四川省眉山市仁寿第一中学校北校区2024-2025学年高二下学期半期生物试卷（含答案）
文档属性
| 名称 | 四川省眉山市仁寿第一中学校北校区2024-2025学年高二下学期半期生物试卷（含答案） |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 1.3MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 通用版 | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2025-06-23 22:26:57 | ||
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文档简介
四川省眉山市仁寿一中北校区2024-2025学年高二下学期半期考试
生物试题
一、单选题
1．基塘农业是水体立体农业综合利用的典型代表，塘中养鱼、基上种桑、桑叶养蚕，形成水陆互养的农业生态系统。下图表示桑基鱼塘模式。下列叙述错误的是（ ）
A．该生态工程建设遵循了循环、整体等原理
B．根据鱼塘面积确定鱼种及饲养密度遵循了协调原理
C．该生态农业提高了当地环境承载力，满足人口发展要求
D．蚕丝文化、生态农业科普旅游体现了生物多样性的间接价值
2．下图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。下列说法错误的是（ ）
A．米曲霉发酵过程中，大豆中蛋白质可为米曲霉的生长提供氮源
B．米曲霉分泌的酶可将大分子有机物水解为小分子有机物
C．发酵池发酵阶段应密封进行，酵母菌与米曲霉对氧气需求相同
D．发酵池中两种主要微生物产生的酒精、乳酸可以抑制杂菌生长
3．下图为啤酒生产的主要流程，下列相关叙述错误的是（ ）
A．粉碎的目的是有利于麦芽中的淀粉与a-淀粉酶充分接触，缩短糖化过程时间
B．麦汁煮沸的主要目的是抑制糖化过程后残留酶的活性同时杀死麦汁中微生物
C．加入酒花的主要目的是提供酵母菌菌种有利于主发酵进行并产生大量酒精
D．主发酵结束后发酵液还要在低温密闭的环境下储存一段时间才能形成成熟啤酒
4．制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。醋酸菌属于好氧型原核生物，常用于食用醋的发酵。下列叙述错误的是（ ）
A．食用醋的酸味主要来源于乙酸 B．醋酸菌不适宜在无氧条件下生存
C．醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶 D．葡萄糖在醋酸菌中的氧化分解发生在线粒体内
5．下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（ ）
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
6．某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB、TrpC、TrpE（仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图示培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现1区域的两增和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述错误的是（ ）
A．TrpC菌株继续生长增殖的一端为靠近1区域的一端
B．3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外
C．该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为中性或弱碱性
D．TrpE菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸的酶
7．迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是（ ）
A．迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体
B．诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸
C．悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团
D．茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率
8．基因定点突变的目的是通过定向地改变基因内一个或少数几个碱基来改变多肽链上一个或几个氨基酸。该技术是蛋白质工程的重要技术。下图为利用重叠延伸PCR技术进行定点突变的流程，图中引物2和引物3中凸起位置为突变碱基所在位点。以下相关叙述错误的是（ ）
A．由于基因决定蛋白质，因此要对蛋白质的结构进行设计改造，最终还必须通过改造或合成基因来完成
B．A酶应为耐高温DNA聚合酶，从4种引物中选择引物1和4进行PCR可得大量完整的突变基因
C．将引物1、引物2、引物3和引物4置于同一个反应系统中同时进行第一个阶段的反应，缩短实验时间
D．利用图示流程技术可以将两个不同的基因拼接到一起
9．下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述正确的是（ ）
A．通常采用培养法或化学诱导法使精子获得能量后进行体外受精
B．哺乳动物体外受精后的早期胚胎培养不需要额外提供营养物质
C．克隆牛技术涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等过程
D．将小鼠桑葚胚分割成2等份获得同卵双胎的过程属于有性生殖
10．通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS 细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是（ ）
A．两种方法都需要运用动物细胞培养技术，需要将细胞置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中
B．利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质均与患者的完全相同，因此移植后不会发生免疫排斥反应
C．可利用农杆菌转化法或显微注射法将Oct3/4 基因、Sox基因、c-Myc 基因和Klf基因导入成纤维细胞
D．图2中卵母细胞去核实际去除的是纺锤体—染色体复合物，核移植时供体细胞不用去核，可整个注入去核的卵母细胞中
11．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（ ）
A．整个提取过程中可以不使用离心机
B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中
C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变
D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰
12．关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（ ）
A．琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小
B．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置
C．在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快
D．琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来
13．研究发现，为心梗患者注射适量t-PA蛋白会诱发颅内出血，但若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血等副作用，改良后的t-PA蛋白成为心梗和脑血栓的急救药。下图所示，通过基因工程大量制备改良药物t-PA蛋白，下列说法错误的是（ ）
A．制备改良t-PA蛋白的过程属于蛋白质工程
B．利用重组pCLY11质粒可获得牛乳腺生物反应器
C．选用限制酶Xmal和BglⅡ切割质粒pCLY11，构建重组质粒
D．成功导入重组质粒的受体细胞在含有新霉素的培养基上能存活，且呈现蓝色
14．人凝血酶Ⅲ是一种分泌蛋白，可预防和治疗急慢性血栓。重组人凝血酶Ⅲ是世界上首个上市的动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白药物。下列相关叙述错误的是（ ）
A．可从人细胞中提取RNA后利用逆转录PCR技术获取目的基因
B．目的基因的上游需连接在乳腺细胞中特异表达基因的启动子
C．用显微注射技术将表达载体导入乳腺细胞来获得转基因动物
D．若用大肠杆菌作为受体细胞难以获得活性高的人凝血酶Ⅲ
15．利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”。我国科研人员将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞后（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．“孤雌小鼠”的染色体条数与代孕母鼠相同，且所有“孤雌小鼠”一定都为雌性
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
16．生物技术安全是国家安全体系的重要组成部分。规范生物技术研究、防止生物技术滥用，才能保障人民生命健康。下列关于生物技术的安全性和伦理问题的分析，合理的是（ ）
A．转基因作物若被动物食用，目的基因会转入到动物体细胞中
B．将a-淀粉酶基因与目的基因同时转入植物中，可防止基因污染
C．生殖性克隆和治疗性克隆的本质是相同的，都会面临伦理问题
D．若加工后的转基因产品不含转基因成分，则不必进行转基因标识
二、解答题
17．测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：
(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在 旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的 操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于 培养基，制备培养基时需要采用 法灭菌。
(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10ml待测水样加入到90ml无菌水中，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为 个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是 。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，培养基配方中则必需添加 （水、无机盐、碳源、氮源）。
18．通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势（甲耐盐、乙高产），培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答问题。
(1)A是 酶，B是 。
(2)由C形成植株的过程利用了 技术，经过 才能形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成幼苗。
(3)植物体细胞融合成功的标志是 。
(4)在培养过程中，培养基中要加入一定的植物激素，使用激素的顺序和比例都影响细胞的发育，生长素与细胞分裂素的比值 （填“高”“低”或“相当”）有利于根的分化。
(5)若要获得脱毒苗，外植体往往取自植物的茎尖等处的分生组织，其原因是 。
19．目前最常利用杂交瘤杂交法来制备特异性抗体。长春花是野生花卉，其所含长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是某双特异性抗体作用图，下图2是科研人员通过杂交一杂交瘤细胞技术(免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体部分过程。请回答下列问题:
(1)与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合方法是 ，过程②选用的骨髓瘤细胞 (选填“能”或“不能”)在HAT培养基上生长。
(2)图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是 。图2方框内需要经过 次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为细胞密度过大、 等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
(3)图2中③选出的杂交瘤细胞，还需进行 和 ，才能筛选出足够量的 的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是 。
(4)与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是 。
20．为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向（注：目的基因序列中无所给限制酶的识别序列）。
(1)利用PCR扩增LEA基因时，需要在引物的 （填“3′端”或“5′端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶最合理的是 ，选择上述酶的依据是 。
(2)为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增时加入的引物的碱基序列为5′ 3′和5′ 3′（请写出引物碱基序列），扩增 代后会得到等长的8条DNA片段。
(3)乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。
①在分子水平上，用 方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是 。
三、实验题
21．近年来，科学家们开发了一种新型核酶，其催化机理如图1，其中该酶的5′和3′端的臂具有靶向识别作用，环状部位为催化活性部位。因此，可通过人工化学合成不同序列的新型核酶，“指哪打哪”，对目标核酸底物进行特异性切割。
(1)据图1可推知，构成该新型核酶的基本单位是________。
A．氨基酸 B．核糖核苷酸
C．葡萄糖 D．脱氧核苷酸
(2)据图1和所学知识判定，该新型核酶不具有的酶学性质是________。
A．催化具有高效性 B．催化切割单链RNA
C．催化具有序列特异性 D．高温会使其丧失稳定性
若改变实验条件，使DNA局部区域拆分为单链，那么该新型核酶也可以对目标DNA的特定位点进行切割，如图2所示。
(3)该新型核酶与限制酶相比，不同之处包括 （编号选填）。
①只能切割单链
②可切割DNA和RNA
③可人为设计该酶的序列，随意定位
(4)由图2可推知，可利用该新型核酶代替限制酶进行重组DNA操作。进行此项操作，在反应体系中加入质粒后，后续的流程应为 （编号选填并排序）。
①添加新型核酶
②添加DNA聚合酶
③导入受体细胞
④添加目的基因
⑤添加DNA连接酶
⑥筛选含重组质粒的细胞
(5)结直肠癌（CRC）是我国最常见的恶性肿瘤，大约40%的CRC是因KRAS基因突变导致的。为了验证该新型核酶的作用，科学家们人工合成了长度为14个核苷酸的KRAS-mRNA区域（含突变位点），然后再用该新型核酶进行切割，实验结果证实该新型核酶可将该KRAS-mRNA切成两段。现需进一步验证该新型核酶在癌细胞内也能把KRAS-mRNA切成两段，科学家已经用该新型核酶处理癌细胞中的核酸，并从中提取分离出KRAS-mRNA；请利用PCR等技术完成后续实验。简要写出实验设计思路： 。
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 D C C D D A B C C D
题号 11 12 13 14 15 16
答案 A A D C D B
17．(1)酒精灯火焰
(2) 接种 固体 高压蒸汽灭菌
(3)3100
(4) 有无核膜为界限的（成形的）细胞核 水、无机盐、氮源
18．(1) 纤维素酶和果胶 融合的原生质体（杂种细胞）
(2) 植物组织培养 脱分化
(3)再生出细胞壁
(4)高
(5)植物生长点附近的细胞病毒浓度很低甚至无病毒
19．(1) 灭活的病毒 不能
(2) 刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 2 有害代谢物的积累/培养液中营养物质缺乏
(3) 克隆化培养 (专一)抗体检测 既能无限增殖又能产生特异性抗体 特异性强、灵敏度高、可大量制备
(4)双特异性单克隆抗体能将抗药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
20．(1) 5′端 EcoR V和Xba I Luc中存在BamH I识别序列，BamH I会将Luc切断；一种酶切会导致载体、LEA自身环化及LEA反向连接
(2) -GATATCATGGGC- -TCTAGACTAGTG- 4/四
(3) 抗原-抗体杂交 在干旱胁迫的环境下，LEA通过促进AC的表达使植物油脂增加；VOC通过抑制ATGL的表达减弱油脂的降低
21．(1)D
(2)D
(3)①②③
(4)④①⑤③⑥或①④⑤③⑥
(5)先将提取分离的mRNA逆转录形成cDNA，再用PCR技术扩增，之后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物
生物试题
一、单选题
1．基塘农业是水体立体农业综合利用的典型代表，塘中养鱼、基上种桑、桑叶养蚕，形成水陆互养的农业生态系统。下图表示桑基鱼塘模式。下列叙述错误的是（ ）
A．该生态工程建设遵循了循环、整体等原理
B．根据鱼塘面积确定鱼种及饲养密度遵循了协调原理
C．该生态农业提高了当地环境承载力，满足人口发展要求
D．蚕丝文化、生态农业科普旅游体现了生物多样性的间接价值
2．下图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。下列说法错误的是（ ）
A．米曲霉发酵过程中，大豆中蛋白质可为米曲霉的生长提供氮源
B．米曲霉分泌的酶可将大分子有机物水解为小分子有机物
C．发酵池发酵阶段应密封进行，酵母菌与米曲霉对氧气需求相同
D．发酵池中两种主要微生物产生的酒精、乳酸可以抑制杂菌生长
3．下图为啤酒生产的主要流程，下列相关叙述错误的是（ ）
A．粉碎的目的是有利于麦芽中的淀粉与a-淀粉酶充分接触，缩短糖化过程时间
B．麦汁煮沸的主要目的是抑制糖化过程后残留酶的活性同时杀死麦汁中微生物
C．加入酒花的主要目的是提供酵母菌菌种有利于主发酵进行并产生大量酒精
D．主发酵结束后发酵液还要在低温密闭的环境下储存一段时间才能形成成熟啤酒
4．制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。醋酸菌属于好氧型原核生物，常用于食用醋的发酵。下列叙述错误的是（ ）
A．食用醋的酸味主要来源于乙酸 B．醋酸菌不适宜在无氧条件下生存
C．醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶 D．葡萄糖在醋酸菌中的氧化分解发生在线粒体内
5．下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（ ）
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
6．某野生型细菌能通过图1途径合成色氨酸，从而在不含色氨酸的培养基上正常生长繁殖，而其突变株则不能。将突变株TrpB、TrpC、TrpE（仅图1中的某一步受阻）分别划线接种在图示培养基的I、Ⅱ、Ⅲ区域，培养短时间内三个区域均有少量细菌生长增殖，继续培养后发现1区域的两增和Ⅱ区域的一端的菌株继续生长增殖，而Ⅲ区域菌株不再生长。下列叙述错误的是（ ）
A．TrpC菌株继续生长增殖的一端为靠近1区域的一端
B．3种突变菌株均能将积累的中间产物分泌到细胞外
C．该培养基中含有少量色氨酸，酸碱度为中性或弱碱性
D．TrpE菌株不再生长是由于缺乏催化吲哚合成色氨酸的酶
7．迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是（ ）
A．迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体
B．诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸
C．悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团
D．茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率
8．基因定点突变的目的是通过定向地改变基因内一个或少数几个碱基来改变多肽链上一个或几个氨基酸。该技术是蛋白质工程的重要技术。下图为利用重叠延伸PCR技术进行定点突变的流程，图中引物2和引物3中凸起位置为突变碱基所在位点。以下相关叙述错误的是（ ）
A．由于基因决定蛋白质，因此要对蛋白质的结构进行设计改造，最终还必须通过改造或合成基因来完成
B．A酶应为耐高温DNA聚合酶，从4种引物中选择引物1和4进行PCR可得大量完整的突变基因
C．将引物1、引物2、引物3和引物4置于同一个反应系统中同时进行第一个阶段的反应，缩短实验时间
D．利用图示流程技术可以将两个不同的基因拼接到一起
9．下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述正确的是（ ）
A．通常采用培养法或化学诱导法使精子获得能量后进行体外受精
B．哺乳动物体外受精后的早期胚胎培养不需要额外提供营养物质
C．克隆牛技术涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等过程
D．将小鼠桑葚胚分割成2等份获得同卵双胎的过程属于有性生殖
10．通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS 细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是（ ）
A．两种方法都需要运用动物细胞培养技术，需要将细胞置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中
B．利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质均与患者的完全相同，因此移植后不会发生免疫排斥反应
C．可利用农杆菌转化法或显微注射法将Oct3/4 基因、Sox基因、c-Myc 基因和Klf基因导入成纤维细胞
D．图2中卵母细胞去核实际去除的是纺锤体—染色体复合物，核移植时供体细胞不用去核，可整个注入去核的卵母细胞中
11．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（ ）
A．整个提取过程中可以不使用离心机
B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中
C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变
D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰
12．关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（ ）
A．琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小
B．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置
C．在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快
D．琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来
13．研究发现，为心梗患者注射适量t-PA蛋白会诱发颅内出血，但若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血等副作用，改良后的t-PA蛋白成为心梗和脑血栓的急救药。下图所示，通过基因工程大量制备改良药物t-PA蛋白，下列说法错误的是（ ）
A．制备改良t-PA蛋白的过程属于蛋白质工程
B．利用重组pCLY11质粒可获得牛乳腺生物反应器
C．选用限制酶Xmal和BglⅡ切割质粒pCLY11，构建重组质粒
D．成功导入重组质粒的受体细胞在含有新霉素的培养基上能存活，且呈现蓝色
14．人凝血酶Ⅲ是一种分泌蛋白，可预防和治疗急慢性血栓。重组人凝血酶Ⅲ是世界上首个上市的动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白药物。下列相关叙述错误的是（ ）
A．可从人细胞中提取RNA后利用逆转录PCR技术获取目的基因
B．目的基因的上游需连接在乳腺细胞中特异表达基因的启动子
C．用显微注射技术将表达载体导入乳腺细胞来获得转基因动物
D．若用大肠杆菌作为受体细胞难以获得活性高的人凝血酶Ⅲ
15．利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”。我国科研人员将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞后（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理后该基因可正常表达
B．“极体”注入“修饰后的次级卵母细胞”后，可通过电融合法使两细胞融合
C．“孤雌小鼠”的染色体条数与代孕母鼠相同，且所有“孤雌小鼠”一定都为雌性
D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同
16．生物技术安全是国家安全体系的重要组成部分。规范生物技术研究、防止生物技术滥用，才能保障人民生命健康。下列关于生物技术的安全性和伦理问题的分析，合理的是（ ）
A．转基因作物若被动物食用，目的基因会转入到动物体细胞中
B．将a-淀粉酶基因与目的基因同时转入植物中，可防止基因污染
C．生殖性克隆和治疗性克隆的本质是相同的，都会面临伦理问题
D．若加工后的转基因产品不含转基因成分，则不必进行转基因标识
二、解答题
17．测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：
(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在 旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的 操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于 培养基，制备培养基时需要采用 法灭菌。
(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10ml待测水样加入到90ml无菌水中，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为 个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是 。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，培养基配方中则必需添加 （水、无机盐、碳源、氮源）。
18．通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势（甲耐盐、乙高产），培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答问题。
(1)A是 酶，B是 。
(2)由C形成植株的过程利用了 技术，经过 才能形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成幼苗。
(3)植物体细胞融合成功的标志是 。
(4)在培养过程中，培养基中要加入一定的植物激素，使用激素的顺序和比例都影响细胞的发育，生长素与细胞分裂素的比值 （填“高”“低”或“相当”）有利于根的分化。
(5)若要获得脱毒苗，外植体往往取自植物的茎尖等处的分生组织，其原因是 。
19．目前最常利用杂交瘤杂交法来制备特异性抗体。长春花是野生花卉，其所含长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是某双特异性抗体作用图，下图2是科研人员通过杂交一杂交瘤细胞技术(免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体部分过程。请回答下列问题:
(1)与植物体细胞杂交相比，图2中过程②特有的诱导融合方法是 ，过程②选用的骨髓瘤细胞 (选填“能”或“不能”)在HAT培养基上生长。
(2)图2中①步骤注射癌胚抗原的目的是 。图2方框内需要经过 次筛选，才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为细胞密度过大、 等因素而分裂受阻，需进行传代培养。
(3)图2中③选出的杂交瘤细胞，还需进行 和 ，才能筛选出足够量的 的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是 。
(4)与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是 。
20．为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向（注：目的基因序列中无所给限制酶的识别序列）。
(1)利用PCR扩增LEA基因时，需要在引物的 （填“3′端”或“5′端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶最合理的是 ，选择上述酶的依据是 。
(2)为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增时加入的引物的碱基序列为5′ 3′和5′ 3′（请写出引物碱基序列），扩增 代后会得到等长的8条DNA片段。
(3)乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。
①在分子水平上，用 方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是 。
三、实验题
21．近年来，科学家们开发了一种新型核酶，其催化机理如图1，其中该酶的5′和3′端的臂具有靶向识别作用，环状部位为催化活性部位。因此，可通过人工化学合成不同序列的新型核酶，“指哪打哪”，对目标核酸底物进行特异性切割。
(1)据图1可推知，构成该新型核酶的基本单位是________。
A．氨基酸 B．核糖核苷酸
C．葡萄糖 D．脱氧核苷酸
(2)据图1和所学知识判定，该新型核酶不具有的酶学性质是________。
A．催化具有高效性 B．催化切割单链RNA
C．催化具有序列特异性 D．高温会使其丧失稳定性
若改变实验条件，使DNA局部区域拆分为单链，那么该新型核酶也可以对目标DNA的特定位点进行切割，如图2所示。
(3)该新型核酶与限制酶相比，不同之处包括 （编号选填）。
①只能切割单链
②可切割DNA和RNA
③可人为设计该酶的序列，随意定位
(4)由图2可推知，可利用该新型核酶代替限制酶进行重组DNA操作。进行此项操作，在反应体系中加入质粒后，后续的流程应为 （编号选填并排序）。
①添加新型核酶
②添加DNA聚合酶
③导入受体细胞
④添加目的基因
⑤添加DNA连接酶
⑥筛选含重组质粒的细胞
(5)结直肠癌（CRC）是我国最常见的恶性肿瘤，大约40%的CRC是因KRAS基因突变导致的。为了验证该新型核酶的作用，科学家们人工合成了长度为14个核苷酸的KRAS-mRNA区域（含突变位点），然后再用该新型核酶进行切割，实验结果证实该新型核酶可将该KRAS-mRNA切成两段。现需进一步验证该新型核酶在癌细胞内也能把KRAS-mRNA切成两段，科学家已经用该新型核酶处理癌细胞中的核酸，并从中提取分离出KRAS-mRNA；请利用PCR等技术完成后续实验。简要写出实验设计思路： 。
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 D C C D D A B C C D
题号 11 12 13 14 15 16
答案 A A D C D B
17．(1)酒精灯火焰
(2) 接种 固体 高压蒸汽灭菌
(3)3100
(4) 有无核膜为界限的（成形的）细胞核 水、无机盐、氮源
18．(1) 纤维素酶和果胶 融合的原生质体（杂种细胞）
(2) 植物组织培养 脱分化
(3)再生出细胞壁
(4)高
(5)植物生长点附近的细胞病毒浓度很低甚至无病毒
19．(1) 灭活的病毒 不能
(2) 刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 2 有害代谢物的积累/培养液中营养物质缺乏
(3) 克隆化培养 (专一)抗体检测 既能无限增殖又能产生特异性抗体 特异性强、灵敏度高、可大量制备
(4)双特异性单克隆抗体能将抗药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
20．(1) 5′端 EcoR V和Xba I Luc中存在BamH I识别序列，BamH I会将Luc切断；一种酶切会导致载体、LEA自身环化及LEA反向连接
(2) -GATATCATGGGC- -TCTAGACTAGTG- 4/四
(3) 抗原-抗体杂交 在干旱胁迫的环境下，LEA通过促进AC的表达使植物油脂增加；VOC通过抑制ATGL的表达减弱油脂的降低
21．(1)D
(2)D
(3)①②③
(4)④①⑤③⑥或①④⑤③⑥
(5)先将提取分离的mRNA逆转录形成cDNA，再用PCR技术扩增，之后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物
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