2019届 二轮复习生物技术实践 教案（适用全国）

专题17　生物技术实践
◢考点概述
本专题的主干知识主要集中在微生物的培养与利用、传统发酵技术的应用即果酒和果醋的制作、酶技术、DNA的粗提取及鉴定和
植物组织培养，植物成分的提取和血红蛋白的提取与分离。这几个内容都比较贴近生活生产实际，不但可以与必修部分的内容相联系，也为培养学生的生物科学素养起到了一定的作用，因此高考的力度逐年加大，高考的立意重在对生物技术过程的研究和理解，更高的要求是根据有关内容进行实验设计和分析。
从命题角度看主要是以微生物的应用为考察对象，进行实验设计或者其他考察，考察的内容多种多样，考查方式和方向是更加密切的联系人们的生活生产实际。微生物的利用在生物技术实践中占有比较重要的地位，包括微生物的分离和培养技术、特定微生物的数量测定等。本专题易考查培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的基础知识，培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术，并运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题。选修只以简单题或填空题形式出现。酶的应用考点和必修内容联系紧密，主要考查果胶酶在果汁生产中的应用和加酶洗衣粉洗涤效果的探究等知识点，以简答或实验设计形式出现。传统发酵技术在食品加工中的应用与生活实践密切相关，考查上注重基础知识，主要考查实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并将这些实验涉及的方法和技能进行综合应用。考查形式上，这部分内容出现在选做题中，以非选择题形式出现。
DNA和血红蛋白的提取和分离与生活实践密切相关，考查上注重DNA和血红蛋白的提取和分离的基础知识，主要考查实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能。考查形式上，这部分内容出现在选做题中，以非选择题形式出现。
此部分考题难度不大，试题往往从生产生活实际入手，进行综合考查。复习每个小专题时建议“抓大放小”，也就是掌握大的方法和思路，力求从宏观上去整体把握。对于一些细节问题没有必要花费太大的精力，因为本专题主要是一些生物技术操作中的技术手段和方法，比如植物组织培养，主要要掌握组织培养的核心过程即脱分化和再分化，影响因素、条件。一要从实验角度剖析每项技术，把握其原理、材料、操作流程、注意事项等；二要用比较的方法区分一些重要概念和方法；三要用联系的观点看待不同的技术，要联系必修教材中的相关实验，注意将不同实验相关联的知识进行整合；四是有条件的最好能动手做实验。
◢考点精讲
【要点梳理】
1．培养基
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。
（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。
2．无菌技术
（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
（2）关键：防止外来杂菌的入侵。
（3）不同对象的无菌操作方法[]
3．大肠杆菌的纯化培养
（1）制备固体培养基：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
（2）纯化大肠杆菌
①平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
4．菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
5．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
6．分解纤维素的微生物的分离
（1）纤维素酶[来源:]
①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
②作用
（2）纤维素分解菌的筛选
①原理
　
②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程
土壤取样（富含纤维素的环境）→选择培养（用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度）→梯度稀释（制备系列稀释液）→涂布平板（将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上）→挑选产生透明圈的菌落。
7．制作原理与发酵条件[]
果酒制作
果醋制作
菌种
酵母菌
醋酸菌
菌种来源
附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
变酸酒表面的菌膜
发酵过程
有氧条件下，酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖：C6H12O6＋6O26CO2＋6H2O；无氧条件下，酵母菌通过无氧呼吸产生酒精：C6H12O62C2H5OH＋2CO2
氧气、糖源充足时：C6H12O6＋2O22CH3COOH＋2CO2＋2H2O；缺少糖源、氧气充足时：C2H5OH＋O2CH3COOH＋H2O
温度
一般酒精发酵18～25
℃，繁殖最适为20℃左右
最适为30～35
℃
气体
前期：需氧，后期：无氧
需要充足的氧气
时间
10～12天
7～8天
8．制作流程
9．制作时的注意事项
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄冲洗，并除去枝梗，以防葡萄汁流失及污染。冲洗以洗去灰尘为目的，且不要太干净，以防洗去野生型酵母菌。
（2）防止发酵液被污染的方法
①榨汁机要清洗干净并晾干。
②发酵瓶要洗净并用体积分数为70%的酒精消毒，或用洗洁精洗涤。
③装入葡萄汁后要封闭充气口。
10．腐乳的制作
（1）制作原理
毛霉等微生物产生蛋白酶、脂肪酶，分解有机物。
①蛋白质→氨基酸＋小分子的肽。
②脂肪→甘油＋脂肪酸。
（2）制作流程
让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。
（3）影响条件
①温度：控制在15～18℃。
②材料的用量：控制盐的用量，酒精含量控制在12%左右。
③配制卤汤：卤汤的成分及作用。
11．泡菜的制作
（1）菌种来源：附着在蔬菜上的乳酸菌。
（2）制作原理：在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。反应式：C6H12O6→2C3H6O3。
（3）制作流程
（4）测定亚硝酸盐的含量
①检测原理
a.NO2－＋对氨基苯磺酸→反应物；
反应物＋N－1－萘基乙二胺盐酸盐→玫瑰红色染料。
b.亚硝酸盐溶液的浓度高，颜色深些；溶液浓度低，颜色浅些。
②检测步骤：配制溶液→制备标准显色液→制备样品处理液→比色。
12．植物有效成分的提取
（1）提取玫瑰精油实验
①方法：水蒸气蒸馏法。
②实验流程：鲜玫瑰花加清水，水蒸气蒸馏→油水混合物→加入NaC1分离油层→加入无水Na2SO4除水→过滤玫瑰油
（2）提取橘皮精油的实验
①方法：一般采用压榨法。
②实验流程：石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油
（3）胡萝卜素的提取
①胡萝卜素性质：不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。
②提取方法及流程
a.方法：萃取法，石油醚最适宜作萃取剂。
b.实验流程：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。
c.鉴定方法：纸层析法。
【方法突破】
1．培养基的配制原则
（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
（3）pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。
2．微生物对主要营养物质的需求特点
不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。
（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。
（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。
2．选择培养基的制作方法
（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。
（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。
（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。
（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。
3．果酒和果醋的制作成功的关键点
项目
说明
材料的选择与处理
选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗，以防葡萄汁流失及污染
防止发酵液被污染
①榨汁机和发酵瓶等都需清洗干净，且发酵瓶要进行消毒；②清洗葡萄时要先清洗后除枝梗；③发酵瓶排气管用曲颈管而不用直管
发酵条件的控制
①葡萄汁装入发酵瓶时，要留约1/3的空间，目的是先让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖，耗尽O2后再进行酒精发酵，防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液的溢出；②严格控制温度：18～25
℃利于酵母菌的繁殖和酒精发酵；30～35
℃利于醋酸菌的繁殖和果醋的发酵；③充气：酒精发酵为无氧发酵，需封闭充气口；醋酸发酵为有氧发酵，需经充气口充气
4．腐乳制作的注意事项
（1）豆腐选取：其含水量以70%为宜。
（2）控制好材料的用量：对卤汤中盐（盐∶豆腐＝1∶5）和酒（12%左右）的用量需要严格控制。
（3）防止杂菌污染的方法
①用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。
②装瓶腌制时，操作要迅速小心，且要逐层加盐，离瓶口表面的盐要铺厚一些。
③加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。
5．泡菜制作的注意事项
（1）材料的选择及用量
①蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被还原成亚硝酸盐。
②清水和盐的质量比为4∶1，盐水要煮沸后冷却。煮沸有两大作用：一是除去水中的氧气，二是杀灭盐水中的其他细菌。
（2）防止杂菌污染：每次取样用具要洗净，要迅速封口。
（3）氧气需求
①泡菜坛要选择透气性差的容器，以创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。
②泡菜坛坛盖边沿的水槽内注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境，并注意在发酵过程中经常补水。
（4）温度：发酵过程温度控制在室温即可，温度过高则易滋生杂菌，温度过低则发酵时间延长。
6．胡萝卜素粗品鉴定过程中的5个易错点
（1）层析时没有选择干净的滤纸，导致实验现象不明显。为了防止操作时对滤纸的污染，应尽量避免用手直接接触滤纸，可以戴手套进行操作。
（2）点样时点样圆点太大（直径大于2
mm），会导致最终在滤纸上形成一条线，无法辨认被提取的色素。点样圆点的直径应为2
mm。
（3）将点好样的滤纸卷成圆筒状，卷纸时不能将滤纸两边相互接触，以避免由于毛细管现象导致溶剂沿滤纸两边的移动加快，溶剂前沿不齐，影响结果。
（4）层析液没及样品原点，色素溶解于层析液中，造成实验失败。层析液不可没及样品原点，以免色素溶解于层析液中，使鉴定失败。
（5）没有设置标准样品作对照。层析液中是否提取到胡萝卜素，可通过与标准样品中的β－胡萝卜素作对比予以确认。
◢考点精练
1．（四川省成都市石室中学2019届高三上学期入学考试生物试题）在玫瑰精油和橘皮精油提取过程中，正确的是（
）
A．玫瑰精油和橘皮精油都可用蒸馏、压榨和萃取的方法提取
B．分离的玫瑰精油油层还含有一定水分可用无水Na2SO4吸水
C．新鲜的橘皮中含有大量的果蜡、果胶等，为了提高出油率，需用CaCO3水溶液浸泡
D．玫瑰精油和橘皮精油都有很强的挥发性，易溶于有机溶剂，都不可能是萜类化合物
【答案】B
2．（北京市朝阳区2017-2018学年度高三第一学期期末练习生物试题）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并定期取样观测发酵效果。以下推测不合理的是（　　）
A．该实验的自变量是菌种，温度属于无关变量
B．大豆发酵过程中部分蛋白质转变为多肽，形成豆豉的独特风味
C．若容器内上层大豆发酵效果优于底层，则发酵菌为厌氧菌
D．煮熟大豆使蛋白质变性，有利于菌体分泌酶作用于蛋白质
【答案】C
【解析】根据题干信息分析，该实验的自变量是菌种的种类（甲乙两种菌种），而温度属于无关变量，A正确；大豆发酵过程中部分蛋白质转变为多肽，形成豆豉的独特风味，B正确；若容器内上层大豆发酵效果优于底层，说明发酵菌为需氧型，C错误；煮熟大豆使蛋白质变性，有利于菌体分泌酶作用于蛋白质，D正确。
3．（四川省广安第二中学校2019届高三上学期第一次月考生物试题）关于豆腐乳的制作，不正确的说法是（　　）
A．毛霉是参与腐乳制作的主要微生物
B．传统工艺生产豆腐乳一般在夏天进行
C．现代食品企业是在无菌条件下接种毛霉生产豆腐乳
D．盐的浓度过低，可能导致豆腐乳腐败变质
【答案】B
【解析】参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是毛霉，A正确；豆腐上生长毛霉的适宜温度为15～18℃，因此传统工艺生产豆腐乳应在春天或秋天，B错误；现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种直接接种到豆腐上，这样可避免其他菌种的污染，保证产品的质量，C正确；加盐和加酒都能抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质，D正确。
4．（四川省成都市第七中学2019届高中毕业班零诊模拟考试生物试题）无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是（　　）
A．紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果
B．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．在微生物接种的实验中，用95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒
【答案】A
【解析】用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A正确；高压灭菌加热结束时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，B错误；为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；在微生物接种的实验中，一般用75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射30min对超净工作台进行灭菌，D错误。
5．（2018年全国普通高等学校招生统一考试江苏卷）某高校采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过程的研究，下列叙述错误的是（　　）
A．夏季生产果酒时，常需对罐体进行降温处理
B．乙醇为挥发性物质，故发酵过程中空气的进气量不宜太大
C．正常发酵过程中罐内的压力不会低于大气压
D．可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
【答案】B
6．（四川省成都市石室中学2019届高三上学期入学考试生物试题）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（
）
A．高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到实验操作台一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为防止污染，接种环经火焰后应趁热快速挑取菌落
D．实验室培养硝化细菌时，培养基无需加入有机碳源
【答案】D
【解析】高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A项错误。倒平板过程中不能将培养皿的皿盖完全打开，B项错误。接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C项错误。硝化细菌就能够制造有机物，培养基无需加入有机碳源，D项正确，故选D。
7．（河南省天一联考2018届高三第三次联考生物试题）南洋东华公司研发了两种石油降解产品BDB-n生物降解菌（厌氧型）和BDB-a生物降解菌（好氧型），降解菌是通过产生酶对石油进行分解的。如图为不同条件下，某种降解菌对某湖泊污泥中石油分解能力的测定结果。下列有关分析错误的是（　　）
　　
A．该实验的自变量为pH和污泥含水量
B．该实验的检测指标是2天后污泥中的石油含量
C．该实验中使用的降解菌最可能是BDB-a生物降解菌
D．在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适pH相同
【答案】C
【解析】分析图解可知，该实验的自变量是pH和污泥含水量，因变量是2天后石油含量，AB正确；根据图中的实验数据分析可知，当污泥含水量60?80%、pH=7时，石油含量最少，说明石油降解酶分解能力最强的条件为污泥含水量60?80%、pH=7，则该实验用的应该是厌氧菌，即BDB-n生物降解菌，C错误；根据三条曲线的最低点可以判断，在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适pH相同，D正确。[]
8．（甘肃省兰州第一中学2018届高三8月月考生物试题）家庭制作腐乳并无严格的灭菌环节，但也能制作出品质优良的腐乳。下列叙述不正确的是（　　）
A．粽叶上有大量毛霉菌繁殖体，使毛霉菌在短期内成为优势菌
B．由于营养物质的消耗和代谢产物的积累，毛霉菌之间的斗争变得激烈
C．发酵过程中要经常揭开覆盖物散热
D．装瓶密封后能继续进行发酵
【答案】C
【解析】在空气中有大量的毛霉，成熟孢子可以在粽叶上萌发菌丝，在高温高湿条件下繁殖迅速，短时间内会成为优势菌种，A正确。随着营养物质的消耗和代谢产物的积累，毛霉菌之间因为资源有限斗争激烈，B正确。发酵过程中为了避免外界微生物的污染不能经常揭开覆盖物，
C错误。装瓶密封后能继续发酵，后期发酵利用的是被杀死后的毛霉裂解释放出来的各种分解酶的作用，D正确。
9．（江苏省盐城市伍佑中学2017届高三考前仿真考试生物试题）研究人员比较了不同贮藏条件对棉叶DNA纯度及提取率（提取率越高，获得的DNA越多）的影响，实验结果见图．下列有关叙述正确是（　　）
A．提纯DNA时可加入酒精去除不溶的蛋白质、酚类等物质
B．新鲜棉叶提取的DNA纯度最高，提取DNA的量也最多
C．木瓜蛋白酶和不同浓度的NaCl溶液均可用于提纯DNA
D．用二苯胺试剂鉴定，颜色最深的是冷冻3d处理后提取的DNA
【答案】CD
【解析】DNA不易溶于酒精，提纯DNA时不宜加入酒精去除不溶的蛋白质、酚类等物质，A项错误；据图可知，新鲜棉叶提取的DNA纯度最高，但提取DNA的量不高，B项错误；木瓜蛋白酶可除去蛋白质，DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液，易溶于2mol/L的NaCl溶液，木瓜蛋白酶和不同浓度的NaCl溶液均可用于提纯DNA，C项正确；冷冻3d处理后提取的DNA最多，用二苯胺试剂鉴定时颜色最深，D项正确。
10．（江苏省泰州中学2018届高三第四次模拟测试生物试题）下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步驟，下列有关叙述错误的是（　　）
　　　　
A．步骤①操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染
B．步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液[]
C．步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数
D．步骤④是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落
【答案】ACD
【解析】据图分析，图中由图可知，①表示倒平板，②表示用接种环沾取菌液，③表示进行平板划线，④表示平板划线后的培养。步骤①倒完平板后应该立即盖上培养皿，等冷却后再将平板倒过来放置，A错误；步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，待接种环冷却后才可以沾取菌液进行平板划线，以防止高温杀死X细菌，B正确；平板划线法只能用于菌种的分离，不能用于菌种的技术，C错误；步骤④将培养皿放在恒温培养箱培养后可用来对X细菌进行分离得到纯种，D错误。
11．（甘肃省静宁县第一中学2019届高三第四次模拟考试生物试题）酸奶是牛奶经过乳酸菌（主要是保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）发酵制成的。乳酸菌可将牛奶中的乳糖转化为乳酸，从而减轻某些人群的乳糖不耐受症状。请回答问题：
（1）为鉴别市售酸奶中的菌种，应该采用平板划线法或_______________法在固体培养基上进行接种，观察所获单菌落的特征。
（2）采用平板划线法分离水样中的乳酸菌。操作时，接种环通过______灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_____________。
（3）某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出能产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是____________。并且单菌落周围______越大，说明该菌株产生乳酸的能力越强。
（4）发酵到后期时，酸奶含量继续增加，当达到1.2%以上时，发酵速度逐渐变缓甚至停止，主要原因是________________________。
（5）含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶，其理由是_____________。
【答案】（1）稀释涂布平板法
（2）灼烧　　将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）生成的乳酸与CaCO3反应生成乳酸钙，周围形成透明圈　　透明圈
（4）pH过低抑制了乳酸菌的生长
（5）抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长
【解析】（1）微生物常见的接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法法，鉴别培养基中，一般需要加入琼脂作为凝固剂制成固体培养基，然后观察所获单菌落的特征。
（2）微生物培养的关键是无菌操作，将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具都需要进行灭菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌。平板划线法分离水样中的乳酸菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
（3）某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是乳酸会与CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，产生乳酸能力越强。
（4）发酵到后期时，酸奶含量继续增加，当达到1.2%以上时，发酵速度逐渐变缓甚至停止，主要原因是pH过低，乳酸杆菌生存环境过于恶劣，乳酸杆菌与环境斗争处于劣势而导致其生命活动（发酵）受到抑制。
（5）抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长，因此含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶。
12．（福建省厦门市厦门外国语学校2019届高三1月月考生物试题）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列问题：
　　
（1）酵母菌的呼吸代谢途径如左图所示。左图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的_________中进行，其产物乙醇与_________试剂反应呈现为灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的_________中进行。
（2）第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在_________条件下才能完成，右图装置中通过_________控制此条件。
（3）在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度_________（填“低于”或“高于”）第二阶段。
（4）左图中，能释放能量并生成ATP的过程是_________（填序号）。右图中的排气口长而弯曲，目的是_________。
【答案】（1）细胞质基质　　重铬酸钾　　线粒体
（2）有氧　　充气口充气
（3）低于　　
（4）①③　　防止空气中微生物的污染
【解析】（1）酵母菌无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳，无氧呼吸在细胞质基质中进行，检测酒精用酸性重铬酸钾溶液，反应呈灰绿色，③为有氧呼吸第二、三阶段，在线粒体中进行。
（2）果醋制作的第二阶段是乙醇转变为醋酸的过程，醋酸菌是严格的好氧菌，故需要在有氧条件下进行醋酸发酵。右图装置中通过向充气口充气来控制有氧条件。
（3）
第一阶段是果酒发酵，其适宜温度是18～25℃，第二阶段是果醋发酵，其适宜温度是30～35℃，因此在生产过程中，第一阶段的温度低于第二阶段。
（4）有氧呼吸三个阶段均能产生ATP，而无氧呼吸只在第一阶段产生ATP，左图中①③为有氧呼吸过程，①②为无氧呼吸过程，其中②为无氧呼吸的第二阶段，不产生ATP，故左图中，能释放能量并生成ATP的过程是①③。右图中的排气口长而弯曲，目的是防止空气中微生物的污染。
13．（吉林省长春外国语学校2019届高三上学期期中考试生物试题）回答下列有关提取植物有效成分的问题：
（1）薄荷油具有易挥发、难溶于水等性质，因此适合选用_________________法来提取。收集到的液体冷却后加入氯化钠的目的是___________________，然后加入无水硫酸钠除去残留的水分。
（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是__________________。对胡萝卜进行粉碎、干燥时，要特别注意干燥的_____________________和时间，以防止胡萝卜焦糊。提取过程中宜采用____________________方式加热，以保障安全。
（3）为了提高胡萝卜汁的澄清度，需要加入果胶酶，该酶往往从某些微生物中提取。一般来讲，筛选微生物时常用的接种方法有___________________、____________________，该过程用到的培养基从功能上讲，属于______________培养基。
【答案】（1）水蒸气蒸馏　　促进油水分层
（2）萃取法　　温度　　水浴
（3）平板划线法　　稀释涂布平板法　　选择
14．（江苏省海安高级中学2019届高三上学期第二次月考生物试题）鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度耐盐，可引起人类肺炎等疾病。在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为检测鲜牛奶是否被金黄色葡萄球菌污染的操作流程，请据图回答：
　　　
（1）鲜牛奶经乳酸杆菌发酵可制成酸奶，在酸奶发酵过程中需控制的气体条件是________。
（2）用7.5%
NaCl肉汤培养基培养的主要目的是_____________。经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现_________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。从功能上分类，血平板属于____________培养基。
（3）在3个血平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后平板上的菌落数分别为38、46、54，则每升原菌液样品中细菌数为________。这一数值与实际值相比可能_________。
（4）分离纯化微生物时，除了图中接种方法，还常用平板划线法。若要在五个区域划线，共需灼烧接种环_____次，最后一次灼烧灭菌的目的是_______________。
【答案】（1）无氧（隔绝空气）　　
（2）筛选出金黄色葡萄球菌（增加金黄色葡萄球菌的数量，同时抑制其它微生物生长）　　周围存在透明圈（无色、红色消褪）　　鉴别
（3）4.6×108　　小
（4）6　　防止污染环境和感染操作者
【解析】（1）乳酸杆菌为厌氧菌，鲜牛奶经乳酸杆菌发酵可制成酸奶，在酸奶发酵过程中需控制的气体条件是无氧（隔绝空气）。
（2）用7.5%
NaCl肉汤培养基培养的主要目的是筛选出金黄色葡萄球菌（增加金黄色葡萄球菌的数量，同时抑制其它微生物生长）。经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现周围存在透明圈的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。从功能上分类，血平板属于鉴别培养基。
（3）在3个血平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后平板上的菌落数分别为38、46、54，则每升原菌液样品中细菌数为（38+46+54）÷3×103×103×10=4.6×108个。
（4）分离纯化微生物时，除了图中接种方法，还常用平板划线法。若要在五个区域划线，共需灼烧接种环6次，最后一次灼烧灭菌的目的是防止污染环境和感染操作者。
15．（四川外国语大学附属外国语学校2019届高三10月月考理综生物试题）请回答关于果酒、果醋、腐乳和泡菜制作的问题。
（1）葡萄酒是最受欢迎的果酒之一，葡萄酒发酵过程中，需将温度控制在________℃。
发酵过程中，在________条件下，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物受抑制。若要让发酵装置由产葡萄酒转变成产葡萄醋，则需要改变的条件_________。
（2）腐乳的制作是利用毛霉产生的__________将豆腐中的蛋白质和脂肪分解。加盐腌制的主要目的是析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬；同时还能______，避免豆腐块腐败变质。
（3）泡菜是川渝地区家喻户晓的开胃小菜，泡菜发酵的原理是_______________；一般地说，泡菜腌制14天后，亚硝酸盐含量低，适合食用，实验室用___________法检测其含量。
【答案】（1）18--25℃　　无氧、酸性　　加入醋酸菌，充入无菌空气，提高发酵温度
（2）蛋白酶和脂肪酶　　抑制微生物的生长繁殖
（3）无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸　　比色