高考生物二轮复习大概念整合六专题十三发酵工程课件(共58张PPT)

(共58张PPT)
专题十三　发酵工程
微生物的培养技术及应用
1．(2025·黑吉辽蒙卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C20H23ClN2O8)能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是(　　)
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
D
解析：D　在以金霉素为唯一碳源的培养基中，只有能降解金霉素的微生物能生存，因此以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基，A正确；在逐步提高金霉素浓度的培养基中能生存的菌株具有对金霉素的高耐受性，B正确；配制选择培养基时，要确保培养基的pH等条件适宜，C正确；应用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，D错误。
2．(2024·黑吉辽卷，改编)某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作正确的是(　　)
A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D．判断内生菌的抗性效果不需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
C
解析：C　题干信息：某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，故在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从未感病植株上采集样品，A错误；获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染；将采集的样品充分消毒后，用无菌水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测，B错误；据题图可知，样品研磨后进行了稀释涂布，可将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落，C正确；据题图抗性检测可知，判断内生菌的抗性效果需设置对照组和实验组，对照组不接种内生菌得到病原菌菌斑，实验组接种内生菌得到病原菌菌斑，然后比较对照组和实验组的菌斑大小，实验组病原菌菌斑越小表明内生菌抗性效果越好，D错误。
(1)(2024·浙江6月选考)以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌。( )
(2)(2021·天津卷)用免洗酒精凝胶擦手能达到灭菌目的。( )
(3)(2023·新课标卷，节选)从豆科植物的根瘤中分离根瘤菌进行培养，可以获得纯培养物，此实验中的纯培养物是________________________。
√
×
由根瘤菌繁殖形成的单菌落
1．微生物培养中的无菌操作技术
2．培养物、纯培养物、纯培养的辨析
3．培养基制备与微生物纯化技术
提醒：①各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求；②为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物实验一般会设置空白对照：随机取若干个灭菌后的空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。
4．微生物分离与计数的实例
命题点
围绕微生物的培养与计数考查生命观念及科学探究
1．研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中(＋代表含抗生素，＋多少代表抗生素浓度，－代表不含抗生素)，对两种抗生素药性分析。在37 ℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是(　　)
A．为排除杂菌的影响，倒平板前
需对培养基采用湿热灭菌
B．该实验使用稀释涂布平板法接
种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养
C．长期使用抗生素A可能会增加结核杆菌的抗药性基因频率
D．与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用
D
解析：D　为排除杂菌的影响，应该用湿热灭菌法对培养基进行灭菌，然后冷却到50 ℃左右倒平板，A正确；如图，菌落分布均匀，是利用了稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养，B正确；长期使用抗生素A，在抗生素A的选择作用下，结核杆菌的抗药性基因频率可能会增加，C正确；根据图中平板上菌落的分布可知，与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B不能增强对结核杆菌的抑制作用，D错误。
2．某研究团队从食塑料蜡虫肠道中分离能降解聚乙烯(PE)的细菌，以解决塑料污染问题。将分离得到的两种细菌(YT1和YP1)在PE薄膜培养液中培养，培养液中细菌数量变化以及PE失重率(降解PE能力的高低)变化如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．用经湿热灭菌后的含PE、葡萄糖和无机盐等成分的液体培养基分离目的细菌
B．分离得到目的细菌的纯培养可用平板划线法在酸性的选择培养基上进行
C．在得到图1曲线过程中的计数常用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法
D．在第20天后两种细菌群体降解PE的能力差异增大，且细菌YT1强于细菌YP1
C
解析：C　分离目的细菌要用PE为唯一碳源的固体培养基，不加葡萄糖，A错误；培养细菌应在中性或碱性环境中培养，B错误；对微生物进行计数，得到图1曲线过程中的计数常用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法，C正确；由20天后PE失重率变化曲线可知，YP1明显高于YT1，即细菌YP1降解PE的能力强于细菌YT1，D错误。
1．(原因分析类)利用稀释涂布平板法统计的菌落数与实际值相比一般会偏小，原因是___________________________________________________ ___ 。
2．(实验探究类)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_________________________ _______________________________________________。
当两个或多个细胞连在一起时，在平板上只观察到一个菌落
在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
3．(完善实验方案类)金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，从而形成透明圈。在无菌室内，经多次规范操作、重复实验，血平板上的菌落周围均出现透明圈，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是______________________________________。
设置不加鲜牛奶，其他操作均相同的对照组
微专题2
传统发酵技术的应用与发酵工程及其应用
1．(2024·湖北卷)制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。醋酸菌属于好氧型原核生物，常用于食用醋的发酵。下列叙述错误的是(　　)
A．食用醋的酸味主要来源于乙酸
B．醋酸菌不适宜在无氧条件下生存
C．醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶
D．葡萄糖在醋酸菌中的氧化分解发生在线粒体内
D
解析：D　食用醋的酸味主要来自醋酸，醋酸学名乙酸，A正确；醋酸菌是好氧型细菌，不适宜在无氧的条件下生存，B正确；在制醋时，缺失原料的情况下，醋酸菌将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸，因此醋酸菌体内含有催化乙醇氧化成乙酸的酶，C正确；醋酸菌属于细菌，没有核膜包被的细胞核和众多细胞器，因此没有线粒体，D错误。
2．(2024·江西卷)井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变种(JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长)发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是(　　)
A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化
D
解析：D　据题可知，井冈霉素是氨基寡糖类物质，并非蛋白质，因而不是基因表达的直接产物，JGs体内没有编码井冈霉素的基因，基因是通过控制相关酶的合成来控制代谢过程，进而控制井冈霉素合成的，A错误；扩大培养可以增加菌种数量，一定时间内菌种数多，代谢产物也会更多，B错误；若发酵培养基中营养物质的浓度过高，会导致培养基的渗透压升高，菌体细胞失水，不利于JGs的生长和代谢，不一定会提高井冈霉素的产量，C错误；稀释涂布平板法可以用来对活菌进行计数，但长出菌落再统计需要一定的时间，不宜用于监控发酵过程中活细胞数量的变化，D正确。
(1)(2024·河北卷)传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的。( )
(2)(2022·山东卷)选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中。( )
(3)(2021·江苏卷)果醋发酵时，用重铬酸钾测定醋酸含量变化时，溶液灰绿色逐日加深。( )
(4)(2021·辽宁卷)酵母菌和醋酸杆菌均以有丝分裂的方式进行增殖。( )
√
√
×
×
(5)(2023·新课标卷)根瘤菌与豆科植物之间是互利共生关系，根瘤菌侵入豆科植物根内可引起根瘤的形成，根瘤中的根瘤菌具有固氮能力。若实验获得一种具有良好固氮能力的根瘤菌，可通过发酵工程获得大量根瘤菌，用于生产根瘤菌肥。根瘤菌肥是一种微生物肥料，在农业生产中使用微生物肥料的作用是__________________________________________ __________________________________________(答出2点即可)。
①促进植物生长，增加作物产量；②能够减少化肥使用，改良土壤，减少污染，保护生态环境
1．厘清“3”种传统发酵食品的制作技术
提醒：①醋酸菌是异养需氧菌，对氧气的含量非常敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌的死亡；②发酵是通过微生物的培养来大量生产各种代谢产物的过程，包括有氧发酵(如醋酸发酵)和无氧发酵(如酒精发酵)，发酵≠无氧呼吸。
2．泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化
提醒：亚硝酸盐是硝酸盐还原菌促进硝酸盐还原形成的，而不是硝化细菌氧化氨形成的。
命题点
围绕传统发酵技术的应用考查生命观念及科学探究
1．传说杜康的儿子杜杼在一次酿酒时发酵过头，等到第 21天开缸时发现酒液变酸却香气扑鼻，酸甜可口。于是杜杼把“廿一日”加“酉”凑成“醋”字，这就是杜杼造醋的故事。下列有关传统发酵技术的叙述，正确的是(　　)
A．葡萄果皮上有野生酵母菌和醋酸菌，葡萄酒制好后直接通入无菌空气即可制醋
B．酿酒时糖未耗尽，酵母菌发酵也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多
C．杜杼酿酒反成醋可能是因发酵装置密封不严导致酵母菌有氧呼吸大量增殖引起
D．醋酸菌在O2和糖源匮乏时，可直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸
B
解析：B　酵母菌的最适温度为18～30 ℃，是兼性厌氧型生物，醋酸菌的最适温度为30～35 ℃，是好氧细菌，葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后，可以直接通入无菌空气，同时还需适当提高发酵温度才能制醋，A错误；酿酒时糖类未耗尽，酵母菌的发酵过程也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多，对发酵起抑制作用，从而导致酵母菌发酵停止，B正确；醋酸菌是好氧细菌，杜杼酿酒反成醋是因为醋酸菌的有氧呼吸导致的，这可能是由于发酵装置密封不严造成的，不是酵母菌的有氧呼吸，C错误；醋酸菌在O2充足，但糖源匮乏时，可直接将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为乙酸，D错误。
2．(不定项)乳酸菌是一类利用碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称，是人体肠道中必不可少且具有重要生理功能的菌群，常用于酸奶、泡菜的制作。下列有关酸奶发酵的叙述不正确的是(　　)
A．在牛奶中加入抗生素进行发酵可减少发酵过程中杂菌的滋生
B．取环境中的天然乳酸菌菌种接种不利于产品质量的提高
C．发酵过程可先通入无菌空气让乳酸菌大量繁殖再进行无氧发酵
D．制作好的酸奶在表面形成一层由乳酸菌聚集形成的“奶盖儿”
ACD
解析：ACD　加入抗生素会杀死乳酸菌，导致酸奶发酵失败，A错误；环境中的天然乳酸菌菌种数量较少，不利于产品质量的提高，B正确；乳酸菌是厌氧细菌，不需要通入空气，C错误；酸奶表面不会有乳酸菌聚集成白膜，D错误。
命题点
围绕发酵工程考查社会责任
3．中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，其以糖蜜(甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖)为原料，在实验室通过发酵生产出PHA等新型高附加值可降解材料，从而提高了甘蔗的整体利用价值。具体的工艺流程如图所示。下列说法错误的是(　　)
A．为了筛选出耐高浓度蔗糖的菌株H，可在
液体培养基中将蔗糖作为唯一碳源，并不断
提高其浓度
B．为统计培养液中H菌的数目，可在培养
过程中定期取样，借助血细胞计数板进行计
数
C．发酵工程的中心环节是分离、提纯产物
D．若在适宜营养物浓度、温度和pH条件下发酵，菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期且产生了少量的乙醇，可以通过增加搅拌器的转速等方式改善
C
解析：C　由题干信息分析可知，为提高甘蔗的整体利用价值，需提高嗜盐单胞菌H对蔗糖的耐受能力和利用效率，故在液体培养基中将蔗糖作为唯一碳源，并不断提高其浓度，A正确；为统计培养液中H菌的数目，可在培养过程中定期取样，借助血细胞计数板进行计数，B正确；发酵工程的中心环节是在发酵罐内发酵，C错误；若在适宜营养物浓度、温度和pH条件下发酵，菌株H细胞增殖和PHA
产量均未达到预期且产生了少量的乙醇，这说明发酵过程中氧气不足，使菌种进行无氧呼吸产生了乙醇，可以通过增加搅拌器的转速(增加氧气)等方式改善，D正确。
1．(原因分析类)在传统发酵食品的制作过程中，为什么发酵食品的品质往往不稳定？___________________________________________________ _______________________________________________________________________。
2．(批判性思维类)市场上购买的真空包装酸菜，在没有漏气的状态下发生了“胀袋”现象，同学A怀疑是杂菌污染导致的，同学B怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，你支持谁的观点并说明理由：_____________________ ______________________。
没有接种菌种，而是利用了天然存在的菌种，菌种差异、杂菌情况不明和发酵过程的控制缺乏标准等，往往会造成发酵食品的品质不一
支持A的观点，乳酸菌
代谢过程中不产生气体
3．(科学探究类)氢能是潜力巨大的可再生清洁能源。利用产气肠杆菌制氢具有条件温和、环保等优点。E.as菌是产氢率较高的菌种，为进一步提高其产氢率，科研人员开展了相关研究。E.as菌是兼性厌氧菌，为研究呼吸方式是否会对其产氢率造成影响，请设计相关实验进行探究：______ ______________________________________________________________________________________________________________________________ (写出实验思路)。
取甲、乙两组等量的葡萄糖培养液，接种等量的E.as菌；甲组控制为无氧、乙组通入氧气；分别在适宜且相同条件下培养一段时间，测定产氢率
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
(限时：45分钟)
一、单项选择题
1．“煪(qiu)糜、糖化、发酵、压榨、陈储”是即墨老酒生产的五个环节。“煪糜”，将泡好的大黄米放入锅中不断添浆加温熬煮、搅拌而制成红棕色、锃亮、黏稠的粥；“糖化”，将煪好的糜降温到适当的温度后加入陈伏麦曲并不断搅拌，使其均匀地混合在一起；“发酵”，将糖化好的糜放上酵母发酵。下列说法错误的是(　　)
A．煪糜的主要目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
B．糖化阶段降温的目的是防止杀死陈伏麦曲中的微生物
C．发酵初期要适当提供O2，发酵过程中需调节pH并保持适宜的温度
D．陈储有利于老酒中醇与酸发生反应，使酒更加芳香
课时作业
训练(十三)　发酵工程
A
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
解析：A　“煪糜”，将泡好的大黄米放入锅中不断添浆加温熬煮、搅拌而制成红棕色、锃亮、黏稠的粥，其目的是杀灭杂菌，使淀粉糊化，有利于酒曲的发酵，A错误。
2
1
3
4
5
6
7
8
9
10
2．利用大豆与奶粉混合，经乳酸菌发酵后可制成酸豆奶，具体生产流程如图所示。下列说法正确的是(　　)
A．醋酸菌能够在上述同样条件下将糖发酵生成乙酸
B．消毒是指采用强烈的理化方法杀死培养基中包括芽孢和孢子在内的所有微生物
C．上述发酵过程早期需要密封，后期需不断通入无菌空气
D．发酵罐内发酵是该生产流程的中心环节，需随时检测培养液中微生物的数量和乳酸的浓度
D
2
1
3
4
5
6
7
8
9
10
解析：D　乳酸菌为厌氧细菌，而醋酸菌为严格的好氧细菌，因此上述同样的条件下，醋酸菌不能正常代谢，A错误；灭菌是指采用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，B错误；发酵用的菌种是乳酸菌，必须在厌氧环境下生存，故整个发酵过程中不能通入氧气，C错误；发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，发酵过程中只在最初添加一次菌种，中途需要随时取样检测培养液中的微生物数量、产物浓度，以便了解发酵进程，D正确。
2
3
1
4
5
6
7
8
9
10
3．利用马铃薯淀粉生产中产生的废渣为主要原料，添加麸皮、磷酸二氢钾、尿素、硫酸铵、硫酸镁等，以黑曲霉、白地霉和热带假丝酵母等多种真菌为发酵菌种，可生产单细胞蛋白饲料。下列说法错误的是(　　)
A．废渣能为菌种的繁殖提供碳源
B．杂菌会增加单细胞蛋白的产量
C．单细胞蛋白就是菌体本身
D．所用培养基的pH最可能为酸性
解析：B　杂菌的存在会影响目标菌种的数量，二者存在竞争关系，会导致单细胞蛋白的产量降低，B错误。
B
2
3
4
1
5
6
7
8
9
10
4．细菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X及其不同突变体进行了实验：在固体培养基表面放置一张能隔离细菌的滤膜，将一种菌(下层菌)滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌(上层菌)，共同培养后，对上、下层菌计数得到如图结果。下列分析正确的是(　　)
A．实验中的培养皿、固体培养基和滤膜均需
要进行消毒处理
B．对上、下层菌计数时应采用稀释涂布平板
法或显微镜直接计数
C．由甲、乙、丙三组结果可推测tcil蛋白能够
中和tcel蛋白的毒性
D．野生型细菌X在与tcel-tcil双突变体和tcel突变体的竞争中均占优势
C
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
解析：C　为避免杂菌的污染，实验中的滤膜、培养皿、固体培养基等均需灭菌处理，A错误。对上、下层菌计数时，由于是对活菌进行计数(活菌才能分泌tcel蛋白和tcil蛋白)，故采用稀释涂布平板法，显微镜直接计数不能区分死菌和活菌，B错误。tcel蛋白是一种有毒性的分泌蛋白，乙组中野生型可产生tcel蛋白作用于tcel-tcil双突变体，使野生型细菌X在竞争中占据优势；而在丙组中，野生型可产生tcel蛋白作用于tcel突变体，但后者可以产生tcil蛋白，与乙组结果相比，野生型对tcel突变体基本没有竞争优势，甚至比甲组的竞争指数低，由此推
测，tcil蛋白能够中和tcel蛋白的毒性，C正确。由甲组、乙组可知，野生型细菌X在与tcel-tcil双突变体的竞争中占优势，由甲组、丙组可知，野生型细菌X在与tcel突变体的竞争中不占优势，D错误。
2
3
4
5
1
6
7
8
9
10
5．野生型青霉菌能在基本培养基上生长，但其氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，在基本培养基上不能生长，只能在完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，下列相关叙述正确的是(　　)
A．图中①②④为完全培养
基，③为基本培养基
B．A操作的目的是提高野生型青霉菌的浓度
C．B的操作是用接种环把菌液接种到②的表面
D．经过程C培养后，可从③中挑取D进行纯化培养
A
2
3
4
5
1
6
7
8
9
10
解析：A　野生型青霉菌能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长。根据题干信息和图形分析，图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A正确；紫外线处理可以提高突变的频率，A操作紫外线照射的目的是提高突变菌株的浓度，即增加突变株的数量，B错误；B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C错误；从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培
养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经过程C影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D错误。
2
3
4
5
6
1
7
8
9
10
6．青霉素是人类发现的第一种抗生素，其工业化生产流程如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．青霉素具有杀菌作用，不需对发酵罐进行灭菌
B．图中过程①、②都属于扩大培养，目的是增加菌种数量
C．过程⑤常用的方法是过滤和沉淀，分离出的菌种可以再使用
D．发酵过程中温度、pH、溶解氧可能发生变化，需及时调整或补充
A
2
3
4
5
6
1
7
8
9
10
解析：A　青霉素虽然具有杀菌作用，主要针对细菌起作用，真菌等其他类型的微生物可以继续生长，杂菌的存在会影响发酵的效果以及产品的品质，因此对发酵罐必须严格的灭菌，A错误。
7
8
9
10
1
3
4
5
6
2
二、不定项选择题
7．常乳是母牛泌乳期一周后直到泌乳停止前一周这个时间段内分泌的乳汁。常乳中会有一定量的细菌存在。现研究小组检测常乳样品中细菌的总量(不考虑菌种)，流程如图，每个平板上接种菌液量为0.1 mL。下列说法正确的是(　　)
A．制作上述平板时培养基要加入血清，细胞才能正常生长
B．倒平板时将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，防止杂菌污染
C．按上述稀释涂布平板法，若三个平板上的菌落平均数为100个，则每毫升样品中细菌总数为1×108个
D．食用常乳前，最佳的消毒方
法是煮沸消毒
BC
7
8
9
10
1
3
4
5
6
2
解析：BC　制作上述平板时培养基不需要加入血清，细菌生长不需要动物血清，A错误；倒平板时将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，防止杂菌污染，B正确；按上述稀释涂布平板法，若三个平板上的菌落平均数为100个，则每毫升样品中细菌总数为100÷0.1×105＝1×108个，C正确；食用常乳前，最佳的消毒方法是巴氏消毒，该方法不仅能杀死绝大多数微生物，而且还能避免常乳中的营养成分被破坏，D错误。
8
9
10
1
3
4
5
6
7
2
8．研究小组欲从土壤中筛选某种抗生素产生菌，进行如下实验：首先将土壤样品充分稀释涂布在培养基上，待长出单菌落后，再将单菌落取出并移至涂布有 S 菌的培养基上，一段时间后观察结果如图所示。下列说法不正确的是(　　)
A．涂布前必须使用清水对土壤
样品进行充分稀释
B．使用涂布器直接将菌液滴加
并涂布到培养基表面
C．有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S 菌的生长
D．抑菌圈的直径越大，说明菌落产生抗生素的能力就越强
ABD
8
9
10
1
3
4
5
6
7
2
解析：ABD　涂布前必须使用无菌水对土壤样品进行充分稀释，A错误；进行涂布平板操作前，先取0.1 mL菌液滴加到培养基表面，再对涂布器进行灼烧灭菌，冷却后再用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，B错误；有抑菌圈说明该圈内S菌不生长，即有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S 菌的生长，C正确；抑菌圈的直径与菌落的直径的比值越大，说明该菌落产生抗生素的能力越强，不能只看抑菌圈直径的大小，D错误。
9
10
1
3
4
5
6
7
8
2
三、非选择题
9．有机磷农药会造成严重的环境污染，并直接或间接地危害人类健康。某研究小组采取下列流程获取农药降解菌：从受农药污染严重的土壤中筛选分离具有优良性状的菌种→定向培育优良菌种→在此基础上进行诱变育种及构建工程菌。回答下列问题：
(1)在采集的样品中，一般目的菌种在数量上并不占优势，为提高分离效率，可以先采用富集培养，即在培养基中加入______________，使所需要的微生物繁殖，形成数量上的优势，限制不需要的微生物的生长繁殖。磷在生物体内可以参与合成________________________________(答出2种即可)等生物大分子。
9
10
1
3
4
5
6
7
8
2
(2)富集培养并不能获得纯种农药降解菌，可以通过______________和______________的方法进行纯化。
(3)为了进一步获得优良菌种，研究小组进行了诱变育种，诱变育种是指_________________________。
(4)研究小组进一步研究了碳源对有机磷农药降解率的影响，得到如下结果，从图中可以得出的结论有：______________________。
9
10
1
3
4
5
6
7
8
2
解析：(1)分析题意可知，本操作目的是获取农药降解菌，故应在培养基中加入有机磷农药，以达到富集目的菌种的目的；磷在生物体内可参与合成DNA、RNA(元素组成都是C、H、O、N、P)等生物大分子。(2)富集培养并不能获得纯种农药降解菌，可以通过平板划线法和稀释涂布平板法进行农药降解菌的纯化。(3)诱变育种是指用物理或化学因素处理生物，使生物发生基因突变，可以提高突变率，创造人类需要的生物新品种。
9
10
1
3
4
5
6
7
8
2
(4)由题图可知，与其他组别相比，蔗糖组的降解率最高，即以蔗糖为碳源时有机磷农药的降解率最高；且蔗糖浓度为1.60%时有机磷农药的降解率最高。
9
10
1
3
4
5
6
7
8
2
答案：(1)有机磷农药　DNA、RNA　(2)平板划线　稀释涂布平板　(3)用物理或化学因素处理生物，使生物发生基因突变，可以提高突变率，创造人类需要的生物新品种　(4)以蔗糖为碳源时有机磷农药降解率最高；且蔗糖浓度约为1.60%时有机磷农药降解率最高
10
1
3
4
5
6
7
8
9
2
10．2024年3月16日，第十四届中国泡菜食品国际博览会在四川眉山开幕，泡辣椒、泡萝卜和泡黄瓜等吸引了来自多个国家和地区参展商的眼球。请回答下列问题：
(1)泡菜腌制的过程中，要注意控制的条件有__________________(答出2点)等。
(2)泡菜制作利用的是乳酸菌发酵，该过程发生在乳酸菌细胞的________________。在泡菜制作过程中，通常加入少量白酒，作用是________________(答出2点)；一段时间后，泡菜坛中溶液量会增加，原因可能是___________________。
10
1
3
4
5
6
7
8
9
2
(3)已知分离纯化乳酸菌所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，某同学以新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌，分离纯化时应挑选出________________的菌落作为目的菌。研究发现，泡菜制作中添加适量的蔗糖能降低亚硝酸盐含量的峰值。为探究蔗糖含量对亚硝酸盐含量峰值的影响，请设计实验并写出实验思路：___________________。
10
1
3
4
5
6
7
8
9
2
解析：(1)泡菜制作中，需注意控制食盐用量、温度、密封以及腌制的时间等，否则容易造成杂菌大量繁殖而导致亚硝酸盐增加，影响泡菜品质。(2)泡菜制作利用的是乳酸菌的无氧呼吸，其场所是细胞质基质。在制作泡菜过程中，通常加入少量白酒，可以抑制杂菌生长，同时也可调节泡菜的风味，增加泡菜的醇香感。由于泡菜制作过程中要加入一定量的食盐、白酒以及香辛料等，会导致蔬菜细胞失水，泡菜坛中溶液增加。(3)在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙，一方面可中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸，另一方面有利于对乳酸菌的识别和分离，分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈的菌落作为目的菌。为探究蔗糖含量对亚硝酸盐含量峰值的影响，自变量为蔗糖溶液的浓度，实验应遵循对照
10
1
3
4
5
6
7
8
9
2
原则和单一变量原则，其主要思路为：将品质相同的同种新鲜蔬菜随机均分为若干组，每组分别加入等体积但不同浓度的蔗糖溶液，其他条件相同且适宜，随后按照泡菜制作流程进行操作，定期测定每组泡菜中亚硝酸盐的含量，观察并记录每组亚硝酸盐含量的峰值。
答案：(1)腌制的时间、温度、密封和食盐的用量　(2)细胞质基质　抑制杂菌生长，调节泡菜的风味(增加泡菜的醇香感)　外界溶液浓度高，蔬菜细胞渗透失水　(3)具有透明圈　将品质相同的同种新鲜蔬菜随机均分为若干组，每组分别加入等体积但不同浓度的蔗糖溶液，其他条件相同且适宜，随后按照泡菜制作流程进行操作，定期测定每组泡菜中亚硝酸盐的含量，观察并记录每组亚硝酸盐含量的峰值