（7）蛋白质工程学案__高二生物学人教版（2019）选择性必修三期末易错题集训

（7）蛋白质工程
——高二生物学人教版（2019）选择性必修三期末易错题集训
【易错点分析】
1.对蛋白质工程概念的理解
(1)易错点：混淆蛋白质工程与基因工程。认为蛋白质工程是直接对蛋白质进行改造，或者不清楚蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程
(2)分析：蛋白质工程的操作对象是基因，而非蛋白质本身。因为任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造基因后可遗传，直接改造蛋白质无法遗传。基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程可以制造出符合人类需要的自然界没有的蛋白质
2.蛋白质工程的操作流程
(1)易错点：不清楚流程中各步骤的顺序及对应关系，例如在根据蛋白质的预期功能推测氨基酸序列后，不能正确推出脱氧核苷酸序列，或者对基因修饰或合成的理解不准确
(2)分析：蛋白质工程的基本操作程序是从蛋白质的预期功能出发，设计蛋白质分子的相应结构，推测出氨基酸序列，再根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列，然后进行 DNA 合成、mRNA 合成等。在推测基因中的碱基序列时，由于密码子的简并性，推测出的碱基序列可能不唯一。此外，基因修饰是对现有基因进行改造，基因合成则是合成全新的基因，要根据具体情况选择合适的方法
3.蛋白质工程与基因工程的比较
(1)易错点：不能准确区分两者在操作对象、目的基因、合成蛋白质种类等方面的差异，以及不清楚如何通过 “三看法” 判断是基因工程还是蛋白质工程
(2)分析：蛋白质工程的操作对象是天然基因改造后的基因，基因工程的操作对象是天然基因。基因工程中的目的基因一般为自然界存在的基因，蛋白质工程中的目的基因不是自然界存在的。通过 “三看法” 判断时，一看对基因的操作方法，若仅切割基因未修饰编码蛋白序列或仅加工调控序列，是基因工程；若对编码区进行实质性改造，如碱基替换等，则是蛋白质工程。二看合成的蛋白质种类，合成天然蛋白质是基因工程，合成与天然蛋白质有差异或自然界不存在的蛋白质是蛋白质工程
4.蛋白质工程的应用及相关计算
(1)易错点：在具体案例分析中，不能准确判断是否属于蛋白质工程的成果，或者在涉及氨基酸序列改变、基因碱基数目计算等问题时出错
(2)分析：判断是否为蛋白质工程成果，关键看是否对蛋白质的结构进行了改造，且这种改造是通过改造基因实现的。例如，在山羊乳腺生物反应器中表达出人 α- 抗胰蛋白酶属于基因工程，而将鼠源杂交瘤抗体改造成鼠 - 人嵌合抗体用于癌症治疗则是蛋白质工程。在计算相关碱基数目时，要依据氨基酸与密码子、碱基的对应关系，以及基因的结构特点进行准确推算，同时要考虑到终止密码子等因素
【易错点练习】
1.人工智能在蛋白质工程中的应用，为蛋白质工程的研究带来了新的方法和思路，加速了蛋白质工程的发展进程。下列相关叙述错误的是( )
A.蛋白质工程原理中应用到的生命观念是结构与功能观
B.蛋白质工程最终需要通过改造或合成基因来实现
C.蛋白质工程可通过改造自然界中已存在的基因来实现
D.通过蛋白质工程是要获得自然界中已存在的蛋白质
2.蛋白质工程可以说是基因工程的延伸，下列叙述正确的是( )
A.蛋白质工程需要制备蛋白质晶体，然后通过X射线衍射技术，分析晶体结构，建立蛋白质三维模型后，才能设计预期蛋白质的功能
B.蛋白质工程和基因工程在分子水平对基因进行定点突变时，只能实现碱基对的替换
C.蛋白质工程和基因工程原则上都能生产自然界中不存在的，但是满足人类生产生活需要的蛋白质
D.蛋白质工程可以通过增加酶内部的二硫键数目，来提高酶的热稳定性
3.干扰素是一种具有干扰病毒复制作用的糖蛋白，在临床上被广泛用于治疗病毒感染性疾病。如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸（密码子：UGU、UGC）变成丝氨酸（密码子：UCU、UCC、UCA、UCG），就可以延长干扰素的体外保存时间。下列相关叙述，错误的是( )
A.对干扰素的设计和改造，以基因的结构和功能的关系为基础
B.对干扰素基因进行定点突变（C→G）来实现碱基的替换
C.改造后的干扰素基因仍需导入受体细胞完成表达过程
D.改造后的干扰素的功能与天然干扰素不是完全不同
4.水蛭是我国的传统中药材，主要药理成分水蛭素为水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。拟通过蛋白质工程改造水蛭素结构，提高其抗凝血活性。蛋白质工程流程如图所示。下列关于蛋白质工程叙述正确的是( )
A.蛋白质工程是在分子水平上对DNA分子直接进行操作，定向改变分子的结构
B.图中的b为mRNAa为蛋白质，b和a对应的单体序列都是唯一的
C.通过蛋白质工程改造的水蛭蛋白是自然界已有的蛋白质
D.蛋白质工程改造的水解蛋白过程中不涉及中心法则
5.科学家利用蛋白质工程研制赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，赖脯胰岛素经皮下注射后易吸收、起效快。图示为利用大肠杆菌制备工程菌获取赖脯胰岛素的操作过程，以下叙述错误的是( )
A.该技术属于第二代基因工程，需对基因进行改造或合成
B.该技术能改造现有的蛋白质，也能制造一种新的蛋白质
C.图中①②过程可同时发生
D.基因表达过程中，物质a若发生变化，物质b一定改变
6.天然胰岛素制剂容易形成二聚体或六聚体，皮下注射后往往要逐渐解离为单体，才能发挥作用，在一定程度上延缓了疗效。科学家利用蛋白质工程(基本思路如图)研发出速效胰岛素，已在临床上广泛应用。下列有关叙述正确的是( )
A.当前限制蛋白质工程发展的关键因素是基因工程技术还不成熟
B.从六聚体胰岛素解离为单体形式是将胰岛素水解为氨基酸
C.利用基因工程和蛋白质工程生产胰岛素都经历①②过程
D.利用蛋白质工程生产速效胰岛素要从推测b入手
7.Bt抗虫蛋白的第5号螺旋可在害虫肠上皮细胞膜上形成孔道结构,位于该螺旋疏水部分的第168位组氨酸是维持孔道结构稳定的关键。该孔道结构越稳定,Bt抗虫蛋白对害虫的毒性越大。研究人员拟对该蛋白进行改造以提高其抗虫效果,相关叙述正确的是( )
A.蛋白质工程的实质是在氨基酸分子水平上进行设计和改造蛋白质
B.改造B抗虫蛋白应首先从设计B:抗虫蛋白基因中的脱氧核苷酸序列出发
C.将第168位组氨酸替换成亲水性更强的氨基酸可增强Bt抗虫蛋白的抗虫效果
D.蛋白质工程的实施难度很大,主要是因为需要设计改造的蛋白质有复杂的高级结构
8.T4溶菌酶耐热性差，若将该酶的第3位氨基酸进行改造（如图所示），并使第3位氨基酸和第97位氨基酸之间形成1个二硫键，可以大大提高其耐热性。下列叙述错误的是( )
A.根据T4溶菌酶的氨基酸序列可推测出多种脱氧核苷酸序列
B.T4溶菌酶耐热性提高的原因是其氨基酸的种类和数量均发生改变
C.改造T4溶菌酶可利用基因定点突变技术，对相关基因进行改造
D.改造后的T4溶菌酶需要进行功能鉴定才能应用于生产实践
9.研究人员利用点突变技术将干扰素（IFN）第17位的半胱氨酸诱变为丝氨酸后，发现其抗病毒活性提高了100倍，且这种新型的IFN在-70℃下保存150天后仍然稳定。下列相关叙述错误的是( )
A.点突变技术通常是直接对蛋白质进行操作，使氨基酸改变
B.IFN抗病毒活性发生改变的直接原因是其空间结构发生改变
C.该技术为蛋白质工程，蛋白质工程常利用的工具酶有限制酶和DNA连接酶等
D.经改造后的新型IFN活性强、稳定性高的性状是可以遗传的
10.天然胰岛素易形成二聚体，使得其疗效被延缓。科研人员通过蛋白质工程使胰岛素第28位的脯氨酸替换为天冬氨酸，从而抑制了胰岛素的聚合，由此研发出的速效胰岛素类似物产品已经在临床上广泛应用，以下叙述错误的是( )
A.改造胰岛素的过程实际是改造胰岛素基因的过程
B.若要改变蛋白质的功能，可通过改进蛋白质的氨基酸序列实现
C.可将定点突变技术获得的新的胰岛素基因直接导入大肠杆菌用于发酵生产
D.在通过蛋白质工程对胰岛素改造的过程中，对蛋白质分子结构的了解是非常关键的
11.组织型纤溶酶原激活物(t-PA)能激活纤溶酶原转化为纤溶酶,将沉积在血管内外的纤维蛋白溶解，从而保持血管畅通。T-PA进入血浆后大部分与纤溶酶原激活剂抑制物形成复合物，并迅速失去活性。科学家对其进行改造,增加溶栓效能、减少药用剂量和降低副作用等。下列叙述错误的是( )
A.改造t-PA可通过改造基因或合成基因来实现
B.改造t-PA的过程不需要构建基因表达载体
C.需根据t-PA氨基酸序列合成出相应的基因
D.利用蛋白质工程生产的改造t-PA在自然界中不存在
12.水蛭素可用于预防和治疗血栓。研究发现，将水蛭素第47位的天冬酰胺替换为赖氨酸，其抗凝血活性显著提高，可通过奶牛乳腺生物反应器批量生产活性高的水蛭素。下列相关叙述错误的是( )
A.对水蛭素进行改造的直接操作对象为水蛭素基因
B.改造后的水蛭素为自然界不存在的蛋白质
C.需要将乳腺中特异表达的基因的启动子与目的基因重组在一起
D.水蛭素基因及其mRNA只能从转基因奶牛的乳腺细胞中提取并检测
13.下列关于蛋白质工程应用的叙述，不正确的是( )
A.蛋白质工程实施中最大的难题是需要清楚蛋白质的高级结构
B.蛋白质工程可以改变蛋白质的活性，实质上是通过改造或合成基因来实现的
C.将人的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌产生人的胰岛素的技术属于蛋白质工程
D.蛋白质工程可以对胰岛素进行改造和修饰,合成速效型胰岛素制剂
14.蛋白质工程是新崛起的一项生物工程，又称第二代基因工程。下图为蛋白质工程的流程。下列有关叙述错误的是( )
A.蛋白质工程本质上是对DNA分子改造
B.图中①②过程都会进行碱基互补配对
C.蛋白质工程的起始是从①过程开始的
D.蛋白质工程可以创造自然界中不存在的蛋白质
15.枯草杆菌产生的蛋白酶E是一种胞外碱性蛋白酶,主要添加在洗涤剂中，使衣服上的血迹和汗渍等很容易被洗掉。现利用发酵工程大量生产蛋白酶E。回答下列问题：
(1)为了选育高产的菌种，在培养基中加入脱脂牛奶使平板呈现为乳白色，用_________法接种枯草杆菌,培养后比较_______,挑选出比值较大的菌落。
(2)将挑选出的菌种进行多次的______培养，达到一定的数量后再接种到发酵罐中，这样做的目的是_______。
(3)将发酵培养基和菌种一次性加入发酵罐，直到结束放出发酵液,这种工艺简单但效率较低;如果不断通入新鲜培养基，同时以相同速率抽出发酵液，便可使发酵过程连续化，但是长期的连续发酵中更容易发生________。
(4)在发酵过程中需加入消泡剂，原因是产生过多的泡沫会__________发酵结束后，将发酵液离心并取_____来测定蛋白酶E的活力。
(5)洗涤剂中加增白剂、酶是洗涤剂发展的一个方向，但蛋白酶E在增白剂的作用下容易失活,原因是其第222位的甲硫氨酸容易被氧化。科研人员利用蛋白质工程将这个甲硫氨酸用丙氨酸替代后，大大降低了蛋白酶E对增白剂的敏感性，便可与增白剂混合使用。方法如图①~⑥过程，其中过程②是将重组质粒导入缺失尿苷酶的大肠杆菌内，克隆时将尿嘧啶脱氧核苷代替胸腺嘧啶脱氧核苷作为原料,与腺嘌呤配对，掺入DNA中,得到含U的重组单链环状DNA。
I.该蛋白质工程是通过设计和改造_______获得特定功能的蛋白质。
Ⅱ.过程③经过高温变性后再自然冷却，形成了缺口双链DNA,造成“缺口”的原因是______。过程⑤形成双链环状DNA,下列叙述正确的是_________。
A.过程⑤还需向反应体系中加入dNTP.DNA聚合酶和DNA连接酶
B.该双链环状DNA完全水解的产物为4种含氮碱基、脱氧核糖和磷酸
C.过程①构建的重组质粒与该双链环状DNA相比,仅有个别碱基的替换
D.该双链环状DNA两条链的碱基序列并不完全互补配对
Ⅲ.过程⑥将此双链环状DNA导入含有尿苷酶的枯草杆菌，尿苷酶水解含U的重组单链环状DNA,只有不含U的突变链不断复制。用__________的突变引物作为探针检测,再经脱脂牛奶平板筛选获得目标工程菌。
答案以及解析
1.答案：D
解析：AB、蛋白质工程的基本思路：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因→获得所需要的蛋白质，因此，蛋白质工程原理中应用到的生命观念是结构与功能观，设计的蛋白质，可通过改造或合成基因来实现，AB正确；
CD、蛋白质工程是指以蛋白质分子结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需求，蛋白质工程能对现有的蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，C正确、D错误。
故选D。
2.答案：D
解析：A、蛋白质工程常常先设计预期蛋白质功能，后设计预期蛋白质结构；
B、蛋白质和基因工程在分子水平对基因进行定点突变时，还可以实现碱基对的增添和缺失；
C、蛋白质工程和原则上都能生产自然界中不存在的，但是满足人类生产生活需要的蛋白质，基因工程一般生产已知的；
D、蛋白质工程可以通过增加二硫键数目来提高热稳定性，例如为了提高T4溶菌酶的耐热性，将3号位的异亮氨酸换成半胱氨酸，在3号和97号半胱氨酸之间形成一个二硫键，使得T4溶菌酶耐热性得到提高。
3.答案：A
解析：A、蛋白质工程的目的是根据人们对蛋白质的功能需求改造或制造蛋白质，理论基础是蛋白质的结构与功能相适应，A错误；B、比较半胱氨酸和丝氨酸的密码子，若第二个碱基由G替换为C，就可引起氨基酸的替换，所以基因上发生定点突变（C→G），可实现基因的改造，B正确；C、基因的表达需要众多物质和结构的参与，还需要细胞呼吸提供能量，故改造后的干扰素基因仍需导入受体细胞完成表达过程，C正确；D、改造后的干扰素由于氨基酸序列改变，导致结构改变，从而延长体外保存时间，但其仍具有干扰病毒复制的功能，即改造后的干扰素与天然干扰素的功能不是完全不同，D正确。故选A。
4.答案：A
解析：A、蛋白质工程直接的操作对象是水蛭素基因，是在分子水平上对DNA分子直接进行操作，定向改变分子的结构，A正确；B、据图可知，物质a是具有氨基酸序列的多肽链，物质b是mRNA。在生产过程中，物质b可能不同，原因是密码子的简并性，即一种氨基酸可能对应几个密码子，B错误；C、通过蛋白质工程改造的水蛭蛋白是自然界没有的蛋白质，C错误；D、根据中心法则逆推以确定目的基因的碱基序列，涉及到了中心法则，D错误。故选A。
5.答案：D
解析：A、该技术是蛋白质工程，是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，操作对象也是DNA，需对基因进行改造或合成，A正确；
B、蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需，B正确；
C、图中①为转录，②为翻译，大肠杆菌是原核生物，没有核膜，转录和翻译可同时进行，C正确；
D、物质a为mRNA，mRNA序列改变，由于密码子的简并性，最终编码的氨基酸序列可能不变，D错误。
故选D。
6.答案：C
解析：A、当前限制蛋白质工程发展的关键因素是蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，而这种高级结构往往很复杂，人们对蛋白质的高级结构了解太少，A错误；B、由题干信息可知，经过蛋白质工程改造后，发挥作用的仍是胰岛素分子，所以从六聚体胰岛素解离为单体形式是将六个胰岛素形成的六聚体水解为单个胰岛素的过程，B错误；C、利用基因工程和蛋白质工程生产胰岛素都经历找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）→转录（①）形成mRNA(c)→翻译（②）获得所需要的蛋白质过程，C正确；D、蛋白质工程中，首先根据预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构，因此利用蛋白质工程生产速效胰岛素要从设计预期的蛋白质结构（a）入手，D错误。故选C。
7.答案：D
解析：蛋白质工程的基本流程为:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→获得所需要的蛋白质,因此蛋白质工程的实质是在DNA分子水平上进行设计和改造蛋白质,A错误;改造Bt抗虫蛋白属于蛋白质工程,应首先从设计预期的蛋白质功能出发,B错误;据题意可知,该螺旋疏水部分的第168位组氨酸是维持孔道结构稳定的关键,该孔道结构越稳定,Bt抗虫蛋白对害虫的毒性越大,故将第168位组氨酸替换成亲水性更强的氨基酸会减弱Bt抗虫蛋白的抗虫效果,C错误;多数蛋白质除具有一级结构外,还具有复杂的高级结构,即空间结构,而很多蛋白质的空间结构人们目前还不清楚,因此实施蛋白质工程的难度很大,D正确。
8.答案：B
解析：A、由于一种氨基酸可能对应多种密码子，因此根据设计的T4溶菌酶的氨基酸序列可能推测出多种脱氧核苷酸序列，A正确；B、根据题意“科学家通过相关研究，最终使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸”可知，T4溶菌酶耐热性提高的原因是组成该酶的氨基酸种类和排列顺序发生了改变，而氨基酸的数量没变，B错误；C、根据题意，改造T4溶菌酶可以从合成蛋白质的基因进行改造，因此可利用基因定点突变技术，对相关基因进行改造，C正确；D、该实例将蛋白质进行了改造，属于蛋白质工程的范畴，T4溶菌酶本质为蛋白质，可利用抗原—抗体特异性结合的特点对该酶进行检测，D正确。故选B。
9.答案：A
解析：A、点突变技术属于蛋白质工程，蛋白质工程直接改造的对象是基因，A错误；
B、IFN抗病毒活性发生改变的直接原因是其空间结构发生改变，B正确；
C、蛋白质工程是第二代基因工程，基因工程利用的工具酶有限制酶和DNA连接酶等，C正确；
D、蛋白质工程改造的是控制蛋白质合成的基因，因此经改造后的新型IFN的性状可以遗传，D正确。
故选A。
10.答案：C
解析：A、蛋白质工程最终还是回到基因工程上来解决蛋白质的合成，即改造胰岛素的过程实际是改造胰岛素基因的过程，A正确；B、蛋白质结构多样性的直接原因构成蛋白质的氨基酸的种类、数目、排列顺序和肽链的空间结构千差万别，结构决定功能，因此若要改变蛋白质的功能，可通过改进蛋白质的氨基酸序列实现，B正确；C、将改造后获得的速效胰岛素基因直接导入大肠杆菌，没有进行基因表达载体的构建，目的基因在受体细胞中可能无法复制、表达，C错误；D、蛋白质工程的基本途径是预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），因此在通过蛋白质工程对胰岛素改造的过程中，对蛋白质分子结构的了解是非常关键的，D正确。
故选C。
11.答案：B
解析：改造蛋白质需要改造基因或合成基因来实现，A正确；通过蛋白质工程改造t-PA的过程仍需要构建基因表达载体，B错误；根据中心法则逆推以确定目的基因的碱基序列：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），故推测出改造t-PA应有的氨基酸序列之后，需要根据其氨基酸序列合成相应DNA,C正确；利用蛋白质工程生产的蛋白质是自然界中不存在的蛋白质，D正确。
12.答案：D
解析：A、对水蛭素的改造是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，属于蛋白质工程的范畴，A正确;B、改造水蛭素的过程涉及蛋白质工程，这是一种能够生产自然界不存在的蛋白质的技术，改造后的水蛭素为自然界不存在的蛋白质，B正确;C、通过奶牛乳腺生物反应器批量生产活性高的水蛭素，因此需要将乳腺中特异表达的基因的启动子与目的基因重组在一起，C正确;D、转基因奶牛的所有细胞中都含有水蛭素基因，只是在乳腺细胞中进行选择性表达，D错误，故选D。
13.答案：C
解析：蛋白质发挥功能依赖其高级结构，而蛋白质的高级结构十分复杂。科学家要设计出更加符合人类需要的蛋白质，还需要不断地攻坚克难，A正确。基因决定蛋白质，因此利用蛋白质工程改变蛋白质的活性，实质上是通过改造或合成基因来实现的，B正确。将人的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌产生人的胰岛素的技术属于基因工程，C错误。蛋白质工程可以通过改造胰岛素基因，对胰岛素进行改造和修饰，合成速效型胰岛素制剂，D正确。
14.答案：C
解析：A、蛋白质工程本质上是对DNA分子改造，A正确；B、图中①表示转录过程，②表示翻译过程，都会进行碱基互补配对，B正确；C、蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），蛋白质工程是从④开始的，C错误；D、蛋白质工程可以创造自然界中不存在的蛋白质，D正确。故选C。
15.答案：(1)(稀释)涂布平板;透明圈直径与菌落直径比值
(2)扩大;可以缩短菌种在发酵罐中发酵的时间
(3)杂菌污染、菌种变异
(4)占据发酵罐的容积、降低发酵效率、影响通气和搅拌操作的正常进行;上清液
(5)I.蛋白酶E基因;Ⅱ.缺口双链DNA是质粒的一条链与含U的重组单链环状DNA碱基配对形成的,质粒不含蛋白酶E基因片段;ACD;Ⅲ.放射性同位素标记
解析：(1)脱脂牛奶富含蛋白质,蛋白酶E能分解蛋白质从而使乳白色的培养基上出现透明圈,筛选高产蛋白酶E的菌种应采用稀释涂布平板法接种枯草杆菌,培养后挑选出透明圈直径与菌落直径比值大的菌落。
(2)挑选出的菌种要进行多次的扩大培养,达到一定的数量后再接种到发酵罐中,这样可以缩短菌种在发酵罐中发酵的时间。
(3)不断通入新鲜培养基,同时以相同速率抽出发酵液,可使发酵过程连续化,但是更容易发生杂菌污染、菌种变异等情况。
(4)在发酵过程中会产生很多泡沫,过多气泡会占据发酵罐的容积,使原料容易溢出,还影响通气和搅拌操作的正常进行,降低发酵效率。目标产物枯草杆菌蛋白酶E是胞外酶,发酵结束后,将发酵液离心后应取上清液。
(5)Ⅰ.该蛋白质工程是通过设计和改造蛋白酶E基因获得特定功能的蛋白质。Ⅱ.由图可知,重组质粒具有蛋白酶E基因片段,步骤③是将质粒与重组单链环状DNA杂交,质粒的一条链因缺少蛋白酶E基因片段而形成缺口。过程⑤以缺口双链DNA为模板,利用突变引物,合成双链环状DNA,该过程需要dNTP作为原料、DNA聚合酶延伸缺口处的脱氧核苷酸序列,还需要DNA连接酶将延伸完的脱氧核苷酸链连接成环状,A正确;该双链环状DNA完全水解的产物为5种含氨碱基、脱氧核糖和磷酸,B错误;过程①构建的重组质粒与该双链环状DNA相比,仅有部分T替换成了U,C正确;该双链环状DNA中编码第222位丙氨酸的序列与另一条链的对应序列不能碱基互补配对,因此该双链环状DNA两条链的碱基序列并不完全互补配对,D正确。