关）。
请回答下列问题：
（4）PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是 半保留复制 。RT﹣PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加 逆转录酶 酶。除了加酶，解开cDNA双螺旋的方法还有 加热 。
（5）对新冠病毒进行检测时，探针是一段与 目的基因中特定的核苷酸序列 相同的核苷酸序列。
（6）通过荧光检测到荧光信号，则可判定该检测样本为 阳 性（选填“阳”、“阴”），在相同PCR循环次数条件下，荧光强度与病毒数量呈 正相关 。
（7）为了在没有条件进行核酸检测前及早发现新冠病毒，我国于2022年3月11日推出新冠病毒抗原检测试剂盒作为核酸检测的补充措施，该试剂盒的检测原理是 抗原抗体的特异性结合 。试剂盒中的探针应采用 单克隆抗体 技术生产。
【考点】微生物的数量测定；发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；PCR技术；理解能力．
【答案】（1）A 浓度和比例（配比）
（2）血细胞计数板##或显微镜计数法 3.2×107 a
（3）发酵条件、发酵底物 醋酸
（4）半保留复制 逆转录酶 加热
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）阳 正相关
（7）抗原抗体的特异性结合 单克隆抗体
【分析】1、酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进行酒精发酵，其反应式为：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。温度是影响酵母菌生长的重要因素，酿酒酵母的最适生长温度约为28℃，发酵时，将温度控制在18～30℃进行发酵。
2、人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质﹣培养基，培养基中一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氯源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。
3、微生物的计数方法包括稀释涂布平板法和利用显微镜进行直接计数。
4、稀释涂布平板法需要将样品进行系列梯度稀释，为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
5、利用显微镜进行直接计数是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。
6、逆转录是指在逆转录酶的催化下，以RNA为模板将四种脱氧核苷酸合成为DNA的过程。
7、PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。PCR反应的条件为需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶；同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
【解答】解：（1）由分析可知，酵母菌主要以糖类底物进行呼吸作用产生酒精，因此比较适合的培养为以糖类为碳源的培养基，即A马铃薯蔗糖培养基。除了要选择合适的培养基成分外，还要考虑培养基中营养物质的浓度和比例，以确保微生物能正常生存和发酵产品的品质。
（2）由分析可知，微生物的计数方法有稀释涂布平板法和利用显微镜进行直接计数，显微镜计数法需要使用血细胞计数板对微生物进行计数。根据题意分析，培养液中酵母菌数量为。利用培养皿培养微生物时，需要将培养皿倒置培养，即a所示状况。
（3）在发酵过程中，培养液中的微生物数量、产物浓度，培养液的营养组分，以及温度、pH和溶解氧等发酵条件，不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。因此，发酵食品会因为发酵时间的长短、发酵条件、发酵底物的不同观使其风味发生变化。酿酒时会因为发酵液放置过久等原因，导致出现酸味，可能是因为醋酸菌繁殖产生了醋酸所致。
（4）由分析可知，PCR技术与DNA体内复制的复制方式都是半保留复制。RT﹣PCR过程为逆转录过程，需向装置中添加逆转录酶，以RNA为模板合成cDNA。DNA体内复制中解开DNA双螺旋的是利用解旋酶，在PCR中则是利用加热解开双螺旋。
（5）由图可知，利用探针对新冠病毒进行检测的原理是碱基互补配对和DNA复制，当存在病毒时，以病毒的遗传物质RNA逆转录合成cDNA，探针能与该cDNA通过碱基互补配对结合，当cDNA进行复制时，会水解探针，因此探针是一段与目的基因（病毒的基因）中特定核苷酸序列相同的核苷酸序列。
（6）若检测到荧光信号，说明探针与被检测物结合后被水解，则可判定该检测样本为阳性，在相同PCR循环次数条件下，病毒数量越多，复制时水解的探针越多，则荧光强度越强，即荧光强度与病毒数量呈正相关。
（7）分析题意可知，新冠病毒抗原检测试剂盒的原理是抗原与抗体的特异性结合。与传统方法生产的抗体相比，单克隆抗体具有纯度高、特异性强的特点，因此试剂盒中的探针应采用单克隆抗体技术生产。
故答案为：
（1）A 浓度和比例（配比）
（2）血细胞计数板##或显微镜计数法 3.2×107 a
（3）发酵条件、发酵底物 醋酸
（4）半保留复制 逆转录酶 加热
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）阳 正相关
（7）抗原抗体的特异性结合 单克隆抗体
【点评】本题主要考查微生物的培养与计数和PCR技术等知识，意在考查学生知识的掌握情况和理解水平，利用知识分析解决问题能力，要求学生熟练掌握知识点，形成知识网络，能根据具体题境利用相关知识解决问题。
18．（2023秋 宣威市校级期末）青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中给微生物持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O2的能力，将其引入青霉菌是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，某些细菌（如透明颤菌）细胞中也存在。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了如图所示的方案。回答下列问题：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指该菌株在缺少该种氨基酸的培养基上会暂停生长
（1）上图步骤②采用的接种方法是 稀释涂布平板法 ，步骤③往培养基中添加的某种物质是 硫氨酸 。得到的平板中菌落较 小 （填“大”或“小”）的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的 免疫活性物质 ，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的 蜗牛酶、溶菌酶 。
（3）简述图甲步骤⑧从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路： 用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株 。
（4）除了上述方案，请再提出一种将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段 利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌 。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用；免疫系统的组成．
【专题】正推法；免疫调节；微生物的分离、培养和应用；理解能力．
【答案】（1）稀释涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物质 蜗牛酶、溶菌酶（顺序不可调换）
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株
（4）利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌
【分析】植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。
【解答】解：（1）图中平板上的菌落分布比较均匀，该步骤②采用的接种方法是稀释涂布平板法。经过步骤③之后首先得到甲硫氨酸营养缺陷菌株，所以步骤③往培养基中添加的某种物质是甲硫氨酸，起到筛选菌株的作用；得到的平板中菌落较小的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株，因为该营养缺陷型菌株生长缓慢，繁殖能力比天然菌株差一些。
（2）溶菌酶属于免疫系统组成中的免疫活性物质。蜗牛以植物和真菌为食，可推测其消化道中的酶可以分解真菌的细胞壁，而溶菌酶可以分解细菌的细胞壁，故处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的蜗牛酶、溶菌酶。
（3）处理⑧的目的是要筛选得到杂种菌株，可以根据两种“亲本”菌种的特点，采取双营养缺陷的培养基进行筛选。方案为：用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株。
（4）颤菌属于原核生物，青霉菌属于真核生物，除了上述方案，将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段是：利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌。
故答案为：
（1）稀释涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物质 蜗牛酶、溶菌酶
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他营养成分齐全的培养基培养融合细胞，能够在培养基上生长的即为杂种菌株
（4）利用基因工程技术，将透明颤菌的血红蛋白基因转入青霉菌
【点评】本题考查免疫调节、基因工程和发酵工程的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。
19．（2023秋 杞县校级期末）回答下列（一）、（二）小题：
（一）如图1是谷氨酸发酵装置示意图，谷氨酸工业上常用谷氨酸棒状杆菌在30℃下发酵获得；如图2是谷氨酸生产的机理，谷氨酸棒状杆菌以葡萄糖为底物进行了如下过程。据图分析，回答下列问题：
（1）如图1中1、2处是发酵罐夹层中冷凝水的进出口，水在发酵罐夹层流动的作用是 降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 。如图1中3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的 通透性 。
（2）谷氨酸棒杆菌进行以硫酸二乙酯和紫外线相结合的复合诱变，经选育得到高产突变株LG﹣01．将其接种在含葡萄糖液体培养基中，于30℃下培养48h。摇匀并取培养液稀释107倍后，向四个培养基分别涂布0.1mL该培养液，四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，则稀释前菌液的菌体为 3.3×109 个/mL，计算得到的值比实际值 低 。
（3）发酵结束后可用接种环蘸取发酵液进行 平板划线 ，从而纯化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落。此外，此过程需确保培养基的pH环境为 中性偏碱 。
（二）甜菜是我国重要的糖料作物之一，为提高甜菜的光合效率和产量。科研工作者构建携带SBPase基因（编码卡尔文循环的关键酶）的表达载体，如图3为重组质粒示意图，通过基因工程对甜菜进行遗传改造。回答下列问题：
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经 凝胶电泳 鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性内切核酸酶切割 质粒和SBPase基因 ，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接。经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）获取抗性植株：将含有重组质粒的农杆菌侵染甜菜叶柄并共培养一段时间后，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是 杀灭农杆菌 ，再转入含有 卡那霉素 的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意 抗生素的种类、剂量及作用时间等 。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含 SBPase基因 的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测 SBPase基因的表达情况 。在整个过程中，反应体系中的酶有 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶 。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
【专题】图文信息类简答题；微生物的分离、培养和应用；解决问题能力．
【答案】（1）降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板划线 中性偏碱
（4）凝胶电泳 质粒和SBPase基因
（5）杀灭农杆菌 卡那霉素 抗生素的种类、剂量及作用时间等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表达情况 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶
【分析】1、谷氨酸生产所用菌种是好氧菌，通风和搅拌不仅会影响对氮源和碳源的利用率，而且会影响发酵周期和谷氨酸的合成量，尤其是发酵后期，加大通气量有利于谷氨酸的合成。当菌体生长到稳定期，适当提高温度有利于生产谷氨酸。在发酵过程中，随着营养物质的利用，代谢产物的积累，培养液的pH会不断变化。
2、基因工程是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种。
【解答】解：（1）在利用发酵罐进行发酵的过程中，由于微生物的呼吸作用以及搅拌等都能产生大量的热，使发酵液温度升高，为防止温度过高降低酶的活性，而降低谷氨酸产量，采取了水在发酵罐表层中流动而降温的措施。3为搅拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵。发酵过程中，若谷氨酸积累过量，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而导致该合成途径中断，因此提高产物产量的关键是改变菌体细胞膜的通透性。
（2）四个培养皿生长的菌落依次为31个、2个、35个、33个，第二个数值明显错误应去掉，计算平均菌落数为33个，则稀释前菌液的菌体为33÷0.1×107＝3.3×109，由于当几个细胞连在一起时观察到的是单个菌落，计算得到的值比实际值偏小。
（3）要化谷氨酸棒状杆菌得到单菌落平板划线，此过程需确保培养基的pH环境为中性偏碱。
（4）构建表达载体并导入农杆菌：获取目的基因后利用PCR技术进行扩增，经电泳鉴定后，切割凝胶，再将凝胶溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段，然后使用限制性内切核酸酶切割SBPase基因和质粒，将带有黏性末端的酶切产物纯化回收后，用DNA连接酶连接，经过一系列步骤后，再将测序正确的重组质粒导入农杆菌。
（5）重组质粒的标记基因是卡那霉素抗性基因，先将外植体放在含有羧苄霉素和头孢霉素的培养基中初步培养，目的是杀死甜菜叶柄中的农杆菌，再转入含有卡那霉素的筛选培养基中获得抗性植株。此过程使用抗生素时需注意：注意抗生素的种类、剂量及作用时间等。
（6）为从分子水平上检测抗性植株是否含有目的基因，对抗性植株进行PCR后检测，检测结果如图4所示。CK+组是选用含目的基因的质粒作为阳性对照。
（7）取阳性无菌苗叶片提取总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用目的基因引物进行PCR以检测阳性无菌苗叶片中的目的基因是否转录出mRNA。在整个过程中，反应体系中的酶有逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶。
故答案为：
（1）降温至30℃利于谷氨酸棒状杆菌发酵 谷氨酸棒状杆菌为需氧型微生物，搅拌能增加发酵液中的溶解氧，可使其与营养物质充分接触利于该菌发酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板划线 中性偏碱
（4）凝胶电泳 质粒和SBPase基因
（5）杀灭农杆菌 卡那霉素 抗生素的种类、剂量及作用时间等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表达情况 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶
【点评】本题考查基因工程与发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
20．（2024 西湖区校级模拟）反硝化细菌是一类能将硝态氮（N）通过一系列中间产物（、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7.2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是 KNO3 ，富集培养的目的是 对反硝化细菌进行扩增 。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用 涂布器 （填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH＝6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了 设置重复，取平均值，减少实验误差 ，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显 蓝 色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5～7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是 其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低 。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量N等指标，结果如图所示：
①本研究的目的是 探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 。
②当投菌量达到 5% 时，反硝化效果最好，N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢 （答1点）。
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
【专题】图像坐标类简答题；微生物的分离、培养和应用．
【答案】（1）KNO3 对反硝化细菌进行扩增
（2）涂布器 设置重复，取平均值，减少实验误差 蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4）探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 5% 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
【分析】微生物接种常用的两种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后，可形成单菌落。
【解答】解：（1）培养基的成分主要包括碳源、氮源、水、无机盐等，培养基中KNO3含有N，可以提供氮源。富集培养的目的是对反硝化细菌进行扩增，增加目的菌落的数量。
（2）稀释涂布平板法用到涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了设置重复，取平均值，减少实验误差；分析题干，反硝化细菌可以产生碱性物质，BTB是酸碱指示剂碱性条件下为蓝色，放在30℃环境中培养2～3天后，挑选周围显蓝色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）反硝化细菌和其他微生物都能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低，因此不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌。
（4）①分析题干，该实验的自变量是菌株N1的接种量，因变量是反硝化效果，因此可知，本研究的目的是探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响。
②分析图，当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，—N和总脱氮率反而下降，因为投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢。
故答案为：
（1）KNO3 对反硝化细菌进行扩增
（2）涂布器 设置重复，取平均值，减少实验误差 蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4）探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 5% 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
【点评】本题考查了微生物的培养和分离的相关知识，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断，难度适中。
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品试卷·第 2 页 （共 2 页）
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