专题测试卷(三)
(时间：60分钟 满分：100分)
一、选择题(共15小题，1～10小题每小题3分，11～15小题每小题5分，共55分。每小题只有一个选项符合题意。)
1．水稻(基因型为AaBb)的花药通过无菌操作，接入试管，经过一系列过程形成试管苗，以下说法中不正确的是( )
A．愈伤组织的产生是通过有丝分裂
B．试管苗的基因型是AABB或aabb或AAbb或aaBB
C．培养基中要添加有机物
D．用花药离体培养获得的胚状体细胞含1个染色体组
解析：愈伤组织是通过脱分化过程形成的，该过程中细胞通过有丝分裂方式增殖；水稻花药离体培养形成的幼苗是单倍体，其基因型是AB或ab或Ab或aB；在形成试管苗的过程中，培养基中应该添加有机物；水稻(基因型为AaBb)细胞中含2个染色体组，用花药离体培养获得的胚状体细胞含1个染色体组。
答案：B
2．关于菊花的组织培养，以下说法正确的是( )
A．材料的年龄、保存时间的长短等都会影响植物组织培养的效果
B．对菊花茎段进行组织培养，必须添加植物激素才能成功
C．外植体经过再分化形成愈伤组织
D．在试管苗进行大田移植前，不需要光照处理
解析：同一种植物中不同材料的全能性大小不同，与材料的年龄、保存时间的长短有关，培养的难易程度也不同；菊花组织培养过程中，自身内源激素即可调节其生长，无需添加植物激素；外植体经过脱分化可以形成愈伤组织，经过再分化形成胚状体；在试管苗进行大田移植前，需要光照处理。
答案：A
3．在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织过程中，一般需下列哪些条件( )
①消毒灭菌 ②一定浓度的植物激素 ③适宜的温度 ④充足的光照 ⑤充足的养料
A．①③④⑤
B．②③⑤
C．①③⑤
D．①②③⑤
解析：①植物组织培养过程需要无菌操作，所以需要消毒灭菌，①正确；②脱分化形成愈伤组织的培养基需要一定浓度的植物激素，②正确；③植物组织培养过程需要适宜的温度，③正确；④脱分化形成愈伤组织时，需要避光，否则会形成维管组织，④错误；⑤植物组织培养需要充足的养料，⑤正确。
答案：D
4．植物学家将胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入特定培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是( )
A．彼此性状极为相似
B．都是单倍体植株
C．植株的变异频率较高
D．都是纯合体植株
解析：这些完整的植物都是由单个韧皮部细胞通过植物组织培养得到的，属于无性繁殖，因此彼此性状极为相似。
答案：A
5．下列关于植物组织培养的叙述，错误的是( )
A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化
C．愈伤组织是一团排列疏松的薄壁细胞组成，是再分化的产物，细胞具有全能性
D．绿色开花植物的花药培养获得的愈伤组织的基因通常只有体细胞的一半
解析：植物组织培养的培养基中需添加蔗糖，目的是提供营养，同时调节渗透压。生长素和细胞分裂素的使用比例不同，培养的结果不同，生长素和细胞分裂素的比值高时，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低时，有利于芽的分化、抑制根的形成；比值适中时，促进愈伤组织的生长。愈伤组织是一团排列疏松的薄壁细胞组成，是脱分化的产物，细胞具有全能性。同一植株不同细胞经培养获得的愈伤组织基因不一定相同，如花粉细胞培养形成的愈伤组织细胞的基因只有体细胞的一半。
答案：C
6．下列关于月季的花药培养，认识错误的是( )
A．花粉的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率
B．选择花药的最适宜时期是完全未开放的花蕾，镜检花粉常用的染色方法是醋酸洋红法
C．选取的材料一定要进行消毒
D．花粉培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株
解析：影响花药培养成功率的因素有很多，如材料和培养条件等，花粉的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率，一般来说，在单核时期细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高；早期花药比后期更容易产生花粉植株，为了单核期的花药，应选择完全未开放的花蕾作实验材料；选取的材料一定要进行消毒，用到的试剂有70%的酒精、0.1%的氯化汞溶液、无菌水；在组织培养过程中，应根据外植体分化的程度及时更换培养基。
答案：D
7．植物组织培养过程中分化成的幼苗需要移栽，下列关于移栽的措施，说法错误的是( )
A．移栽时，应在打开培养瓶的封口后马上移栽
B．移栽时，应先将培养瓶的封口膜打开一段时间，让试管苗在培养间生长几日
C．移栽时需用清水清洗根部的培养基
D．最后幼苗需移植到消毒的新环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中
解析：移栽时，应先将培养瓶的封口膜打开一段时间，让试管苗在培养间生长几日；移栽时需用流水清洗根部的培养基；最后幼苗需移植到消过毒的新环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。
答案：A
8．下面为番茄植物组织培养过程的流程图解，以下相关叙述不正确的是( )
A．脱分化发生在b步骤，形成愈伤组织，在此过程中植物激素发挥了重要作用
B．再分化发生在d步骤，是愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程
C．从叶组织块到种苗形成的过程说明番茄叶片细胞具有全能性
D．经该过程产生的人工种子属于无性繁殖
解析：从图中分析可知，b代表的是脱分化，在此过程中发挥作用的植物激素有生长素和细胞分裂素；再分化发生在c步骤，是愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程；由体细胞形成完整的植株，体现了植物细胞的全能性，因为其具有本物种全部的遗传信息；人工种子是通过组织培养制备的，通过人工种子种植后得到的后代植株属于无性生殖。
答案：B
9．用于植物组织培养的培养基和无土栽培时所用的培养液相比，最大的差别( )
A．必须含植物必需的矿质元素
B．必须含有机物
C．浓度必须小于细胞液浓度
D．不一定含有植物激素
解析：植物组织培养的培养基和无土栽培的营养液中需要添加矿质元素。由于植物组织培养过程中，组织细胞不进行光合作用，所以在培养液中需要添加蔗糖，属于有机物；而绿色植物能进行光合作用，所以在培养液中不需要添加有机物。植物组织培养的培养基和无土栽培的营养液浓度都必须小于细胞液浓度，使得细胞吸水。植物组织培养的培养液中需要植物激素，但绿色植物栽培的营养液中不需要植物激素，不是最大的差别。
答案：B
10．植物的组织培养与微生物培养的相同之处是( )
A．都需要配制培养基并灭菌
B．前者培养基中需多种矿质营养，后者不需要
C．培养基中都需要加入有机物
D．都需要在相同的温度条件下培养
解析：植物的组织培养与微生物培养，都需要配制培养基并灭菌；植物的组织培养与微生物培养，都需要多种矿质营养；植物的组织培养需要加入有机物，而微生物培养的培养基根据培养微生物的不同，有些需要加入有机物，有些不需要；微生物培养的不同阶段所需的温度条件不同。
答案：A
11．愈伤组织分化过程中，培养基中细胞分裂素/生长素的比值较低时诱导分化的是( )
A．根
B．芽
C．叶
D．胚性细胞团
解析：愈伤组织分化过程中，培养基中细胞分裂素/生长素的比值较低时诱导分化的是根。
答案：A
12．在对外植株消毒时，以下说法正确的是( )
A．菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉用软刷子轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20
min
B．用95%的酒精冲刷
C．放入0.1%的氯化汞中10
min
D．用蒸馏水清洗若干次
解析：植物外植体一般需要经过一系列的消毒过程，一般先用流水冲洗20
min左右(流水冲洗后可加少许洗衣粉用软刷子轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20
min)，在无菌操作台上用体积分数为70%的酒精消毒30
s，取出后在无菌水中清洗，再用质量分数为0.1%的氯化汞溶液灭菌1～2
min，最后用无菌水冲洗3次。
答案：A
13．下列关于花药培养过程的说法，正确的是( )
A．花药中的花粉在培养基上发育成胚状体还是愈伤组织是随机的，不受环境的影响
B．接种后的花药需要每天用日光灯照射12
h
C．花药培养过程中，诱导形成愈伤组织时不需要光照，幼小植株的形成需要光照
D．如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药将产生一个幼小植株
解析：花药中的花粉在培养基上在营养物质和激素的作用下，先后形成愈伤组织和胚状体；接种后的花药在开始的脱分化阶段不需要光照；花药培养过程中，诱导形成愈伤组织时不需要光照，幼小植株(具有了叶绿体)的形成需要光照；如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药将产生2个幼小植株。
答案：C
14．要将菊花茎段细胞培养成完整的植株，无需( )
A．选用生长旺盛的嫩枝
B．离体状态并且具有完整细胞核的细胞
C．导入外源基因
D．一定的营养物质和激素
解析：将菊花茎段细胞培养成完整的植株，需选用生长旺盛的嫩枝，原因是嫩枝的生理状态好，容易诱导脱分化和再分化；菊花茎段细胞培养成完整的植株原理是植物细胞的全能性，原因是每个细胞含有本物种生长发育所需的全套遗传物质，故选取组织培养的细胞，必须要有完整细胞核；若不处于离体状态，由于基因的选择性表达，细胞不能表现出全能性，而是分化成为不同的组织器官；将菊花茎段细胞培养成完整的植株，无需导入外源基因；植物组织培养需要一定的营养(无机、有机成分)和激素(生长素和细胞分裂素)。
答案：C
15．某兴趣小组研究了培养基中生长素与细胞分裂素含量的比值对烟草愈伤组织分化的影响，得到如下结果：
组别
生长素/(mg/L)
细胞分裂素/(mg/L)
分化状况
甲
2
0.02
分化形成根
乙
2
0.2
不分化
丙
2
0.5
分化形成芽
下列叙述不正确的是( )
A．愈伤组织在生长过程中细胞的核膜、核仁会出现周期性变化
B．培养在乙组培养基中的烟草愈伤组织细胞丧失了细胞全能性
C．两种激素含量比值的变化会导致愈伤组织细胞出现稳定性差异
D．生长素与细胞分裂素含量的比值高时有利于愈伤组织分化形成根
解析：愈伤组织是植物细胞脱分化后形成的，具有细胞周期，能够继续进行分裂，所以愈伤组织在生长过程中细胞的核膜、核仁会出现周期性变化，A正确；培养在乙组培养基中的烟草只是促进愈伤组织的形成，没有丧失细胞全能性，调节适合的情况下仍然可以发育为一个完整的新个体，B错误；据表分析，两种激素含量比值的变化会导致愈伤组织出现不同的分化方向，即细胞出现稳定性差异，C正确；从题表数据可知，生长素与细胞分裂素含量的比值高时有利于愈伤组织分化形成根，D正确。
答案：B
二、非选择题(共5小题，共45分)
16．(8分)菊花是一种良好的观赏植物，并具有一定的药用价值，科研人员通过组织培养技术可实现某些珍稀菊花品种的快速繁殖。
(1)进行组织培养所依据的原理是____________。配制MS固体培养基的母液时，微量元素应浓缩________倍。
(2)接种前，外植体的消毒一般要用到70%的酒精和_________两种药剂。由愈伤组织形成丛芽的过程称为____________。
(3)在研究植物生长调节剂对丛芽增殖的影响时，研究人员设计了相关实验，实验结果如下表(6～BA属于细胞分裂素类似物、NAA属于生长素类似物)。
组别
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
6﹣BA(mg/L)
0.1
0.1
0.5
0.5
1.0
1.0
2.0
2.0
3.0
3.0
NAA(mg/L)
2.0
1.0
2.0
1.0
0.5
0.1
0.5
0.1
0.5
0.1
丛芽增殖倍数
1.6
2.1
2.4
2.5
2.6
2.7
2.7
4.4
2.5
2.7
①据实验结果分析，6﹣BA的浓度在__________mg/L之间时，丛芽的增殖倍数随之相应增加；当6﹣BA浓度一定时，NAA浓度越____________(低/高)，丛芽的增殖效果越明显。
②若要进一步诱导丛芽生根，新配制的培养基与诱导丛芽增殖的培养基相比，在成分上的主要区别是MS培养基各成分用量____________(增加/不变/减半)和NAA含量____________(增加/不变/减半)。
解析：(1)植物组织培养的原理是植物细胞的全能性；配制MS固体培养基的母液时，无机物中的大量元素应浓缩10倍，微量元素浓缩100倍。(2)接种前，外植体的消毒一般要用到70%的酒精和0.1%的氯化汞(升汞)两种药剂，在酒精中摇动2～3次，持续6～7秒，在氯化汞溶液中1～2分钟，由外植体形成愈伤组织的过程为脱分化，由愈伤组织形成丛芽的过程称为再分化。(3)根据表格分析，自变量是植物生长调节剂6～BA和NAA的浓度，因变量是丛芽增殖。①据实验结果分析，6～BA的浓度在0.1～2.0
mg/L之间时，丛芽的增殖倍数随之相应增加；当6～BA浓度一定时，NAA浓度越低，丛芽的增殖效果越明显。②将新配制的培养基与诱导丛芽增殖的培养基相比，在成分上的主要区别是MS培养基各成分用量减半(少)和NAA含量增加，可进一步诱导丛芽生根。
答案：(1)植物细胞的全能性 100 (2)0.1%的氯化汞 再分化 (3)①0.1～2.0 低 ②减半 增加
17．(10分)下列是用花粉培养植株的相关问题，请回答：
(1)通过花药培养产生单倍体植株一般有两种途径：一种是花粉通过________阶段发育为植株，另一种是在诱导培养基上先形成____________，再将其诱导分化成植株。这两种途径主要取决于培养基中____________的种类及浓度配比。
(2)花粉植株的培养(如月季花药培养)包括材料的选取、材料的消毒、接种和培养等过程。材料的选取可先对花粉粒运用_____________进行染色，然后通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。
(3)花粉的形成经历了四分体时期________、________等阶段。该“四分体”与减数分裂过程中的四分体不同，是指由一个花粉母细胞经过减数分裂产生的连在一起的4个细胞。月季花药培养时的花粉粒最好是____________。
(4)材料消毒主要有以下几步：
①将花蕾在酒精中浸泡约30
s
②放入氯化汞液中2～4
min
③无菌水清洗，然后用吸水纸吸干花蕾表面的水分
④用无菌水冲洗3～5次
正确的顺序是____________________________。
(5)某同学在进行组织培养过程中，发现只分裂而不分化出芽和根，可能原因是______________________________________________
______________________________________________________。
解析：(1)花药离体培养有两条途径：一是脱分化形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。二是脱分化形成胚状体。进行何种途径主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。(2)花粉植株的培养(如月季花药培养)包括材料的选取、材料的消毒、接种和培养等过程。材料的选取可先对花粉粒运用醋酸洋红法或焙花青—铬矾法进行染色，然后通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。(3)花粉的形成经历了四分体时期、单核期和双核期等阶段。该“四分体”与减数分裂过程中的四分体不同，是指由一个花粉母细胞经过减数分裂产生的连在一起的4个细胞。月季花药培养时的花粉粒最好是单核靠边期。(4)材料消毒主要有以下几步：将花蕾在酒精中浸泡约30
s；无菌水清洗，然后用吸水纸吸干花蕾表面的水分；放入氯化汞溶液中2～4
min；用无菌水冲洗3～5次。故正确的顺序是：①③②④。(5)在进行组织培养过程中，发现只分裂而不分化出芽和根，可能原因是细胞分裂素和生长素配比不对或先使用生长素后使用细胞分裂素。
答案：(1)胚状体 愈伤组织 植物激素
(2)醋酸洋红法或焙花青—铬矾法
(3)单核期 双核期 单核靠边期 (4)①③②④
(5)细胞分裂素和生长素配比不对或先使用生长素后使用细胞分裂素
18．(10分)如图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题：
(1)菊花的组织培养与月季的花药培养都需要制备____________固体培养基，该培养基含有20多种营养成分，在配制培养基母液时常将其配方中的微量元素浓缩____________倍。
(2)用于培养的菊花嫩枝和月季花药都需要消毒，通常消毒所用的药剂是________和________。
(3)月季花药培养选材十分重要，从花期分析需要选取________的花药；从花蕾分析需要选取____________的花蕾；从花粉发育时期分析需要选取____________的花粉，从而提高诱导成功率。
(4)月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过____________阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于____
______________________________________________________。
解析：(1)菊花的组织培养与月季的花药培养都需要制备MS固体培养基，在配制培养基母液时常将其配方中的微量元素浓缩100倍。(2)用于培养的菊花嫩枝和月季花药都需要消毒，通常消毒所用的药剂是70%的酒精和0.1%的氯化汞。(3)月季花药培养选材时一般选取初花期(或早期时)的花药、完全未开放的花蕾、单核期的花粉，可以提高诱导成功率。(4)月季的花药培养过程中，花粉植株的形成除图中所示途径外，还可以通过胚状体阶段发育而来，这两种途径的差别主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
答案：(1)MS 100 (2)70%的酒精 0.1%氯化汞 (3)初花期(或早期时) 完全未开放 单核期 (4)胚状体 培养基中的激素的种类及其浓度的配比
19．(7分)月季因花色艳丽、芬芳迷人而被称为花中皇后，可用植物组织培养技术快速繁殖而用于生产。请回答下列问题：
(1)植物组织培养的实验操作流程是：制备MS固体培养基、________、接种、培养、移栽、栽培。
该实验能成功培育出植株的理论依据是___________________。
(2)在配置培养基时，需要根据各种母液的________，计算用量。将分装好的培养基进行________灭菌。
(3)如图为培养基中蔗糖浓度对月季叶愈伤组织诱导率的影响。
①蔗糖浓度为________
，最有利于愈伤组织的形成，原因是____
______________________________________________________。
②外植体形成愈伤组织的过程称为________，将愈伤组织继续进行培养。生长素和细胞分裂素________(填使用顺序)，提高分化频率，有利于重新分化成根或芽。
③蔗糖浓度为90
g/L时，无愈伤组织形成的原因最可能是
______________________________________________________。
解析：(1)植物组织培养的基本实验操作步骤为制备MS固体培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽、栽培。植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性。
(2)在配置培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。将分装好的培养基进行高压蒸汽灭菌。
(3)①据图示可知，蔗糖浓度为30
g/L时，诱导率最高，最有利于愈伤组织的形成，原因是该浓度的蔗糖既能较好调节培养基的渗透压又能为细胞提供充足的碳源。
②外植体形成愈伤组织的过程称为脱分化，将愈伤组织继续进行培养。生长素和细胞分裂素同时使用能提高分化频率，有利于重新分化成根或芽。
③蔗糖浓度为90
g/L时，培养基渗透压过大，导致细胞渗透失水而死亡，故无愈伤组织形成。
答案：(1)外植体消毒 植物细胞的全能性
(2)浓缩倍数 高压蒸汽
(3)①30
g/L 该浓度的蔗糖既能较好调节培养基的渗透压又能为细胞提供充足的碳源
②脱分化 同时使用
③培养基渗透压过大，导致细胞渗透失水而死亡
20．(10分)植物组织培养是克隆植物的一种方法，请回答相应的问题：
(1)培养皿中的培养基除添加________外，还需要添加植物激素，其目的是_________________________________________________。
(2)培养过程需要植物
________的最适条件，否则在光学显微镜下可能观察到
________，进而使植物出现遗传不稳定甚至不育。
(3)在植物组织培养过程中，愈伤组织的成功诱导是至关重要的步骤。科学家研究了植物生长调节剂对某药用植物愈伤组织诱导的影响，实验结果如下表：
培养基代号
2，4－D/(mg·L－1)
6－BA/(mg·L－1)
愈伤组织诱导率/%
L1
1.0
0
65.41
L2
2.0
0
68.76
L3
3.0
0
91.01
L4
3.0
0.2
54.48
L5
3.0
0.5
57.35
L6
3.0
1.0
51.71
注：愈伤组织诱导率(%)＝产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×100%
①从上表可以知道，在基本培养基中添加较高浓度的________有利于形成愈伤组织，而添加________则不利于愈伤组织的形成。
②在上述研究的基础上，为了探究光照对愈伤组织形成的影响：应将已经消毒过的外植体平均分为甲、乙两组，分别接种到
________(填培养基编号)培养基上；甲组置于有光环境，乙组置于
________环境，其他条件相同且适宜；培养一段时间后，分别计数甲、乙两组中愈伤组织的________并计算_________________________。
解析：(1)培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加植物激素，其目的是诱导外植体进行脱分化和再分化。
(2)培养过程需要植物生长和繁殖的最适条件，否则在光学显微镜下可能观察到发生染色体(结构与数目)异常，进而使植物出现遗传不稳定甚至不育。
(3)①由以上分析可知，在基本培养基中添加较高浓度的2，4－D有利于食用稗胚形成愈伤组织，而添加6－BA则不利于食用稗胚愈伤组织的形成。
②该实验的目的是探究光照对愈伤组织形成的影响，因此自变量是有无光照，因变量是愈伤组织诱导形成的概率，那么影响愈伤组织诱导形成的概率培养基等就是无关变量，在处理无关变量时要做到相同且最适宜，因此在该实验中要把相应的材料放在最有利愈伤组织形成的L3培养基中培养。甲组置于光照条件下培养，乙组置于黑暗条件下培养，其他条件相同且适宜；培养一段时间后，分别计数甲、乙两组中愈伤组织的个数并计算愈伤组织诱导率。
答案：(1)营养物质 诱导外植体进行脱分化和再分化
(2)生长和繁殖 发生染色体(结构与数目)异常
(3)①2，4－D 6－BA ②L3 黑暗 个数 愈伤组织诱导率专题知识整合
[网络构建]
填充：①无氧呼吸 ②C6H12O6―→2C2H5OH＋2CO2 ③冲洗 ④果酒 ⑤果醋 ⑥脂肪酸、甘油 ⑦加盐腌制 ⑧无氧呼吸 ⑨N－1－萘基乙二胺盐酸盐 ⑩加入调味料 配制盐水专题1
传统发酵技术的应用
课题1
果酒和果醋的制作
1．严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，直接关系到是否能得到质量高、产量多的理想产物，通常所指的发酵条件不包括( )
A．温度控制
B．溶氧控制
C．pH控制
D．酶的控制
解析：通常所指的发酵条件包括温度、pH、溶氧、通气与转速等。酶是自身调节物质，不属于发酵条件。
答案：D
2．下列有关果酒自然发酵流程中的叙述正确的是( )
A．应将选择好的葡萄进行反复冲洗，防止杂菌污染
B．应将选择好的葡萄只冲洗1～2次，防止菌种流失
C．应去梗再冲洗，防止冲洗时梗刺破葡萄皮造成污染
D．应对榨取的葡萄汁进行灭菌处理，防止杂菌污染
解析：在果酒自然发酵中，冲洗这一步操作的主要目的是除去浮尘，不能冲洗得过于干净，也不能去皮，因为自然发酵的菌种来自葡萄皮上的野生型酵母菌。去梗的操作应在冲洗之后，否则会因去梗造成汁液流出和造成杂菌的污染。灭菌会使酵母菌被消灭，无法产生果酒。
答案：B
3．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是( )
A．先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和饱和的重铬酸钾溶液的混合液
B．先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入饱和的重铬酸钾溶液，混匀后滴加硫酸
C．先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸，混匀后滴加饱和的重铬酸钾溶液
D．先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸，混匀后滴加饱和的重铬酸钾溶液，并加热
解析：本题主要考查酒精检验的基本操作。检测的原理是在酸性环境下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。检测时，先在试管中加入发酵液2
mL，再滴入物质的量浓度为3
mol/L的硫酸3滴，振荡混匀，最后滴加饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色的变化。这个反应在常温下即可进行，无需加热。
答案：C
4．下图中的4个曲线图分别表示在发酵罐中培养酵母菌时各种因素对酵母菌繁殖速率的影响，其中不正确的是( )
解析：在发酵罐中，由于营养和空间是有限的，酵母菌的繁殖速率不可能一直保持上升，温度、溶氧量和pH影响酶的活性，从而影响繁殖速率。
答案：C
5．如图是果酒制果醋的发酵装置，分析回答问题：
(1)如果将该装置改为酒精的发酵装置，则温度应该控制在________。果酒制果醋的反应式为：__________________________。缺少糖源时，醋酸菌将__________变为________，再变为醋酸。
(2)果汁发酵后是否有酒精产生，可以用________来检验，在________条件下，该物质与酒精反应呈现________色。
(3)请指出用该发酵装置的一个缺点：______________________
______________________________________________________。
解析：酒精发酵的温度一般是18～25
℃。缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。酒精能使酸性重铬酸钾变成灰绿色。醋酸发酵时应加放气装置。
答案：(1)18～25
℃ C2H5OH＋O2―→CH3COOH＋H2O 乙醇 乙醛 (2)重铬酸钾 酸性 灰绿
(3)没有放置气体的装置
1．下列有关果酒和果醋制作的叙述正确的是( )
A．果酒和果醋的制作都是由酵母菌完成的
B．制果醋的温度要比制果酒的温度高些
C．传统的葡萄酒制作一定需要人工接种菌种
D．葡萄汁装入发酵瓶时，要将瓶装满
解析：在果酒的制作中利用酵母菌，温度为18～25
℃，传统的葡萄酒制作，利用的菌种是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，不需要人工接种菌种。在果醋的制作中利用醋酸菌，温度为30～35
℃。葡萄汁装入发酵瓶时，一般预留发酵容器的1/3空间，通气一段时间后，再密封发酵。
答案：B
2．下列说法不正确的是( )
A．在进行酒精发酵的过程中，接种酵母菌后，应立即密封
B．在进行酒精发酵的过程中，接种酵母菌后，应先通气一段时间，再隔绝空气
C．为了避免杂菌污染，在实际生产过程中可以直接接种纯种的酵母菌
D．制葡萄酒的时间控制在10～12
d左右
解析：利用酵母菌的无氧呼吸可以酿酒，一开始通入空气，酵母菌通过旺盛的有氧呼吸使繁殖加快，产生更多酵母菌，这样在以后密闭不通气阶段才能有大量的酵母菌进行无氧呼吸产生大量酒精。制葡萄酒的时间控制在10～12
d左右。
答案：A
3．下列关于果酒和果醋制作的叙述，错误的是( )
A．参与发酵的微生物都含有线粒体
B．发酵过程中培养液pH都会下降
C．制果酒时瓶口需密闭，而制果醋时需要通入氧气
D．果酒制成后可将装置移至温度略高的环境中制果醋
解析：参与醋酸发酵的醋酸菌是原核生物，没有线粒体，故A项叙述错。
答案：A
4．下列关于果酒和果醋的制作原理、发酵过程的叙述中，错误的是( )
A．果酒和果醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同
B．制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒
C．变酸果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落
D．果酒和果醋的制作可用同一装置，但需控制不同发酵条件
解析：果酒的制作菌种是酵母菌，是兼性厌氧菌，而制作果醋的醋酸菌是需氧型菌。
答案：A
5．下列关于果醋制作的说法，正确的是( )
A．醋酸菌是好氧菌，在制作过程中要一直打开发酵瓶
B．在制作葡萄醋的过程中，温度应严格控制在18～25
℃
C．当糖源不足时，醋酸菌先将乙醇变成乙醛，再将乙醛变为醋酸
D．在糖源和氧气充足时，醋酸菌能将葡萄糖分解成乙醇和二氧化碳
解析：当氧气、糖源充足时，醋酸菌能将葡萄汁中的葡萄糖分解为醋酸；在果醋制作过程中不宜一直打开发酵瓶，以防止污染；在果醋发酵过程中，温度应严格控制在30～35
℃。
答案：C
6．如图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是( )
A．过程①和②都只能发生在缺氧条件下
B．过程①和③都发生在酵母菌细胞的线粒体中
C．过程③和④都需要氧气的参与
D．过程①～④所需的最适温度基本相同
解析：有氧呼吸和无氧呼吸的第一阶段相同，均发生在细胞质基质中，产物是丙酮酸，而丙酮酸产生乙醇只能发生在无氧呼吸过程中，A、B两项均错；③过程属于有氧呼吸第二、三阶段，第三阶段需要氧气参与，④过程是制作果醋的过程，需醋酸菌参与，醋酸菌是一种好氧细菌，因此④过程需要氧气参与，C项正确；制作果酒时，最适温度为18～25
℃，而制作果醋时最适温度为30～35
℃。
答案：C
7．小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置中进行试验(见图)，恰当的做法是( )
A．加入适量的酵母菌
B．一直打开阀b通气
C．一直关紧阀a，始终不打开阀b
D．把发酵装置放到4
℃冰箱中进行实验
解析：若一直打开阀b通气，酵母菌就只进行有氧呼吸，则不会产生酒精。若把装置放到4
℃冰箱中，温度过低会导致呼吸作用有关酶的活性降低，则无氧呼吸产生酒精的效率会极低。酵母菌无氧呼吸会产生CO2，偶尔打开阀b可排出CO2。
答案：A
8．在适宜的温度条件下，在下图所示装置中都加入干酵母(内有活酵母菌)，其中适于产生酒精的装置是( )
解析：酵母菌产生酒精的条件一是要有葡萄糖、水和酵母菌；二是必须在密封的条件下(无氧条件下)，这两个条件缺一不可，可见A项符合，B、C、D三项都不符合。
答案：A
9．下图简单地表示了葡萄酒的酿制过程，请据图分析：
(1)葡萄酒的酿制原理是先通气使酵母菌进行________，以增加酵母菌的数量，然后使酵母菌________获得葡萄酒。
(2)随着发酵过程的进行，液体密度会逐渐降低(可用密度计测量)，其原因是______________________________________________
_____________________________________________________。
(3)在甲中进行搅拌的目的是____________________________，
丙中一段时间后，揭开盖子是否能够产生果醋？______(填“能”或“不能”)。
解析：本题重在考查对果酒制作的原理及方法的掌握。(1)酵母菌为一种兼性厌氧真菌，在有氧情况下可进行有氧呼吸，无氧则进行发酵。(2)由于发酵时糖被消耗，产生酒精和二氧化碳，而酒精的密度比糖和水低，这是液体密度降低的原因。(3)搅拌可增加甲内的溶氧量，有氧呼吸需要氧，有氧呼吸和发酵均能产生CO2。揭盖后有氧气溶解进去，丙中酒精可能在醋酸菌作用下被氧化生成醋酸。
答案：(1)有氧呼吸 发酵
(2)由于发酵时糖被消耗，产生酒精和CO2，而酒精的密度比糖和水低
(3)增加溶氧量 能
10．某同学用带盖的瓶子制葡萄酒，进而制作果醋。
(1)发酵过程中，每隔约12
h将瓶盖拧松一次(注意，不是打开瓶盖)，原因是______________________________________________
______________________________________________________。
(2)此后再将瓶盖拧紧，目的是____________________________
_____________________________________________________。
(3)当发酵产生酒精后，再将瓶盖打开，盖上一层纱布，就可制造出果醋，原因是__________________________________________，
反应式为______________________________________________。
(4)分析此发酵装置不足之处：___________________________。
解析：本题主要考查酒精发酵和醋酸发酵的过程。开始拧松瓶盖是为了放出积累的CO2，然后拧紧瓶盖是为了制造无氧环境，进行酒精发酵。此装置的最大不足就是容易被杂菌污染。
答案：(1)酒精发酵过程中产生CO2，瓶盖拧松以放出CO2 (2)防止进入氧气，使酵母菌在无氧的条件下继续进行酒精发酵
(3)制造有氧条件，进行醋酸发酵
C2H5OH＋O2―→CH3COOH＋H2O
(4)易被杂菌污染，制造果醋时，难以进行深层发酵
11．“每天喝一点，健康多一点。”这是“宁夏红”率先提出的消费理念，将积淀了千百年的枸杞药食文化和中国红文化完美结合起来，更增添了品牌的文化魅力和优势。下图为“宁夏红”枸杞果酒生产工艺流程简图，据图回答问题：
选料→？→粉碎→灭菌→接种→发酵→？→果酒
(1)流程中？处的内容应为________、________。
(2)果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格，含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。
_______________________________________________________
_____________________________________________________。
(3)果酒制作离不开酵母菌，与醋酸菌相比，酵母菌在结构上的主要特点是_____________________________________________
_____________________________________________________。
(4)枸杞果酒制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，目的是_____________________________________
______________________________________________________。
(5)若要提高果酒的产量，发酵过程中关键要控制好哪些条件？
_______________________________________________________
_____________________________________________________。
解析：(1)果酒生产的工艺流程为选料→冲洗→粉碎→灭菌→接种→发酵→过滤→果酒。
(2)如果果汁灭菌不合格，含有醋酸菌，因果酒发酵处于无氧环境，且温度不适合醋酸菌生存，所以醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸。
(3)醋酸菌是原核生物，无成形的细胞核，酵母菌是真核生物，有成形的细胞核及多种细胞器。
(4)枸杞果酒制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量，有利于后期发酵。
(5)发酵过程中要控制好温度、pH和通气量等。
答案：(1)冲洗 过滤
(2)不能。因醋酸菌是好氧型细菌，而果酒发酵是无氧环境(或因醋酸菌需要在有氧且温度是30～35
℃条件下，才能将糖转化成醋酸，而此时发酵罐中的条件是无氧且温度是18～25
℃)
(3)有成形的细胞核
(4)在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量
(5)适宜的温度、pH、通气量等专题3
植物的组织培养技术
课题1
菊花的组织培养
1．下列属于组织培养的是( )
A．花粉培养成单倍体植株
B．芽发育成枝条
C．根尖分生区发育成成熟区
D．受精卵发育成植株
解析：植物组织培养是指离体的植物器官、组织或细胞脱分化、再分化形成完整植物体的过程。花粉培育成单倍体植株，是在一定条件下离体完成的。芽发育成枝条、根尖分生区发育成成熟区，是植物体发育的一部分。受精卵发育成植株，也属于正常的发育过程。
答案：A
2．用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是( )
A．该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的
B．该愈伤组织的细胞没有全能性
C．该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的
D．该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构
解析：愈伤组织的细胞仍具有全能性，在一定条件下继续培养，细胞会发生再分化，生成芽和根，进而发育成完整植株。
答案：B
3．下列关于影响植物组织培养的因素，说法正确的是( )
A．不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程度相同
B．在植物组织培养中，培养基中必须添加植物激素
C．植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是互相独立的
D．pH、温度、光照等条件对植物组织培养也特别重要
解析：不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料也会因年龄、保存时间的长短等导致实验结果不同，故A错误；在植物组织培养中，培养基中常常要添加植物激素，但不是都必须添加植物激素，故B错；各种植物激素的作用是相互联系的，而不是互相独立的，故C错。
答案：D
4．下列有关菊花的组织培养的说法，正确的是( )
A．需要有三种培养基，其营养成分中的碳源应该是无机碳源
B．要用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，即在100
℃下保持15～30
min
C．在培养过程中要先让愈伤组织生根后再使其生芽
D．用酒精对外植体进行消毒时，持续的时间不能太长
解析：在该过程中，共需配制三种培养基，分别是脱分化培养基、生芽培养基和生根培养基，但这些培养基需要的碳源是蔗糖，而不是无机碳；在对培养基进行高压蒸汽灭菌时，要在121
℃下保持15～30
min，以便于杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子等，100
℃下不能杀死微生物的芽孢；在培养过程中要先让愈伤组织生芽后再使其生根；用酒精对外植体进行消毒时，持续的时间不能太长，否则容易杀死外植体细胞。
答案：D
5．我国植物学家将名贵兰花的茎尖细胞放进培养基中进行培养，最终发育成完整的新植株。下图是细胞培养形成兰花植株示意图，请据图回答：
注：胚状体即相当于植物种子的胚的结构。
(1)过程③是________，⑤过程主要是指____________________
_____________________________________________________。
(2)在培养过程中，除了提供水分和必要的有机营养物质外，还需要在培养基中加入________和________。同时，培养过程中，除保证必要的温度、光照和氧气等外界条件外，还必须保证的关键条件是
_______________________________________________________
______________________________________________________。
解析：本题考查植物组织培养的过程及对结果的分析能力。其过程为离体的细胞愈伤组织生根发芽的胚状体，可以根据此线索解决其中的问题。(1)过程③是由离体的细胞发育成愈伤组织的过程，是脱分化过程。过程⑤是由胚状体发育成完整的植株，所以主要是指组织器官的形成，可逐渐发育成为完整的植株。(2)进行组织培养的过程中，脱分化阶段不需要光照，但在再分化阶段，叶片中的叶绿素的形成需要光照，同时需大量的营养，包括水和无机盐，为了控制细胞的脱分化与再分化，常加入生长素和细胞分裂素等植物激素。在操作的过程中，必须进行无菌操作，防止杂菌污染。
答案：(1)脱分化 组织器官的形成，可逐渐发育成为完整植株
(2)无机盐(或矿质元素) 植物激素 无菌环境
1．MS培养基与微生物培养基相比，需要提供的是( )
A．无机营养
B．有机营养
C．甘氨酸和维生素
D．植物激素
解析：MS培养基是用于植物组织培养的，往往需添加植物激素。
答案：D
2．要将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，不需要的是( )
A．具有完整细胞核的细胞
B．离体状态
C．导入外源基因
D．一定的营养物质和激素
解析：要表现全能性，细胞应具备的内因是要有本物种生长发育所需要的全套遗传物质(要有完整的细胞核)；应具备的外因即外部条件是离体、一定的营养物质、激素诱导等。
答案：C
3．植物组织培养的过程可以归纳为：
①②③④。对此叙述有误的是( )
A．②至③的再分化过程中，当细胞分裂素与生长素的浓度比低时，有利于根的分化
B．植物组织培养所依据的原理是细胞的全能性
C．③到④过程指植物的营养生长和生殖生长阶段
D．植物组织培养获得的植株不能保持亲本性状
解析：植物组织培养的原理是细胞具有全能性，过程分为脱分化、再分化、植株的生长发育几个阶段，生长发育包括营养生长和生殖生长两个阶段。每个阶段对环境条件的要求各不相同，再分化阶段细胞分裂素与生长素浓度比低时，利于生根，高时利于生芽，整个过程是细胞全能性逐渐表现的过程。植物组织培养过程是无性繁殖过程，子代能保持亲本性状。
答案：D
4．植物组织培养是指( )
A．将离体的植物器官、组织或细胞培育成完整植物体
B．将愈伤组织培育成植株
C．将离体的植物器官、组织或细胞培育成愈伤组织
D．愈伤组织形成并液泡化
解析：植物组织培养是指在人工控制的条件下，将离体的植物组织、器官或细胞培育成完整植株的过程。
答案：A
5．菊花种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的( )
A．有丝分裂
B．分化
C．减数分裂
D．全能性
解析：用菊花的茎尖进行组织培养，其原理是细胞的全能性。在组织培养过程中，离体组织通过脱分化才能成为愈伤组织，再经过再分化、细胞有丝分裂，成为具有根、茎、叶的植物体。减数分裂是在形成生殖细胞过程中的一种分裂方式，而题中为发育到种苗，因此组织培养中不涉及减数分裂。
答案：C
6．在菊花的组织培养操作完成3～4
d后，观察同一温室中的外植体，发现有的瓶内外植体正常生长，有的瓶内外植体死亡，你认为外植体死亡的原因不可能是( )
A．培养条件，比如光照、温度等不适宜
B．接种时外植体未灭菌
C．接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体
D．将外植体倒插入培养基中
解析：同一温室提供了相同的光照和温度，但有的瓶内外植体正常生长，有的瓶内外植体却死亡，说明外植体死亡的原因不可能是光照、温度等培养条件不适宜。
答案：A
7．下列关于植物组织培养的说法中，哪一项是错误的( )
A．在进行植物组织培养时，需要适宜的温度、营养、氧气和pH
B．植物的组织培养过程中不需要光
C．不同植物进行组织培养时，所需的温度有所不同
D．由外植体形成幼苗的过程中，培养基中有机物的总量会减少
解析：植物组织培养需要一定的条件。除需要营养、适宜的温度、酸碱度和渗透压外，还需要光。光不仅仅是进行光合作用的重要条件，也对培养细胞的分裂和分化有重要影响。
答案：B
8．下列实例中能体现细胞全能性的是( )
①用悬浮液培养胡萝卜单个细胞可形成可育的植株 ②植物用种子繁殖后代 ③用烟草组织培养的单个细胞形成可育的完整植株
A．①②
B．①③
C．②③
D．①②③
解析：细胞的全能性是指已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。体现细胞全能性的是由细胞→生物体的实例。其中①和③都是属于由分化的细胞经过培养形成可育的植株的实例，体现了细胞的全能性。植物用种子繁殖后代，实际上就是由一个受精卵，通过细胞的增殖和分化发育成新个体，这是由未经分化的细胞(受精卵)发育成新个体的过程，因此不能体现细胞的全能性。
答案：B
9．关于菊花组织培养的操作，下列说法不正确的是( )
A．培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
B．幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间
C．用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，一旦感染杂菌则前功尽弃
D．接种时用镊子夹取菊花茎段插入培养基中即可
解析：菊花的组织培养中为防止杂菌污染，需要进行严格的无菌操作，外植体要消毒，培养基及其他器械要灭菌。接种时要注意茎段的形态学上下端，不应倒插；幼苗要先移植到消过毒的环境中生活一段时间，然后再栽培到土壤中。
答案：D
10．下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是( )
A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化
C．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织
D．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同
解析：植物组织培养过程中用的是固体培养基，添加蔗糖可提供营养和调节渗透压；添加不同比例的生长素和细胞分裂素可促进愈伤组织进行再分化；组织培养过程中愈伤组织的形成需经过脱分化(或称去分化)；同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织或植株的基因(遗传物质)不一定相同，如花粉和其他体细胞。
答案：D
11．下图是基因型为AaBb的菊花茎尖离体培养示意图，据图回答下列问题：
菊花茎尖―→培养基中培养―→植物体(幼苗)
(1)图中B是____________________。菊花茎尖培养成植物体的根本原因是________________________________________________
_____________________________________________________。
(2)菊花的组织培养形成试管苗的过程中，其中应大量供给的元素是__________。试管苗形成过程中要给予一定光照，其目的是_____
______________________________________________________。
要促进茎尖细胞分裂、分化和生长，培养基中应含__________。
(3)脱分化是指__________________________________________
_____________________________________________________，
脱分化和再分化这两个过程的进行除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，还要保证__________________，否则植物组织培养就不能成功。
(4)这样培养成的试管苗的基因型是__________。
答案：(1)具根、芽的胚状体(丛芽、根和芽) 植物细胞具有全能性
(2)N、S、P、K、Ca、Mg 促进叶绿体的形成并进行光合作用合成有机物 细胞分裂素和生长素 (3)高度分化的植物器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程 无菌 (4)AaBb
12．乙醇等“绿色能源”的开发备受关注，利用玉米秸秆等生产燃料酒精已成为大势所趋。
(1)植物组织培养可实现玉米等大规模快速繁殖，如上图，把外植体通过植物组织培养技术培育成完整植株，利用了________原理。通过组织培养技术进行植物繁育，可以很好地保持亲本的优良性状，原因是____________________________________________________
_____________________________________________________。
A、B分别代表________和________，过程①、②分别表示________和________。
(2)在玉米组织培养过程中，有关说法不正确的是( )
A．培养出的玉米植株个体都是纯合子
B．A细胞的全能性最高
C．从外植体到A的过程不需要光照
D．从外植体到完整植株，细胞的分裂方式都是有丝分裂
解析：(1)由植物组织培养技术图可知其原理是植物细胞的全能性，由于整个过程均为有丝分裂，故亲子代遗传物质相同，从而可保持亲代的优良性状。
(2)脱分化过程没有叶绿素的形成，故不需光照。玉米种子均为杂交种。
答案：(1)植物细胞的全能性 子代遗传物质与亲代相同，不会像有性生殖一样出现性状分离 愈伤组织 胚状体 脱分化 再分化 (2)A
13．如图为科学家将胡萝卜韧皮部的细胞培养形成胡萝卜植株的过程示意图。请据图完成下列问题：
注：胚状体即等同于植物种子的胚的结构
(1)由细胞团形成胚状体要经过__________过程。
(2)这种培养方法在生物技术中称为________培养。
(3)培养基中除了需要水分和有机营养物质外，还需要加入______________和____________________。培养过程必要的外界条件是适宜的温度、______________和____________等。
(4)由胡萝卜韧皮部细胞培养成完整的胡萝卜植株证明了_____。
解析：植物组织培养的理论基础是细胞的全能性；由细胞团发育成植物幼苗需经细胞分裂和细胞分化两个过程；植物组织培养所用的培养基中应含有植物生长发育所需的各种营养物质，为诱导根或芽的分化还应加入生长素、细胞分裂素两种植物激素，并保证适宜的外界环境。
答案：(1)细胞分裂和细胞分化 (2)植物组织 (3)矿质元素 生长调节类(激素)物质 pH 光照 (4)植物细胞具有全能性专题测试卷(一)
(时间：60分钟 满分：100分)
一、选择题(共15小题，1～10小题每小题3分，11～15小题每小题5分，共55分。每小题只有一个选项符合题意。)
1．下列有关家庭制作果酒、果醋和腐乳的叙述，正确的是( )
A．菌种均可来自于自然环境，接种纯净的菌种则品质更佳
B．均需在适宜温度下进行发酵，果酒发酵温度最高
C．果酒、果醋发酵需无氧环境，腐乳制作需有氧环境
D．变酸的酒表面的菌膜含大量酵母菌，腐乳的“皮”为毛霉菌丝
解析：参与果酒、果醋和腐乳制作的微生物都可以来自自然环境，但接种纯净的菌种则品质更佳；果酒制作的适宜温度是18～25
℃，果醋制作的适宜温度是30～35
℃，腐乳制作的适宜温度是15～
18
℃，所以果醋发酵温度最高；参与果醋制作的醋酸菌和参与腐乳制作的毛霉都属于需氧型生物，因此果醋和腐乳制作过程都需要在有氧环境中进行；变酸的酒表面的菌膜含大量醋酸菌，腐乳的“皮”为毛霉菌丝。
答案：A
2．下列有关果酒、果醋、腐乳、泡菜制作的叙述，正确的是( )
A．果酒、果醋、腐乳及泡菜中的乳酸都是微生物无氧呼吸的产物
B．果酒制成后只需将装置转移至温度较高的环境中即可制成果醋
C．腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与，如毛霉
D．泡菜泡制的时间越长，亚硝酸盐含量越高，可用比色法测定其含量
解析：参与果酒制作的微生物是酵母菌，其代谢类型是异养兼性厌氧性，参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其代谢类型是异养需氧型，参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其代谢类型是异养需氧型，参与泡菜制作的微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型；果酒制成后除需转移到温度较高环境外，还需醋酸杆菌且需在有氧环境中才可制作果醋；毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸；随发酵进行，亚硝酸盐含量先逐渐增加，后又逐渐降低，用比色法可进行亚硝酸盐含量的测定。
答案：C
3．下列哪种条件下，醋酸菌将葡萄汁中的糖分分解成醋酸( )
A．氧气、糖源充足
B．氧气充足、缺少糖源
C．缺少氧气、糖源充足
D．氧气、糖源都缺少
解析：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸；醋酸菌是嗜氧菌，缺少氧气时，醋酸菌不能进行发酵。
答案：A
4．下列产醋最多的措施是( )
A．将果酒中加入食醋，并通气
B．将果酒中加入变酸的酒表面的菌膜，并通气
C．将果酒暴露在空气中
D．将果酒中加入冲洗葡萄的水，并通气
解析：食用的食醋已经经过灭菌措施，因此不含有相应菌种；变酸的果酒表面的菌膜中含有大量的醋酸菌，将其接种到果酒中并且通气将会产生更多的醋酸；空气中也含有醋酸菌，和B项比较含量较少；冲洗葡萄的水中可能有醋酸菌，但数量不大。
答案：B
5．在酿制果醋的过程中，下列相关说法正确的是( )
A．果醋的制作需用醋酸菌，醋酸菌是兼性厌氧型细菌，需先通一段时间氧气后密封
B．在发酵过程中，温度控制在18～25
℃，发酵效果最好
C．当氧气、糖源充足时，醋酸菌可将葡萄中的糖分解成醋酸而酿制成果醋
D．醋酸菌对氧气特别敏感，仅在深层发酵时缺氧影响代谢活动
解析：醋酸菌是需氧型细菌，因此进行果醋发酵时不需要密封；果醋发酵最适宜的温度是30～35
℃；当氧气、糖源充足时，醋酸菌可将葡萄中的糖分解成醋酸而酿制成果醋；醋酸菌对氧气特别敏感，在整个发酵过程中，缺氧都会影响代谢活动。
答案：C
6．如图为苹果酒的发酵装置示意图，下列叙述正确的是( )
A．发酵过程中酒精的产生速率越来越快
B．集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的CO2
C．发酵过程中酵母种群呈“J”形增长
D．若发酵液表面出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气
解析：酒精发酵过程中，开始时，酒精的产生速率逐渐加快，后来保持相对稳定，最后由于营养物质逐渐被消耗等原因，酒精的产生速率逐渐减慢；集气管中的气体是酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸产生的CO2；发酵过程中酵母种群呈“S”形增长；若发酵液表面出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气，醋酸菌大量繁殖所致。
答案：D
7．可用于检验果酒发酵产物的是( )
①酸性重铬酸钾溶液 ②碱性重铬酸钾溶液 ③澄清石灰水 ④斐林试剂
A．①④
B．①③
C．②③④
D．①③④
解析：果酒发酵产物是酒精和二氧化碳。(1)酒精可以用酸性重铬酸钾溶液检测，颜色由橙色变为灰绿色；(2)二氧化碳用澄清石灰水检测，能使澄清石灰水变浑浊。
答案：B
8．下列果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是( )
A．腐乳制作所需要的适宜温度是35
℃
B．果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐增大
C．使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌
D．使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA
解析：果酒需要的温度在18～25
℃，果醋制备的温度是30～35
℃，腐乳制作需要的适宜温度是15～18
℃；果酒发酵过程中，葡萄糖分解变成酒精，因此发酵液密度会逐渐减小；使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌和毛霉；果酒、果醋和腐乳制作所使用的菌种分别是酵母菌(单细胞真菌)、醋酸杆菌(属于需氧型细菌)和毛霉(多细胞真菌)，它们均有细胞结构，都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA。
答案：D
9．下列有关发酵食品加工的操作，正确的是( )
A．制作果酒时应对葡萄进行反复冲洗以免杂质的影响
B．制作果醋时应避免通入空气以保证有关菌种正常代谢
C．制作腐乳时应适量加盐以避免豆腐变质、变软
D．制作酸奶时应保证有氧环境以提高酸奶的酸度
解析：发酵技术制葡萄酒所需的酵母菌菌种来自附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，不能进行反复冲洗；制作果醋时，用的是醋酸菌，是好氧细菌，应通入空气以保证有关菌种正常代谢；制作腐乳时应适量加盐可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期制作过程中不会过早酥烂；制作酸奶时是利用乳酸菌在无氧的环境下大量繁殖，将葡萄糖分解成乳酸。
答案：C
10．下列关于果酒和果醋的制作原理、发酵过程的叙述中，错误的是( )
A．果酒和果醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同
B．制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒
C．变酸果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落
D．果酒和果醋的制作可用同一装置，但需控制不同发酵条件
解析：果酒的发酵菌种是酵母菌，其代谢类型为异养兼性厌氧型，果醋的发酵菌种是醋酸菌，其代谢类型是异养需氧型；制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒；变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的；果酒和果醋的制作可用同一装置，但需控制不同发酵条件，如果酒制作需要无氧环境，适宜温度为18～25
℃，而果醋制作需要有氧环境，适宜温度为30～35
℃。
答案：A
11．关于酸奶制作，下列说法正确的是( )
A．含抗生素的牛奶更容易发酵
B．温度越高，制作酸奶需要的时间越长
C．牛奶变酸的同时，其中的糖类发生了变化
D．所有物质都装瓶后再加热灭菌，酸奶凝固的会更好
答案：C
12．下列有关生物技术实践操作的叙述正确的是( )
A．果醋发酵过程中，要严格密封，才有利于醋酸菌的代谢
B．制作腐乳时，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抑制杂菌生长
C．用乳酸菌制作酸奶时需要不时通入氧气
D．家庭制作果酒时，用洗涤剂反复冲洗葡萄表面不会影响发酵效果
解析：醋酸菌是好氧菌，所以需要适时充气才有利于醋酸菌的代谢；加盐可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期制作中不会过早酥烂，同时盐还能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质；乳酸菌是厌氧菌，所以需要隔绝氧气；家庭制作果酒，主要是利用附着在葡萄皮上的野生酵母菌，所以不能用洗涤剂反复清洗。
答案：B
13．下列有关生物技术的叙述，不正确的是( )
A．制作果醋时，必须向发酵装置不断地补充无菌空气，以保证醋酸菌的生长
B．制作腐乳时，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抑制杂菌生长
C．变酸的酒表面的菌膜是醋酸菌大量繁殖形成的
D．用传统的发酵技术制葡萄酒必须添加酵母菌菌种
解析：用传统的发酵技术制葡萄酒所需的酵母菌菌种来自附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，不需添加酵母菌菌种。
答案：D
14．测定亚硝酸盐含量的有关叙述，不正确的是( )
A．亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，需在盐酸酸化条件下
B．重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料
C．对显色反应样品进行目测，可精确算出泡菜中亚硝酸盐含量
D．配制溶液所用的提取剂为氯化镉与氯化钡
解析：目测颜色比较粗略，不可以精确算出亚硝酸盐的含量。
答案：C
15．泡菜发酵的微生物主要是乳酸菌，而在发酵初期，水槽内经常有气泡产生，这些气泡产生的原因及成分分别是( )
A．乳酸菌是厌氧型微生物，初期进行有氧呼吸产生CO2；气体为CO2
B．因腌制过程中盐进入蔬菜使蔬菜体积缩小，气体被排出；气体为空气
C．发酵初期酵母菌活动强烈，其利用氧气进行呼吸作用，产生的气体为CO2
D．乳酸菌在发酵过程中产生了热量，使坛内温度升高，空气受热膨胀排出；气体为空气
解析：乳酸菌是厌氧型微生物，只能进行无氧呼吸产生乳酸，A错误；腌制过程中，蔬菜体积缩小的原因是植物细胞逐渐失水，B错误；在发酵初期，水槽内经常有气泡产生，这些气泡产生的原因是发酵初期酵母菌活动强烈，其利用氧产生的气体为CO2，C正确，D错误。
答案：C
二、非选择题(共5小题，共45分)
16．(9分)在学习了传统发酵技术后，某同学利用新鲜的葡萄汁来尝试制作果酒和果醋，选用了如图所示装置，请据图回答下列问题：
(1)仔细观察装置，若用于制作果酒，装置中有两处不妥，请改正：
①________________________；②________________________
(2)在制作果酒时，充气口的使用方法是____________；在制作果醋时充气口的使用方法是__________________。
(3)排气管用弯曲细长的玻璃管或弯曲的长胶管与瓶身相连，原因是______________________________________________________。
(4)出料口的作用是___________________________________。
(5)接种醋酸菌，需升高温度到____________℃，并且需要通气，这是因为醋酸菌为____________。
(6)与醋酸菌相比较，酵母菌在细胞结构上最大的特点是______。
(7)使用果酒制作果醋的过程中，醋酸菌细胞内发生的代谢过称为(写方程式)______________________。
解析：(1)发酵装置清洗消毒后，将发酵液从瓶口装入，预留发酵瓶空间，塞紧橡皮塞，密封出料口，充气口玻璃管应插在发酵液深处，排气口应离开液面一段距离，以防发酵产生的泡沫堵塞排气口。正确的装置图如下：
(2)在制作果酒时，充气口应该密封，否则外界气体会通过充气口进入瓶内，影响酵母菌的无氧呼吸，即影响酒精产量；在制作果醋时，充气口应接气泵，不断充入空气。
(3)排气管用弯曲细长的玻璃管或弯曲的长胶管与瓶身相连，这样既能防止空气中微生物污染发酵液，又能使瓶内气体顺利排出。
(4)出料口是用来取样的，发酵过程中需定时检测发酵产物的浓度及菌体数量，还可用来排出废料。
(5)醋酸杆菌是嗜氧菌，也是嗜温菌，其代谢的适宜温度为30～35
℃。
(6)醋酸菌是原核生物，但酵母菌是真核生物，二者的细胞结构主要区别在于有无以核膜为界限的细胞核。
(7)使用果酒制作果醋的过程中，葡萄酒在醋酸菌的作用下，酒精转化成醋酸，反应式为C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O。
答案：(1)充气口应插入液面下一定深度 出气口管口应在液面上方离液面一段距离
(2)应该密封 应接气泵并适时充入空气
(3)防止空气中微生物污染发酵液
(4)取样、定时检测发酵产物的浓度及菌体数量、排出废料等
(5)30～35 好氧型细菌
(6)具有核膜包被的细胞核
(7)C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O
17．(9分)γ－氨基丁酸(GABA)是具有降血压、抗焦虑等功能的水溶性氨基酸。科研人员通过实验研究了白方腐乳在前发酵、盐腌和后发酵过程中GABA的含量变化，为寻找生产富含GABA腐乳的工艺奠定基础。实验步骤如下：
①豆腐白坯表面接种毛霉孢子后，在适宜的温度和湿度下培养48
h，获得毛坯。
②将毛坯分层整齐地摆放在瓶中，盐腌5
d。
③腌制后加入卤汤，置于28
℃恒温箱中后发酵90
d。
④分别采集各时段的腐乳坯样品，测定GABA含量，结果如下：
前发酵和盐腌过程
后发酵时间
请分析回答下列问题：
(1)通常含水量为____________左右的豆腐适合做腐乳；毛霉生长的适宜温度为____________。
(2)前发酵过程中，毛坯的GABA含量发生明显变化的原因是________________________。
(3)步骤②中，加盐腌制的正确方法是________________。此过程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面部分GABA会____________而导致测定值减小。
(4)后发酵过程中，GABA含量再次增加的原因是____________，后发酵____________d后的白方腐乳出厂销售比较适宜。
解析：(1)做腐乳所用豆腐的含水量为70%左右，水分过多则腐乳不易成形，且容易腐败变质；制作腐乳时主要的微生物是毛霉，毛霉生长的适宜温度为15～18
℃。
(2)据图中曲线可知，前发酵过程中，毛坯的GABA含量明显升高，其发生明显变化的原因是毛霉产生的蛋白酶促进蛋白质水解产生GABA。
(3)将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增高盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质，此过程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面部分GABA会溶解于水而导致测定值减小。
(4)后发酵过程中，GABA含量再次增加的原因是毛霉产生的蛋白酶继续发挥作用，后发酵60
d后的白方腐乳出厂销售比较适宜。
答案：(1)70% 15～18
℃
(2)毛霉产生的蛋白酶促进蛋白质水解产生GABA
(3)逐层加盐，随着层数的加高增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些 溶解于水(不存在于腐乳块中)
(4)毛霉产生的蛋白酶继续发挥作用 60
18．(9分)泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害，某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到如图。
(1)制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是__________。乳酸菌发酵第一阶段的产物有____________。
(2)据图，与第3天相比，第8天后的泡菜更适于食用，因为后者____________；pH呈下降趋势，原因是_______________________
_____________________________________________________。
(3)该小组得到一株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍)，拟参照资料的实验方案和食盐浓度(4%～10%)，探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件。请你设计一个实验结果记录表，并推测实验结论。________________________________________。
解析：(1)乳酸菌是厌氧菌，制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封以达到隔绝空气、为乳酸菌提供无氧环境的目的；乳酸菌发酵第一阶段的产物有丙酮酸、[H]、ATP。
(2)分析题图可知，与第三天相比，第八天亚硝酸盐含量较低，因此第8天后的泡菜更适于食用；由于乳酸菌发酵产物是乳酸，因此在发酵过程中pH会逐渐降低。
(3)分析题意可知，该实验的目的是探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低及适宜的条件，因此实验的自变量是菌种、食盐浓度和时间，因变量是亚硝酸盐的含量，因此记录实验结果的表格为：
推测实验结论
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
普通乳酸菌
4%
6%
8%
10%
优选乳酸菌
4%
6%
8%
10%
“优选”乳酸菌制作泡菜的亚硝酸盐含量比普通乳酸菌的含量低。
答案：(1)隔绝空气，为乳酸菌提供无氧环 丙酮酸、[H]、ATP
(2)亚硝酸盐含量较低 乳酸菌发酵产生乳酸使pH降低
(3)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
普通乳酸菌
4%
6%
8%
10%
优选乳酸菌
4%
6%
8%
10%
推测实验结论：“优选”乳酸菌制作泡菜的亚硝酸盐含量比普通乳酸菌的含量低
19．(9分)近年来，纪录片《舌尖上的中国》引发全民关注美食的热潮，其中多次讲述了利用不同微生物的发酵作用制作的美味食品。请分析回答下列问题：
(1)在果醋制作时，运用醋酸菌在供应
________
和糖源充足时，将糖分解成醋酸；在糖源不充足时，也可以利用酒精生成醋酸，请写出该过程的化学反应式：____________________________________。
(2)腐乳制作的流程是：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。用盐腌制时，应注意控制
________；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在
________%左右。
(3)制作泡菜的原理是__________________________________。
(4)蔬菜在腌制过程中，会产生亚硝酸盐。在
________条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生
________反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成
________色染料。
解析：(1)在果醋制作时，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，其化学反应式为：C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O。
(2)腐乳制作过程中，加盐腌制时，应注意控制盐的用量；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在12%左右，若酒精含量过高会延长腐乳成熟的时间，若酒精含量过低则不足以杀菌。
(3)制作泡菜的原理是乳酸菌在无氧的环境下大量繁殖，将葡萄糖分解成乳酸。在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
答案：(1)氧气 C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O
(2)盐的用量 12
(3)乳酸菌在无氧的环境下大量繁殖，将葡萄糖分解成乳酸
(4)盐酸酸化 重氮化 玫瑰红
20．(9分)酸菜，古称菹，《周礼》中就有其大名。制作酸菜的初衷是为了延长蔬菜保存期限。请回答下列问题：
(1)酸菜制作起主要作用的微生物是
________。但是在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是________。
(2)实验室可采用
__________法进行菌种纯化，在对该菌种进行培养时，与常规培养基相比还需要额外在培养基中添加_________。
(3)为了保持所获得菌种纯净，需要进行菌种的保藏。若采用临时保藏，将菌种接种在
________上，放入4
℃冰箱中可保藏3～6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的________混匀，放在－20℃的冰箱中保存一年。
(4)市场上购买的真空包装酸菜，在没有发生漏气状态下发生了“胀袋”现象，A同学怀疑是杂菌污染导致的，B同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说出理由。支持
________，理由是___________________________________________________。
解析：(1)酸菜制作起主要作用的微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型，能发酵产生乳酸。在发酵初期，酵母菌(或产膜酵母)会导致泡菜水的表面长白膜。
(2)纯化菌种常用平板划线法或稀释涂布平板法；维生素是乳酸菌生长繁殖所必需的，在体内又不能合成，因此要在培养乳酸菌的培养基中添加维生素。
(3)进行菌种保藏时，若采用临时保藏，将菌种接种在斜面培养基上，放入4
℃冰箱中可保藏3～6个月；若要长期保存，可将菌液与灭菌的甘油混匀，放在－20
℃的冰箱中保存一年。
(4)乳酸菌是厌氧型微生物，只能进行无氧呼吸，且无氧呼吸的产物只有乳酸，不产生气体，因此支持A同学的观点。
答案：(1)乳酸菌 酵母菌(或产膜酵母)
(2)平板划线或稀释涂布平板(任意答对一个即给分) 维生素
(3)斜面培养基 甘油
(4)A 乳酸菌代谢过程中不产生气体(或乳酸菌呼吸作用不产生二氧化碳)专题2
微生物的培养与应用
课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将( )
A．变蓝色
B．变红色
C．变黑色
D．变棕色
解析：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。
答案：B
2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )
A．细菌个体小，真菌个体大
B．细菌易稀释，真菌不易稀释
C．细菌在土壤中数量比真菌多
D．随机的，没有原因
解析：土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。
答案：C
3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是( )
A．平板上的一个菌落就是一个细菌
B．菌落中的细菌数是固定的
C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同
解析：用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。
答案：C
4．土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )
A．尿素酶
B．脲酶
C．蛋白酶
D．肽酶
解析：能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。
答案：B
5．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。实验的主要步骤如下，请分析回答问题：
(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________________。
(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。
(4)转为固体培养时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。
解析：题干中首先说明了化合物A是有机物，后来在培养基中又增加了磷酸盐、镁盐以及微量元素，通过比较各培养瓶中化合物A的多少，选出“目的菌”，由此还可推断出“目的菌”所需碳源和氮源都来自化合物A，是异养型。获得“目的菌”后，再进行扩大培养，培养过程中及培养结束后注意灭菌。
答案：(1)目的菌 选择 (2)化合物A 异养需氧型
(3)减少 增加 (4)平板划线
1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( )
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符合。C没有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。
答案：A
2．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有( )
①尿素 ②有机氮化物 ③无机盐 ④有机碳化物
⑤水 ⑥无机碳化物
A．①③④⑤
B．②③④⑤
C．①③⑤⑥
D．②③⑤⑥
解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。
答案：A
3．关于土壤取样的叙述错误的是( )
A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤
B．先铲去表层土3
cm左右，再取样
C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌
D．应在火焰旁称取土壤
答案：C
4．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是( )
A．活细胞数
B．死细胞数
C．菌落数
D．细胞总数
解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。
答案：D
5．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有( )
①由于土样不同 ②由于培养基被污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照
A．①②③
B．②③④
C．①③④
D．①②④
答案：A
6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是( )
A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数
B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落
C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果
解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布三个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。
答案：C
7．请选出分离土壤细菌的正确操作步骤( )
①土壤取样 ②称取10
g土壤，加入盛有90
mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1
mL进行平板涂布 ④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A．①→②→③→④
B．①→③→②→④
C．①→②→④→③
D．①→④→②→③
解析：在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10
g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
答案：C
8．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是( )
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同
C．如果得到了2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数
D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落
解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30～300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。
答案：D
9．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是( )
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②从土壤中分离出能够分解氨的细菌 ③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌 ④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌
A．①② B．①③ C．②④ D．③④
解析：该实验是为了分离出能分解尿素的细菌，根据活菌计数法，计算出的是每克土壤样品中的菌株数。
答案：B
10．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时( )
A．葡萄糖在培养基中含量越多越好
B．尿素在培养基中含量越少越好
C．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为无机氮
D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为有机氮
解析：葡萄糖是微生物最常用的碳源，但在培养基中不能加入过多，否则，会使细胞无法吸水而死亡；尿素在培养基中可以作为氮源，要适量加入而非越少越好；同时尿素是分解菌的有机氮源，而不是无机氮源，在分解过程中，尿素会被尿素分解菌分解为氨。
答案：D
11．广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)。
(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意________和________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据___________________________________________，
筛选出突变菌。
(2)上述步骤2、3和4的依据分别是________________________
______________________________________________________。
解析：(1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗糖和调低pH，能在选择培养基上生长的即为所需菌种。(2)步骤2是给其提供高糖或酸性的筛选环境；步骤3是为了获得单菌落；步骤4是根据能生长的菌株具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。
答案：(1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低pH 是否能在选择培养基上生长 (2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性
12．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数，请回答与此实验相关的问题：
(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_______和_____。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是______和_____。
(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是__________________
__________________。
(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37
℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种____________作为对照进行实验。
(4)培养20
h后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越____________________________。
(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐______________细菌，这种培养基被称为____________________。
答案：(1)氮源(碳源不作要求) 碳源 无机盐 水 (2)高压蒸汽灭菌 (3)无菌水 (4)多 高 (5)盐(或NaCl) 选择培养基
13．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________________________________；然后，将1
mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1
mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________________。
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是___________________________________
______________________________________________________。
(3)示意图A和B中，__________________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的__________的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高__________的利用率。
解析：(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：
×M＝
×100×1
000＝3.8×107
(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到菌落。
(3)由题图可知B图为平板划线法接种的结果(菌落相对均匀分布)。
(4)震荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；另外震荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。
答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107
(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
(3)B (4)溶解氧 营养物质专题2
微生物的培养与应用
课题3
分解纤维素的微生物的分离
1．纤维素酶可以将下列哪种物质分解( )
A．牛肉片
B．鱼片
C．滤纸条
D．塑料条
解析：纤维素酶只能使纤维素分解，本题中只有C项滤纸条的主要成分是纤维素，所以可以将滤纸条分解。
答案：C
2．下列环境中，纤维素分解菌含量最高的是( )
A．热带雨林中的土壤
B．寒带森林中的土壤
C．花盆中
D．荒漠地区
解析：生物与环境是相互依存的，纤维素含量高的环境，纤维素分解菌含量较多。
答案：A
3．纤维素、纤维素酶和控制纤维素酶合成的物质，它们的基本组成单位依次是( )
A．葡萄糖、葡萄糖和氨基酸
B．葡萄糖、氨基酸和核苷酸
C．氨基酸、氨基酸和核苷酸
D．淀粉、蛋白质和核酸
解析：纤维素是多糖，其基本组成单位是葡萄糖；纤维素酶是蛋白质，其基本组成单位是氨基酸；控制酶合成的物质是DNA，其基本组成单位是核苷酸。
答案：B
4．在从土壤中分享出分解纤维素的微生物的实验中，先进行选择培养，再进行刚果红染色法分离。先选择培养的目的是( )
A．浓缩目标菌种
B．除去杂菌，获得能分解纤维素的纯菌种
C．杀灭不需要的微生物
D．在微生物的菌落上获得纤维素分解菌种
解析：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到浓缩目标菌种的作用，但是不能得到单一菌种。该培养基中的化学成分不能杀灭微生物。选择培养时用液体培养基，微生物在培养液中繁殖，不能获得目标菌落。
答案：A
5．有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能产生纤维素酶的微生物。请分析后回答下列问题：
(1)培养基中加入的化合物A是________，为微生物的生长提供________，这种培养基属于________培养基。
(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，应向培养基中加入________。
(3)在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度。若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是________，操作时采用________灭菌的方法；还可用____________________法进行接种。
(4)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是__________________________________________。
解析：(1)利用纤维素作为唯一碳源的培养基分离纯化分解纤维素的微生物，这类培养基属于选择培养基。(2)在培养基中加入刚果红，它可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，在培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。(3)用平板划线法进行接种的工具是接种环，接种环常用灼烧方法进行灭菌。(4)使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样可以避免杂菌对环境造成污染。
答案：(1)纤维素 碳源 选择 (2)刚果红 (3)接种环 灼烧 稀释涂布平板 (4)防止造成环境污染
1．微生物体内能够使纤维素分解成纤维二糖的酶是( )
A．C1酶和Cx酶
B．C1酶和葡萄糖苷酶
C．Cx酶和葡萄糖苷酶
D．C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶
解析：纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分，其中C1酶和Cx酶能将纤维素分解成纤维二糖，而葡萄糖苷酶能将纤维二糖分解成葡萄糖。
答案：A
2．关于纤维素酶的叙述中，错误的是( )
A．牛、羊等草食动物可以合成纤维素酶，从而利用纤维素
B．纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分
C．纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质
D．分解纤维素的细菌、真菌、放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的
解析：牛、羊等草食动物不能合成纤维素酶，它们之所以能利用纤维素是因为它们的瘤胃中有许多微生物可分泌纤维素酶；纤维素被纤维素酶分解后的产物是葡萄糖，葡萄糖可作为微生物的营养物质；能分解纤维素的微生物都能产生纤维素酶，它们通过纤维素酶来分解纤维素。
答案：A
3．要将能分解纤维素的细菌从土壤中分离出来，应将它们接种在( )
A．加入指示剂的鉴别培养基上
B．含有蛋白胨的固体培养基上
C．只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上
D．含四大营养要素的培养基上
解析：选择纤维素分解菌的培养基中应含有该种菌生长发育所需的营养条件，其他菌种在这种培养基中不能生存。
答案：C
4．分离土壤中纤维素分解菌所用到的方法是( )
①稀释倒平板法 ②涂布平板法 ③单细胞挑取法 ④选择培养基分离
A．①②
B．②③④
C．②③
D．①③④
解析：分离土壤中的纤维素分解菌时，先进行选择培养，以增大纤维素分解菌的浓度，即富集培养，梯度稀释后涂布平板、培养，最后运用挑取单细胞法以获得纯培养。
答案：B
5．从土壤中筛选纤维素分解菌的实验设计正确的是( )
A．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→发酵培养
B．土壤取样→选择培养→稀释涂布平板→挑选菌落
C．土壤取样→梯度稀释→选择培养→挑选菌落
D．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→选择培养→挑选菌落
解析：土壤取样之后，应先经过选择培养，以增大目的菌株的浓度，然后为避免一个培养基上的菌落太多，需进行稀释涂布平板。
答案：B
6．刚果红能与哪项物质形成红色复合物( )
A．纤维二糖
B．纤维素
C．葡萄糖
D．麦芽糖
答案：B
7．纤维素酶的测定方法一般是( )
A．对纤维素进行定量测定
B．对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定
C．对纤维素酶分解纤维素后所产生的纤维二糖进行定量测定
D．对纤维素分解菌进行定量测定
解析：进行纤维素酶的测定，测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。
答案：B
8．在分离纤维素分解菌过程中往往需要震荡，其作用不包括( )
A．使细菌能与培养基混合均匀
B．使细菌能充分吸收氧气
C．使细菌能快速繁殖
D．防止细菌失水
解析：纤维素分解菌属好氧型细菌，充分震荡，一方面可促进细菌与培养基混合均匀，有利于其吸收营养，另一方面让细菌能充分与空气接触，有利于吸收氧气，以上两方面都能促进细菌快速繁殖。
答案：D
9．在加入刚果红的培养基中会出现如图所示透明圈，产生的透明圈是( )
A．刚果红与纤维素形成的复合物
B．刚果红与纤维二糖形成的复合物
C．纤维素分解后形成的葡萄糖导致的
D．以纤维素分解菌为中心形成的
解析：刚果红可以与纤维素结合形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
答案：D
10．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1
mL，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37
℃恒温培养24～48
h
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
解析：确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
答案：D
11．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：
(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将____________分解成________。
(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成__________色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的____________________。
(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：
成分
酵母膏
无机盐
淀粉
纤维素粉
琼脂
CR溶液
水
培养基甲
＋
＋
＋
＋
－
＋
＋
培养基乙
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
注：“＋”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______________________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________________________________。
解析：(1)纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，如下图：
(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
(3)分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，且需以纤维素为唯一碳源。
答案：(1)纤维二糖 葡萄糖 (2)红 透明圈
(3)不能 液体培养基不能分离单菌落 不能 乙培养基中没有纤维素，不会形成CR－纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
12．某实验小组欲从土壤中筛选出能高效分解纤维素的微生物，设计了下列实验流程。请回答相关问题：
→→→→
(1)选择培养使用的培养基是以__________为唯一碳源，该培养基是__________(固体或液体)培养基。
(2)鉴别纤维素分解菌的培养基中应加入________染料，它可以与纤维素形成________色复合物，最终应挑选透明圈________(大或小)的菌落进行纯化培养。
(3)实验中对培养基进行灭菌常用方法是________________。挑选菌落前，对接种环的灭菌方法是____________________。
(4)上述实验中，接种操作都应在火焰附近进行，以防止_______。
答案：(1)纤维素 液体 (2)刚果红 红 大 (3)高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 (4)杂菌污染
13．利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。请完善实验方案，并回答相关问题：
【实验目的】比较三种微生物所产生的纤维素酶的活性。
【实验原理】纤维素酶催化纤维素分解为葡萄糖，用葡萄糖的产生速率表示酶活性大小；用呈色反应表示葡萄糖的生成量。
【实验材料】三种微生物(A～C)培养物的纤维素酶提取液，提取液中酶蛋白浓度相同。
【实验步骤】
(1)取四支试管，分别编号。
(2)在下表各列的一个适当位置，填写相应试剂的体积，并按表内要求完成相关操作。
试管号
1
2
3
4
蒸馏水/mL
1.4
1.4
1.4
pH
7.5的缓冲液/mL
0.2
0.2
0.2
纤维素悬浮液/mL
0.3
0.3
0.3
微生物A提取液/mL
0.1
微生物B提取液/mL
微生物C提取液/mL
0.1
总体积/mL
2.0
2.0
2.0
2.0
(3)将上述四支试管放入37
℃的水中，保温1
h。
(4)在上述四支试管中分别加入_______试剂，摇匀后，进行__________处理。
(5)观察比较实验组的三支试管与对照组试管的颜色及其深浅。
【实验结果】
物质
微生物A提取物
微生物B提取物
微生物C提取物
颜色深浅程度
＋
＋＋＋
＋＋
【分析讨论】
(1)该实验中的对照组是__________号试管。
(2)实验组试管中呈现的颜色均是__________，但深浅不同。
(3)上述结果表明：不同来源的纤维素酶，虽然酶蛋白浓度相同，但活性不同。若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异，其可能原因是______________________。
(4)你认为上述三种微生物中，最具有应用开发价值的是______。
(5)从解决能源问题的角度考虑，开发这种纤维素酶的意义在于
_______________________________________________________
_______________________________________________________
______________________________________________________。
解析：本题实验目的是比较三种微生物所产生的纤维素酶的活性。根据实验目的确定自变量为不同微生物提取液，因变量为葡萄糖的生成量，其余为无关因素(如不同微生物的提取液量、pH
7.5的缓冲液量和纤维素悬浮液量)，应该等量。4号试管为空白对照组，其未加入微生物提取液，故应该加入1.5
mL的蒸馏水以保证总体积为2.0
mL。实验结果通过与斐林试剂共热生成砖红色沉淀的颜色深浅程度进行判断，分析实验结果可知，微生物B提取液与斐林试剂反应颜色最深，最具有研究价值。不同来源的纤维素酶，虽然酶蛋白浓度相同，但活性不同。若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异，其可能原因是不同酶的空间结构不同。开发纤维素酶的意义在于葡萄糖可用作制取酒精的原料或用纤维素代替化学能源。
答案：【实验步骤】(2)
试管号
1
2
3
4
蒸馏水/mL
1.5
pH
7.5的缓冲液/mL
0.2
纤维素悬浮液/mL
0.3
微生物A提取液/mL
微生物B提取液/mL
0.1
微生物C提取液/mL
总体积/mL
(4)斐林 水浴加热
【分析讨论】(1)4 (2)砖红色 (3)不同酶的氨基酸序列不同(不同酶的空间结构不同) (4)微生物B (5)葡萄糖可用作制取酒精的原料或用纤维素代替化学能源(言之有理即可)专题知识整合
[网络构建]
填充：①液体培养基 ②碳源 ③氮源 ④巴氏消毒 ⑤干热灭菌法 ⑥称量 ⑦倒平板 ⑧平板划线 ⑨稀释涂布平板 ⑩样品的稀释 葡萄糖苷 梯度稀释 刚果红专题知识整合
[网络构建]
填充：①植物细胞的全能性 ②外植体消毒 ③移栽 ④单核期 ⑤愈伤组织 ⑥丛芽 ⑦培养基的组成 ⑧接种专题测试卷(二)
(时间：60分钟 满分：100分)
一、选择题(共15小题，1～10小题每小题3分，11～15小题每小题5分，共55分。每小题只有一个选项符合题意。)
1．下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是( )
A．微生物培养前，需对培养基进行消毒
B．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度
C．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法
D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源
解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌；为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌；尿素分解菌中的脲酶能将尿素分解为氨，筛选分离时必须以尿素为唯一碳源。
答案：A
2．下列关于细菌的叙述，错误的是( )
A．硝化细菌能以NH3，作为氮源和能源物质
B．某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物
C．生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质
D．含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌
解析：硝化细菌可以利用氧化氨释放的能量用来合成有机物，氨含有氮元素可以提供氮源；蓝藻可以利用光能进行光合作用；生长因子是一类对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物，它的需要量一般很少，生长因子一般有维生素、碱基、卟啉及其衍生物、氨基酸等，并不是所有的微生物都需要生长因子，某些微生物不能合成一些生长所必需的物质，必须从外界摄取这些营养物质；伊红和美蓝试剂的培养基可以用来鉴别牛奶中的大肠杆菌，如果菌落呈深紫色，并带有金属光泽，说明有大肠杆菌。
答案：D
3．下列有关微生物培养的说法，正确的是( )
A．制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板
B．分离能分解纤维素的细菌，要以纤维素作为培养基中唯一碳源
C．配置培养不同微生物的培养基时都要将pH调至中性或微碱性
D．在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌
解析：制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板；分离能分解纤维素的细菌，要以纤维素作为培养基中唯一碳源；配置培养不同微生物的培养基时都要将pH调至能够满足该种微生物的需要；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌。
答案：B
4．关于平板划线法和涂布平板法的叙述不正确的是( )
A．只能应用于固体培养基接种
B．都可以用于微生物的计数
C．接种培养后均可获得单菌落
D．接种用具都需进行严格灭菌
解析：平板划线法和稀释涂布平板法都只能用于固体培养基上接种；稀释涂布平板法又称活菌计数，是由一个单细胞繁殖可成单个菌落这一培养特征设计的计数方法，可对微生物进行计数，而平板划线法不能用于计数；接种换上的菌液经过连续划线或逐步稀释，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落；接种环和涂布器都必须经过灭菌才能使用。
答案：B
5．关于微生物培养基的说法正确的是( )
A．牛肉膏不能提供碳源
B．培养硝化细菌可以不加有机碳
C．刚果红使纤维二糖染色
D．酵母菌酿酒时需持续供氧
解析：牛肉膏能给微生物提供碳源；硝化细菌属于自养型微生物，故培养硝化细菌可以不加有机碳；纤维素可以与刚果红染液反应呈红色；酵母菌酿酒时前期需要供氧，后期应该是严格的无氧发酵。
答案：B
6．为探究大叶木姜子多糖的抑菌效果，研究人员将下列4种菌分别用无菌水稀释成菌悬液，于固体培养基上制成含菌平皿，在平皿上放置经不同浓度大叶木姜子多糖溶液浸泡2～3小时的滤纸片，培养一段时间后，测定各供试菌的抑菌圈直径，结果如下表，相关叙述，错误的是( )
多糖浓度/%
金黄色葡萄球菌
酵母菌
灰绿曲霉
黑曲霉
10.0
2.8
3.3
2.6
1.2
5.0
2.7
3.1
1.8
0.9
2.5
2.3
2.7
1.0
0.3
1.0
1.4
0.3
－
－
0.5
1.2
－
－
－
A.金黄色葡萄球菌与另外三种菌的主要区别是没有核膜
B．制备含菌平皿可用稀释涂布平板法或平板划线法
C．每个浓度每种菌重复多次实验，所得数据取平均值
D．大叶木姜子多糖对黑曲霉抑制效果最差
解析：金黄色葡萄球菌属于细菌，原核生物，其余三种微生物都是真菌，真核生物，前者没有核膜包被的细胞核，后者都有；根据题干接种使用的是菌悬液，最好应该使用稀释涂布平板法接种；为避免实验误差，每个浓度每种菌重复多次实验，所得数据取平均值；黑曲霉在含有不同浓度的大叶木姜子多糖上产生的抑菌圈的直径最小，抑制效果最差。
答案：B
7．有关平板划线操作不正确的是( )
A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红
B．接种环在平板上划线位置是随机的
C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰
D．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养
解析：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌；在平板划线时，要划3～5条平行线，而不是随机的；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰；将平板倒置放在恒温箱。
答案：B
8．如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是( )
A．需要对活性污泥作灭菌处理
B．②中LB培养基应以甲醛为唯一碳源
C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养
解析：活性污泥不需要进行灭菌处理；②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量；③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，即培养出以甲醛为唯一碳源的细菌；目的菌种异化作用是需氧型；经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养。
答案：D
9．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )
A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入伊红－美蓝试剂
C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂
D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
解析：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果有尿素分解菌可以呈红色；伊红－美蓝试剂可以用来鉴别大肠杆菌；苏丹Ⅲ试剂可以用来检测脂肪；双缩脲试剂可以用来检测蛋白质。
答案：A
10．分离土壤中分解尿素的细菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是( )
A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层
B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌
C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源
D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒
解析：制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大；涂布器未在酒精灯外焰上的烧灼灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大；接种操作的双手未用酒精进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大。
答案：C
11．甲、乙、丙是三种微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是( )
粉状硫10
g
K2HPO44
g
FeSO40.5
g
蔗糖10
g
(NH4)2SO40.4
g
H2O100
mL
MgSO49.25
g
CaCl20.5
g
Ⅰ
＋
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
Ⅱ
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
＋
Ⅲ
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
A.甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
解析：从表中所列的三种培养基成分着手，培养基Ⅰ中缺少氮源，培养基Ⅱ中缺少有机碳，培养基Ⅲ中营养成分最全。由题意中所给的情况分析，只有甲能在培养基Ⅰ中生长，而乙、丙不能说明甲能自行固氮；乙能在Ⅱ中生长，说明乙可自行合成有机碳，是一种自养微生物；而丙只能在Ⅲ中生长，说明它既不能固氮也不能自行合成有机物。由此可知甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物。
答案：D
12．某生物兴趣小组以带有落叶的表层土壤(深5
cm左右)为实验材料，研究土壤微生物在适宜温度下的分解作用，对土壤处理情况见下表。与此有关的叙述不正确的是( )
组别
1组
2组
3组
4组
土壤
灭菌
不灭菌
灭菌
不灭菌
处理
湿润
湿润
较干燥
较干燥
A.探究的问题是不同土壤湿度条件下，土壤微生物对落叶的分解作用
B．预期结果是1、3组的落叶不被分解，2、4组中的落叶被不同程度的分解
C．为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理
D．该实验的自变量为土壤是否灭菌处理，实验中的对照组是1和3
解析：实验组2组和4组可以形成对照，变量是土壤的湿润程度，来研究土壤微生物对落叶的分解作用；该实验的变量有两个，一个是灭菌、不灭菌，一个是湿润、不湿润。自变量是灭菌、不灭菌，在湿润条件下1、2形成对照，在干燥条件下3、4形成对照，所以1、3分别是两组对照实验的对照组；为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理，消除微生物的影响；1组和3组由于没有微生物，落叶不被分解，2组和4组由于有微生物，落叶不同程度地被分解。
答案：D
13．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出( )
①大肠杆菌 ②霉菌 ③放线菌 ④固氮细菌
A．④③②
B．④②③
C．④①②
D．④②①
解析：根据题意，固氮细菌的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌和酵母菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身的产物。
答案：B
14．MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如下表。下列说法正确的是( )
组别
培养基中的添加物
MRSA菌
1
100
μg/mL蛋白质H
生长正常
2
20
μg/mL青霉素
生长正常
3
2
μg/mL青霉素＋100
μg/mL蛋白质H
死亡
A.细菌死亡与否是通过光学显微镜观察其细胞核的有无来确定的
B．第2组和第3组对比表明，使用低浓度的青霉素即可杀死MRSA菌
C．实验还需设计用2
μg/mL青霉素做处理的对照组
D．蛋白质H有很强的杀菌作用，是一种新型抗生素
解析：细菌是原核生物，其细胞中无细胞核，因而不能通过光学显微镜观察其细胞核的有无来确定细菌的死亡与否；第2组和第3组对比说明使用低浓度青霉素和高浓度蛋白质H可杀死MRSA菌；第3组缺少2
μg/mL青霉素做处理的对照组；抗生素是由微生物产生的具有抗菌作用的物质，而蛋白质H是乳腺细胞产生，不属于抗生素。
答案：C
15．如表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( )
成分
牛肉膏
葡萄糖
K2HPO4
伊红
美蓝
青霉素
琼脂
蒸馏
含量
10
g
10
g
2
g
0.4
g
0.065
g
1万单位
适量
1000
mL
A.此培养基是天然鉴别培养基
B．能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因
C．此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中
D．此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准
解析：此培养基属于鉴定大肠杆菌的半合成培养基，另外有青霉素还具有选择作用，A错误；能在此培养基上生长的大肠杆菌，抗青霉素的抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上，B错误；大肠杆菌常作为基因工程的工程菌，此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中，C正确；此培养基只能用来检测自来水中大肠杆菌含量是否符合饮用水标准，D错误。
答案：C
二、非选择题(共5小题，共45分)
16．(7分)螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：
→→→→
请回答：
(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。
(2)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。
(3)在培养时，需将培养皿倒置并放在__________________中。若不倒置培养，将导致______________________________________。
(4)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的____________分解为NH3和14CO2。
解析：(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(3)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(4)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。
答案：(1)红 (2)接种 涂布 单 (3)恒温培养箱 无法形成单菌落 (4)尿素
17．(10分)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于________培养基。
(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和______________。接种时所用的接种环通过________灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从____________
开始划线，该分离纯化方法称________法。
(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。
(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、____________和____________________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
答案：(1)原油 选择 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 灼烧 上一次划线的末端 平板划线 (3)强 (4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰
18．(7分)农作物秸秆中含有大量的纤维素，这些纤维素可以在纤维素分解菌的作用下被分解成葡萄糖，然后通过相关微生物的代谢活动转化为酒精或其他产物。请回答下列问题：
(1)纤维素分解菌能产生分解纤维素的________酶，该酶是一种复合酶，一般认为它至少包括_______________________三种组分。
(2)从自然界中筛选纤维素分解菌时有两个关键的操作步骤：一是选择培养，二是鉴别纤维素分解菌。选择培养时培养基中添加的唯一碳源是________，选择培养的目的是_________________________
______________________________________________________；
鉴别纤维素分解菌时在鉴别培养基中加入了________染液，如果有纤维素分解菌存在，则培养基中以该菌落为中心的周围会出现____________________。
(3)葡萄糖经过不同微生物的代谢可以转化为不同的产物，如在____________的作用下可以转化为酒精，在________的作用下可以转化为醋酸。
解析：(1)纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。(2)选择培养指用纤维素作为唯一碳源的选择培养基培养微生物，在这种培养基上只有能够分解利用纤维素的微生物才能生长和繁殖。可以使用刚果红来鉴别是否存在纤维素分解菌，如果存在纤维素分解菌，则在培养基中该菌落周围会出现透明圈。(3)葡萄糖通过酵母菌的无氧呼吸可以转化成酒精，通过醋酸菌的有氧呼吸可以转化为醋酸。
答案：(1)纤维素 C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 (2)纤维素 使能够分解利用纤维素的微生物在培养基上生长和繁殖，从而淘汰不能分解利用纤维素的微生物 刚果红 透明圈 (3)酵母菌 醋酸菌
19．(8分)已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A。现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如图。
(1)步骤一使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，其中含有细菌生长所需的水、
________等营养物质(至少写出3种)；该培养基是[ ](多选)。
A．固体培养基
B．液体培养基
C．通用培养基
D．选择培养基
(2)步骤一采用
________接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的
________，最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是
__________________________________________________。
(3)无论是培养基(液)，接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行
________
；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是
______________________________________________。
(4)步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，预测可能的结果并推测结论：
①A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，两者未分离。
②___________________________________________________。
③___________________________________________________。
(5)经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量测定结果都下降，瓶中同时存在两种细菌，未分离的情况，则应
________，再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止。
解析：(1)牛肉膏蛋白胨培养基中含有细菌生长所需的水、碳源、氮源、无机物、生长因子等营养物质；该培养基一般加琼脂制成固体培养基，并属于通用培养基。
(2)由图可知，步骤一采用平板划线法接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的菌落，最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是筛选、分离两种类型的细菌。
(3)无论是培养基(液)，接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行灭菌；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是防止杂菌污染。
(4)若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，若A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，说明两者未分离；若A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ；若B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ。
(5)经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量都下降，说明两种细菌还未分开，则需要重复步骤一和步骤二再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止。
答案：(1)碳源、氮源、无机物、生长因子(任意三种，仅写出一种或两种即可) A、C
(2)平板划线 菌落 筛选、分离两种类型的细菌
(3)灭菌 防止杂菌污染
(4)②A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ
③B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ
(5)重复步骤一和步骤二
20．(13分)Ⅰ.细菌常被应用于生产生活中，如有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的细菌。
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以
________为唯一碳源的固体培养基上。为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围清晰区域的大小。一般情况下，如图中清晰区域越大说明
____________。
Ⅱ.另一同学将第一步筛选得到的甲、乙、丙三种细菌分别接种到A、B、C三种培养液中，经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：
培养液成分
繁殖一代所需的时间(分钟)
甲
乙
丙
A.葡萄糖、NaCl、PO、MgSO4
43
100
－
B.葡萄糖、NaCl、PO、MgSO4、8种氨基酸
28
40
－
C.葡萄糖、NaCl、PO、MgSO4、19种氨基酸
25
25
80
注：“－”表示细菌没有生长。
(2)在A培养基中增殖较快的细菌是____________。丙细菌可以在C培养液中繁殖却无法在B培养液中繁殖，原因是
___________。
(3)由于微生物的营养类型复杂，不同的微生物对营养物质的需求是不同的。如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的营养物质是
________(多选题)。
A．碳源 B．氮源 C．生长因子
D．无机盐 E．水
Ⅲ.下面是有关某细菌G的四项实验：
实验1：将G接种于一般培养基上，结果出现菌落。
实验2：用一定剂量的紫外线处理G，产生突变种g1。将g1接种于一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现菌落。
实验3：用另一剂量的紫外线处理G，得突变种g2，将g2接种于一般培养基后，也不出现菌落；但在培养基内添加营养物质乙后，就出现菌落。
实验4：将g1和g2一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落。
(4)细菌g1和g2分别接种于一般培养基，均不能生长。其原因是用紫外线处理导致细菌G发生了
________，从而缺乏合成营养物质甲或乙的酶。
A．基因突变 B．基因重组 C．染色体畸变 D．不可遗传变异
(5)实验1至3表明，物质甲和乙均是细菌G在代谢过程中产生的代谢产物。在实验2和3中，它们是作为
________加入一般培养基的。
A．碳源
B．氮源
C．生长因子
D．无机盐
(6)实验4中出现菌落的原因可能是
_____________________。
解析：(1)从实验目的欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的细菌，可以得出该培养基属于选择培养基，培养基的成分应以原油为唯一碳源。细菌可分解原油，分解能力越强，形成的透明圈越大，透明度越高，一般清晰区域越大说明该菌株的降解能力强。
(2)观察题图表格可以看出在A培养基中，能生长的细菌是甲和乙，甲繁殖一代需要的时间短，所以增殖较快。比较B、C培养基的成分可知，C培养基的氨基酸的种类比B培养基多，所以丙细菌可以在C培养液中繁殖却无法在B培养液中繁殖，原因可能是B培养液中缺乏丙细菌生长所必需的氨基酸。
(3)如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的营养物质中不需要添加碳源和生长因子。
(4)分析资料可知紫外线照射后发生了基因突变，突变后的g1不能合成甲物质，突变后的g2不能合成乙物质。所以细菌g1和g2分别接种于一般培养基，均不能生长。其原因是用紫外线处理导致细菌G发生了基因突变，从而缺乏合成营养物质甲或乙的酶。
(5)实验1至3表明，物质甲和乙均是细菌G在代谢过程中产生的代谢产物。在实验2和3中，它们是作为生长因子加入一般培养基的。
(6)实验4中出现菌落的原因可能是细菌g1能够合成营养物质乙，g2能够合成营养物质甲，因此一起培养可以互相支持保证必需的营养要素。
答案：(1)原油 该菌株的降解能力强
(2)甲 B培养液中缺乏丙细菌生长所必需的氨基酸
(3)B、D、E (4)A (5)C
(6)细菌g1能够合成营养物质乙，细菌g2能够合成营养物质甲，因此一起培养可以互相支持保证必需的营养要素专题2
微生物的培养与应用
课题1
微生物的实验室培养
1．下列有关培养基叙述正确的是( )
A．培养基的营养成分都有碳源、氮源、水、无机盐
B．除水以外的无机物都属于无机盐
C．用培养基培养甲型H1N1流感病毒作为科学研究
D．培养基配制过程中应调pH，适应各微生物的生长
解析：固氮微生物培养基可无氮源，有的无机物如NH4NO3可作氮源，H1N1流感病毒必须寄生在细胞内，不能用培养基培养。
答案：D
2．关于灭菌和消毒的不正确的理解是( )
A．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是相同的
C．接种环用灼烧的方法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌等
解析：消毒是指用温和的理化方法杀死体表或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是用强烈的理化因素杀死体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
答案：B
3．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌
B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，应先根据需要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板。
答案：C
4．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是( )
A．接种时再拿起来方便
B．在皿底上标记日期等方便
C．正着放置容易破碎
D．防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
解析：平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
答案：D
5．氯苯化合物是重要的有机化工原料，其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表：
液体培养基
蛋白胨
牛肉膏
氯苯
氯化钠
硝酸铵
无机盐(无碳)
蒸馏水
Ⅰ号
10
g
5
g
5
mg
5
g
－
－
1
L
Ⅱ号
－
－
50
mg
5
g
3
g
适量
1
L
Ⅲ号
－
－
20～80
mg
5
g
3
g
适量
1
L
图1
(1)配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的________。
(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是____________。
(3)在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_____________。
(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。
(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线(如图2)。从图2可知，SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是________________________________________。
图2
解析：本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程，意在考查学生的图表信息转换与分析能力。配制固体培养基时应在液体培养基的成分中再加入琼脂作为凝固剂。在配制培养基时应先调节pH，后进行灭菌，防止灭菌后在调节pH的过程中污染培养基。在营养缺乏、环境恶劣时，微生物可以形成休眠体——芽孢，来度过不良环境。据图可知，SP1菌在20
mg/L氯苯培养条件下菌体数最早达到最大值，即最早停止生长，原因是在Ⅲ号培养液中，氯苯是唯一碳源，由于20
mg/L氯苯培养条件下碳源最少，因此也最早被耗尽，使SP1菌停止生长。
答案：(1)琼脂 (2)先调pH，后灭菌 (3)硝酸铵
(4)芽孢 (5)20
mg/L氯苯 碳源最早耗尽
1．下列有关培养基的叙述正确的是( )
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌
解析：培养基除固体、液体培养基外，还有半固体培养基，B错误；固体培养基中加入了凝固剂，加入少量水仍为固体培养基，C错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落，但不一定是单个菌落，D错误。
答案：A
2．有关培养基配制原则表述正确的是( )
A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子
B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素
C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响
D．营养物质的浓度越高越好
解析：培养自养型微生物时不需要添加碳源，培养固氮菌时可以不加氮源；一般来说，培养基中含量最多的是水；配制培养基时要合理控制营养物质的浓度，必须考虑微生物对渗透压的耐受能力。
答案：C
3．下面对微生物培养中灭菌的理解不正确的是( )
A．防止杂菌污染
B．灭菌就是杀死培养基中的杂菌
C．培养基和培养设备都必须进行灭菌
D．灭菌必须在接种前
解析：灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。
答案：B
4．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于( )
A．碳源
B．氮源
C．无机盐
D．生长因子
解析：自养型微生物主要包括进行光合作用或进行化能合成作用的微生物，他们能够利用CO2来合成自身所需的有机物；而异养型微生物主要是直接利用外界的有机物来合成自身所需的有机物，所以他们培养基的主要差别就在于自养型微生物主要是利用无机物中的碳，而异养型微生物主要是利用有机物中的碳。
答案：A
5．下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( )
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．将培养基冷却至50
℃左右时进行倒平板
D．将平板冷却凝固约5～10
min后将平板倒过来放置
解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏融化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。将培养基冷却至50
℃，用手触摸锥形瓶感觉刚刚不烫手时倒平板，平板冷却后还需倒置。
答案：A
6．平板冷却凝固后要将平板倒置，其意义是( )
A．利于大肠杆菌的接种
B．有利于大肠杆菌培养
C．利于培养基的冷却
D．防止皿盖冷却水倒流入培养基，防止杂菌污染
解析：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。
答案：D
7．纯化大肠杆菌的步骤正确的是( )
A．样品稀释→划线或涂布法分离→培养成单菌落
B．样品稀释→培养成单菌落→划线或涂布法分离
C．样品稀释→划线或涂布→分离→培养成单菌落
D．样品稀释→划线→涂布→分离→培养成单菌落
解析：微生物的分离与纯化主要包括样品稀释、划线或涂布及培养三个基本步骤，其中划线或涂布法是对微生物进行分离，培养是将分离后的菌种培养成单个菌落。
答案：A
8．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是( )
A．培养基分装到培养皿后进行灭菌
B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养
D．培养过程中每隔一周观察一次
解析：在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C错误；培养过程中一般隔12
h或24
h观察一次，D错误。
答案：B
9．现有菌液10
mL，按下图进行系列稀释，在最后一个试管中测得细菌数为20个，则未稀释前的试管中有细菌( )
A．600个
B．1
200个
C．2×107个
D．2×106个
解析：从本题的图中可看出，每次都是稀释10倍，总共稀释6次，即稀释106倍，最后一个试管为20个，即原来菌液中应该有细菌2×107个。
答案：C
10．为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( )
A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法
B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上
C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异
D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4
℃保藏的方法
解析：低温4
℃保藏属于临时保藏的方法。
答案：D
11．为了获得纯度高的大肠杆菌，需要对大肠杆菌进行培养和分离。培养大肠杆菌一般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
(1)培养大肠杆菌，配制固体培养基的基本步骤：计算→称量→__________→__________→倒平板。
(2)称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用______挑取，放在______上称量。由于牛肉膏和蛋白胨________，称量时动作要迅速，称量后要及时盖上瓶盖。
(3)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的大肠杆菌能生长，说明培养基含有________________________________________________
等大肠杆菌生长所需的营养要素。
(4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法如________和________等，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个________，从而获得纯菌株。
解析：配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的基本步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。称量时，可用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量，称量时动作要迅速。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中含有大肠杆菌所需要的碳源、氮源、无机盐、水等营养要素，所以常用来培养大肠杆菌。微生物纯化培养的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，可使大肠杆菌在固体培养基上形成单个菌落，从而获得纯菌株。
答案：(1)溶化 灭菌 (2)玻璃棒 称量纸 容易吸潮
(3)碳源、氮源、无机盐、水 (4)平板划线法 稀释涂布平板法 菌落
12．下表为牛肉膏、蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：
牛肉膏
蛋白胨
NaCl
H2O
琼脂
0.5
g
1.0
g
0.5
g
100
mL
2.0
g
(1)蛋白胨在培养基中的作用是___________________________
______________________________________________________。
(2)此培养基如要培养霉菌时需将培养基的pH值调至________。
(3)从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法有：_______________________________________________________
_____________________________________________________。
(4)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是__________________
_____________________________________________________。
(5)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是___________、__________________，最终，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个__________________，从而获得纯菌株。
答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子 (2)酸性 (3)高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 (4)扩大接种面积 (5)平板划线法 稀释涂布平板法 菌落
13．下图是倒平板操作示意图，请回答下列问题：
(1)正确的操作顺序是______________________。
(2)平板冷凝后将平板倒置原因是_________________________
_____________________________________________________。
(3)在倒平板过程中如果不小心将培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板还能培养微生物吗？__________________，原因是___
_______________________________________________________
_______________________________________________________
______________________________________________________。
答案：(1)ACBD (2)利于水蒸气的散发、防止杂菌污染 (3)不能 这样容易被杂菌污染专题1
传统发酵技术的应用
课题2
腐乳的制作
1．下列关于腐乳发酵原理的叙述，不正确的是( )
A．多种微生物参与了腐乳发酵
B．装瓶后豆腐坯上的各种微生物会继续发酵
C．发酵过程中蛋白质分解成多肽和氨基酸
D．发酵过程中毛霉和根霉为互利共生关系
解析：发酵过程中毛霉和根霉等多种微生物是协同作用，但并不等于它们之间就是互利共生关系，它们之间仍存在竞争的关系。
答案：D
2．腐乳制作过程中要注意防止杂菌污染。下列措施中不能起抑制杂菌污染作用的是( )
A．加入12%的料酒
B．逐层增加盐的用量
C．装瓶时让瓶口通过酒精灯火焰
D．用含水量约为70%的豆腐
解析：A、B、C三项均有防止杂菌污染的作用，而D项主要是让腐乳成形。
答案：D
3．下列关于腐乳制作的叙述，错误的是( )
A．毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸
B．卤汤中酒的含量越高，杂菌繁殖越快，豆腐易腐败
C．用盐腌制腐乳的过程中，要控制盐的用量，盐的浓度过高会影响口味，过低则不足以抑制杂菌的生长，导致豆腐腐败
D．其制作过程可以表示为让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制
解析：豆腐中含量最多的有机物是蛋白质，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸。卤汤中酒的含量过高，腐乳成熟的时间将会延长；卤汤中酒的含量过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败。
答案：B
4．腐乳味道鲜美，易于消化、吸收，是因为其内主要含有的营养成分是( )
A．无机盐、水、维生素
B．氯化钠、氨基酸、甘油和脂肪酸
C．多肽、氨基酸、甘油和脂肪酸
D．蛋白质、脂肪、氯化钠、水
解析：豆腐的主要营养成分是蛋白质和脂肪。在毛霉等多种微生物分泌的蛋白酶和脂肪酶的作用下分解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等营养成分。
答案：C
5．腐乳是通过微生物发酵制成的佐餐食品，其制作流程如下，请回答有关问题：
→→→
(1)民间制作腐乳时，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子，现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样做的目的是什么？
_____________________________________________________。
(2)制作腐乳的原料中哪种有机物含量比较高？__________。毛霉可利用体内的酶将其分解成哪些小分子有机物？_____________。
(3)在用盐腌制腐乳的过程中，若盐的浓度过低会出现什么现象？_____________________________________________________。
解析：现代的腐乳生产是将优良的毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样既可以增加毛霉的数量，又可以避免其他菌种污染。豆腐中蛋白质含量较多，毛霉体内可产生蛋白酶，将蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸。用盐腌制时，必须控制盐的用量。
答案：(1)可以增加毛霉数量并且可以避免其他菌种污染，保证产品的质量
(2)蛋白质 小分子的肽和氨基酸
(3)不足以抑制微生物生长，导致豆腐腐败变质
1．现代科学研究表明，多种微生物参与了腐乳的发酵，其中起主要作用的是( )
A．青霉 B．曲霉 C．毛霉 D．根霉
解析：参与腐乳发酵的微生物主要是毛霉。
答案：C
2．腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有( )
①盐的用量 ②酒的用量 ③发酵温度、时间
④发酵微生物的种类 ⑤香辛料的用量
A．①②
B．③④
C．①②⑤
D．①②③④⑤
答案：D
3．下列关于腐乳制作的描述中，错误的是( )
A．在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与
B．含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳
C．加盐和加酒都能抑制微生物的生长
D．密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染
解析：一般说来，做腐乳所用的豆腐含水量应为70%左右，含水量过大，不易成形；含水量太小，比较坚硬，口感不好。
答案：B
4．腐乳发酵中具有防腐杀菌作用的是( )
①花椒 ②食盐 ③酒 ④茴香 ⑤蔗糖
A．①②③⑤
B．③④⑤
C．②③④⑤
D．①②③④
解析：花椒、食盐、酒、茴香有防腐杀菌作用，腐乳的香辛料没有用到蔗糖。
答案：D
5．下列哪项不是在腐乳制作过程中防止杂菌污染的操作( )
A．用来腌制腐乳的玻璃瓶要用沸水消毒
B．装瓶时操作要迅速、小心
C．封瓶时要使瓶口通过酒精灯的火焰
D．发酵温度要控制在15～18
℃范围内
解析：发酵温度要控制在15～18
℃范围内是为了保证毛霉等微生物形成菌丝。
答案：D
6．制作腐乳的过程中，需要加一些盐，下列哪项不是盐的作用( )
A．析出豆腐中的水分，使豆腐变硬
B．抑制微生物的生长
C．调制腐乳的口味
D．主要增加腐乳的重量，获取更多的利润
答案：D
7．下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是( )
A．腐乳制作所需要的适宜温度最高
B．果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵
C．使用菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌
D．使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA
解析：果醋制作所需要的适宜温度最高；果醋发酵只包括有氧发酵；使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌和毛霉。
答案：D
8．卤汤中酒的含量一般控制在12%左右，下列不是其作用的是( )
A．抑制微生物的生长
B．使腐乳具有独特香味
C．使腐乳中的蛋白质变性
D．使后期发酵安全度过，延长保质期
解析：加酒可抑制微生物的生长，使后期发酵安全度过，延长保质期，酒精可引起复杂的生化反应，使腐乳具有独特的香味。
答案：C
9．以下关于腐乳制作过程中的叙述，不正确的是( )
A．卤汤中酒的含量一般控制在12%左右
B．将豆腐切成块放在消毒的笼屉中，控制温度在15～18
℃，并保持一定的湿度
C．装瓶后腐乳坯上的微生物会继续发酵
D．发酵过程中毛霉和根霉为互利共生关系
解析：卤汤中酒的含量需要保持在12%左右。其中用于腐乳发酵的毛霉最适生长温度是15～18
℃，装瓶之后，腐乳上的微生物将继续发酵。毛霉和根霉的营养需求相同，二者的关系是竞争。
答案：D
10．在果酒、果醋和腐乳制作中，都要防止微生物污染，下列有关叙述正确的是( )
A．果醋发酵阶段应封闭充气口，防止杂菌进入
B．制腐乳的卤汤中应含有12%左右的酒精以抑制细菌的增殖
C．利用自然菌种制作果酒时，将封有葡萄汁的发酵瓶进行高压蒸汽灭菌
D．将长满毛霉的豆腐放在瓶中，并逐层加盐，接近瓶口部分的盐要铺薄一些
解析：醋酸菌是好氧菌，发酵的时候需要通入无菌空气；利用自然菌种制果酒时就是利用葡萄皮上的酵母菌，高压蒸汽灭菌会杀死酵母菌；腐乳制作过程中，加盐腌制时越靠近坛口盐越要铺厚一些。
答案：B
11．腐乳是我国民间传统发酵食品，味道鲜美，营养丰富，风味独特，易于消化。请回答有关问题：
(1)在腐乳的制作中，起主要作用的生物是________，它与乳酸菌在结构上主要的区别是______________________________。
(2)腐乳含有丰富的氨基酸、甘油、脂肪酸等小分子物质，与此有关的物质变化是_______________________、__________________。参与这些物质变化的酶是____________________。
(3)腐乳的制作过程中需加盐腌制，那么用盐腌制的目的是_____
_______________________________________________________
_____________________________________________________。
但要控制盐的用量，这是因为_____________________________
______________________________________________________。
(4)在腐乳的制作中，卤汤是由酒和香辛料配制而成的，卤汤中酒的含量一般控制在12%左右的原因是_______________________
_______________________________________________________
______________________________________________________。
答案：(1)毛霉 毛霉具有成形的细胞核
(2)蛋白质→多肽→氨基酸 脂肪→甘油＋脂肪酸 蛋白酶、脂肪酶
(3)抑制微生物的生长，避免豆腐块变质；析出豆腐中多余的水分，使豆腐块变硬，在后期制作过程中不会过早酥烂；调味作用 盐的浓度过高会影响腐乳的口味；而过低则不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质
(4)加入的酒具有防腐杀菌、调味的作用，如果加入的量过高，会导致腐乳成熟时间延长，而过低则不足以抑制微生物的生长
12．腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图：
―→―→―→
(1)现代科学研究表明，许多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种________状真菌。
(2)腐乳制作的原理是___________________________________
______________________________________________________。
(3)传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自_______________。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以_______________________。
(4)加盐的作用是___________________和__________________。
(5)卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的，卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在________左右。加酒的作用是____________________和____________________。
解析：豆腐发酵有多种微生物参与，其中毛霉起主要作用，毛霉是一种丝状真菌，它产生的脂肪酶和蛋白酶可以将豆腐中相应的大分子物质变成小分子物质，在多种微生物的作用下，豆腐转变成腐乳。操作过程中一定要注意防止其他杂菌污染，加盐和加酒都有防止杂菌污染的目的。
答案：(1)丝 (2)毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以将脂肪水解为甘油和脂肪酸 (3)空气中的毛霉孢子 避免其他菌种污染，保证产品的质量 (4)析出豆腐中的水分，使其变硬 抑制微生物的生长，避免豆腐变质 (5)12% 抑制微生物的生长 使腐乳具有独特的香味
13．某实验小组自己动手制作腐乳。他们精心选择豆腐，切成豆腐块，放置在笼屉中，并控制温度在15～18
℃，保持一定的湿度。几天后发现豆腐块表面已长满毛霉，然后就把长满毛霉的豆腐块分层摆放在瓶中，严格控制每层的盐含量，使之保持相等。3
d后取出，加入配制的卤汤，控制酒精含量为30%。经过一段时间后取出，发现与商店里卖的有很大的区别，自己制的腐乳咸味不均匀，表面还长了一层黄色的某种微生物。据此回答有关问题：
(1)请你帮助这几位同学找出他们制作过程中的不当之处。
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(2)在毛霉发酵的过程中，现代腐乳的生产和家庭生产腐乳有很大的不同，主要区别有哪些？
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解析：为了保证腐乳的品质，应熟练掌握加盐的操作，其中包括加盐腌制的时间、加盐量和酒精量的控制，现代工厂腐乳生产和家庭生产腐乳的主要区别是无菌操作和菌种来源两个方面。
答案：(1)①加盐应该是随着豆腐块层数的加高而增加盐量；②加盐腌制的时间过短，应为8
d左右；③腌制的过程中有黄色微生物出现，说明盐量太少，没有抑制其他微生物的生长；④酒精含量太高，应该为12%左右。
(2)现代工厂进行的腐乳生产是在严格无菌的条件下，将优良的毛霉菌种直接接种到豆腐上，从而可避免其他菌种的污染。专题1
传统发酵技术的应用
课题3
制作泡菜并检测亚硝酸盐含量
1．下列操作中不会引起泡菜污染的是( )
A．坛盖边沿的水槽应注满水，并且要时常补充水槽中的水
B．腌制时温度过高，食盐量不足10%
C．腌制的时间过短
D．盐水入坛前不用煮沸，直接入坛
解析：在泡菜的腌制过程中，要注意控制时间、温度和食盐的用量。温度过高，食盐量不足10%，腌制时间过短，盐水入坛前不煮沸冷却等，容易引起细菌大量繁殖。
答案：A
2．下列有关乳酸菌代谢的叙述中，正确的是( )
A．乳酸菌没有细胞器，只能进行无氧呼吸
B．乳酸菌的蛋白质合成在自身的核糖体上进行
C．乳酸菌的代谢终产物也是CO2和H2O
D．乳酸菌的细胞壁与植物细胞壁的组成相同
解析：乳酸菌有核糖体，乳酸菌的代谢终产物是乳酸，无CO2，乳酸菌的细胞壁主要是肽聚糖，而植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成，故只有B正确。
答案：B
3．亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与N－1－萘基乙二胺盐酸盐反应生成的物质呈( )
A．玫瑰红色
B．蓝色
C．砖红色
D．橘红色
解析：在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色的染料。
答案：A
4．在选泡菜坛时，应选择火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的，其目的是( )
A．美观
B．可防止内部液体渗出
C．耐用
D．密封好，保证坛内外气体不交换
解析：泡菜的制作离不开乳酸菌，而乳酸菌是厌氧生物，无O2时方可进行乳酸发酵产生乳酸。
答案：D
5．如图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：
(1)制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜，原因是___________________。
(2)为保证既无杂菌，又能使乳酸菌发挥正常作用，应如何处理所用盐水？___________________________________________。
(3)为测定泡菜内的亚硝酸盐含量，某同学用比色法进行了实验，他在制备标准显色液时做了如下操作：
①用刻度移液管量取一系列不同体积的亚硝酸钠溶液，分别置于50
mL比色管中；
②在各管中分别加入2.0
mL对氨基苯磺酸溶液，紧接着再分别加入1.0
mL
N－1－萘基乙二胺盐酸盐溶液；
③观察各比色管中溶液颜色的梯度变化。
请指出该同学操作的失误之处：___________________________
_______________________________________________________
_______________________________________________________
解析：本题考查泡菜的制作及亚硝酸盐含量的测定。新鲜蔬菜中亚硝酸盐的含量低，对盐水加热煮沸的目的是杀菌，冷却后使用是为了保证微生物的生命活动不受影响。测定亚硝酸盐的含量可利用比色法，粗略地检测其含量，注意实验中显色剂的配制和相关对比操作。
答案：(1)亚硝酸盐的含量低
(2)先将盐水煮沸杀灭杂菌，然后冷却至室温时再使用
(3)①中还应再添加一支比色管作为空白对照；步骤②中在各比色管中分别加入2.0
mL对氨基苯磺酸溶液，混匀后应静置3～5分钟，再分别加入1.0
mL的N－1－萘基乙二胺盐酸盐溶液，添加蒸馏水使各比色管的溶液的体积达到50
mL。
1．制作泡菜的过程实际上是应用了乳酸菌的呼吸作用原理。将原料放入泡菜坛后应当怎样处理才能得到可口的泡菜( )
A．马上密封，保持温度30～40
℃
B．一直通风，保持温度30～40
℃
C．先通风后密封，保持温度30～40
℃
D．马上密封，保持温度60
℃以上
解析：在泡菜的制作中用到的乳酸菌是严格的厌氧菌，在有氧的情况下乳酸菌不能增殖，B、C错误；乳酸菌生长的最适温度为30～40
℃，在60
℃时乳酸菌已经被杀死，D错误。
答案：A
2．在泡菜的腌制过程中容易造成亚硝酸盐含量增加的因素主要是( )
A．食盐用量过多
B．细菌大量繁殖
C．腌制时间过长
D．加水过少
解析：由于硝酸盐还原菌的活动，从而使硝酸盐转变成亚硝酸盐。
答案：B
3．要使泡菜制作成功最主要的条件是( )
A．缺氧环境
B．有氧环境
C．加盐
D．加香辛料
答案：A
4．在泡菜的腌制过程中，下列说法正确的是( )
A．只要取材得当，操作正确，最后坛中微生物只有乳酸菌
B．正确的泡菜腌制过程的后期，坛中乳酸菌含量下降
C．由于乳酸菌能抑制和杀死其他微生物，所以泡菜腌制的时间越长越好
D．只要是泡菜的品质不好，就一定是操作有错误
解析：本题的C项和A项可能成为陷阱。由于乳酸菌可以抑制或杀死其他微生物，会误选C项。
答案：B
5．果酒变酸、泡菜坛液面的一层白膜、腐乳外部致密的一层“皮”，与其相关的微生物分别是( )
A．醋酸菌、乳酸菌、毛霉
B．醋酸菌、霉菌、毛霉
C．醋酸菌、酵母菌、毛霉
D．酵母菌、醋酸菌、毛霉
答案：A
6．下图为泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化的曲线，正确的是( )
答案：C
7．在制果酒、果醋、泡菜、腐乳时，发酵过程中对氧气的需求分别是( )
A．无氧、有氧、无氧、有氧
B．有氧、无氧、无氧、有氧
C．无氧、有氧、有氧、无氧
D．有氧、无氧、有氧、无氧
答案：A
8．下列关于泡菜腌制及亚硝酸盐含量测定实验的叙述，不正确的是( )
A．制作时加入陈泡菜汁会缩短泡菜腌制时间
B．乳酸菌产生的乳酸不利于其菌种优势的保持
C．发酵装置密封是泡菜制作成功的关键
D．与标准溶液比较估测泡菜中的亚硝酸盐含量
解析：乳酸菌产生的乳酸不利于其他菌种的生存，有利于乳酸菌菌种优势的保持。
答案：B
9．下列关于发酵产物检验的说法，错误的是( )
A．果汁发酵是否产生酒精可以用酸性重铬酸钾来检验
B．检验醋酸产生的简单易行的方法是品尝
C．泡菜制作产生的亚硝酸盐可以用对氨基苯磺酸和N－1－萘基乙二胺盐酸盐检验
D．发酵产生乳酸的量可以用比色法测量
答案：D
10．下列有关泡菜发酵过程的叙述，正确的是( )
A．发酵时间越长，亚硝酸盐的含量越高
B．发酵过程中只有乳酸菌的发酵作用
C．发酵过程中乳酸菌可分解蛋白质和果胶
D．发酵过程中要经常补充水槽中的水
解析：亚硝酸盐的含量变化为先增加后减少；发酵过程主要为乳酸菌的作用，还有酵母菌的发酵作用；发酵中的乳酸菌不分解蛋白质和果胶，保持蔬菜脆嫩而不软化腐败；发酵过程中要经常补充水槽中的水，以保持坛内无氧状态。
答案：D
11．下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：
(1)制作泡菜宜选用新鲜蔬菜的原因是____________________。
(2)制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为____________，盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是__________________________。
试说明盐在泡菜制作中的作用：__________________________。
(3)泡菜风味形成的关键在于______________________的加入。
(4)泡菜的制作方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至发霉变味，试分析可能的原因。
______________________________________________________。
(5)发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是__________
______________________________________________________。
解析：制作泡菜一般选用含亚硝酸盐含量低的新鲜的蔬菜；清水与盐的比例一般为4∶1，一般要进行加热煮沸处理，其主要目的是杀灭杂菌等微生物，但要等到冷却后使用是为了使乳酸菌的生命活动不受温度的影响。制作泡菜时，若泡菜坛子密封不严、取食工具不卫生或盐的比例过小，都会引起杂菌滋生、泡菜变质。亚硝酸盐含量在不同时期都可能发生变化，所以需要通过检测来把握取食泡菜的最佳时机。测定亚硝酸盐含量的方法一般采用比色法。
答案：(1)亚硝酸盐的含量低 (2)4∶1 加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响 盐有灭菌、析出蔬菜中过多的水以及调味的作用 (3)调味料 (4)泡菜坛子密封不严或取菜工具不卫生或盐的比例过小，都会引起杂菌滋生、泡菜变质 (5)亚硝酸盐的含量在不同时期都有可能发生变化。专题3
植物的组织培养技术
课题2
月季的花药培养
1．选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，会给材料的消毒带来困难。主要原因是( )
A．花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料消毒带来困难
B．花瓣松动后，体积变大，给消毒带来困难
C．花瓣松动后，就会使花药消毒时接触酒精而被杀死
D．花瓣松动后，会使花药老化，不适宜作花药培养
解析：花瓣松动后，会增加微生物侵入到花药部位的机会，给材料消毒带来困难。
答案：A
2．某科技活动小组将二倍体番茄植株的花粉按如图所示的程序进行实验。根据实验，下列分析正确的是( )
A．花粉也能通过培养形成植株M，这是因为番茄的生殖细胞也含有控制生长发育的全套遗传物质
B．植株M一定为单倍体植株，其特点之一是往往高度不育，因此不能体现生殖细胞具有全能性
C．由花粉培育得到植株M的过程中，植物器官的发生主要通过营养物质的配比进行调节
D．由花粉培育得到植株N，整个过程都必须在无菌条件下进行
解析：B选项能体现生殖细胞的全能性，细胞全能性的体现与最终能否形成完整植物个体有关，而与植物个体是否可育无关。C选项中，植物器官的发生主要通过调节植物激素的配比进行调节。D选项中，植株M到植株N的过程不需要在无菌条件下进行。
答案：A
3．下列有关花药培养基配制的说法中，不正确的是( )
A．花药培养可在同一培养基上培养至长出幼小植株后再更换培养基继续培养
B．花药培养的各个阶段，培养基配方不完全一样
C．诱导生根的培养基配方比诱导丛芽或胚状体的培养基配方中的IAA浓度高
D．诱导愈伤组织分化是先分化出芽再分化出根
解析：花药培养长出愈伤组织或释放出胚状体后，应及时更换培养基。
答案：A
4．植物的花药培养在育种上有特殊的意义。植物组织培养可用于无病毒植株及细胞产物的工厂化生产等方面。请回答相关问题：
(1)利用月季的花药离体培养产生单倍体时，选材非常重要。一般来说，在____________期花药培养的成功率最高。为了选择该期的花药，通常选择____________的花蕾。确定花粉发育时期最常用的方法有____________法，但是对于花粉细胞核不易着色的植物，需采用____________法，该法能将花粉细胞核染成____________色。
(2)若要进行兰花无病毒植株的培育，首先选择兰花的_________作为外植体。从外植体到无病毒植株试管苗，要人为控制细胞的____________________和______________过程。
(3)进行组织培养需配制MS培养基，在该培养基中常需要添加____________、____________等植物激素。欲有利于根的分化，植物激素的用量比例应为________________________________________
_____________________________________________________。
(4)不同植物的组织培养除需营养和激素外，________________等外界条件也很重要。
(5)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，下列各项中使用化学药剂进行消毒的是____________，采用灼烧方法进行灭菌的是____________(填序号)。
①培养皿 ②培养基 ③实验操作的双手 ④三角锥形瓶 ⑤接种环 ⑥花蕾
解析：(1)早期的花药比后期的更容易培养成功。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。该时期的花药通常存在于完全未开放的花蕾中。(2)根尖、茎尖约0～0.1
mm区域中几乎不含病毒。病毒通过维管系统移动，而分生组织中不存在维管系统，且茎尖分生组织中，代谢活力高，竞争中病毒复制处于劣势。(3)生长素与细胞分裂素等植物激素可调节脱分化和再分化。当生长素含量多于细胞分裂素含量时，利于生根。(4)植物培养时，除需要营养、激素外，还需要适宜的温度、pH和光照等。(5)对实验器具进行灭菌处理，对实验过程中的具有生物活性的材料或用具进行消毒处理。
答案：(1)单核靠边 完全未开放 醋酸洋红 焙花青—铬矾 蓝黑 (2)茎尖分生组织 脱分化(或去分化) 再分化 (3)生长素 细胞分裂素(两空顺序可以颠倒) 生长素多于细胞分裂素 (4)pH、温度和光照 (5)③⑥ ⑤
1．进行花药离体培养时，选择月季花粉的时期最佳为( )
A．盛开期的月季花
B．略微开放的月季花
C．完全未开放的花蕾
D．花近败时期的花蕾
解析：选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素。在花粉发育过程的单核期，花粉培养的成功率高，因此常选择完全未开放的花蕾。
答案：C
2．某名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离，为了防止性状分离并快速繁殖，可以利用该植物体的一部分器官或组织进行离体培养，发育成完整的植株。进行离体培养时不宜采用该植株的( )
A．茎尖
B．子房壁
C．叶片
D．花粉粒
解析：繁殖名贵花卉是为了保留亲本优良性状，要保持亲本性状，必须用植物体细胞来进行组织培养，如茎尖、子房壁、叶片等均属于体细胞，而花粉粒是经过减数分裂形成的，遗传物质是该植物体细胞的一半，所以离体培养不能用该植物的花粉粒。
答案：D
3．被子植物的花粉发育依次经过( )
①双核期 ②四分体时期 ③单核居中期 ④单核靠边期
A．①②③④
B．②③④①
C．②④③①
D．②①③④
解析：被子植物的花粉发育过程：四分体时期→单核居中期→单核靠边期→双核期。
答案：B
4．下列不是影响花药培养因素的是( )
A．材料的选择和培养基的组成
B．亲本植株的生长条件
C．材料的低温处理以及接种密度
D．做实验的时间
解析：花药培养是在实验室条件下进行的，不受时间限制。
答案：D
5．用醋酸洋红法确定花粉发育时期的原理是( )
A．醋酸洋红可使细胞全部着色
B．醋酸洋红可使单核期的细胞着色
C．醋酸洋红可使花粉细胞核着色
D．醋酸洋红可进入细胞显示放射性标记
解析：花粉细胞核内有染色体，醋酸洋红是碱性染料，可以使染色体染色，从而确定花粉发育时期。
答案：C
6．对花药离体培养的说法中错误的是( )
A．接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体后，要适时转换培养基，以便进一步分化成植株
B．材料消毒时需先用酒精浸泡，在无菌水中清洗，然后用氯化汞或次氯化钙溶液浸泡，最后再用无菌水冲洗
C．接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株形成后需要光照
D．对材料的选择最常用的是焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色
解析：对材料的选择最常用的方法是醋酸洋红法。
答案：D
7．关于植物组织培养与花药培养的区别，说法错误的是( )
A．前者形成愈伤组织后每日给光照12
h，后者幼小植株形成后才需光照
B．两者的培养基中都含植物激素但种类及用量不同
C．后者需将愈伤组织及时转移到分化培养基上，前者不需要转移便可再分化为植株
D．花药培养对培养基配方的要求更为严格
解析：在植物组织培养过程中，当愈伤组织转变为绿色后也需将愈伤组织更换到生芽培养基中，30～40
d后再将长出幼芽的组织置于生根培养基中进行培养。
答案：C
8．下列有关植物组织培养的叙述，正确的是( )
A．愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞
B．二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后可得到稳定遗传的植株
C．用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子
D．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得
解析：愈伤组织细胞排列疏松而无规则，是一团无定形的薄壁细胞；二倍体植株花粉经脱分化和再分化后形成单倍体植株，要得到稳定遗传的个体要用秋水仙素处理单倍体幼苗；用人工薄膜将胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等分别包装可制成人工种子；加适量NaCl的培养基是选择性培养基。
答案：D
9．在花药培养过程中，需要对培育出来的植株做进一步的鉴定和筛选，目的是看其( )
A．是否有染色体丢失
B．是否有基因突变
C．是否出现染色体倍性变化
D．是由哪种形式形成的
解析：在花药离体培养过程中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化，因此还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。
答案：C
10．下列有关月季花药培养的实验操作中，不正确的是( )
A．花药培养可在同一培养基上培养至长出幼小植株再更换培养基继续培养
B．镜检花粉时可用醋酸洋红法或焙花青—铬矾法染色，后者能将花粉细胞核染成蓝黑色
C．在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则易从受伤部位产生愈伤组织
D．如果接种的花药长出愈伤组织并分化成幼小植株，还需对植株作进一步的鉴定和筛选
解析：花药培养形成愈伤组织或胚状体后，要转移到分化培养基上进行再分化生芽、生根，发育成小植株；由于花粉植株常出现染色体倍性变化，需对再生植株作进一步的鉴定和筛选。
答案：A
11．据报道，花粉是一种很好的保健品，可以美容抗衰老，能够增强体质，增强精神，还可以快速地消除身体疲劳。它既可以外用也可以内服，是强身健体美容养颜的佳品。花粉产自各种植物的花朵。下图表示花粉的形成过程，据图回答下列问题：
(1)图中的A代表花粉发育过程中的_______________________
时期，是小孢子母细胞通过__________分裂产生的。
(2)图中的B代表花粉发育过程中的______期，包括___________和____________两个阶段。
(3)图中的D代表__________，形成__________细胞。花粉萌发时会通过__________分裂产生两个精子。
解析：被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段。在小孢子四分体时期，4个单倍体细胞连在一起。单核期前期的细胞含浓厚的原生质，核位于细胞的中央，该阶段称为单核居中期。随着细胞不断长大，细胞核由中央移向细胞一侧称为单核靠边期。单核靠边期的细胞的细胞核通过分裂形成一个生殖细胞核和一个花粉管细胞核，称为双核期。然后再形成两个细胞，一个是营养细胞，一个是生殖细胞。当花粉管萌发时生殖细胞将进行一次有丝分裂，形成两个精子。
答案：(1)小孢子四分体 减数 (2)单核 单核居中期 单核靠边期 (3)生殖细胞核 生殖 有丝
12．请回答下列问题：
(1)植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的____________，繁殖种苗的速度____________。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部______________。
(2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免______________的污染。
(3)微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗__________，而与__________配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需要使用的生长调节剂是________(脱落酸、2，4－D)。
(4)将某植物试管苗在含不同浓度蔗糖的培养基上培养一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是____________。单株鲜重的变化趋势是________________。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量______(填“能”或“不能”)满足自身最佳生长的需要。
(5)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应________________(降低、增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。
解析：植物组织培养技术在操作过程中应注意无菌操作，避免杂菌污染，因为培养过程中使用的培养基营养物质丰富；适宜浓度的生长素可以诱导试管苗生根，而如果要促进愈伤组织形成芽，则需要与细胞分裂素配比；促进愈伤组织产生和生长，应使用2，4－D。
答案：(1)遗传性 快 遗传信息
(2)微生物(杂菌)
(3)生根 细胞分裂素 2，4－D
(4)逐渐减小 先增加后下降 不能 (5)降低
13．育种工作者常采用花药培养的方法，使花粉粒发育为单倍体植株。下列过程是采用水稻的花药进行培养的步骤，请据此回答下列问题：
选取水稻花药→对花蕾消毒→接种和培养→植物体
(1)选取的水稻花药应为__________期，此时细胞核由中央移向细胞一侧，花药培养成功率最高。
(2)通过花药培养产生单倍体植株一般有两种途径：一种是花粉通过________________________阶段发育为植株；另一种是在诱导培养基上先形成____________________，再将其诱导分化成植株。
(3)试管苗形成过程中，必须从培养基中获得无机盐或矿质元素和小分子有机物等营养物质。要促进花粉细胞分裂和生长，培养基中应有______________和________________两类激素。
解析：(1)一般选取单核期的花药进行培养。选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，给材料消毒带来困难。
(2)花药离体培养有两条途径：一是脱分化形成愈伤组织，二是脱分化形成胚状体。
(3)促进花粉细胞分裂和生长取决于细胞分裂素和生长素的比例。
答案：(1)单核 (2)胚状体 愈伤组织 (3)细胞分裂素 生长素
