备战2019高考生物-三轮复习-基因工程-专题模块练习（含解析）
文档属性
| 名称 | 备战2019高考生物-三轮复习-基因工程-专题模块练习（含解析） |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 308.1KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 通用版 | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2019-05-06 22:08:04 | ||
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文档简介
备战2019高考生物-三轮复习-基因工程-专题模块练习（含答案）
一、单选题
1. ( 2分 ) 图甲表示某环型DNA分子经限制性核酸内切酶（EcoRⅠ）完全酶切后的片段电泳结果，若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如图乙所示的电泳结果（Kb即千个碱基对）。下列叙述错误的是
A.?该DNA 分子全长至少为7K?????????????????????
B.?该DNA 分子中至少含有4个EcoRⅠ酶切位点 C.?反应时间越长，得到图甲结果的可能性越大????????
D.?适当增加EcoRⅠ浓度，可得到图乙的结果
2. ( 2分 ) 科学家将抗冻蛋白基因导入烟草，筛选出抗冻蛋白基因成功整合到染色体上的烟草（假定抗冻蛋白基因都能正常表达）。某些烟草的体细胞含两个抗冻蛋白基因，这两个基因在染色体上的整合情况有图示的三种类型（黑点表示抗冻蛋白基因的整合位点）；让这些含两个抗冻蛋白基因的烟草自交，后代冻蛋烟草和普通烟草（不含抗冻蛋白基因）的比值分别是（?? ）
A.?1:0 3:1 15:1????????????????????B.?3:1 3:1 9:6:1????????????????????C.?1:0 1:1 9:6:1????????????????????D.?1:1 3:1 15:1
3. ( 2分 ) 下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是（）
A.?一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列?????
B.?限制性内切酶的活性受温度影响 C.?限制性内切酶能识别和切割RNA????????????????????????????????????????
D.?限制性内切酶可从原核生物中提取
4. ( 2分 ) 利用基因工程生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列叙述不正确的是（???? ）
?过程①是在小菜蛾细胞的细胞核中进行???????????????
?过程②获取的CarE基因中不含有启动子 C.?过程③进行前需要用Ca2+处理大肠杆菌??????????????
D.?过程④后只有部分工程菌含有CarE基因
5. ( 2分 ) 科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下列叙述错误的是（? ）
A.?如果目的基因的核苷酸序列是全部未知的，可用PCR技术得到 B.?可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞 C.?含耐盐基因的水稻细胞可经植物组织培养 获得植株 D.?可用较高浓度的盐水浇灌来鉴定 水稻植株的耐盐性
6. ( 2分 ) 下图是培育抗冻番茄的过程示意图。下列相关叙述正确的是（??? ）
?过程①和过程②所用的酶相同?????????????????????????????
?转基因抗冻番茄植株的获得是定向变异的结果 C.?重组质粒转人农杆菌的主要目的是筛选目的基因??????????
D.?可用DNA探针检测抗冻基因是否在番茄植株中表达
7. ( 2分 ) 下列有关基因工程的基本操作工具的说法中，正确的是（?? ）
A.?所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B.?质粒是基因工程中唯一的运载体 C.?运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D.?DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键
8. ( 2分 ) 下列相关叙述正确的是（ ）
A.?原生质体的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成 B.?用酶解法获得原生质体后，可以用观察细胞的有丝分裂实验对其活力进行检査 C.?DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板 D.?人胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，其结构基础是DNA的双螺旋结构
9. ( 2分 ) 基因工程的正确操作步骤是（ ）
①使目的基因与运载体结合 ?????? ②将目的基因导入受体细胞 ③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求?? ④提取目的基因．
A.?③②④①????????????????B.?②④①③??????????????????C.?④①②③???????????????D.?③④①②
二、多选题
10. ( 2分 ) 下列有关基因工程技术的不正确叙述是（ ）
A.?DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 B.?所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C.?选用细菌作为重组质粒的受体细胞与细菌繁殖快有关 D.?只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
11. ( 3分 ) 在现代生物工程技术中，下列研究方案能实现其目的是（??? ）
选项
方案
目的
A
通过体外培养或体内培养骨髓瘤细胞
制备单克隆抗体
B
体外诱导胚胎干细胞分化
培育供移植的组织器官
C
将胰岛素基因导入大肠杆菌，进行培养
大量生产人胰岛素
D
用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块
制备动物细胞悬浮液
A.?A???????????????????????????????????????????B.?B???????????????????????????????????????????C.?C???????????????????????????????????????????D.?D
12. ( 3分 ) 下列关于基因工程技术的叙述，错误的是（ ）
A.?切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 B.?PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 C.?载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D.?抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
13. ( 3分 ) 如图为某科研人员利用DNA分子探针鉴定50ml菌液样品中是否含有某特定DNA的细菌的示意图．下列叙述错误的是（??? ）
A.?培养皿中菌落数就是样品中含有的实际活菌数目 B.?重组质粒与探针进行分子杂交的原理是碱基互补配对原则 C.?外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制 D.?放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置
14. ( 3分 ) 关于现代生物技术应用的叙述，正确的是（ ）
A.?蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质 B.?DNA连接酶与DNA聚合酶作用的原理和条件都一样 C.?受精卵发育到原肠胚阶段之后才能进行胚胎移植 D.?植物组织培养技术要经过脱分化形成愈伤组织
15. ( 3分 ) 下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是（ ）
A.?一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列?????
B.?限制性核酸内切酶的活性受温度的影响 C.?限制性核酸内切酶能识别和切割RNA?????????????????????????????????
D.?限制性内切酶主要从真核生物中提取
三、填空题
16. ( 8分 ) 苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．如图是培育转毒素蛋白基因植物及转基因植物中两种生物大分子合成的部分过程示意图．请据图回答问题： （1）将图中①处的DNA用HindⅢ、BamH l完全酶切后，反应管中有________?种DNA片段．过程②需要用到________?酶． （2）假设图中质粒原来BamHl的识别序列变为BclI的识别序列，现用BclI和HindⅢ切割质粒，再经过程②能否获得所需重组质粒________?，理由是________? （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒可被限制酶________?切割． （4）图中α链是________?．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点________（填“都相同”或“都不同”或“不完全相同”），原因是________?
17. ( 9分 ) 基因工程被广泛应用于药物制备、动植物育种等，下图所示为基因工程在动物乳腺生物反应器﹣﹣转基因山羊和抗虫棉的培育过程．据图回答： （1）在图示①过程中，使用的限制酶能够识别________?的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，从而获得A．也可采用________?（填技术名称）从人的DNA分子或苏云金芽孢杆菌中对已知序列的A进行分离并扩增． （2）基因工程的关键环节之一是构建B，其完整结构至少包括________?等部分，在此过程中除了使用工具酶外，还需使用的工具是________? （3）在通过⑤过程形成转基因抗虫棉时，一般要用到植物组织培养技术，但若在③过程中采用________?法则不需要；在形成转基因山羊C的过程中，需要从雌性动物体内取出卵，在②过程中通过________?将目的基因导入________?，在形成转基因山羊的过程中除了基因工程技术外，还需要用到________?技术． （4）由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法是从转基因生物中提取蛋白质，用________ ， 表明目的基因已形成蛋白质产品．
18. ( 8分 ) 请回答有关下图的问题： （1）图1中①～⑤所示的生物工程称为蛋白质工程．该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对________?的修饰或合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求． （2）图1中④所示过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________?（请将模板链上的碱基写在前面）． （3）若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图2中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的________?；且在图1中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体________?的精子． （4）图中[3]________的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来． （5）为获得较多的受精卵进行研究，图1中⑥过程一般需要对供体用________?激素处理，使其超数排卵；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对供、受体动物做________?处理． （6）对早期胚胎进行________?技术，可获得同卵双胎或多胎．
19. ( 8分 ) 现有两种同科不同属的农作物，甲作物高产不耐盐，乙作物低产但耐盐．欲培育出既高产又耐盐的植株，以适应于盐碱地栽培．请回答下面的问题： （1）采用________?（填“杂交”、“嫁接”或“转基因”）方法可以达到上述目的，这种育种方法的优点是________? ． （2）采用细胞工程育种的方法如下： ①甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是________? ． 以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然种子相比，人工种子具有哪些显著的优点？（请举出1条）________? ． ②动物细胞工程应用较广泛的是单克隆抗体的制备，单克隆抗体最主要的优点是________? ． 单克隆抗体的应用主要有两个方面，一个是作为________?试剂，能准确 地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生________ ． 另一方面可以用于________?和运载药物．
20. ( 7分 ) 图1中①～③分别表示人体细胞中发生的3种生物大分子的合成过程．请回答下列问题． （1）细胞中过程②发生的主要场所是________? （2）已知过程②的α链中鸟嘌呤与尿嘧啶之和占碱基总数的54%，α链及其模板链对应区段的碱基中鸟嘌呤分别占29%、19%，则与α链对应的DNA区段中腺嘌呤所占的碱基比例为________? （3）由于基因中一个碱基对发生替换，而导致过程③合成的肽链中第8位氨基酸由异亮氨酸（密码子有AUU、AUC、AUA）变成苏氨酸（密码子有ACU、ACC、ACA、ACG），则该基因的这个碱基对替换情况是________? （4）在人体内成熟红细胞、浆细胞、记忆细胞、效应T细胞中，能发生过程①②③的细胞是________? （5）人体不同组织细胞的相同DNA进行过程②时启用的起始点________? （填“都相同”“都不同”或“不完全相同”），其原因是________? （6）图2为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q），用相关酶完全切割后得到的每个DNA片段的长度如表格所示．下列说法错误的是________?（多选）
切割位置
限制酶
得到的每个DNA片段的长度
Q
EcoRⅠ
3，7
P
BamHⅠ
8，2
A．该病毒的遗传物质是DNA或RNA B．该病毒的中心法则是DNA→RNA→蛋白质 C．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，新形成了8个游离的磷酸基团 D．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，得到的各种长度的DNA片段有3、5、2．
21. ( 7分 ) 如图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题： （1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由________?连接． （2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是________?末端，其产物长度为________?． （3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________?种不同DNA片段． （4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________?．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________?的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________?
四、解答题
22. ( 8分 ) 已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡．因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力． 回答下列问题：
（1）为了获得丙中蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙中蛋白质的________序列，据此可利用________方法合成目的基因．获得丙中蛋白质的基因还可用________、________方法．
（2）在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需使用________酶和________．
（3）将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗________的危害．
（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，该植株的种子________（填“含有”或“不含”）丙种蛋白质基因．
五、综合题
23. ( 8分 ) 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如下图所示。请回答下列问题：
（1）过程①代表的是________，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的________所识别，以便于其催化转录过程。
（2）上图为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2 000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域能指导蛋白质合成的片段转录产生的mRNA中A和U总数是________个。
（3）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的________数目。
（4）在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是将________筛选出来，第二次是将________筛选出来。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的________与分离出的病毒进行特异性检测。
24. ( 6分 ) 基因打靶技术是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术.结合图示回答问题。
注: neor是新霉素抗性基因;
HSV-tk和neor基因在同一DNA分子上时会表达，可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质,导致细胞死亡.
（1）打靶载体测序验证正确后,利用________酶,将之线性化,以提高重组率.通过________技术导入胚胎干细胞,这样打靶载体与细胞内靶基因同源的区段就有几率发生同源重组.为了筛选发生同源重组的细胞,可在培养液中加入________ .
（2）将打靶成功的细胞注射入小鼠囊胚,移植到同种、________的母鼠体内,一段时间后对受体母鼠进行________检查,确保其生下嵌合小鼠.这种嵌合体小鼠长大后,体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因.如果某些小鼠的________(选填“体细胞”、“生殖细胞”)恰巧被“修饰”过了,则它们的杂交后代中,就可能出现基因完全被“修饰”过的小鼠.
答案部分
一、单选题
1.【答案】 D
【考点】基因工程的应用
【解析】【分析】题干信息，DNA分子是环型的，经限制性核酸内切酶（EcoRⅠ）完全酶切后得到图甲的4个片段，至少含有4个EcoRⅠ酶切位点，长度至少是7Kb。图乙是改变条件使酶切不充分获得的，可能是改变了酶促反应的温度或者Ph，也可能是反应时间，但是不会使酶浓度，因为酶具有高效性，D错误。
2.【答案】 A
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】甲图、乙图可以看做是AO、BO两对基因位于一对同源染色体上，甲图自交产生的子代基因型是AAOO、OOBB、AOBO，故子代都表现抗冻，乙图的子代是AABB、AOBO、OOOO，可以按一对杂合体考虑，抗冻烟草：普通烟草=3:1；丙图可以看做是AO、BO两对基因位于两对同源染色体上，子代是A_B_、A_OO、OOB_、OOOO，抗冻烟草：普通烟草=15:1
故答案为：A
【分析】解答此题要根据基因导入到染色体的情况，正确写出配子的类型，再写出后代的表现型，计算出比例。
3.【答案】 C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【分析】限制酶具有专一性，且只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，A正确。限制酶的化学本质是蛋白质，作为一种生物催化剂，其活性受温度的影响，B正确。限制酶只能识别和切割双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，C错误。限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，D正确。
4.【答案】 A
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】过程①表示通过反转录法合成目的基因，该过程是在体外进行的，不是在小菜蛾细胞的细胞核中进行的，A符合题意；目的基因是通过逆转录法获得的，该方法获得的目的基因不含启动子，因此过程②获取的CarE基因中不含有启动子，B不符合题意；将目的基因导入微生物细胞时采用感受态转化法，感受态细胞可用Ca2+溶液处理得到，C不符合题意；过程④获得的工程菌需要进行鉴定，在没有鉴定前只有部分含有CarE基因，D不符合题意。
故答案为：A
【分析】根据题意和图示分析可知：图中过程①表示通过反转录法合成相应的DNA；过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞；过程④表示通过筛选获得工程菌。
5.【答案】 A
【考点】PCR技术的基本操作和应用，基因工程的原理及技术
【解析】【分析】PCR技术获取目的基因的前提条件是要有一段已知的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；A错误。农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上，实现重组质粒导入受体细胞；B正确。含耐盐基因的水稻细胞可经植物组织培养获得转基因植株，体现植物细胞的全能性；C正确。个体水平的检测：可用较高浓度的盐水来浇灌水稻植株，观察其存活情况，来鉴定水稻是否具有耐盐性特性；D正确。
6.【答案】B
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】过程①获得抗冻基因（目的基因）的过程需要逆转录酶和DNA聚合酶参与，过程②构建重组质粒的过程中需要用到限制性核酸内切酶和DNA连接酶，A不符合题意；转基因抗冻番茄植株的获得是借助基因工程导致定向变异的结果，B符合题意；重组质粒转入农杆菌的主要目的是将抗冻基因（目的基因）导入受体细胞，C不符合题意；可用DNA探针检测抗冻基因是否插入番茄细胞的染色体的DNA上以及是否转录出mRNA，D不符合题意。
故答案为：B
【分析】熟记并理解基因工程的基本操作程序等相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上从题图中提取信息并结合题意作答。本题的易错点在于混淆了对目的基因的检测与鉴定的相关知识。
7.【答案】 C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】每一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同的限制酶所识别的序列不同，A不符合题意；质粒是常用的运载体，但不是唯一的，B不符合题意；运载体具有多个限制酶切点，被限制酶切出黏性末端与外源基因连接，C符合题意；DNA连接酶连接的是两个被限制酶切割的DNA片段的切口，连的是磷酸二酯键，D不符合题意
故答案为：C
【分析】理清DNA重组技术的基本工具 (1) 理清限制性核酸内切酶(简称：限制酶)的相关知识点： ①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ③结果：产生黏性末端或平末端。 (2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 (3)载体 ①种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 ②理清质粒作为运载体的特点：能自我复制、有一个至多个限制酶切割位点、有特殊的标记基因。
8.【答案】D
【考点】基因工程的原理及技术，植物体细胞杂交的过程
【解析】【解答】解：A、原生质层的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成，原生质体是植物细胞去除细胞壁后剩余的结构，A错误； B、观察细胞有丝分裂实验中，经过解离步骤细胞会死亡，因此不能用该实验检测酶解法获得原生质体的活力，B错误； C、DNA聚合酶能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板，C错误； D、人胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，是因为它们的DNA都是有规则的双螺旋结构，而且DNA的基本组成单位相同，D正确． 故选：D． 【分析】1原生质体是指植物细胞去除细胞壁后剩余的结构，是植物细胞内的生命结构．2原生质层是指细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质．3DNA连接酶与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键．4 DNA分子的空间结构是反向平行方式盘旋成的双螺旋结构．
9.【答案】C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：基因工程的基本操作步骤主要包括四步：（1）目的基因的获取，即④提取目的基因；（2）基因表达载体的构建，即①使目的基因与运载体结合；（3）将目的基因导入受体细胞，即②；（4）目的基因的检测与表达，即③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求． 故选：C． 【分析】基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品．据此答题．
二、多选题
10.【答案】C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，运载体是基因工程所用的工具，但不是工具酶，A错误； B、限制酶具有专一性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同限制酶识别的核苷酸序列不同，B错误； C、选用细菌作为重组质粒的受体细胞与细菌繁殖快有关，C正确； D、目的基因进入了受体细胞不一定能成功实现表达，D错误． 故选：C． 【分析】1基因工程的工具： 1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂． 2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键． 3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒． 2? 基因工程技术的基本步骤： 1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成． 2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等． 3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法． 4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
11.【答案】 BCD
【考点】基因工程的应用，动物细胞与组织培养过程，单克隆抗体的制备过程，胚胎干细胞的来源及分化
【解析】【解答】解：A、通过体外培养或体内培养杂交瘤细胞，可以制备单克隆抗体，A错误；
B、胚胎干细胞具有全能性，因此可以体外诱导胚胎干细胞分化培育供移植的组织器官，B正确；
C、利用基因工程技术将人胰岛素基因导入大肠杆菌进行培养，能大量生产人胰岛素，C正确；
D、在动物细胞培养过程中，用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块，制备动物细胞悬浮液，D正确．
故选：BCD．
【分析】单克隆抗体是指由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体．制备单克隆抗体是将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞通过动物细胞融合得到的杂交瘤细胞实现的，该杂交瘤细胞结合两个细胞的遗传特性：既能不断增殖，又能产生特异性抗体．
12.【答案】A,B,C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、大多数限制性核酸内切酶识别6个核苷酸序列，少数限制酶识别序列由4、5或8个核苷酸组成，故A选项错误； B、PCR反应中温度的周期性改变是为了变性、复性、延伸，故B选项错误； C、载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，故C选项错误； D、抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达，需要进行检测和鉴定，故D选项正确． 故选：ABC． 【分析】能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．大多数限制性核酸内切酶识别6个核苷酸序列，少数限制酶识别序列由4、5或8个核苷酸组成． PCR技术的过程：高温解链、低温复性、中温延伸． 质粒中的标记基因一般用抗生素抗性基因或荧光标记基因．
13.【答案】AC
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、根据培养皿中菌落数只能估算样品中含有的活菌数目，A错误；
B、重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子的碱基互补配对原则，B正确；
C、外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能表达，而复制需要有复制原点，C错误；
D、放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置，因为菌落附着在膜上的位置是固定的，放射自显影后可以一一对应起来，D正确．
故选：AC．
【分析】分析题图：图示为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图，先采用DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌，再采用放射自显影显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置，最后进行克隆化培养．
14.【答案】A,D
【考点】蛋白质工程
【解析】【解答】A、蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质，A正确； B、DNA连接酶和DNA聚合酶都是作用于磷酸二酯键，但DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键，B错误； C、受精卵发育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行胚胎移植，C错误； D、植物组织培养技术要经过脱分化形成愈伤组织，D正确． 故选：AD． 【分析】1、蛋白质工程与基因工程不同，基因工程产生的是自然界中原有的蛋白质，而蛋白质工程能创造出自然界没有的蛋白质． 2、DNA连接酶和DNA聚合酶的区别： ①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键； ②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来； ③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板． 3、胚胎发育的过程为：受精卵→卵裂→桑椹胚→囊胚→原肠胚．其中桑椹胚的32个细胞属于全能细胞；囊胚期细胞发生了细胞分化，原肠胚出现了三个胚层的分化． 4、植物组织培养过程是离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官，进而形成新的植物体．
15.【答案】CD
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、一种限制酶能识别某种特定的脱氧核糖核苷酸序列，A正确； B、酶的作用条件温和，其活性受温度、pH的影响，B正确； C、限制性核酸内切酶能识别和切割DNA，不能切割RNA，C错误； D、限制酶主要来源于原核生物，D错误． 故选：CD． 【分析】有关限制酶，考生可以从以下几方面把握： 1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来． 2）特点：具有特异性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂． 3）作用结果：形成黏性末端和平末端两种． 4）限制酶的化学本质是蛋白质，其活性受温度、pH的影响．
三、填空题
16.【答案】4??；DNA连接酶；能；切割后露出的粘性末端相同；HindIII；mRNA?；不完全相同；不同组织细胞中基因会进行选择性表达
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：（1）限制酶HindⅢ有2个切割位点，处理DNA分子时可获得3种DNA片段、BamHl有1个切割位点，再次处理DNA，共获得4种DNA片段．过程②是基因表达载体的构建，需要用DNA连接酶连接目的基因和质粒． （2）如果质粒原来BamHl的识别序列变为BclI的识别序列，BclI和BamHl识别的DNA序列是相同的，切割后露出相同的粘性末端，所以用BclI和HindⅢ切割质粒，再经过程②能获得所需重组质粒． （3）BclI和BamHl识别的DNA序列是相同的，能切割后露出相同的粘性末端，重组质粒可被限制酶HindIII切割． （4）图中α链是以DNA的一条链为模板合成的mRNA．不同组织细胞中基因会进行选择性表达，因此不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点不完全相同． 【分析】1、“分子手术刀”﹣﹣限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的． （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性． （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端． 2．“分子缝合针”﹣﹣DNA连接酶 （1）根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶． 这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低． （2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键． （3）DNA连接酶和DNA聚合酶的区别：（需理解） ①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键； ②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来； ③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板
17.【答案】双链DNA分子??；PCR（或多聚酶链式反应）；目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因；载体；花粉管通道；显微注射?；受精卵?；胚胎移植；相应的抗体进行抗原﹣抗体杂交，若有杂交带出现
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】（1）基因工程的工具包括限制酶、DNA连接酶两种限制酶和运载体，其中，限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．PCR技术可用于较大DNA分子中目的基因的分离与扩增． （2）基因工程包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定． （3）基因工程的关键环节之一是构建表达载体，完整的基因表达载体包括：目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等结构． （4）检测目的基因是否表达出蛋白质，可从转基因生物中提取蛋白质，用应的抗体进行抗原﹣抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品． 【分析】根据题意和图示分析可知：图示表示利用生物技术获得生物新品种的过程，其中①表示获取目的基因的过程，则A为目的基因，B表示重组质粒；②③表示将目的基因导入受体细胞的过程；④表示早期胚胎培养、胚胎移植过程；⑤表示植物组织培养过程．
18.【答案】基因????????????；A﹣T；标记基因????????????；启动子；X；促性腺 ??????；同期发情?????????；胚胎分割移植
【考点】基因工程的原理及技术，胚胎工程的概念及操作对象
【解析】【解答】解：（1）蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的修饰或合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产生活的需求． （2）图2中④表示反转录过程，该过程遵循的碱基互补原则为U﹣A、A﹣T、C﹣G、G﹣C，而翻译过程中遵循的碱基互补原则为U﹣A、A﹣U、C﹣G、G﹣C，前者不同于翻译过程的是A﹣T． （3）基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子．图中3是标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来． （4）制备乳腺生物反应器过程中，在构建基因表达载体时，需在目的基因前加上乳腺蛋白基因的启动子；因为只有雌性个体能分泌乳汁，所以在图甲中⑨过程之前，要对精子进行筛选、保留含性染色体X的精子． （5）为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用促性腺激素对供体做超数排卵处理；为提高培育成功率，进行胚胎移植过程之前，要对供、受体动物做同期发情处理． （6）对早期胚胎进行胚胎分割移植技术，可获得同卵双胎或多胎． 【分析】分析题图：图乙①一⑤表示蛋白质工程，其中⑤表示基因表达载体的构建过程，基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子；⑥表示卵母细胞的采集和培养；⑦表示精子的采集和获能；⑧⑨表示体外受精过程；⑩表示胚胎移植过程．
19.【答案】转基因?????；能定向的改变生物的性状；形成新的细胞壁；生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输????；特异性强，灵敏度高；诊断；特异性反应；治疗、预防疾病
【考点】基因工程的原理及技术，植物体细胞杂交的过程，单克隆抗体的制备过程
【解析】【解答】（1）由于不同种生物之间存在生殖隔离，因此不能采用杂交法；由于嫁接属于无性繁殖，该方法只能保留一个亲本的优良性状，因此欲不能采用嫁接法；所以，培育出既高产又耐盐的植株需要采用转基因方法，这种育种方法能定向的改变生物的性状． （2）①甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是形成新的细胞壁．以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然种子相比，人工种子具有的优点有：生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输． ②单克隆抗体最主要的优点是特异性强，灵敏度高．单克隆抗体的应用主要有两个方面，一个是作为诊断试剂，能准确地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生 特异性反应．另一方面可以用于治疗、预防疾病和运载药物． 【分析】1、基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品． 2、植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产． 3、单克隆抗体的作用： ①作为诊断试剂：（最广泛的用途）具有准确、高效、简易、快速的优点． ②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症，可制成“生物导弹”．
20.【答案】细胞核；26%；A/T→G/C；记忆细胞；“不完全相同”；不同的细胞内进行基因的选择性表达；A B C
【考点】中心法则及其发展，基因工程的原理及技术
【解析】【解答】（1）②是以DNA的一条链为模板转录形成RNA的过程，主要发生在细胞核中． （2）α链是mRNA，其中G占29%，U占54%﹣29%=25%，则其模板链中C占29%、A占25%，再者模板链中G占19%，则T占27%，则α链对应的DNA区段中A占（25%+27%）÷2=26%． （3）异亮氨酸对应的密码子与苏氨酸对应的密码子中只有一个不同碱基，即第2个碱基，由U变为C，则模板基因中碱基替换情况是A/T→G/C． （4）成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，不能发生图中①②③过程；浆细胞和效应T细胞都已经高度分化，不再分裂，但能合成蛋白质，因此不能发生①过程，但可以进行②③过程；记忆细胞具有增殖和分化能力，因此能发生①②③过程． （5）由于基因的选择性表达，人体不同细胞中相同DNA转录的起始点不完全相同． （6）A、病毒只含有一种核酸，图示病毒的遗传物质含有限制酶（能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列）的酶切位点，说明该病毒的遗传物质是DNA，A错误； B、该病毒的遗传物质是DNA，则其中心法是， B错误； C、该病毒DNA含有2个游离的磷酸基团，若用EcoRI和BamHI完全切割该病毒DNA可形成3个DNA片段，每个DNA片段含有2个游离的磷酸，则新形成了3×2﹣2=4个游离的磷酸基团，C错误； D、用EcoRI完全切割该病毒DNA，能形成3、7两种长度的DNA分子；用BamHI完全切割该病毒DNA，能形成2、8两种长度的DNA分子，则用EcoRI和BamHI完全切割该病毒DNA，可得到的三种长度的DNA片段有3、5、2，D正确． 故选：ABC． 【分析】分析图1：①是以DNA的两条链为模板，进行的是DNA复制过程，主要发生在细胞核中；②是以DNA的一条链为模板，进行的是转录过程，主要发生在细胞核中；③是以mRNA为模板，进行的是翻译过程，发生在核糖体上． 分析图2：图示为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q）． 分析表格：用EcoRI完全切割该病毒DNA，能形成3和7两种长度的DNA分子；用BamHI完全切割该病毒DNA，能形成2和8两种长度的DNA分子．
21.【答案】脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖；平；537bp、790bp、661bp；4；BamHⅠ；抗生素B；同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接． （2）限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，其切割产生的是平末端．图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp． （3） 杂合子的基因型为Dd，其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的 d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全 切割后形成会四种不同的DNA片段． （4）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运 载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．用限制 酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出 含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养．由于同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接，这样会导致部分含有重组 质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达． 【分析】分析图1：图中DNA片段含有2个限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割位点，也含有两个限制酶BamHⅠ和MboⅠ切割位点．基因D两侧序列为GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割． 分 析图2：质粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶 MboⅠ切割．用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素 A．
四、解答题
22.【答案】（1）基因；化学；基因文库；PCR扩增 （2）限制；DNA连接 （3）乙种昆虫 （4）不含
【考点】基因工程的原理及技术，基因工程的应用
【解析】【解答】（1）在已知蛋白质的氨基酸序列的情况下，可根据氨基酸和碱基的对应关系，推出合成该蛋白质的mRNA序列，依据碱基互补配对原则再推出DNA的碱基序列，用DNA合成仪通过化学方法来合成目的基因．此外也可以从基因文库中获取目的基因，也可通过PCR方法获取目的基因．（2）构建重组质粒时，需要用同种限制酶将运载体目的基因切开，并用DNA连接酶将目的基因连接到运载体上，从而构建基因表达载体．（3）愈伤组织中含有丙蛋白，所以由愈伤组织培养的植株，乙昆虫食用后会死亡，说明植株可抵抗乙昆虫的危害．（4）直接用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，可在叶片部分细胞中合成丙蛋白，该植株的种子和其他的营养器官均不含有重组质粒，所以不含有丙中蛋白质的基因． 故答案为：（1）基因 化学 基因文库 PCR扩增（2）限制? DNA连接（3）乙种昆虫（4）不含 【分析】本题考生着重从目的基因的获取和基因工程的操作工具着手解答．获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ?②利用PCR技术扩增? ③人工合成（化学合成）；DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体
五、综合题
23.【答案】 （1）逆转录；RNA聚合酶 （2）400 （3）浆细胞 （4）杂交瘤细胞；能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 （5）A蛋白；抗A蛋白的单克隆抗体
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】解： (1)过程①表示以RNA为模板合成DNA的逆转录过程。? 启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA；终止子位于基因的尾端，具有终止转录的作用。因此过程③构建A基因重组载体时，重新构建的启动子和终止子都应该能被受体细胞的RNA聚合酶识别。(2) 依题意可知：A基因中能指导蛋白质合成的片段即空白区域共含有2000－800＝1200个碱基，其中C＋G＝400个，A＋T＝1200－400＝800个。依碱基互补配对原则，每条链上所对应的该片段中A＋T＝400个。因mRNA是由该区域的一条链为模板，按照碱基互补配对原则，通过转录产生，所以由该区域转录产生的mRNA中A和U总数是400个。(3) A蛋白为主要抗原。给小鼠皮下反复注射A蛋白的目的是增强小鼠的免疫能力，使机体产生较多的浆细胞。(4) 在制备单克隆抗体的过程中，需要两次筛选。第一次是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次是利用专一抗体阳性检测筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 (5)在预防接种时，可以利用A蛋白作为抗原制备疫苗；或者从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测。
【分析】本题结合“疫苗的生产和抗体的制备流程图” 综合考查学生对基因工程和细胞工程的相关知识的识记和理解能力，准确判断图中各过程的名称是解答此题的关键。①为逆转录，②为获取目的基因，③是基因表达载体的构建，④是将目的基因导入受体细胞，⑤是从小鼠皮下获取已经免疫的B细胞，⑥为B细胞的增殖分化，⑦是细胞融合，X 为杂交瘤细胞。
24.【答案】（1）? 限制；显微注射；新霉素和丙氧鸟苷? （2）生理状态相同（或经同期发情）；妊娠；生殖细胞
【考点】基因工程的应用，动物细胞与组织培养过程，胚胎移植
【解析】【解答】(1)分析题图可知，将目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA?片段都重组到载体(或质粒)上，构建打靶载体(基因表达载体)。打靶载体测序验证正确后，利用限制酶，将之线性化，以提高重组率。通过显微注射技术导入胚胎干细胞，这样打靶载体与细胞内靶基因同源的区段就有几率发生同源重组。结合题意：neor是新霉素抗性基因和HSV-tk基因的表达可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质，导致细胞死亡，因此为了筛选发生同源重组的细胞，可在培养液中加入新霉素和丙氧鸟苷；最后还需要通过DNA分子杂交技术鉴定同源重组的细胞(去除靶基因)，将这样的细胞通过动物细胞(或克隆)培养后，获得大量打靶成功的细胞。 (2)将打靶成功的细胞注射入小鼠囊胚，移植到同种、生理状态相同(或经同期发情)的母鼠体内，一段时间后对受体母鼠进行妊娠检查，确保其生下嵌合小鼠。这种嵌合体小鼠长大后，体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。如果某些小鼠的生殖细胞恰巧被“修饰”过了，则它们的杂交后代中，就可能出现基因完全被“修饰”过的小鼠。
【分析】基因打靶是指通过DNA定点同源重组 ， 改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。 基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶，用显微注射技术导入受体细胞。据此答题。
一、单选题
1. ( 2分 ) 图甲表示某环型DNA分子经限制性核酸内切酶（EcoRⅠ）完全酶切后的片段电泳结果，若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如图乙所示的电泳结果（Kb即千个碱基对）。下列叙述错误的是
A.?该DNA 分子全长至少为7K?????????????????????
B.?该DNA 分子中至少含有4个EcoRⅠ酶切位点 C.?反应时间越长，得到图甲结果的可能性越大????????
D.?适当增加EcoRⅠ浓度，可得到图乙的结果
2. ( 2分 ) 科学家将抗冻蛋白基因导入烟草，筛选出抗冻蛋白基因成功整合到染色体上的烟草（假定抗冻蛋白基因都能正常表达）。某些烟草的体细胞含两个抗冻蛋白基因，这两个基因在染色体上的整合情况有图示的三种类型（黑点表示抗冻蛋白基因的整合位点）；让这些含两个抗冻蛋白基因的烟草自交，后代冻蛋烟草和普通烟草（不含抗冻蛋白基因）的比值分别是（?? ）
A.?1:0 3:1 15:1????????????????????B.?3:1 3:1 9:6:1????????????????????C.?1:0 1:1 9:6:1????????????????????D.?1:1 3:1 15:1
3. ( 2分 ) 下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是（）
A.?一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列?????
B.?限制性内切酶的活性受温度影响 C.?限制性内切酶能识别和切割RNA????????????????????????????????????????
D.?限制性内切酶可从原核生物中提取
4. ( 2分 ) 利用基因工程生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列叙述不正确的是（???? ）
?过程①是在小菜蛾细胞的细胞核中进行???????????????
?过程②获取的CarE基因中不含有启动子 C.?过程③进行前需要用Ca2+处理大肠杆菌??????????????
D.?过程④后只有部分工程菌含有CarE基因
5. ( 2分 ) 科学家利用基因工程培育出了耐盐的转基因水稻新品系。下列叙述错误的是（? ）
A.?如果目的基因的核苷酸序列是全部未知的，可用PCR技术得到 B.?可通过农杆菌的感染以实现重组质粒导入受体细胞 C.?含耐盐基因的水稻细胞可经植物组织培养 获得植株 D.?可用较高浓度的盐水浇灌来鉴定 水稻植株的耐盐性
6. ( 2分 ) 下图是培育抗冻番茄的过程示意图。下列相关叙述正确的是（??? ）
?过程①和过程②所用的酶相同?????????????????????????????
?转基因抗冻番茄植株的获得是定向变异的结果 C.?重组质粒转人农杆菌的主要目的是筛选目的基因??????????
D.?可用DNA探针检测抗冻基因是否在番茄植株中表达
7. ( 2分 ) 下列有关基因工程的基本操作工具的说法中，正确的是（?? ）
A.?所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B.?质粒是基因工程中唯一的运载体 C.?运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D.?DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键
8. ( 2分 ) 下列相关叙述正确的是（ ）
A.?原生质体的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成 B.?用酶解法获得原生质体后，可以用观察细胞的有丝分裂实验对其活力进行检査 C.?DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板 D.?人胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，其结构基础是DNA的双螺旋结构
9. ( 2分 ) 基因工程的正确操作步骤是（ ）
①使目的基因与运载体结合 ?????? ②将目的基因导入受体细胞 ③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求?? ④提取目的基因．
A.?③②④①????????????????B.?②④①③??????????????????C.?④①②③???????????????D.?③④①②
二、多选题
10. ( 2分 ) 下列有关基因工程技术的不正确叙述是（ ）
A.?DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 B.?所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C.?选用细菌作为重组质粒的受体细胞与细菌繁殖快有关 D.?只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
11. ( 3分 ) 在现代生物工程技术中，下列研究方案能实现其目的是（??? ）
选项
方案
目的
A
通过体外培养或体内培养骨髓瘤细胞
制备单克隆抗体
B
体外诱导胚胎干细胞分化
培育供移植的组织器官
C
将胰岛素基因导入大肠杆菌，进行培养
大量生产人胰岛素
D
用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块
制备动物细胞悬浮液
A.?A???????????????????????????????????????????B.?B???????????????????????????????????????????C.?C???????????????????????????????????????????D.?D
12. ( 3分 ) 下列关于基因工程技术的叙述，错误的是（ ）
A.?切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 B.?PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 C.?载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D.?抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
13. ( 3分 ) 如图为某科研人员利用DNA分子探针鉴定50ml菌液样品中是否含有某特定DNA的细菌的示意图．下列叙述错误的是（??? ）
A.?培养皿中菌落数就是样品中含有的实际活菌数目 B.?重组质粒与探针进行分子杂交的原理是碱基互补配对原则 C.?外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制 D.?放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置
14. ( 3分 ) 关于现代生物技术应用的叙述，正确的是（ ）
A.?蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质 B.?DNA连接酶与DNA聚合酶作用的原理和条件都一样 C.?受精卵发育到原肠胚阶段之后才能进行胚胎移植 D.?植物组织培养技术要经过脱分化形成愈伤组织
15. ( 3分 ) 下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是（ ）
A.?一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列?????
B.?限制性核酸内切酶的活性受温度的影响 C.?限制性核酸内切酶能识别和切割RNA?????????????????????????????????
D.?限制性内切酶主要从真核生物中提取
三、填空题
16. ( 8分 ) 苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．如图是培育转毒素蛋白基因植物及转基因植物中两种生物大分子合成的部分过程示意图．请据图回答问题： （1）将图中①处的DNA用HindⅢ、BamH l完全酶切后，反应管中有________?种DNA片段．过程②需要用到________?酶． （2）假设图中质粒原来BamHl的识别序列变为BclI的识别序列，现用BclI和HindⅢ切割质粒，再经过程②能否获得所需重组质粒________?，理由是________? （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒可被限制酶________?切割． （4）图中α链是________?．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点________（填“都相同”或“都不同”或“不完全相同”），原因是________?
17. ( 9分 ) 基因工程被广泛应用于药物制备、动植物育种等，下图所示为基因工程在动物乳腺生物反应器﹣﹣转基因山羊和抗虫棉的培育过程．据图回答： （1）在图示①过程中，使用的限制酶能够识别________?的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，从而获得A．也可采用________?（填技术名称）从人的DNA分子或苏云金芽孢杆菌中对已知序列的A进行分离并扩增． （2）基因工程的关键环节之一是构建B，其完整结构至少包括________?等部分，在此过程中除了使用工具酶外，还需使用的工具是________? （3）在通过⑤过程形成转基因抗虫棉时，一般要用到植物组织培养技术，但若在③过程中采用________?法则不需要；在形成转基因山羊C的过程中，需要从雌性动物体内取出卵，在②过程中通过________?将目的基因导入________?，在形成转基因山羊的过程中除了基因工程技术外，还需要用到________?技术． （4）由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法是从转基因生物中提取蛋白质，用________ ， 表明目的基因已形成蛋白质产品．
18. ( 8分 ) 请回答有关下图的问题： （1）图1中①～⑤所示的生物工程称为蛋白质工程．该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对________?的修饰或合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求． （2）图1中④所示过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________?（请将模板链上的碱基写在前面）． （3）若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图2中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的________?；且在图1中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体________?的精子． （4）图中[3]________的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来． （5）为获得较多的受精卵进行研究，图1中⑥过程一般需要对供体用________?激素处理，使其超数排卵；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对供、受体动物做________?处理． （6）对早期胚胎进行________?技术，可获得同卵双胎或多胎．
19. ( 8分 ) 现有两种同科不同属的农作物，甲作物高产不耐盐，乙作物低产但耐盐．欲培育出既高产又耐盐的植株，以适应于盐碱地栽培．请回答下面的问题： （1）采用________?（填“杂交”、“嫁接”或“转基因”）方法可以达到上述目的，这种育种方法的优点是________? ． （2）采用细胞工程育种的方法如下： ①甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是________? ． 以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然种子相比，人工种子具有哪些显著的优点？（请举出1条）________? ． ②动物细胞工程应用较广泛的是单克隆抗体的制备，单克隆抗体最主要的优点是________? ． 单克隆抗体的应用主要有两个方面，一个是作为________?试剂，能准确 地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生________ ． 另一方面可以用于________?和运载药物．
20. ( 7分 ) 图1中①～③分别表示人体细胞中发生的3种生物大分子的合成过程．请回答下列问题． （1）细胞中过程②发生的主要场所是________? （2）已知过程②的α链中鸟嘌呤与尿嘧啶之和占碱基总数的54%，α链及其模板链对应区段的碱基中鸟嘌呤分别占29%、19%，则与α链对应的DNA区段中腺嘌呤所占的碱基比例为________? （3）由于基因中一个碱基对发生替换，而导致过程③合成的肽链中第8位氨基酸由异亮氨酸（密码子有AUU、AUC、AUA）变成苏氨酸（密码子有ACU、ACC、ACA、ACG），则该基因的这个碱基对替换情况是________? （4）在人体内成熟红细胞、浆细胞、记忆细胞、效应T细胞中，能发生过程①②③的细胞是________? （5）人体不同组织细胞的相同DNA进行过程②时启用的起始点________? （填“都相同”“都不同”或“不完全相同”），其原因是________? （6）图2为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q），用相关酶完全切割后得到的每个DNA片段的长度如表格所示．下列说法错误的是________?（多选）
切割位置
限制酶
得到的每个DNA片段的长度
Q
EcoRⅠ
3，7
P
BamHⅠ
8，2
A．该病毒的遗传物质是DNA或RNA B．该病毒的中心法则是DNA→RNA→蛋白质 C．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，新形成了8个游离的磷酸基团 D．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，得到的各种长度的DNA片段有3、5、2．
21. ( 7分 ) 如图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题： （1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由________?连接． （2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是________?末端，其产物长度为________?． （3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________?种不同DNA片段． （4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________?．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________?的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________?
四、解答题
22. ( 8分 ) 已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡．因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力． 回答下列问题：
（1）为了获得丙中蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙中蛋白质的________序列，据此可利用________方法合成目的基因．获得丙中蛋白质的基因还可用________、________方法．
（2）在利用上述丙中蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需使用________酶和________．
（3）将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗________的危害．
（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，该植株的种子________（填“含有”或“不含”）丙种蛋白质基因．
五、综合题
23. ( 8分 ) 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如下图所示。请回答下列问题：
（1）过程①代表的是________，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的________所识别，以便于其催化转录过程。
（2）上图为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2 000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域能指导蛋白质合成的片段转录产生的mRNA中A和U总数是________个。
（3）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的________数目。
（4）在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是将________筛选出来，第二次是将________筛选出来。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的________与分离出的病毒进行特异性检测。
24. ( 6分 ) 基因打靶技术是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术.结合图示回答问题。
注: neor是新霉素抗性基因;
HSV-tk和neor基因在同一DNA分子上时会表达，可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质,导致细胞死亡.
（1）打靶载体测序验证正确后,利用________酶,将之线性化,以提高重组率.通过________技术导入胚胎干细胞,这样打靶载体与细胞内靶基因同源的区段就有几率发生同源重组.为了筛选发生同源重组的细胞,可在培养液中加入________ .
（2）将打靶成功的细胞注射入小鼠囊胚,移植到同种、________的母鼠体内,一段时间后对受体母鼠进行________检查,确保其生下嵌合小鼠.这种嵌合体小鼠长大后,体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因.如果某些小鼠的________(选填“体细胞”、“生殖细胞”)恰巧被“修饰”过了,则它们的杂交后代中,就可能出现基因完全被“修饰”过的小鼠.
答案部分
一、单选题
1.【答案】 D
【考点】基因工程的应用
【解析】【分析】题干信息，DNA分子是环型的，经限制性核酸内切酶（EcoRⅠ）完全酶切后得到图甲的4个片段，至少含有4个EcoRⅠ酶切位点，长度至少是7Kb。图乙是改变条件使酶切不充分获得的，可能是改变了酶促反应的温度或者Ph，也可能是反应时间，但是不会使酶浓度，因为酶具有高效性，D错误。
2.【答案】 A
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】甲图、乙图可以看做是AO、BO两对基因位于一对同源染色体上，甲图自交产生的子代基因型是AAOO、OOBB、AOBO，故子代都表现抗冻，乙图的子代是AABB、AOBO、OOOO，可以按一对杂合体考虑，抗冻烟草：普通烟草=3:1；丙图可以看做是AO、BO两对基因位于两对同源染色体上，子代是A_B_、A_OO、OOB_、OOOO，抗冻烟草：普通烟草=15:1
故答案为：A
【分析】解答此题要根据基因导入到染色体的情况，正确写出配子的类型，再写出后代的表现型，计算出比例。
3.【答案】 C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【分析】限制酶具有专一性，且只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，A正确。限制酶的化学本质是蛋白质，作为一种生物催化剂，其活性受温度的影响，B正确。限制酶只能识别和切割双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，C错误。限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，D正确。
4.【答案】 A
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】过程①表示通过反转录法合成目的基因，该过程是在体外进行的，不是在小菜蛾细胞的细胞核中进行的，A符合题意；目的基因是通过逆转录法获得的，该方法获得的目的基因不含启动子，因此过程②获取的CarE基因中不含有启动子，B不符合题意；将目的基因导入微生物细胞时采用感受态转化法，感受态细胞可用Ca2+溶液处理得到，C不符合题意；过程④获得的工程菌需要进行鉴定，在没有鉴定前只有部分含有CarE基因，D不符合题意。
故答案为：A
【分析】根据题意和图示分析可知：图中过程①表示通过反转录法合成相应的DNA；过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞；过程④表示通过筛选获得工程菌。
5.【答案】 A
【考点】PCR技术的基本操作和应用，基因工程的原理及技术
【解析】【分析】PCR技术获取目的基因的前提条件是要有一段已知的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；A错误。农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上，实现重组质粒导入受体细胞；B正确。含耐盐基因的水稻细胞可经植物组织培养获得转基因植株，体现植物细胞的全能性；C正确。个体水平的检测：可用较高浓度的盐水来浇灌水稻植株，观察其存活情况，来鉴定水稻是否具有耐盐性特性；D正确。
6.【答案】B
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】过程①获得抗冻基因（目的基因）的过程需要逆转录酶和DNA聚合酶参与，过程②构建重组质粒的过程中需要用到限制性核酸内切酶和DNA连接酶，A不符合题意；转基因抗冻番茄植株的获得是借助基因工程导致定向变异的结果，B符合题意；重组质粒转入农杆菌的主要目的是将抗冻基因（目的基因）导入受体细胞，C不符合题意；可用DNA探针检测抗冻基因是否插入番茄细胞的染色体的DNA上以及是否转录出mRNA，D不符合题意。
故答案为：B
【分析】熟记并理解基因工程的基本操作程序等相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上从题图中提取信息并结合题意作答。本题的易错点在于混淆了对目的基因的检测与鉴定的相关知识。
7.【答案】 C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】每一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同的限制酶所识别的序列不同，A不符合题意；质粒是常用的运载体，但不是唯一的，B不符合题意；运载体具有多个限制酶切点，被限制酶切出黏性末端与外源基因连接，C符合题意；DNA连接酶连接的是两个被限制酶切割的DNA片段的切口，连的是磷酸二酯键，D不符合题意
故答案为：C
【分析】理清DNA重组技术的基本工具 (1) 理清限制性核酸内切酶(简称：限制酶)的相关知识点： ①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ③结果：产生黏性末端或平末端。 (2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 (3)载体 ①种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 ②理清质粒作为运载体的特点：能自我复制、有一个至多个限制酶切割位点、有特殊的标记基因。
8.【答案】D
【考点】基因工程的原理及技术，植物体细胞杂交的过程
【解析】【解答】解：A、原生质层的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成，原生质体是植物细胞去除细胞壁后剩余的结构，A错误； B、观察细胞有丝分裂实验中，经过解离步骤细胞会死亡，因此不能用该实验检测酶解法获得原生质体的活力，B错误； C、DNA聚合酶能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板，C错误； D、人胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，是因为它们的DNA都是有规则的双螺旋结构，而且DNA的基本组成单位相同，D正确． 故选：D． 【分析】1原生质体是指植物细胞去除细胞壁后剩余的结构，是植物细胞内的生命结构．2原生质层是指细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质．3DNA连接酶与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键．4 DNA分子的空间结构是反向平行方式盘旋成的双螺旋结构．
9.【答案】C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：基因工程的基本操作步骤主要包括四步：（1）目的基因的获取，即④提取目的基因；（2）基因表达载体的构建，即①使目的基因与运载体结合；（3）将目的基因导入受体细胞，即②；（4）目的基因的检测与表达，即③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求． 故选：C． 【分析】基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品．据此答题．
二、多选题
10.【答案】C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，运载体是基因工程所用的工具，但不是工具酶，A错误； B、限制酶具有专一性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同限制酶识别的核苷酸序列不同，B错误； C、选用细菌作为重组质粒的受体细胞与细菌繁殖快有关，C正确； D、目的基因进入了受体细胞不一定能成功实现表达，D错误． 故选：C． 【分析】1基因工程的工具： 1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂． 2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键． 3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒． 2? 基因工程技术的基本步骤： 1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成． 2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等． 3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法． 4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
11.【答案】 BCD
【考点】基因工程的应用，动物细胞与组织培养过程，单克隆抗体的制备过程，胚胎干细胞的来源及分化
【解析】【解答】解：A、通过体外培养或体内培养杂交瘤细胞，可以制备单克隆抗体，A错误；
B、胚胎干细胞具有全能性，因此可以体外诱导胚胎干细胞分化培育供移植的组织器官，B正确；
C、利用基因工程技术将人胰岛素基因导入大肠杆菌进行培养，能大量生产人胰岛素，C正确；
D、在动物细胞培养过程中，用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块，制备动物细胞悬浮液，D正确．
故选：BCD．
【分析】单克隆抗体是指由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体．制备单克隆抗体是将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞通过动物细胞融合得到的杂交瘤细胞实现的，该杂交瘤细胞结合两个细胞的遗传特性：既能不断增殖，又能产生特异性抗体．
12.【答案】A,B,C
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、大多数限制性核酸内切酶识别6个核苷酸序列，少数限制酶识别序列由4、5或8个核苷酸组成，故A选项错误； B、PCR反应中温度的周期性改变是为了变性、复性、延伸，故B选项错误； C、载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，故C选项错误； D、抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达，需要进行检测和鉴定，故D选项正确． 故选：ABC． 【分析】能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．大多数限制性核酸内切酶识别6个核苷酸序列，少数限制酶识别序列由4、5或8个核苷酸组成． PCR技术的过程：高温解链、低温复性、中温延伸． 质粒中的标记基因一般用抗生素抗性基因或荧光标记基因．
13.【答案】AC
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、根据培养皿中菌落数只能估算样品中含有的活菌数目，A错误；
B、重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子的碱基互补配对原则，B正确；
C、外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能表达，而复制需要有复制原点，C错误；
D、放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置，因为菌落附着在膜上的位置是固定的，放射自显影后可以一一对应起来，D正确．
故选：AC．
【分析】分析题图：图示为通过DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌克隆示意图，先采用DNA分子杂交鉴定含有某特定DNA的细菌，再采用放射自显影显示原培养皿中含有特定DNA的细菌菌落位置，最后进行克隆化培养．
14.【答案】A,D
【考点】蛋白质工程
【解析】【解答】A、蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质，A正确； B、DNA连接酶和DNA聚合酶都是作用于磷酸二酯键，但DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键，B错误； C、受精卵发育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行胚胎移植，C错误； D、植物组织培养技术要经过脱分化形成愈伤组织，D正确． 故选：AD． 【分析】1、蛋白质工程与基因工程不同，基因工程产生的是自然界中原有的蛋白质，而蛋白质工程能创造出自然界没有的蛋白质． 2、DNA连接酶和DNA聚合酶的区别： ①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键； ②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来； ③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板． 3、胚胎发育的过程为：受精卵→卵裂→桑椹胚→囊胚→原肠胚．其中桑椹胚的32个细胞属于全能细胞；囊胚期细胞发生了细胞分化，原肠胚出现了三个胚层的分化． 4、植物组织培养过程是离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官，进而形成新的植物体．
15.【答案】CD
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：A、一种限制酶能识别某种特定的脱氧核糖核苷酸序列，A正确； B、酶的作用条件温和，其活性受温度、pH的影响，B正确； C、限制性核酸内切酶能识别和切割DNA，不能切割RNA，C错误； D、限制酶主要来源于原核生物，D错误． 故选：CD． 【分析】有关限制酶，考生可以从以下几方面把握： 1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来． 2）特点：具有特异性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂． 3）作用结果：形成黏性末端和平末端两种． 4）限制酶的化学本质是蛋白质，其活性受温度、pH的影响．
三、填空题
16.【答案】4??；DNA连接酶；能；切割后露出的粘性末端相同；HindIII；mRNA?；不完全相同；不同组织细胞中基因会进行选择性表达
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：（1）限制酶HindⅢ有2个切割位点，处理DNA分子时可获得3种DNA片段、BamHl有1个切割位点，再次处理DNA，共获得4种DNA片段．过程②是基因表达载体的构建，需要用DNA连接酶连接目的基因和质粒． （2）如果质粒原来BamHl的识别序列变为BclI的识别序列，BclI和BamHl识别的DNA序列是相同的，切割后露出相同的粘性末端，所以用BclI和HindⅢ切割质粒，再经过程②能获得所需重组质粒． （3）BclI和BamHl识别的DNA序列是相同的，能切割后露出相同的粘性末端，重组质粒可被限制酶HindIII切割． （4）图中α链是以DNA的一条链为模板合成的mRNA．不同组织细胞中基因会进行选择性表达，因此不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点不完全相同． 【分析】1、“分子手术刀”﹣﹣限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的． （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性． （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端． 2．“分子缝合针”﹣﹣DNA连接酶 （1）根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶． 这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低． （2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键． （3）DNA连接酶和DNA聚合酶的区别：（需理解） ①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键； ②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来； ③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板
17.【答案】双链DNA分子??；PCR（或多聚酶链式反应）；目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因；载体；花粉管通道；显微注射?；受精卵?；胚胎移植；相应的抗体进行抗原﹣抗体杂交，若有杂交带出现
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】（1）基因工程的工具包括限制酶、DNA连接酶两种限制酶和运载体，其中，限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．PCR技术可用于较大DNA分子中目的基因的分离与扩增． （2）基因工程包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定． （3）基因工程的关键环节之一是构建表达载体，完整的基因表达载体包括：目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等结构． （4）检测目的基因是否表达出蛋白质，可从转基因生物中提取蛋白质，用应的抗体进行抗原﹣抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品． 【分析】根据题意和图示分析可知：图示表示利用生物技术获得生物新品种的过程，其中①表示获取目的基因的过程，则A为目的基因，B表示重组质粒；②③表示将目的基因导入受体细胞的过程；④表示早期胚胎培养、胚胎移植过程；⑤表示植物组织培养过程．
18.【答案】基因????????????；A﹣T；标记基因????????????；启动子；X；促性腺 ??????；同期发情?????????；胚胎分割移植
【考点】基因工程的原理及技术，胚胎工程的概念及操作对象
【解析】【解答】解：（1）蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的修饰或合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产生活的需求． （2）图2中④表示反转录过程，该过程遵循的碱基互补原则为U﹣A、A﹣T、C﹣G、G﹣C，而翻译过程中遵循的碱基互补原则为U﹣A、A﹣U、C﹣G、G﹣C，前者不同于翻译过程的是A﹣T． （3）基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子．图中3是标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来． （4）制备乳腺生物反应器过程中，在构建基因表达载体时，需在目的基因前加上乳腺蛋白基因的启动子；因为只有雌性个体能分泌乳汁，所以在图甲中⑨过程之前，要对精子进行筛选、保留含性染色体X的精子． （5）为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用促性腺激素对供体做超数排卵处理；为提高培育成功率，进行胚胎移植过程之前，要对供、受体动物做同期发情处理． （6）对早期胚胎进行胚胎分割移植技术，可获得同卵双胎或多胎． 【分析】分析题图：图乙①一⑤表示蛋白质工程，其中⑤表示基因表达载体的构建过程，基因表达载体主要由目的基因、标记基因、启动子和终止子；⑥表示卵母细胞的采集和培养；⑦表示精子的采集和获能；⑧⑨表示体外受精过程；⑩表示胚胎移植过程．
19.【答案】转基因?????；能定向的改变生物的性状；形成新的细胞壁；生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输????；特异性强，灵敏度高；诊断；特异性反应；治疗、预防疾病
【考点】基因工程的原理及技术，植物体细胞杂交的过程，单克隆抗体的制备过程
【解析】【解答】（1）由于不同种生物之间存在生殖隔离，因此不能采用杂交法；由于嫁接属于无性繁殖，该方法只能保留一个亲本的优良性状，因此欲不能采用嫁接法；所以，培育出既高产又耐盐的植株需要采用转基因方法，这种育种方法能定向的改变生物的性状． （2）①甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是形成新的细胞壁．以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然种子相比，人工种子具有的优点有：生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输． ②单克隆抗体最主要的优点是特异性强，灵敏度高．单克隆抗体的应用主要有两个方面，一个是作为诊断试剂，能准确地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生 特异性反应．另一方面可以用于治疗、预防疾病和运载药物． 【分析】1、基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品． 2、植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产． 3、单克隆抗体的作用： ①作为诊断试剂：（最广泛的用途）具有准确、高效、简易、快速的优点． ②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症，可制成“生物导弹”．
20.【答案】细胞核；26%；A/T→G/C；记忆细胞；“不完全相同”；不同的细胞内进行基因的选择性表达；A B C
【考点】中心法则及其发展，基因工程的原理及技术
【解析】【解答】（1）②是以DNA的一条链为模板转录形成RNA的过程，主要发生在细胞核中． （2）α链是mRNA，其中G占29%，U占54%﹣29%=25%，则其模板链中C占29%、A占25%，再者模板链中G占19%，则T占27%，则α链对应的DNA区段中A占（25%+27%）÷2=26%． （3）异亮氨酸对应的密码子与苏氨酸对应的密码子中只有一个不同碱基，即第2个碱基，由U变为C，则模板基因中碱基替换情况是A/T→G/C． （4）成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，不能发生图中①②③过程；浆细胞和效应T细胞都已经高度分化，不再分裂，但能合成蛋白质，因此不能发生①过程，但可以进行②③过程；记忆细胞具有增殖和分化能力，因此能发生①②③过程． （5）由于基因的选择性表达，人体不同细胞中相同DNA转录的起始点不完全相同． （6）A、病毒只含有一种核酸，图示病毒的遗传物质含有限制酶（能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列）的酶切位点，说明该病毒的遗传物质是DNA，A错误； B、该病毒的遗传物质是DNA，则其中心法是， B错误； C、该病毒DNA含有2个游离的磷酸基团，若用EcoRI和BamHI完全切割该病毒DNA可形成3个DNA片段，每个DNA片段含有2个游离的磷酸，则新形成了3×2﹣2=4个游离的磷酸基团，C错误； D、用EcoRI完全切割该病毒DNA，能形成3、7两种长度的DNA分子；用BamHI完全切割该病毒DNA，能形成2、8两种长度的DNA分子，则用EcoRI和BamHI完全切割该病毒DNA，可得到的三种长度的DNA片段有3、5、2，D正确． 故选：ABC． 【分析】分析图1：①是以DNA的两条链为模板，进行的是DNA复制过程，主要发生在细胞核中；②是以DNA的一条链为模板，进行的是转录过程，主要发生在细胞核中；③是以mRNA为模板，进行的是翻译过程，发生在核糖体上． 分析图2：图示为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q）． 分析表格：用EcoRI完全切割该病毒DNA，能形成3和7两种长度的DNA分子；用BamHI完全切割该病毒DNA，能形成2和8两种长度的DNA分子．
21.【答案】脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖；平；537bp、790bp、661bp；4；BamHⅠ；抗生素B；同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接
【考点】基因工程的原理及技术
【解析】【解答】解：（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接． （2）限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，其切割产生的是平末端．图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp． （3） 杂合子的基因型为Dd，其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的 d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全 切割后形成会四种不同的DNA片段． （4）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运 载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．用限制 酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出 含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养．由于同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接，这样会导致部分含有重组 质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达． 【分析】分析图1：图中DNA片段含有2个限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割位点，也含有两个限制酶BamHⅠ和MboⅠ切割位点．基因D两侧序列为GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割． 分 析图2：质粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶 MboⅠ切割．用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素 A．
四、解答题
22.【答案】（1）基因；化学；基因文库；PCR扩增 （2）限制；DNA连接 （3）乙种昆虫 （4）不含
【考点】基因工程的原理及技术，基因工程的应用
【解析】【解答】（1）在已知蛋白质的氨基酸序列的情况下，可根据氨基酸和碱基的对应关系，推出合成该蛋白质的mRNA序列，依据碱基互补配对原则再推出DNA的碱基序列，用DNA合成仪通过化学方法来合成目的基因．此外也可以从基因文库中获取目的基因，也可通过PCR方法获取目的基因．（2）构建重组质粒时，需要用同种限制酶将运载体目的基因切开，并用DNA连接酶将目的基因连接到运载体上，从而构建基因表达载体．（3）愈伤组织中含有丙蛋白，所以由愈伤组织培养的植株，乙昆虫食用后会死亡，说明植株可抵抗乙昆虫的危害．（4）直接用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，可在叶片部分细胞中合成丙蛋白，该植株的种子和其他的营养器官均不含有重组质粒，所以不含有丙中蛋白质的基因． 故答案为：（1）基因 化学 基因文库 PCR扩增（2）限制? DNA连接（3）乙种昆虫（4）不含 【分析】本题考生着重从目的基因的获取和基因工程的操作工具着手解答．获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ?②利用PCR技术扩增? ③人工合成（化学合成）；DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体
五、综合题
23.【答案】 （1）逆转录；RNA聚合酶 （2）400 （3）浆细胞 （4）杂交瘤细胞；能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 （5）A蛋白；抗A蛋白的单克隆抗体
【考点】基因工程的应用
【解析】【解答】解： (1)过程①表示以RNA为模板合成DNA的逆转录过程。? 启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA；终止子位于基因的尾端，具有终止转录的作用。因此过程③构建A基因重组载体时，重新构建的启动子和终止子都应该能被受体细胞的RNA聚合酶识别。(2) 依题意可知：A基因中能指导蛋白质合成的片段即空白区域共含有2000－800＝1200个碱基，其中C＋G＝400个，A＋T＝1200－400＝800个。依碱基互补配对原则，每条链上所对应的该片段中A＋T＝400个。因mRNA是由该区域的一条链为模板，按照碱基互补配对原则，通过转录产生，所以由该区域转录产生的mRNA中A和U总数是400个。(3) A蛋白为主要抗原。给小鼠皮下反复注射A蛋白的目的是增强小鼠的免疫能力，使机体产生较多的浆细胞。(4) 在制备单克隆抗体的过程中，需要两次筛选。第一次是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次是利用专一抗体阳性检测筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 (5)在预防接种时，可以利用A蛋白作为抗原制备疫苗；或者从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测。
【分析】本题结合“疫苗的生产和抗体的制备流程图” 综合考查学生对基因工程和细胞工程的相关知识的识记和理解能力，准确判断图中各过程的名称是解答此题的关键。①为逆转录，②为获取目的基因，③是基因表达载体的构建，④是将目的基因导入受体细胞，⑤是从小鼠皮下获取已经免疫的B细胞，⑥为B细胞的增殖分化，⑦是细胞融合，X 为杂交瘤细胞。
24.【答案】（1）? 限制；显微注射；新霉素和丙氧鸟苷? （2）生理状态相同（或经同期发情）；妊娠；生殖细胞
【考点】基因工程的应用，动物细胞与组织培养过程，胚胎移植
【解析】【解答】(1)分析题图可知，将目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA?片段都重组到载体(或质粒)上，构建打靶载体(基因表达载体)。打靶载体测序验证正确后，利用限制酶，将之线性化，以提高重组率。通过显微注射技术导入胚胎干细胞，这样打靶载体与细胞内靶基因同源的区段就有几率发生同源重组。结合题意：neor是新霉素抗性基因和HSV-tk基因的表达可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质，导致细胞死亡，因此为了筛选发生同源重组的细胞，可在培养液中加入新霉素和丙氧鸟苷；最后还需要通过DNA分子杂交技术鉴定同源重组的细胞(去除靶基因)，将这样的细胞通过动物细胞(或克隆)培养后，获得大量打靶成功的细胞。 (2)将打靶成功的细胞注射入小鼠囊胚，移植到同种、生理状态相同(或经同期发情)的母鼠体内，一段时间后对受体母鼠进行妊娠检查，确保其生下嵌合小鼠。这种嵌合体小鼠长大后，体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。如果某些小鼠的生殖细胞恰巧被“修饰”过了，则它们的杂交后代中，就可能出现基因完全被“修饰”过的小鼠。
【分析】基因打靶是指通过DNA定点同源重组 ， 改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。 基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶，用显微注射技术导入受体细胞。据此答题。
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