【高考突破方案】选择性必修三 专题10 第4讲　动物细胞工程 -讲义（教师版） 高考生物一轮复习

第4讲　动物细胞工程
1.阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础 2.阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程 3.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术 5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值 科学思维 建立动物细胞培养与单克隆抗体制备的基本流程模型
科学探究 探究单克隆抗体制备的过程及其应用
社会责任 关注细胞工程的最新科技进展，关注克隆动物及其对人类社会的可能影响
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养——动物细胞工程技术的基础
(1)地位：动物细胞工程常用的技术包括__动物细胞培养__、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中__动物细胞培养__是动物细胞工程的基础。
(2)概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成__单个细胞__，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞__生长和增殖__的技术。
(3)培养条件
(4)动物细胞培养的过程
①过程
②相关概念
a.细胞贴壁：__细胞悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上__。
b.细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互__接触__时，细胞停止分裂增殖的现象。
c.原代培养：分瓶之前的细胞培养，即动物细胞经处理后的__初次__培养。
d.传代培养：分瓶之后的细胞培养。
2.干细胞培养及其应用
(1)干细胞
①概念：干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，与组织、器官的发育、再生和修复密切相关，在一定条件下可以__分化__成其他类型细胞的细胞。
②分布：早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中。
③种类及应用
种类 胚胎干细胞 (ES细胞) 成体干细胞 诱导多能干细胞 (iPS细胞)
来源 __早期胚胎__ 骨髓造血干细胞、神经系统神经干细胞和睾丸中的精原干细胞等 体细胞(如成纤维细胞等)
特点 能分化成任何一种细胞，并形成组织和器官，甚至成为__个体__ 分化成__特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力__ 能诱导分化成类似__胚胎干细胞__的细胞
应用 分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等 造血干细胞用于治疗白血病，神经干细胞用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病等 治疗镰状细胞贫血、阿尔茨海默病、心血管疾病等
【易错易混自纠】
(1)制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。( × )
提示：因为细胞外液的pH是7.35～7.45，而胃蛋白酶的最适pH是1.5，所以制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，不能用胃蛋白酶处理而是用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。
(2)肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸。( × )
提示：通入5%的CO2是为了维持培养液的pH。
(3)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞。( × )
提示：培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上是贴壁生长的，只会形成单层细胞。
(4)动物细胞培养时，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。( √ )
(5)可借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞。( √ )
二、动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.动物细胞融合
2.单克隆抗体及其应用
(1)原理：一种B淋巴细胞在抗原的刺激下，只能产生一种针对这种抗原的特异性抗体；__骨髓瘤__细胞能够无限增殖；B淋巴细胞与其融合后形成的__杂交瘤__细胞在体外培养时可大量增殖并获得所需抗体。
(2)制备过程
(3)单克隆抗体的优点及应用
【易错易混自纠】
(1)植物原生质体融合与动物细胞融合的原理是相同的。( √ )
(2)灭活是用物理或化学手段杀灭细菌或病毒，使其各种结构都失去相应的功能。( × )
提示：灭活是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
(3)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种细胞类型(若仅考虑两两融合的情况)。( √ )
(4)灭活的病毒能促进动物细胞融合，但不能促进植物细胞融合。( √ )
三、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1.动物体细胞核移植技术的概念、原理及类型
2.体细胞核移植的过程(以克隆高产奶牛为例)
3.动物体细胞核移植技术的应用前景及存在问题
(1)应用前景
(2)存在问题
【易错易混自纠】
(1)动物细胞核移植的受体细胞必须是卵细胞。( × )
提示：动物细胞核移植的受体细胞必须是(MⅡ期)卵母细胞。
(2)克隆动物的性状与供体动物完全相同。( × )
提示：克隆动物的性状主要由供体细胞核来决定，也与去核的卵母细胞的细胞质有关。
(3)与多莉羊等克隆哺乳动物相关的技术有胚胎移植、细胞培养和核移植。 ( √ )
(4)在核移植时，通常将整个体细胞而不是细胞核注入去核卵母细胞中。( √ )
1.(选择性必修3 P44)细胞在培养过程中分裂受阻的原因：悬浮培养的细胞会因__细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻__；对于贴壁细胞来说，除上述因素外，还会因为__接触抑制__而停止分裂增殖。
2.(选择性必修3 P44正文)动物细胞培养时，要将动物组织分散成单个细胞的原因是什么？
__①保证细胞所需要的营养供应；②保证细胞内有害代谢物的及时排出；③防止细胞与细胞靠在一起限制彼此的生长和增殖__。
3.(选择性必修3 P48～49图2－16)单克隆抗体制备过程中涉及两次筛选，第一次是利用__选择培养基__，筛选出杂交瘤细胞；第二次是__克隆化培养和抗体检测__，目的是筛选出足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
教材拾遗
1.(选择性必修3 P44旁栏思考)进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是__蛋白质__。用胃蛋白酶__不行__，因为__胃蛋白酶的最适pH为1.5，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在该环境中失去活性__。
2.(选择性必修3 P48相关信息)灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去__感染__能力，但并不破坏它们的__抗原__结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的__糖蛋白和一些酶__能够与细胞膜上的__糖蛋白__发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的__蛋白质分子和脂质分子__重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
3.(选择性必修3 P52、54相关信息)减数分裂Ⅱ中期(MⅡ期)卵母细胞中的“核”其实是__纺锤体—染色体复合物__。该文中“去核”就是去除该复合物。普通使用的去核方法是__显微操作法__，也有__梯度离心__、__紫外线短时间照射__和化学物质处理等。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。
考点1　动物细胞培养
植物组织培养与动物细胞培养的比较
类型 植物组织培养 动物细胞培养
理论基础 植物细胞的全能性 细胞增殖
前期处理 无菌、离体 无菌；用机械方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理，使组织细胞相互分散开
取材 植物较幼嫩的部位或花药等 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织
培养基性质 固体 液体
培养基成分 水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素、琼脂等 糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等
结果 可产生新个体，体现细胞的全能性 细胞培养产生大量细胞，不形成新个体，不能体现细胞的全能性
相同点 ①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、pH等条件；③都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂
分析动物细胞培养过程，考查科学思维
1.(2024·山东三模)细胞划痕实验是一种研究细胞迁移的体外实验方法。当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，以此来观察测量细胞的迁移侵袭能力。下列说法错误的是(　　)
A.经划痕处理后的细胞需放在CO2培养箱中进行培养
B.为更好地达到实验目的可适当降低培养基中血清的浓度
C.并非所有的动物细胞都适合做划痕实验
D.划痕缩小直至愈合，完全是由细胞迁移所导致
【解析】D　经划痕处理后的细胞需放在CO2培养箱中进行培养，以维持培养液的pH，A正确；为更好地达到实验目的可适当降低培养基中血清的浓度，以减少细胞迁移，B正确；并非所有的动物细胞都适合做划痕实验，如神经细胞已高度分化不能再分裂，C正确；划痕缩小直至愈合，不完全是由细胞迁移所导致，也有细胞增殖的原因，D错误。
2.(2024·山东二模)微载体是一种直径在 60～250 μm的微小颗粒，通常由天然葡聚糖或各种合成聚合物组成。它们能够作为载体，使贴壁依赖性细胞在其表面附着生长，常应用于悬浮培养系统，培养装置局部如图。下列说法正确的是 (　　)
A.利用微载体培养动物细胞时，可避免发生接触抑制现象
B.微载体浓度越高，可附着表面积越大，越利于细胞培养
C.图中搅拌器的主要作用是增大 CO2浓度维持培养液pH
D.图中悬浮系统中的细胞传代培养时，也需用胰蛋白酶处理
【解析】D　微载体的存在使贴壁依赖性细胞在其表面附着生长，但并不能避免发生接触抑制的可能，A错误；当微载体的浓度过高时，细胞的培养将受到限制，B错误；搅拌器的作用主要是增加培养液中的溶氧量，有利于细胞的氧气供应，C错误；图中悬浮系统中的细胞传代培养时，贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，D正确。
关于动物细胞培养的两组概念辨析
(1)细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。
(2)原代培养与传代培养
①原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，分瓶培养之前的细胞培养。原代培养的细胞核型正常。
②传代培养：进行分瓶后的扩大培养，即传代培养。一般情况下，细胞传至10～50代时，增殖会明显减缓，甚至完全停止，部分细胞出现核型异常。
围绕干细胞培养及应用，考查科学思维
3.(2024·山东一模)(不定项)科学家将A、B、C、D基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。几周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。研究人员为了确定4种基因在此过程中的作用，依次去掉1个基因，将其他3个基因转入小鼠成纤维细胞中，然后通过与转入4个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的那个基因对诱导iPS细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小。下列叙述正确的是(　　)
A.培养iPS细胞的培养基需要先添加血清再灭菌
B.确定4种基因作用的实验利用了减法原理
C.ES细胞和成纤维细胞都具有全能性
D.已经分化的T细胞、B细胞也能被诱导成iPS细胞
【解析】BD　培养iPS细胞的培养基先添加血清再灭菌，会破坏血清的成分，A错误；为了确定4种基因在此过程中的作用，依次去掉1个基因，利用了减法原理，B正确；成纤维细胞是已经分化的细胞，不具有全能性，C错误；已经分化的T细胞、B细胞也能被诱导成iPS细胞，D正确。
4.(2024·福建一模)帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病。科学研究证实，干细胞在治疗帕金森病领域有很大潜力。通过干细胞再生，移植到患者体内，补充缺失或缺损的神经细胞，有望从根本上治疗帕金森病。回答下列问题：
(1)胚胎干细胞存在于早期胚胎，通过体外受精、体外培养获得早期胚胎的途径如图甲所示。
①从卵巢中获得的卵母细胞需在过程①中培养到______期，过程②为__________。
②可以从受精卵培养得到的______________等早期胚胎中获得胚胎干细胞。
(2)从早期胚胎中获得人胚胎干细胞存在伦理问题。研究人员把病人的体细胞通过体外诱导，获得类似胚胎干细胞的一种细胞，称为____________________(简称iPS细胞)。这不仅解决了伦理问题，也避免了异体移植导致的________________问题。
(3)人iPS细胞经体外培养，诱导出神经干细胞的过程如图乙。
①悬浮培养的细胞因为____________________________而停止分裂。贴壁培养的细胞需要用__________处理，使之分散成单个细胞，再进行传代培养。
②研究者在培养基中加入小分子化合物A8301和DMH1，这两种物质能够影响TGF－β和BMP信号通路来促进神经干细胞的形成，其原理是_____________________________________________________________________。
【答案】(1)①MⅡ　精子获能　②桑葚胚、囊胚　(2)诱导多能干细胞　免疫排斥反应　(3)①有害代谢物积累，营养物质缺乏　胰蛋白酶　②A8301和DMH1能够抑制TGF－β和BMP信号通路，抑制类胚体分化为内胚层和中胚层，从而促进类胚体分化为外胚层，进而分化成神经干细胞
考点2　动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
类型 植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性
融合前处理 去除细胞壁 使细胞分散开
相关酶 纤维素酶和果胶酶 机械方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等
诱导方法 物理法、化学法 除了物理法、化学法，还可以用灭活病毒诱导法
结果 形成杂种植株 形成杂交细胞
应用 培育植物新品种 主要用于制备单克隆抗体
意义 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
2.细胞融合与单克隆抗体的制备
步骤 操作 技术方法 原理
取材 从已免疫的小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞，体外培养骨髓瘤细胞 动物细胞培养 细胞增殖
融合 通过灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 动物细胞融合 细胞膜的流动性
培养 在小鼠腹腔内进行体内培养，或在装有细胞培养液的培养基中进行体外培养 动物细胞培养 细胞增殖
3.单克隆抗体制备过程中两次筛选分析
分析内容 第一次筛选 第二次筛选
筛选原因 诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞
筛选方法 用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)才能生长 用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
结合动物细胞融合，考查科学思维
1.(2024·山东三模)(不定项)动物体细胞融合后染色体核型不稳定，来自某一方的染色体往往随机丢失一至多条，这种现象常应用于基因的定位。在甲型流感单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象。不考虑基因互作和其他变异，下列叙述正确的是(　　)
A.B淋巴细胞可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得
B.在筛选杂交瘤细胞的选择培养基上，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均死亡
C.与亲代杂交瘤细胞相比较，若减少某条染色体后分泌单克隆抗体的功能缺失，则该抗体的基因就位于这条染色体上
D.利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞克隆化培养将具有持续产生甲型流感抗体的能力
【解析】ABC　杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象，若丢失的染色体含有产生甲型流感抗体的基因，则利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞不一定具有持续产生甲型流感抗体的能力，D错误。
通过单克隆抗体制备，考查科学探究
2.(2024·山东一模)(不定项)细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。某研究小组以小鼠甲为实验材料设计实验，研制抗病毒A的单克隆抗体。下列叙述错误的是(　　)
A.实验前必须给小鼠甲注射病毒A是为了得到能产生特定抗体的B淋巴细胞
B.将小鼠体内取出的脾脏用剪刀剪碎后加入胃蛋白酶处理，使其分散成单个细胞
C.筛选1需用特定的选择培养基进行筛选才能获得融合的杂交瘤细胞
D.筛选2利用96孔板经1次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
【解析】BD　将小鼠体内取出的脾脏用剪刀剪碎后加入胰蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，B错误；第二次筛选用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群，该过程用到抗原—抗体杂交，获取的杂交瘤细胞通过培养获得大量的分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D错误。
3.如图为某同学设计的生产单克隆抗体的流程图，据图回答：
(1)该方案并不能达到预期效果，原因是_________________________。
(2)图中①为____________________过程，依据的生物学原理是____________________。这一过程可采用电激、离心、振动等物理方法，也可用化学药剂____________，还可使用生物方法，如_____________。目的是使得到的杂交瘤细胞既具有 B 淋巴细胞产生特定抗体的能力，又具有骨髓瘤细胞________________的本领。
(3)图中②表示用特定的选择性培养基进行细胞培养，目的是________________________________________________________________________。
(4)培养正常动物细胞时会出现，但瘤细胞不会出现的现象是________________________________________________________________________。
(5)与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是_______________________________。
【答案】(1)未给小鼠注射特定的抗原　(2)动物细胞融合　细胞膜的流动性　聚乙二醇(PEG)　灭活的病毒　无限增殖　(3)筛选杂交瘤细胞　(4)细胞贴壁和接触抑制　(5)特异性强、灵敏度高，并可大量制备
考点3　动物体细胞核移植技术和克隆动物
(1)核移植中供体动物、提供卵母细胞的动物、代孕动物和克隆动物之间的关系：克隆动物绝大部分性状与供体动物相同，少数性状(由线粒体DNA控制的性状)与提供卵母细胞的动物相同，与代孕动物的性状无遗传关系。
(2)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本可能不同的3个原因：
①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本，与植物组织培养不同(来自一个亲本)，即克隆动物的遗传物质来自两个亲本。
②在发育过程中可能发生基因突变、染色体变异导致性状改变。
③外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。
(3)细胞核移植技术形成重组细胞并发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
(4)克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
围绕动物体细胞核移植和克隆动物，考查科学思维和科学探究
1.(2024·雅礼中学二模)我国科学家经过努力，攻克了用核移植方法克隆猴的各项难关，比如在10 s内完成对次级卵母细胞的去核操作；将组蛋白去甲基化酶的mRNA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)注入重构胚促进重构胚的相关基因表达，提高胚胎的发育率等。下列相关叙述错误的是(　　)
A.可采用梯度离心、紫外线短时间照射等方法，在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性
B.染色体中组蛋白发生甲基化和去乙酰化分子修饰后将有利于重构胚相关基因的表达
C.重构胚一般需要在无菌、无毒的环境条件下培养至桑葚胚或囊胚阶段再进行移植
D.利用胚胎分割技术获得胚胎和利用核移植技术获得重构胚，都属于无性繁殖
【答案】B
2.(2024·山东二模)M基因在动物的肝细胞中特异性表达产生M蛋白。培育M基因失活的转基因克隆动物A的操作流程如图所示。下列说法错误的是(　　)
A.显微操作去核是指去除MⅡ期卵母细胞中的纺锤体—染色体复合物
B.将成纤维细胞用离心法收集制成新的细胞悬液进行传代培养
C.提取A成纤维细胞中的蛋白质进行抗原—抗体杂交，检测M基因是否失活
D.A可以作为研发与M基因相关疾病药物的模型动物
【解析】C　提取A成纤维细胞中的蛋白质进行抗原—抗体杂交，检测M基因是否表达，C错误。
1.(2024·吉林卷)从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A.传代培养时，培养皿需密封防止污染
B.选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C.直接用离心法收集细胞进行传代培养
D.细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
【解析】D　传代培养时培养器皿容许内部气体和培养箱中的气体进行交换，A错误；选取②的细胞进行传代培养比①更合理，②时细胞增长开始变得缓慢，B错误；对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，先需要用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大、细胞间产生接触抑制有关，D正确。
2.(2024·江西卷)(不定项)某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体)。为了建立一种灵敏、高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗－S单克隆抗体(如图)。下列说法正确的是(　　)
A.利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞
B.制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体
C.用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存
D.单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白
【解析】AD　胶原蛋白酶可以催化分解细胞外的胶原蛋白，因此利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞，A正确；由于蛋白S含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体，单克隆抗体A和单克隆抗体B来自不同的杂交瘤细胞，因此制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B不是相同的单克隆抗体，B错误；用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，也可以冷冻保存，C错误；单克隆抗体A和单克隆抗体B都来自筛选出的杂交瘤细胞，因此都能够特异性识别S蛋白，D正确。
3.(2024·广东卷)某些肿瘤细胞表面的PD－L1与细胞毒性T细胞(CTL)表面的PD－1结合能抑制CTL的免疫活性，导致肿瘤免疫逃逸。免疫检查点疗法使用单克隆抗体阻断PD－Ll和PD－1的结合，可恢复CTL的活性，用于肿瘤治疗。为进一步提高疗效，研究者以黑色素瘤模型小鼠为材料，开展该疗法与化疗的联合治疗研究。部分结果见图。
回答下列问题：
(1)据图分析，________疗法的治疗效果最佳，推测其原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(2)黑色素瘤细胞能分泌吸引某类细胞靠近的细胞因子CXCL1。为使CTL响应此信号，可在CTL中导入__________________基因后再将其回输小鼠体内，从而进一步提高治疗效果。该基因的表达产物应定位于CTL的________(填位置)且基因导入后不影响CTL______________的能力。
(3)某兴趣小组基于现有抗体—药物偶联物的思路提出了两种药物设计方案。方案一：将化疗药物与PD－L1 单克隆抗体结合在一起。方案二：将化疗药物与PD－1单克隆抗体结合在一起。你认为方案______(填“一”或“二”)可行，理由是____________________________________________________________________________________________________________________________________________。
【答案】(1)联合　该疗法既发挥了化疗药物的作用，也增加了活化的CTL数量　(2)CXCL1受体　(细胞膜)表面　杀伤肿瘤细胞　(3)一　方案一的偶联物既可阻断PD－1与PD－L1 结合，恢复CTL的活性，又使化疗药物靶向肿瘤细胞
4.(2023·湖南卷节选)研究人员通过肺上皮干细胞诱导生成肺类器官，可自组装或与成熟细胞组装成肺类装配体，如图所示。肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透压、pH以及__________________________________________(答出2点)等基本条件。肺类装配体形成过程中是否运用了动物细胞融合技术______(填“是”或“否”)。
【答案】无菌、无毒环境，含95%空气和5%CO2的气体环境　否
【解析】肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透压、pH以及无菌、无毒环境，含95%空气和5%CO2的气体环境等基本条件；由图示可知，肺类装配体形成的过程中没有运用动物细胞融合技术，只涉及了细胞的分裂和分化等内容。
(2024·北京期末)手足口病由多种肠道病毒感染引起，主要表现为手、足和口腔黏膜等处疱疹，柯萨奇病毒A组2型(CV－A2)是引发该病的主要病原体之一、制备抗CV－A2的单克隆抗体，对检测和治疗手足口病具有重要意义。回答下列问题：
(1)将纯化的CV－A2抗原间隔多次注射给小鼠，一段时间后，取免疫小鼠的脾细胞与体外培养的_________细胞，利用________诱导融合后，选择培养得到杂交瘤细胞。再经克隆化培养和抗体检测，初次筛选获得13株杂交瘤细胞。
(2)科研人员对上述13株杂交瘤细胞再进一步筛选，通过抗CV－A2单抗特异性分析结果可知(图1)，应选择第________株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体，理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
注：吸光度大小反映与抗原结合的单抗含量高低。
图1
(3)科研人员使用高、中、低3个浓度的CV－A2抗原稀释液，对不同温度下放置3 d的抗CV－A2单抗进行检测，图2结果表明单抗稳定性良好。判断依据是：在37 ℃和4 ℃的条件下放置3 d后，各稀释液浓度下的检测值______________。
注：检测值表示与单抗结合的抗原含量。
图2
(4)制备的抗CV－A2单抗在检测和治疗手足口病方面的具体应用是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(写出1条即可)。
【答案】(1)骨髓瘤　PEG/灭活病毒/电脉冲　(2)4　第4株杂交瘤细胞产生的单克隆抗体特异性强且含量最高　(3)无显著差异　(4)检测：可应用于手足口病感染病毒类型的检测/病毒感染的早期诊断；治疗：注射抗CV－A2单抗治疗手足口病/抗CV－A2单抗可作为治疗性抗体