课件16张PPT。课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段本节重点:
★掌握PCR技术的基本原理
★讨论PCR的应用
★了解PCR技术的基本操作回顾:细胞内进行的DNA的复制1.场所:真核生物:
原核生物:
病毒:2.原料:
3.模板:
4.能量:
5.酶:
6.特点:
7.复制n次:细胞核 线粒体 叶绿体细胞质宿主细胞4种脱氧核糖核苷酸DNA的两条链ATP半保留复制 边解旋边复制 多起点双向进行解旋酶 DNA水解酶 DNA连接酶子代DNA2n 个 含有母链的DNA 2个 基础知识
(一)PCR原理1.PCR的全称是什么?
2.引物是什么?
3.为什么PCR技术要使用引物?
4.DNA的合成方向?阅读59页 填空:1.在DNA复制过程中 是进行复制的前提。在体外这个过程可以通过 实现。
2.在( )的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体.
3.PCR技术利用了DNA的( )原理,通过控制温度来控制双链的( )和( )。那么问题来了,高温会不会使DNA聚合酶变性?耐高温的TaqDNA聚合酶的发现和应用解决了这个问题!小结:PCR反应所需要的条件:1.DNA模板
2.分别与两条模板链相结合的两种引物
3.四种脱氧核糖核苷酸
4.耐热的DNA聚合酶
5.缓冲液
6.PCR仪思考:PCR技术扩增DNA与细胞内合成DNA有什么不同?(二)PCR的反应过程问题:
1.PCR过程经历多少次循环?每次循环分为几步?
2.每一步骤的温度是多少?作用是什么?
3.你能具体描述循环过程吗?PCR 循环第一步:高温变性1、PCR仪㈠.设备及用具实质上一台能够自动调控温度的仪器。实验操作2、微量离心管一种薄壁塑料管,总容积为0.5ml3、微量移液器用于定量转移PCR配方中的液体,其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。