课件30张PPT。动物细胞融合和单克隆抗体学科网 学习目标
1 动物细胞融合过程
2 制备单克隆抗体的原理、过程和应用
知识回顾?再分化一、原理:
细胞膜具有流动性
细胞的全能性二、诱导方式:
物理法、化学法三、用途:
获得杂种植株学科网一 动物细胞融合
1 概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个单核细胞的过程。1、动物细胞融合的基本原理是什么?2、动物细胞融合的诱导方式是什么?与植物细胞融合的诱导方式有什么不同?学科网???用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程2.过程:杂交细胞细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核动物细胞融合1 原理:细胞膜的流动性
2 结果:形成单核的杂交细胞 3 诱导方式:物理法:电激、振动、离心化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒)打破生殖隔离,使远缘杂交成为可能;
重要用途:制备单克隆抗体。4 意义和应用: 动物细胞融合过程和植物体细胞杂交有何不同?细胞膜的流动性
细胞的全能性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理(离心、振荡、电刺激)
化学(聚乙二醇)物理、化学方法(同左)
灭活的病毒获得杂种植株????制备单克隆抗体【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 ( )
A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动
【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点( )
具有原来两个或多个细胞的遗传信息
B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁
【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是( )
A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体
C.培育新物种 D.生产杂种细胞
BB初试牛刀A学科网二、单克隆抗体1、抗体是由何种细胞产生的?浆细胞(效应B细胞)2、抗体是如何产生的?抗原刺激B淋巴细胞 增殖分化成浆细胞3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体?每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体思考:传统的方法得到的抗体具有什么特点?(2)缺点:特异性差、产量和纯度都很低。1.传统抗体的制备向动物体内反复注射_____,使动物产生抗体,然后从_____中分离所需抗体。抗原血清(1)方法学科网二、单克隆抗体McAb原理 :
要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的B淋巴细胞,形成细胞群。
1、在体外培养的条件下,一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖?不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力?癌细胞3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力?细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术思路:动物细胞融合单克隆 抗体既能产生特异性抗体,又能大量增殖(选择培养基)(抗体检测)1.注射抗原的目的是什么?2.诱导细胞融合的手段有哪些?3.若细胞两两融合后,有几种融合情况?4.怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交瘤细胞有何优点?5.第一次筛选出的杂交瘤细胞,为何需进行克隆化培养、专一抗体检测?获得产生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞)获得足够数量的能分泌特异性抗体的细胞群。 6.大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法?体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。B细胞-B细胞 瘤细胞-瘤细胞 杂交瘤细胞7.两次筛选的目的是什么?
?第一次。获得杂交瘤细胞
第二次.获得产生单一抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体的制备 1 优点:
特异性强,灵敏度高,并可大量制备。
2 利用的技术手段:
动物细胞融合技术
动物细胞培养技术三、单克隆抗体的应用①作为诊断试剂(最广泛的用途):
的优点②用于治疗疾病和运载药物 (生物导弹)准确、高效、简易、快速“生物导弹”=抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素、化学药物或细胞毒素。(单克隆抗体:导向。准确找到癌细胞位置,原位杀死癌细胞。)两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法:一个新细胞:一个优势:
【课堂小结】单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势杂交瘤细胞灭活病毒第一次是获得杂交瘤细胞
第二次是获得产生特异性抗体的杂交瘤细胞两次筛选练习:1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较,
在动物细胞融合中有特殊性的是( )
A、融合的原理 B、融合的优点
C、融合的诱导手段 D、融合的过程练习:2、动物细胞融合的目的中最重要的是( )
A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体
C、培育新物种 D、生产杂种细胞练习:3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,
得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗
体,与骨髓瘤细胞融合的是( )
A、经过免疫的B淋巴细胞
B、不经过免疫的T淋巴细胞
C、经过免疫的T淋巴细胞
D、不经过免疫的B淋巴细胞练习:4. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞
诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( )
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融
合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞
⑤杂交瘤细胞
A. ②④ B.①③⑤
C. ①②③④ D.②③ 练习:5、(2006,广雅中学考题)研究单克隆抗体治疗癌症的思路是( )
A.利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞
B.以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞
C.抗癌物质在克隆细胞中大量合成
D.单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合练习:6.只能使动物细胞融合的常用诱导方法( )
A.PEG B.灭活的病毒
C.电刺激 D.离心
7、“生物导弹”是指 ( )
A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞
C.产生特定抗体的B淋巴细胞
D.在单抗上连接抗癌药物8.下图是单克隆抗体制备过程示意图,据图回答:。
(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得__________细胞,该细胞能够产生___________。从小鼠体内提取分离该细胞之前,应给小鼠注射_____________类物质。
(2)B过程是一个____________过程,该过程的进行需要灭活的______或_____________的诱导。
浆细胞抗体抗原细胞融合 病毒 聚乙二醇 9、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。(1)_______________技术是单克隆抗体技术的基础。
(2)根据培养基的用途分类,图中HAT培养基属于________培养基。
(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是________________。
(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外,还可以采用________________。
(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点,又具备淋巴细胞的_______________特点。
(6)淋巴细胞是由动物体_________中的______________细胞分化、发育而来。
(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓造血干细胞 知识延伸用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程