人教版高中生物选修一专题二课题1微生物的实验室培养 课件共44张PPT

课件44张PPT。微生物的概念与分类概念：
个体多数十分微小，结构都相当简单，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到的生物。微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌单细胞的动植物
如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构真核细胞细菌、放线菌等原核细胞专题2 微生物的培养与应用 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保其他微生物无法混入。（一）培养基 （二）无菌技术一、基础知识（一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。按物理状态分2. 类型1.概念：液体培养基
固体培养基（加入凝固剂 ）琼脂固体培养基液体培养基一般用于增菌（扩大培养）、工业生产一般用于分离纯化、鉴定、计数微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落按功能分选择培养基
鉴别培养基允许某种特定的微生物生存，阻止或抑制其他微生物生存鉴别不同种类的微生物（添加某种指示剂或化学药品）以纤维素为唯一碳源的培养基分离纤维素分解菌加入酚红指示剂能鉴定尿素分解菌；伊红—美蓝培养基使大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴别大肠杆菌几种选择培养基：加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:
分离金黄色葡萄球菌
只有尿素作为惟一氮源的培养基：
分离出分解尿素的细菌
不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物按化学组成分合成培养基
天然培养基由化学成分和浓度完全清楚的物质配制的培养基。以动植物组织或天然成分为原料配制的培养基，培养基成分不明确 。（牛肉膏、蛋白胨）3.培养基的营养成分： 不管哪种培养基，一般都含有 、
、 和 等营养物质。 （1）基本成分：水 碳源 氮源 无机盐1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（2）特殊营养： 细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如维生素（乳酸杆菌）、某些氨基酸、碱基等（3）pH、氧气等要求细菌偏碱或中性，真菌偏酸
厌氧微生物需无氧条件4. 配制原则（《步》P244）⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂（CO2）（二）无菌技术1、获得纯净培养物的关键:
2、无菌技术包括的四大方面
防止外来杂菌的入侵①实验操作的空间、操作者的衣着、手
②培养器皿、接种用具、培养基
③实验操作
④已灭菌物品避免与未灭菌物品接触清洁、消毒灭菌酒精灯火焰旁化学药剂巴氏消毒法煮沸消毒法3、消毒与灭菌：耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时接种环、接种针等 金属用具70~75℃、30min
80℃、15min（牛奶）100℃、5~6min较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精—手；氯气—水；
石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基等
100KPa、
121℃、15～30min（二）纯化大肠杆菌
接种方法有： 和
平板法稀释涂布（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算－ －溶化－ － 倒平板二、实验操作 大肠杆菌的纯化培养：分散成单个细胞,形成单菌落称量灭菌平板划线法（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录
1.临时保藏：
接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。（适用于频繁使用的菌种）
2.长期保存：
甘油管藏法三、菌种的保存 练 习1．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述，不正确的是(　　)
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．碳源物质也是该微生物的能源物质
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一B2．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌(　　)
A．接种环、手、培养基
B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环
D．接种环、手、高压锅
C2．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是(　　)
A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度
稀释
B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培
养基表面
C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单
个的菌落
D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行
严格灭菌处理C3．(2013·江苏，18)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是(　　)
A．培养基分装到培养皿后进行灭菌
B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行
划线
C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中
培养
D．培养过程中每隔一周观察一次B4．(2012·北京，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是(　　)
A．将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中
B．将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上
C．将转基因植物叶片接种到无菌培养基上
D．将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基
上C5．(2011·新课标，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即____________________和____________________。原油选择平板划线法稀释涂布平板法5．(2011·新课标，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：
(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力____________。
(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和____________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 强干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰6．(2014·新课标Ⅱ，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：
(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为______________。检测培养基平板灭菌是否合格3.8×107(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_________________________
。
(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落B(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高____________的利用率。溶解氧营养物质碳源可作为碳源的物质有:
无机碳源:CO2、碳酸盐、碳酸氢盐
有机碳源：

如：牛肉膏、蛋白胨等
不同微生物所利用的碳源不同
异养型微生物的碳源为有机碳源
自养型微生物的碳源为无机碳源
糖类（主要）蛋白质脂肪核酸返回氮源可作为氮源的物质有:
无机氮源：氮气、硝酸盐、氨盐
有机氮源：
固氮微生物所利用的氮源是游离氮返回牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等（NO3—、NH4＋）一个
细胞2.特征：大小、形状、光泽度、
颜色、透明度等。3.功能：1.定义： 菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体倒平板约50℃1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？讨论 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。1、平板划线法接种环防止划破培养基菌种在固体培养基表面连续划线使菌种稀释分散单菌落 划3个平板 1个不划线（重复实验）（空白对照）讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？讨论 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？问题讨论 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2、稀释涂布平板法稀释涂布平板法梯度稀释菌液
分别（依次）涂布平板 (1)梯度稀释操作:
101102103104105106（2）涂布平板操作各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。讨论