生物技术实践——微生物的培养与应用
1、下表是某同学列出的分离土壤中微生物培养基的配方数据表，据此回答下列问题：
培养基配方
含量
培养基配方
含量
KH2PO4
1.4g
葡萄糖
10.0g
Na2HPO4
2.1g
尿素
1.0g
MgSO4?7H2O
0.2g
琼脂
15.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
（1）培养微生物的培养基中，一般都含有碳源、氮源、___________________等营养物质。若用于培养乳酸菌，培养基中除上述营养物质外，还需要添加_____________________。细菌能利用尿素作为氮源，是由于其能合成_____________________酶。21世纪教育网版权所有
（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入______________指示剂。接种前一般采取_______________对培养基进行灭菌。21cnjy.com
（3）某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为105的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为161、155、158、170个，则每毫升原土壤样液中尿素分解菌的数量为_________________。某同学在纯化土壤中的尿素分解菌时，培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是__________________。
（4）常采用________________法将纯化得到的目的菌长期保存。
2、对十二烷基苯磺酸钠（LAS）是洗涤剂的主要成分，LAS对人体的皮肤、血液、肝脏有一定的危害，LAS不易被生物降解，从而容易造成环境污染。某同学尝试从长期被洗涤剂污染的土壤中筛选出LAS降解菌，并对该菌种进行培养和计数。回答下列问题：21·cn·jy·com
（1）该同学从长期被洗涤剂污染的土壤中取样后，将样本置于在以_______________作为唯一碳源的液体培养基上进行培养，该培养基为_____________，其作用是_____________。
（2）经过初步培养后，该同学对获得的LAS降解菌溶液进行梯度稀释，吸取105稀释倍数的降解菌液各0.1mL，分别涂布在三个平板上，一段时间后形成的菌落数依次为20、14、14，该同学以平均菌落数16进行计数。21·世纪*教育网
①以平均菌落数16进行计数，可求得原菌液中LAS降解菌的浓度为_________个/mL。
②你认为该同学的计数方法是否正确？________（填“正确”或“不正确”），说明理由____________。【来源：21·世纪·教育·网】
（3）稀释涂布平板法不适宜用于某些食品工业（比如酸奶等）的质量检测，原因是__________，此时应采用_______________统计细菌的数目。2-1-c-n-j-y
3、毒死蜱(C9H11C13NO3PS)是一种有机磷杀虫剂，长期使用将导致土壤中农药残留严重。某研究小组从长期施药的韭菜温室土壤（偏酸性）里分离出能降解毒死蜱的木霉，并对其降解特性进行初步研究。请回答：21*cnjy*com
（1）用于分离木霉菌种的培养基属于__________________培养基。配制此培养基时，应加入____________作为唯一碳源。接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基__________________，以确定培养基是否被污染。
（2）纯化木霉时，统计出0.2 mL的稀释液在稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为40个，则每mL样液中的菌落数为__________个。用此法测定木霉数量，实际活菌数量要比统计的菌落数量______，原因是________________________________________________。2·1·c·n·j·y
（3）探究pH对木霉降解毒死蜱活性的影响
①研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L 毒死蜱，5天后检测毒死蜱的残留量（图1）。由图可推知：在偏酸性的土壤中，__________________________。【来源：21cnj*y.co*m】
②研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L 毒死蜱，再分别接种1 mL木霉悬液，混合均匀，5天后检测毒死蜱的残留量（图2）。在此韭菜温室土壤中，若要提高木霉对毒死蜱的降解活性，可对土壤作何处理？_____________________________。www-2-1-cnjy-com
4、生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。请回答下列问题：
（1）培养大肠杆菌所用的LB培养基一般用________法灭菌。检验大肠杆菌的含量时，通常将水样用_________进行一系列的梯度稀释。【出处：21教育名师】
（2）将稀释后的水样分别接种到LB固体培养基，_______（填“正置/倒置”）于恒温培养箱，在_____℃条件进行培养。用该方法统计样本菌落数时_________（填“需要/不需要”）设置对照组。
（3）对于生活饮用水中大肠杆菌的数量统计，也可以采用滤膜法，该法是利用滤膜的直径_______（填“大于/小于”）大肠杆菌的直径，将大肠杆菌留在滤膜上进行的计数。
（4）下图表示培养和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列相关叙述错误的是_____（多选）。
A．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B．步骤②接种环火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线
C．步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数
1、【答案】 水和无机盐 维生素 脲 酚红 高压蒸汽法 1.61×108 菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够） 甘油管藏21教育网
2、【答案】 LAS 选择 初步筛选LAS降解菌，并增大其浓度 1.6×107 不正确 应涂布多个稀释倍数的稀释液，以获得菌落数在30-300个的平板 置的食品容易变质，导致大量目的菌死亡，而稀释涂布平板法只能测活菌数目 显微镜计数法www.21-cn-jy.com
3、【答案】 选择 毒死蜱 是否产生菌落 2×107 多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 毒死蜱稳定性较好 适当提高土壤的pH至7左右【版权所有：21教育】
4、【答案】 高压蒸汽灭菌 无菌水 倒置 37 需要 小于 ABD
生物技术实践——微生物的培养与应用2
1、某同学欲从土壤中筛选能够分解纤维素的细菌，请回答以下问题：
（1）在筛选具有分解纤维素能力的细菌时，应将土壤样品用____________________进行稀释，然后接种到以____________为唯一碳源的培养基上。21教育名师原创作品
（2）采用____________法对初步筛选到的菌株进行纯化。
（3）对纯化的菌种再采用____________方法进行鉴定。
（4）若将稀释105倍的上述纤维素分解菌菌液，用直接计数法和稀铎涂布平板法进行计数。
①直接计数法：用吸管吸取0.1ml该菌液，滴于血球计数板上的盖玻片边缘，待该细菌全部沉降到计数室底部，用显微镜直接计数，并计算出每升菌液的细菌数目。21*cnjy*com
②稀释涂布平板法计数：在五个固体培养基上分别接种O.lmL该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：40、152、154、156，则每升菌液中细菌数量为_________个。
③正常操作情况下，上述两种计数法中，_________统计获得的细菌数量数目目偏多，原因是____________________________________________。
2、某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能髙效降解脂肪的菌株，请回答：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_________为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲，该培养基属于___________培养基。
(2)为避兔培养皿污染，需将培养皿呈_______状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行________处理。为了排除培养基被污染,需设置接种______的培养基作为空白对照。
(3)为了筛选出菌株，可将适童的__________试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围出现透明圈，则说明此种菌能够分泌脂肪酶，纯化菌种时，为了对活菌进行计数，可采用_________法接种于新的培养基平板上。21·世纪*教育网
(4)试验操作应在酒精灯火馅附近进行的原因是______________。
3、某小组开展“市售鲜猪肉中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析”的研究，进行了相关实验操作，回答下列问题：
（1）菌株的分离纯化:切取鲜猪肉表层样品接入蛋白胨大豆肉汤培养基中，放在37℃摇床振荡培养18h。取肉汤接种于琼脂平板培养基上，培养后再挑取单菌落，接种培养，培养一段时间后，再次挑取单菌落接种于固体培养基上，多次重复此步骤。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的______________；操作过程中液体培养的目的是______________，反复接种固体培养基的目的是____________________________。
（2）下面是纸片扩散法对猪大肠杆菌的耐药性实验。
步骤1:用打孔器制成直径约6 mm的圆形滤纸片，浸入一定浓度的氨苄西林，烘干；
步骤2:取含大肠杆菌的菌液均匀涂布于______________上；
步骤3：在培养基上，每隔一定距离贴一片含药物的圆形滤纸片，培养，观察。
分析与评价：
①观察发现，在每个纸片周围都形成了抑菌圈，其直径的大小表示大肠杆菌对氨苄西林的敏感性。抑菌圈直径越大，敏感性越______________（填“高”或“低”）。2·1·c·n·j·y
②发现在抑菌圈外长满多种不同形态的菌落，其原因可能是_________________________。
③欲比较五倍子和黄连提取液对猪大肠杆菌的抑制作用，为治疗提供依据。请写出实验思路:________。www-2-1-cnjy-com
4、为调查水质情况，某研究小组对自来水水样中的大肠杆菌数量进行了测定。回答下列问题：
（1）用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应____________（填“大于”或“小于”）大肠杆菌，将已知体积的水用滤膜过滤，然后将__________放在伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现__________色，该培养基属于____________（填“液体”或“固体”）培养基，培养基中的蛋白胨为大肠杆菌提供_________。www.21-cn-jy.com
（2）该研究小组在统计菌落数目时，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因_________而遗漏菌落的数目。通过统计菌落的数目计算出水样中大肠杆菌的数量，其原理是_________________，但测定值比实际值________（填“偏高”或“偏低”），原因是______________________。【来源：21·世纪·教育·网】
（3）大肠杆菌与制作果酒用的酵母菌在结构上最主要的区别是_______________________。
5、根据所学内容，回答下列问题。
（1）研究发现，乳酸菌还可产生乳酸菌素，抑制肉制品中致病菌和腐败菌的生长,起到生物防腐的作用。为探究不同种乳酸菌的抑菌效果，将稀释倍数相同的等量乳酸菌培养液滴加在长满致病菌的平板上，一段时间后，会出现以滴点为中心的抑菌圈，实验结果如下表。21cnjy.com
三种乳酸菌对各致病菌的抑菌圈直径（mm）
菌株编号
金黄色葡萄球菌
单增李斯特菌
阪崎肠杆菌
鼠伤寒沙门氏菌
大肠杆菌
PC3
16.2
2.0
14.4
13.1
11.9
PC15
18.2
15.3
12.1
13.0
10.5
PCS
22.5
9.6
16.2
15.3
13.5
实验的因变量是________________________。
（2）纯化乳酸菌时可选用平板划线法或______接种，还需要设置____________的培养基作为对照，若对照组培养基表面没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。21世纪教育网版权所有
（3）乳酸菌常用于制作酸奶等发酵食品。若牛奶中含有抗生素，会影响酸奶的制作效果，原因是抗生素能_________乳酸菌。21教育网
（4）胡萝卜素的萃取过程应该避免明火加热，采用_________加热，其原因是有机溶剂都是易燃物,直接使用明火加热容易引起____________。21*cnjy*com
（5）果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格，含有醋酸杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸杆菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。________________。【来源：21cnj*y.co*m】
1、【答案】 无菌水 纤维素 稀释涂布平板法或平板划线法 刚果红染色法 1.26×1011 直接计数法 直接计数法无论菌休死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落2-1-c-n-j-y
2、【答案】 豆油 选择 倒置 梯度稀释 等量无菌水 苏丹Ⅳ 稀释涂布平板 避免周围环境中微生物的污染21·cn·jy·com
3、【答案】 子细胞群体 获得含有大肠杆菌等菌的菌液 分离纯化菌落 平板培养基 高 操作过程污染了其他微生物 取等量相同浓度的五倍子后黄连提取液，采用纸片扩散法，比较抑菌圈的直径大小，直径越大，抑制作用越强【出处：21教育名师】
4、【答案】 小于 滤膜 黑 固体 碳源、氮源和维生素 培养时间不足 培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌 偏低 两个或多个大肠杆菌连在一起时，培养基上只能观察到一个菌落 没有以核膜为界限的细胞核【版权所有：21教育】
5、【答案】 抑菌圈直径的大小 稀释涂布平板法 未接种乳酸菌 杀死 水浴 燃烧,爆炸 不能，因醋酸杆菌是好氧型细菌，而果酒发酵是无氧环境(或因醋酸杆菌需要在有氧且温度是30～35℃条件下，才能将糖转化为醋酸，而此时发酵罐中的条件是无氧且温度是18～25℃)
生物技术实践——微生物的培养与应用3
1、进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力。缓解环境污染。试分析并回答有关问题：21·cn·jy·com
（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中_______________在细胞结构上与其他两者不同。21*cnjy*com
（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将____________分解为______________。
（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列______________，从而得到单个菌落, 再采用______________方法进行鉴定，得到右图的菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌株是_______________(填图中序号)。
（4）图中所示培养基从物理状态上看，属于____________培养基。
2、豆浆是人们喜爱的食品之一，很多家庭自制豆浆作早餐食品，为了检测自制豆浆中细菌含量，做如下图所示操作。回答下列有关问题：【来源：21·世纪·教育·网】
（1）在接种前，常常随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_____________。21世纪教育网版权所有
（2）为了对自制豆浆中细菌进行计数，应采用的接种方法是____________。采用这种方法接种培养时，取最终的豆浆稀释液0.1mL滴在平板培养基上，操作前一般用____________法对接种工具进行灭菌。2·1·c·n·j·y
（3）用上述方法接种、培养后统计4个培养皿，菌落数分别为25个、31个、33个、35个，则可以推测每毫升自制豆浆中含细菌数为___________个。该结果往往较实际值偏小，原因是_____________。21·世纪*教育网
3、水中细菌总数可以作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，经37℃、24h培养后，所生长出的菌菌落数。为初步测定某处池水中的细菌数目，实验的大致流程为：【来源：21cnj*y.co*m】
回答下列问题：
（1）对采集的池水进行梯度稀释时，应先将1mL水样加入___________中以获得稀释10倍的稀释液。实验中对采集的池水要进行稀释的原因是___________________________。2-1-c-n-j-y
（2）接种培养所用到培养基中，能为细菌同时提供碳源和氮源的物质是_________________________。【出处：21教育名师】
（3）为保证菌落计数结果准确，一般选择菌落数在__________的平板进行计数。用这种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低，原因是____________________________。
（4）实验过程中为确保培养基上菌落来自所采集水样，避免杂菌污染。实验中需要注意的具体操作有____________________________（至少答2点）。www-2-1-cnjy-com
4、聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料,科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：
（1）实验小组欲从土壤中获取PET降解菌,需将土壤样品置于________为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是______________。【版权所有：21教育】
（2）该实验小组选取PET浓度为800mg·L-1的富集液进行系列稀释，分别取10-3、10-4和10-5倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、297)，(35、32、31),(36、7、2),不适合用于计数的为________倍数的稀释液,用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是__________________________。
（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是________。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是____________。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时,须从上一次划线的末端开始划线，原因是__________。www.21-cn-jy.com
（4）在保藏PET降解菌菌种时，可采取____________的方法进行长期保存。
5、微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请分析回答：21教育名师原创作品
(1)土壤有________________之称，该类微生物应取自_____________的土壤。
(2)用于筛选和纯化该类微生物的培养基从功能上讲属于________培养基。对培养基进行灭菌，常用的方法是____________________________。21cnjy.com
(3)接种后，必须密封培养，其原因是__________________。培养一段时间后，在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈____________的菌落作为高效菌株。21*cnjy*com
(4)扩大培养过程中需要对微生物进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为___________个/mL。该统计结果______（低于/高于）实际值。
1、【答案】 细菌 纤维二糖 葡萄糖 梯度稀释 刚果红染色 1 固体
2、【答案】 检测培养基是否感染杂菌或是否彻底灭菌 稀释涂布平板法 灼烧 3.3×106 少数菌落可能是由2个或多个细菌形成
3、【答案】 9ml无菌水 避免池水中细菌数目过多（密度过大），得不到单菌落 牛肉膏、蛋白胨 30—300 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 采集水样的容器要灭菌，稀释和接种要在酒精灯火焰旁等21教育网
4、【答案】 PET 增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌 10-5 稀释倍数为10-3时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10-4组的结果 灭菌，防止微生物污染 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落 甘油管藏
5、【答案】 微生物的天然培养基 长期被石油污染（含石油多的） 选择 高压蒸汽灭菌法 该类微生物是厌氧型微生物 最大 1000 低于
