(共34张PPT)
动物细胞工程常用的技术手段:
动物细胞培养、 动物细胞核移植、
动物细胞融合、 单克隆抗体
复习:
植物细胞工程常用的技术手段有哪些?
植物组织培养、 植物体细胞杂交
强调:
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
问题讨论:
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植,但对于大面积烧伤病人来讲,健康皮肤很有限,使用他人皮肤来源不足,而且会产生排异反应。请同学们想一想如何来治疗该病人?
取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植
一、动物细胞培养
动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
1、概念
2、原理
细胞增殖
(1) 选材:
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
3、培养过程:
原因:它们细胞增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养。
(2)处理:
分散成单个细胞,制成细胞悬液
在进行动物细胞培养时,剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散细胞。
既然用胰蛋白酶等处理细胞,表明细胞间的物质是蛋白质,用胃蛋白酶行吗?
想一想:
不行,因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。
(3)动物细胞生长特性:
①细胞贴壁:
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,
要求:
培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。
②细胞的接触抑制:
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会
停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
胰蛋白酶
单个细胞
加培养液
制成
细胞悬液
部分细胞无限传代
动物细胞培养不能
最终培养成生物体
细胞贴壁
原代培养
传代培养
胰蛋白酶
10代细胞
50代细胞
(4)具体过程
(4)具体过程
强调几个概念:
遗传物质改变
定义:将动物组织消化后的初次培养称为原代培养
定义:当原代培养的细胞生长停止,这时如果要使细胞继续生长,就要及时用胰蛋白酶等,使细胞从瓶壁上解离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养
传代培养
原代培养
有关概念:
细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。
细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制。
有关概念:
探究:
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的知识,认为体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢?
【资料一】细菌、真菌和病毒等均可造成细胞培养环境的污染,而离体培养的细胞已经失去了对微生物和有毒物质的防御能力,一旦受到污染或自身代谢物质积累等,培养的细胞就会死亡。
探究:
结论一:
(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)
无菌、无毒
【资料二】培养的细胞就像体内细胞一样,需要一些基本的营养物质和生长因子,如氨基酸、葡萄糖、无机盐、维生素、核苷酸等。不同组织来源的细胞需要不同的生长因子,而且需求量也不同,所以必须精心设计这些成分的搭配比例。
探究:
结论二:
(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。)
全部的营养物质
【资料三】人体细胞培养的标准温度为( 36.5+(-)0.5度),偏离这一温度范围,细胞的正常代谢就会受到影响。培养的细胞对低温的耐受能力比高温的耐受力大。
探究:
结论三:
适宜的温度和PH值
36.5+(-)0.5度, 7.2-7.4
【资料四】开放培养时一般把细胞置于95%空气和5% 二氧化碳的气体环境中。氧气参与细胞呼吸作用,二氧化碳可以维持培养基的PH。
探究:
结论四:
O2和CO2(95%空气和5% CO2 )
必要的气体条件
①无菌、无毒
②全部的营养物质
③适宜的温度和PH值
④必要的气体条件
(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)
(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。)
保证细胞顺利的生长增殖
36.5+(-)0.5度, 7.2-7.4
O2和CO2(95%空气和5% CO2 )
4、条件:
维持培养液的PH
5、应用
大规模培养生产生物制品(病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体)
作为基因工程中的受体细胞
培养的动物细胞可以用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性
用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据
细胞的全能性
细胞株、细胞系
植株
培养结果
获得细胞或细胞产物
快速繁殖、培育无病毒植株等
培养目的
动物血清
植物激素
培养基特有成分
液体培养基
固体培养基
培养基性质
细胞增殖
原理
动物细胞培养
植物组织培养
比较项目
植物组织培养和动物细胞培养的比较
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --( )
A.细胞系 B.细胞株
C.原代细胞 D.传代细胞
2、动物细胞工程技术的基础是 ------ ( )
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养
A
D
课堂检测:
3、在动物细胞培养过程中,下列哪种现象是不可能的( )
A.细胞一直在细胞悬液中分裂生长
B.有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去
C.有部分细胞核型会发生变化
D. 个别细胞会发生基因突变
4、下列过程与细胞培养无关的是------------------( )
A.检测有毒物质 B.生产单克隆抗体
C.筛选抗癌药物 D.杂交育种
A
D
课堂检测:
离体的植物组织或细胞在适当的培养条件下可发育成完整的植株,那么,是否能用类似的方法使动物细胞发育成一个完整的动物个体呢?
思考:
二 动物体细胞核移植技术 和克隆动物
将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎, 这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
核移植
胚胎细胞核移植
体细胞核移植
(难度高)
1、概念
细胞质
细胞核
细胞核移植
多莉羊的培育过程
2、过程
供体细胞
(供核)
细胞培养
体细胞
卵母细胞
(减2中期:供质)
去核
无核卵母细胞
注入
电刺激
重组细胞
重组胚胎
胚胎移植
代孕母体
新个体(与母体相同的个体)
3、应用前景
(1)加快家畜遗传改良进程
(2)保护频危物种
(3)利用生物反应器生产生物蛋白
(4)器官移植供体
4、存在问题
成功率低
存在健康问题
克隆动物食品的安全问题
许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷,如体型过大,异常肥胖,发育困难,脏器缺陷,免疫失调等。
1、在克隆多利羊的过程中,下列哪项技术没有运用到
A.细胞培养技术 B.细胞核移植
C.胚胎移植技术 D.基因工程技术
2、从母羊甲的体细胞中取出细胞核,注入到母羊乙去掉核的卵细胞中,融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎,再植入到另一只母羊丙的子宫内,出生小羊的大多数性状
A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙
D
B
课堂检测:
3、生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功“复生”野驴的方法是 ( )
A.将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分化、再分化,培育成新个体
B.将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个体
C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中,经孕育培养成新个体
D.将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体
C
小结: 动物细胞工程
动物细胞培养液的主要成分:
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
(1)液体培养基
(2)含有动物血清
动物体细胞大都生活在液体的环境