人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件共27张PPT

课件27张PPT。课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数选修一：专题2 微生物的培养与应用1.研究培养基对微生物的选择作用;
2.分析研究思路的形成过程;
3.进行微生物数量的测定.尿素是一种重要的农业氮肥（提供氮源），分子式为CO(NH2)2，不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。1、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶2、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌等能被植物利用1、实例：DNA多聚酶链式反应（PCR），此项技术要求使用耐高温（93 ℃）的DNA聚合酶。
去哪寻找这种酶？原因：因为热泉温度70～80 ℃，淘汰了绝大多数微生物，只有Taq细菌被筛选出来。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；
方法：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或者阻止其他微生物生长。2、实验室中微生物的筛选原理：尿素培养基
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
用蒸馏水定容至1000ml
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏: 5.0g
蛋白胨： 10.0g
NaCl： 5.0g
琼脂： 20.0g
用蒸馏水定容至1000ml 思考：为什么下面的培养基能够分离出能分解尿素的细菌？在尿素培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是____________，
提供氮源的是________。葡萄糖尿素对照 基础培养基 以尿素作为培养基的唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物因缺乏氮源而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。3、培养基筛选分解尿素的细菌的原理 选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌；
不适于对运动细菌的计数；
个体小的细菌在显微镜下难以观察。缺点：2、间接计数法（活菌计数法）
⑴原理：在稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。平均值：163？平均值：100分析讨论：下列同学在稀释倍数为106的菌液中取0.1mL涂布平板，获得的菌落数如下：为保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数1.甲没有设置重复组。2.乙涂布三个平板，但其中一个计数结果与另两个相差太远，应剔除。√3.丙的实验结果合理150A同学B同学C同学D同学505253培养基被杂菌污染了选择的土样不同操作有误原因如何通过设置对照实验找出原因？试分析以下同学的实验结果：？如何设置对照实验证明是培养基污染影响实验结果？A同学的培养基不加土样培养（空白对照组）结果无菌落有菌落培养基没有污染培养基污染说明1.A同学的培养基不加土样作为空白对照如何设置对照实验证明土样不同还是操作有误影响实验结果？其他同学取与A同学相同的土样进行实验（实验组）结果约150个菌落约50个菌落土样不同A的操作有问题说明对照组A的实验结果：
约150个菌落2.其他同学用与A同学相同的土样进行实验 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
“微生物的天然培养基”数量最大、种类最多大约70%—90%是细菌注意：取土样用的小铁铲和盛土样的信封在
使用前都要灭菌。
应在火焰旁称取土壤。实验组对照组①②③④⑤表：不同菌一般选择的稀释倍数原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板初次实验，可以将稀释的范围放宽一点，例如，可以将103-107倍的稀释液分别进行涂布 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。
选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度：
细菌：30～37℃培养1～2d
放线菌：25～28℃培养5～7d
霉菌：25～28℃培养3～4d。　一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色。平均值：100每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M丙同学在稀释倍数为106的菌液中取0.1mL涂布平板，获得的菌落数如下：=（100÷0.1）×106=1.0×109
实验结果3课题延伸pH升高
指示剂（酚红）将变红在以尿素为唯一氮源的培养基上加入酚红指示剂，
培养某种细菌后，若pH升高，指示剂将变红，这样
说明该菌能够分解尿素。思考：怎样判断筛选出来的菌就是能够分解尿素的菌呢？
可以用什么去鉴定呢？1.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )
A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　
C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素D2.下列说法不正确的是（ 　 ）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比，土壤中微生物数量最大，种类最多。B平均值谢谢大家！