【高考突破方案】选择性必修三 专题10 第3讲　植物细胞工程 -讲义（教师版） 高考生物一轮复习

第3讲　植物细胞工程
1.阐明植物组织培养是在一定条件下，将离体植物器官、组织和细胞在适宜的培养条件下诱导形成愈伤组织，并重新分化，最终形成完整植株的过程 2.概述植物体细胞杂交是将不同植物体细胞在一定条件下融合成杂合细胞，继而培育成新植物体的技术 3.举例说明植物细胞工程利用快速繁殖、脱毒、次生代谢产物生产、育种等方式有效提高了生产效率 科学思维 通过建立植物组织培养、植物体细胞杂交流程图，理解植物体细胞杂交的原理
科学探究 探究植物细胞工程的应用
社会责任 正确看待植物细胞工程在生产生活中的应用
1.细胞工程
(1)概念
原理、方法 细胞生物学、分子生物学和__发育生物学__等
操作水平 __细胞器__、细胞或组织水平
目的 获得特定的细胞、__组织__、__器官__、个体或其产品
(2)分类：植物细胞工程和动物细胞工程。
2.植物组织培养
(1)原理——细胞的全能性
(2)流程简图
外植体愈伤组织胚状体(长出芽和根)植株
①脱分化：在一定的激素和营养等条件的诱导下，__已经分化__的细胞，失去其特有的结构和功能，转变成__未分化__的细胞的过程。
②再分化：__愈伤组织__重新分化形成芽、根等器官的过程。
(3)实例——菊花的组织培养
①原理：植物细胞的全能性。
②方法步骤
3.植物体细胞杂交技术
(1)概念：将__不同__来源的植物体细胞，在一定条件下融合成__杂种细胞__，并把杂种细胞培育成__新植物体__的技术。
(2)操作流程
①去壁：对应图中__a__过程，即去除__细胞壁__，获得具有活力的原生质体，用到的酶是__纤维素酶和果胶酶__。
②诱导融合：对应图中__b__过程，即原生质体的融合。
③培养：过程d是__植物组织培养__，其原理是__植物细胞的全能性__。
(3)意义：在打破__生殖隔离__，实现__远缘__杂交育种，培育植物新品种等方面展示出独特的优势。
4.植物细胞工程的实际应用
(1)植物繁殖的新途径
(2)作物新品种的培育：单倍体育种、__突变体__的利用。
(3)细胞产物的工厂化生产
①次生代谢物：是一类__小分子__有机化合物，在植物抗病、抗虫等方面发挥作用，也是很多药物、香料和色素等的重要来源。
②细胞产物的工厂化生产：人们利用__植物细胞培养__来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。
③原理——植物细胞培养：是指在__离体__条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其__增殖__的技术。
④过程
外植体愈伤组织细胞悬液细胞产物
【易错易混自纠】
(1)培养基添加生长素和细胞分裂素后，愈伤组织一定能发育成完整的植株。( × )
提示：培养基添加生长素和细胞分裂素后，要有合适的生长素和细胞分裂素的比例，还要有光照条件才能发育成完整的植株。
(2)植物的每个细胞在植物体内和体外都能表现出全能性。( × )
提示：在植物体体内，在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性表达，所以并不是所有的细胞都能表现出全能性。
(3)在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞。 ( × )
提示：在植物细胞融合之前必须用纤维素酶和果胶酶去掉细胞壁。
(4)同一株绿色开花植物不同部位的细胞经组织培养获得的植株基因都是相同的。( × )
提示：不一定。如果取的都是体细胞，那么基因都是相同的；如果取的是花粉，就会形成单倍体，基因可能不同。
(5)单倍体育种和突变体培育的遗传学原理是一致的。( × )
提示：单倍体育种的原理是染色体变异，突变体培育的原理主要是基因突变。
1.(选择性必修3 P35)从繁殖方式上看，植物组织培养属于哪种繁殖方式？为什么？__无性繁殖。植物组织培养是在细胞有丝分裂和细胞分化的基础上实现的，此过程并没有生殖细胞的产生，所以是无性繁殖__。
2.(选择性必修3 P35)植物组织培养离体的细胞能表达全能性的原因是__离体细胞含有本物种全部的遗传信息__，若不离体这些细胞在母体上发生__基因选择性表达__而分化。
3.(选择性必修3 P40正文拓展)脱毒苗与抗毒苗有何区别？作物脱毒时应选取哪里的组织进行组织培养？原因是什么？
__①脱毒苗是选择植物的分生区如茎尖(刚形成，不含有病毒)进行组织培养而获得的，属于细胞工程的范畴。一般选取根尖或茎尖的分生区；植物的分生区病毒极少，甚至无病毒，用分生区细胞进行组织培养，就能得到大量的脱毒苗。②抗毒苗是把某抗病毒基因导入受体细胞中，并通过一定的方法培养形成的，属于基因工程的范畴__。
教材拾遗
1.(选择性必修3 P35探究·实践)在菊花组织培养过程中，诱导外植体脱分化形成愈伤组织的培养基所需的碳源为什么一般用蔗糖，而不用葡萄糖？
__蔗糖既可提供充足的碳源，又可维持相对适中的渗透压，而葡萄糖在与蔗糖提供相同数量碳源的前提下，其造成的渗透压可能过高__。
2.(选择性必修3 P41相关信息)初生代谢是__生物生长和生存所必需的代谢活动__，因此在整个生命过程中它一直进行着。初生代谢物有__糖类__、__脂质__、__蛋白质__和核酸等。次生代谢不是生物生长所必需的，一般在__特定的组织或者器官__中，并在__一定的环境和时间__条件下才进行。
考点　植物细胞工程
1.植物组织培养的关键
(1)条件：离体，一定营养物质，激素(生长素、细胞分裂素)等。
(2)培养基状态：固体培养基(有诱导愈伤组织的培养基、有诱导生根的培养基及诱导生芽的培养基)。
(3)体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。
(4)光照的应用：脱分化阶段一般不需要给予光照；再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。
2.植物激素对植物组织培养的影响
(1)按照不同的顺序使用激素，会得到不同的实验结果
使用顺序 实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂也分化
同时使用 分化频率提高
(2)当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向
生长素/细胞分裂素 植物细胞的发育方向
高 有利于根的分化、抑制芽的形成
低 有利于芽的分化、抑制根的形成
适中 促进愈伤组织的形成
　　3.植物体细胞杂交和有性杂交的辨析
4.植物组织培养与植物体细胞杂交的区别与联系
名称 植物组织培养 植物体细胞杂交
原理 细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性和细胞的全能性
过程 离体的植物器官、组织或细胞 ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽或胚状体 ↓发育 植物体
选材 选取根尖、茎尖、形成层部位最容易诱导脱分化 不同种的植物体细胞融合后形成杂种细胞
技术 操作 脱分化、再分化等 除脱分化、再分化外，还要用酶解法去除细胞壁，用一定的方法诱导原生质体融合
关系 植物组织培养是植物体细胞杂交的基础，植物体细胞杂交所用的技术更复杂
结合植物组织培养，考查科学思维
1.(2024·北京一模)某科学小组探索长寿花组织培养过程中外植体的消毒条件，实验结果如下表。下列分析不正确的是(　　)
2%次氯酸钠处理时间/min 8 10 12
75%酒精处理时间/min 20 30 40 20 30 40 20 30 40
污染率/% 25.6 21.1 13.3 22.2 16.7 12.2 20 17.8 8.9
褐化率/% 0 0 8.9 0 5.6 14.4 7.8 16.7 16.7
注：褐化是指培养材料在组培过程中向培养基中释放褐色物质，并变褐死亡的现象。
A.消毒处理时间越长，组织培养成功率越高
B.消毒处理时间越长，外植体的污染率越低
C.诱导培养外植体脱分化为愈伤组织的过程中一般不需要光照
D.组织培养过程中提高生长素与细胞分裂素的比例有助于生根
【答案】A
结合植物体细胞杂交过程，考查科学思维和科学探究
2.(2024·海南期末)从紫草(2N＝14)中提取的紫草宁能抗葡萄球菌、枯草杆菌及某些真菌，并能抑制流感病毒，可用于治疗皮炎、牛皮癣等。青蒿素是从黄花蒿(2N＝18)茎叶中提取的一种代谢产物，主要用于间日疟、恶性疟的症状控制。某科研小组为培育能生产紫草宁的黄花蒿，进行了不对称体细胞杂交，如图为培育过程。根据所学知识回答下列问题：
(1)过程①的处理为______________。过程②可采用的方法是________________(答出1点)。能产生紫草宁的黄花蒿植株的遗传信息来源是________________。
(2)图中杂种细胞形成的标志是________________。过程③④所用培养基中需要添加的植物激素为________________。图中②③④过程所利用的原理是________________________。在图中愈伤组织中提取不到青蒿素，需将其培养成黄花蒿植株后从叶片中提取，根本原因可能是____________________。
(3)与从紫草植株幼苗中提取紫草宁相比，利用植物细胞培养生产紫草宁的优点有____________________________(答出2点)。
【答案】(1)去除细胞壁　PEG融合法　黄花蒿和紫草　(2)细胞壁的再生　生长素和细胞分裂素　细胞膜的流动性、植物细胞的全能性　基因的选择性表达　(3)不占用耕地，几乎不受季节、天气等的限制
3.(2024·湖南一模)(不定项)为获得利福平和链霉素双抗的黄色短杆菌菌株，科研人员用现有的甲、乙两种菌株进行细菌细胞融合(基本过程与植物体细胞杂交一致)。菌株甲抗利福平(Rifr)但对链霉素敏感(StrS)，菌株乙抗链霉素(Strr)但对利福平敏感(RifS)。下列叙述正确的是(　　)
A.过程①中需要用纤维素酶和果胶酶处理细菌甲和细菌乙
B.为避免原生质体失水而影响融合，应将制备好的原生质体置于低渗环境中
C.融合子有3种，可用含利福平和链霉素的固体培养基进行筛选
D.过程②体现了细胞膜的流动性，PEG同样也可以诱导动物细胞融合
【解析】CD　细菌细胞融合与植物体细胞杂交的基本过程一致，首先都是要去除细胞壁，细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，不能使用纤维素酶和果胶酶来处理，A错误；失去细胞壁保护的原生质体更容易受到外界环境的影响，在低渗环境中很容易吸水涨破，因此制备好的原生质体应该置于等渗环境中，B错误；形成的两两融合的融合子共有3种，分别是菌株甲互融、菌株乙互融、菌株甲与菌株乙互融，其中只有菌株甲与菌株乙互融形成的融合子才是所需要的双抗菌株，可用含有利福平和链霉素的固体培养基进行筛选，C正确；过程②是原生质体甲、乙相互融合的过程，该过程体现了细胞膜的流动性，PEG是常用的细胞融合诱导剂，除此之外还可以诱导动物细胞融合以及植物细胞的融合，D正确。
围绕植物细胞工程的应用，考查理论与实践相结合
4.(2024·山东一模)紫草宁是从紫草细胞中提取的一种药物和色素，具有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性。利用植物细胞培养生产紫草宁的基本过程如下图所示。下列叙述正确的是(　　)
→→→→
A.为提高愈伤组织的诱导速率，诱导时应给予适当时间和强度的光照
B.悬浮振荡培养前，需用胰蛋白酶从愈伤组织中分离出具活性的单个细胞
C.植物细胞培养时易发生突变，需筛选出高产突变体才能用来制备生物反应器
D.紫草宁是紫草细胞的初生代谢物，是紫草细胞基本生命活动所必需的产物
【解析】C　光照不利于愈伤组织形成，因此形成愈伤组织的过程中不需要光照，A错误。在动物细胞培养过程中，需用胰蛋白酶将组织分散成单个细胞，制成细胞悬液，防止接触抑制，在植物细胞培养时不用胰蛋白酶，B错误。组织培养过程中，愈伤组织易受到培养条件和外界环境的影响而发生突变，进而发育成为新品种，所以可通过从中筛选获得高产的突变体制备生物反应器，C正确。紫草宁是从紫草细胞中提取的一种药物和色素，具有抗菌、消炎和抗肿瘤等活性。紫草宁属于次生代谢产物，D错误。
5.(2024·天津一模)植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用。下图列举了几项成果。下列叙述错误的是(　　)
A.三种成果的获得过程中，都发生了基因的选择性表达
B.①过程获得脱毒苗是因为该过程发生了基因突变产生了抗病毒基因
C.②过程可以提高隐性性状的出现概率
D.③主要利用了细胞增殖的原理
【解析】B　愈伤组织之后发生了再分化，细胞分化的实质是基因的选择性表达，A正确；切取一定大小的茎尖进行组织培养，再生的植株就有可能不带病毒，从而获得脱毒苗，B错误；若单倍体植株只含有一个染色体组，染色体加倍后隐性性状容易出现，C正确；植物细胞培养：指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术，原理为细胞增殖，D正确。
6.(2024·黑龙江模拟)水果红提中富含槲皮素，槲皮素具有抗氧化、抗癌等多种生物活性。科研人员利用二倍体红提和植物F，采用多种途径尝试培育不同品种，培育途径如图所示，其中①～⑤表示过程。请回答下列问题：
(1)图中过程________(填序号)均采用了植物组织培养技术，细胞主要经过了________和________过程，最终发育为完整植株。
(2)在过程③中，对愈伤组织进行细胞培养，可实现槲皮素的工厂化生产，这是因为愈伤组织具有______________________的特点。
(3)途径丁采用______________技术培育红提—F杂种植物，其中过程④需要先用__________________处理获得原生质体，再用一定方法诱导，多次筛选后，得到杂种细胞。诱导细胞融合的常用化学方法有___________________________(至少答出1种)。
(4)图中植物A～F中，属于四倍体植物的有______________。
【答案】(1)①③⑤　脱分化　再分化　(2)未分化，分裂能力强　(3)植物体细胞杂交　纤维素酶和果胶酶　聚乙二醇(PEG)融合法或高Ca2+—高pH融合法　(4)植株E、植株G
【解析】(1)图中①为花药离体培养，②为人工诱导染色体加倍，③为植物组织培养，④为植物体细胞融合，⑤是植物组织培养，因此图中过程①③⑤均采用了植物组织培养技术，细胞主要经过了脱分化和再分化过程，最终发育为完整植株。(2)槲皮素的工厂化生产是因为愈伤组织是未分化的细胞，分裂能力强，常采用植物细胞培养技术，进行扩大培养后再提取。(3)途径丁采用植物体细胞杂交技术培育红提—F杂种植物，其中过程④需要先用纤维素酶和果胶酶处理形成原生质体，再用一定方法诱导，多次筛选后，才能获得融合的杂种细胞。诱导植物细胞融合的常用化学方法有聚乙二醇(PEG)融合法或高Ca2+—高pH融合法等。(4)植株A是有性生殖产生的二倍体，植株B是单倍体，植株C是单倍体育种获得的纯合二倍体，植株D是植物组织培养技术获得的二倍体，植株E是多倍体育种获得的四倍体，植株G是植物体细胞杂交技术获得的四倍体，因此属于四倍体植物的有植株E、植株G。
1.(2024·甘肃卷)兰州百合栽培过程中易受病毒侵染，造成品质退化。某研究小组尝试通过组织培养技术获得脱毒苗，操作流程如下图。下列叙述正确的是 (　　)
A.①为脱分化过程，1号培养基中的愈伤组织是排列规则的薄壁组织团块
B.②为再分化过程，愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变或基因重组
C.3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值大于1
D.百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，可以作为该研究中的外植体
【解析】D　在脱分化过程中，1号培养基中的愈伤组织是排列不规则的薄壁组织团块，A错误；愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变，但基因重组发生在减数分裂过程中，B错误；3号培养基用于诱导生根，其细胞分裂素浓度与生长素浓度的比值应该小于1，C错误；百合分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，因此可以作为该研究中的外植体，D正确。
2.(2024·吉林卷)迷迭香酸具有多种药理活性。进行工厂化生产时，先诱导外植体形成愈伤组织，再进行细胞悬浮培养获得迷迭香酸，加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量。下列叙述错误的是(　　)
A.迷迭香顶端幼嫩的茎段适合用作外植体
B.诱导愈伤组织时需加入NAA和脱落酸
C.悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团
D.茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物的合成速率
【解析】B　迷迭香顶端幼嫩的茎段生长旺盛，分裂能力较强，适合用作外植体，A正确；诱导愈伤组织时需加入NAA和细胞分裂素，B错误；悬浮培养时需将愈伤组织打散成单个细胞或较小的细胞团，获得更多的营养物质和氧气，使得其可以进一步分裂，C正确；加入诱导剂茉莉酸甲酯可大幅提高产量，推测茉莉酸甲酯改变了迷迭香次生代谢产物(不是植物生长所必需的)的合成速率，D正确。
3.(2024·安徽卷)植物细胞悬浮培养技术在生产中已得到应用。某兴趣小组尝试利用该技术培养胡萝卜细胞并获取番茄红素，设计了以下实验流程和培养装置(如图)，请同学们进行评议。下列评议不合理的是(　　)
A.实验流程中应该用果胶酶等处理愈伤组织，制备悬浮细胞
B.装置中的充气管应置于液面上方，该管可同时作为排气管
C.装置充气口需要增设无菌滤器，用于防止杂菌污染培养液
D.细胞培养需要适宜的温度，装置需增设温度监测和控制设备
【解析】B　装置中的充气管应置于液面下方，以利于培养液中的溶氧量的增加，该管不能同时作为排气管，B错误。
4.(2024·山东卷)(不定项)下列关于植物愈伤组织的说法，正确的是(　　)
A.用果胶酶和胶原蛋白酶去除愈伤组织的细胞壁获得原生质体
B.融合的原生质体需再生出细胞壁后才能形成愈伤组织
C.体细胞杂交获得的杂种植株细胞中具有来自亲本的2个细胞核
D.通过愈伤组织再生出多个完整植株的过程属于无性繁殖
【答案】BD
5.(2024·湖北卷)植物甲抗旱、抗病性强，植物乙分蘖能力强、结实性好。科研人员通过植物体细胞杂交技术培育出兼有甲、乙优良性状的植物丙，过程如下图所示。下列叙述错误的是(　　)
A.过程①中酶处理的时间差异，原因可能是两种亲本的细胞壁结构有差异
B.过程②中常采用灭活的仙台病毒或PEG诱导原生质体融合
C.过程④和⑤的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素
D.可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株
【解析】B　酶解是为了去除植物细胞的细胞壁，过程①中酶处理的时间不同，说明两种亲本的细胞壁结构有差异，A正确；过程②为原生质体的融合，常用PEG诱导原生质体融合，灭活的仙台病毒可诱导动物细胞融合，不能用于植物，B错误；过程④脱分化和⑤再分化的培养基中均需要添加生长素和细胞分裂素，但在两个过程中比例不同，C正确；植物丙是植物甲和植物乙体细胞杂交形成的个体，应具备两者的遗传物质，因此可通过分析植物丙的染色体，来鉴定其是否为杂种植株，D正确。
6.(2024·浙江6月选考改编)植物体在干旱、虫害或微生物侵害等胁迫过程中会产生防御物质，这类物质属于次生代谢产物。次生代谢产物在植物抗虫、抗病等方面发挥作用，也是药物、香料和色素等的重要来源。次生代谢产物X的研发流程如下：
筛选高产细胞→细胞生长和产物X合成关系的确定→发酵生产X
回答下列问题：
(1)获得高产细胞时，以X含量高的植物品种的器官和组织作为________，经脱分化形成愈伤组织，然后通过液体振荡和用一定孔径的筛网进行________获得分散的单细胞。
(2)对分离获得的单细胞进行________培养，并通过添加过量的胸苷或营养缺陷培养方法获取细胞周期同步、遗传和代谢稳定、来源单一的细胞群。为进一步提高目标细胞的X含量，将微生物菌体或其产物作为诱导子加入培养基中，该过程模拟了____________的胁迫。
(3)在大规模培养高产细胞前，需了解植物细胞生长和产物合成的关系。培养细胞生产次生代谢产物的模型分为3种，如图所示。若X只在细胞生长停止后才能合成，则X的合成符合图______(填“甲”“乙”或“丙”)，根据该图所示的关系，从培养阶段及其目标角度，提出获得大量X的方法：________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(4)多种次生代谢产物在根部合成与积累，如人参、三叶青等药用植物，可通过______的水培养替代细胞悬浮培养生产次生代谢产物。随着基因组测序和功能基因组学的发展，在全面了解生物体合成某次生代谢产物的______________和______________的基础上，可利用合成生物学的方法改造酵母菌等微生物，利用________________工程生产植物的次生代谢产物。
【答案】(1)外植体　过滤　(2)扩大　微生物侵害　(3)丙　将细胞培养至稳定期(即停止生长时期)一定时间后，通过分离提纯获得大量X　(4)根　相关基因组成　基因表达过程　基因工程和发酵
(2024·山东期末)多肉植物因其观赏性和耐旱易栽培的特点受到越来越多人的喜爱。研究人员以叶插繁殖能力强的多肉植物长寿花为实验材料，通过使用改良的“切—浸—芽”(CDB)方法实现了多肉植物的遗传转化和基因编辑，为多肉植物的遗传改良开辟了新途径。图甲、图乙分别表示利用常规转化法和CDB法对长寿花进行基因改造的一般流程。回答下列问题：
(1)无菌操作是图甲操作成功的关键，诱导愈伤组织的固体培养基分装后应采用________________法灭菌。当①过程的培养基中细胞分裂素和生长素的比例大于1时，有利于诱导______(填“生根”或“生芽”)；该过程还需要提供光照，目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(2)为测试图乙CDB方法能否对长寿花实现遗传转化，研究人员用携带绿色荧光蛋白基因(EGFP)和除草剂抗性基因(bar)的农杆菌K599侵染外植体B，再将被侵染的外植体放入充满湿润土壤的培养箱中培养。紫外灯下，实现遗传转化的转基因芽表现为____________；农杆菌侵染能将EGFP和bar等外源基因递送
到外植体B细胞中的原理是__________________________________________________________________________________。为确定转化效率，研究人员以感染农杆菌的100个外植体培养获得的转基因长寿花B1为材料，采取下表多种方式进行鉴定，下表中①～③依次代表__________________；表中检测目标的检出比例从大到小依次是________________________________________________________________________。
方法 检测对象 检测目标 检出比例
PCR扩增 基因组DNA bar基因 a1
分子杂交 ① bar基因转录产物 a2
② 总蛋白质 bar基因翻译产物 a3
③ 幼苗 抗除草剂幼苗 a4
　　(3)为了进一步确定CDB方法能否用于传递基因编辑工具，研究人员选择与叶绿素合成有关的叶绿烯去饱和酶基因(PDS)作为靶基因进行基因编辑实验，构建了用于敲除PDS的CRISPR/Cas9基因编辑载体。鉴定导入长寿花B1中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是____________________________，依据是______________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(4)与图甲相比，图乙通过CDB方法对长寿花进行的遗传转化不需要经过____________________过程，因而具有操作简单、培养周期短的优点。
【答案】(1)高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)　生芽　诱导形成叶绿素，使试管苗能够进行光合作用　(2)发出绿色荧光　外源基因EGFP和bar插入农杆菌Ti质粒上的T－DNA后可一起转移到被侵染的外植体细胞中，并与外植体细胞的染色体DNA整合到一起　①总mRNA；②抗原—抗体杂交；③喷洒除草剂　a1 >a2 >a3>a4　(3)观察长寿花幼苗是否表现出白化性状　PDS基因缺失会导致植株无法合成叶绿素，表现为白化，出现白化苗则说明通过基因编辑技术成功实现了PDS基因的敲除　(4)脱分化和再分化(或植物组织培养)