微专题突破
一、植物组织培养和花药离体培养
1．植物组织培养技术和花药离体培养技术
植物组织培养技术
花药离体培养技术
选材
体细胞
生殖细胞(精子)
生殖方式
无性生殖
有性生殖
相同点
植物细胞全能性；外植体→愈伤组织→丛芽→生根→移栽；无菌技术；接种等
2．植物激素在组织培养过程中的重要作用
生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点如下表。
激素使用
实验结果
使用顺序
先生长素后细胞分裂素
有利于细胞分裂
先细胞分裂素后生长素
细胞既分裂也分化
生长素与细胞分裂素同时使用
分化频率提高
生长素用量与细胞分裂素用量的比例
该比值高时
利于根的分化，抑制芽的形成
该比值低时
利于芽的分化，抑制根的形成
该比值适中时
促进愈伤组织的生长
1．如图表示应用植物组织培养技术培育优质玉米的过程。对此过程的相关描述错误的是( )
A．B→E过程中细胞全能性的高低发生了改变
B．C试管中形成的是高度液泡化的薄壁细胞
C．A植株和F植株体细胞中的染色体组数相同
D．培养出的F植株一般不能直接应用于扩大种植
【解析】 该过程是植物组织培养，实际上就是植物花药离体培养。花药是减数分裂产生的，因此，花药离体培养后得到的个体(单倍体)的染色体只有原母本植株A染色体的一半。
【答案】 C
2．如图表示植物组织培养过程：
(1)图中①过程获得的细胞是正常植物体经________形成的，在这一过程中染色体的变化是______________________________________________________
________________________________________________________________。
(2)要顺利完成③过程，除了需要各种无机营养成分外，还需要在培养基中加入________、________(两类不同功能的物质)等。该过程形成的细胞与正常体细胞相比，具有____________________的特点。
(3)从过程④的结果看，它的实质是________________________
________________________________________________________________。
【解析】 (1)单倍体性细胞是经减数分裂形成的，减数分裂的特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，子细胞中染色体数目减半。
(2)图中③是脱分化，在培养基中除需加入无机营养成分外，还需要加入有机营养成分和植物激素等，形成的愈伤组织细胞是高度液泡化、无定形状态的薄壁细胞。
(3)图中④是再分化，从实质上看是基因选择性表达的结果。
【答案】 (1)减数分裂 染色体复制一次，细胞分裂两次，子细胞中染色体数目是亲代细胞中的一半
(2)有机营养成分 植物激素 排列疏松、高度液泡化、细胞壁薄
(3)基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果
3．植物组织培养技术被广泛应用于培育无病毒植株、育种及获得植物次生代谢产物等生产生活实际。如图为番茄植株的培育过程。分析回答：
(1)①过程中使用了______________酶，获得植物细胞原生质体，此处使用的溶液浓度不宜过小，以防止细胞原生质体______________。
(2)同一番茄植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因____________(填“相同”“不相同”或“不一定相同”)；图中属于再分化的过程是____________(填序号)。
(3)多倍体番茄植株所结果实中维生素含量更高，若想培育多倍体番茄，可选择在图中的过程③中添加____________进行处理，也可以选择在过程⑥中添加____________进行处理。
【解析】 (1)①过程中使用了纤维素酶和果胶酶，获得植物细胞原生质体，此处使用的溶液浓度不宜过小，以防止细胞原生质体吸水涨破。
(2)同一番茄植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因不一定相同，如花粉细胞和体细胞培养形成的植株愈伤组织的基因型不同，图中属于再分化的过程是⑨⑩。
(3)多倍体番茄植株所结果实中维生素含量更高，若想培育多倍体番茄，可选择在图中的过程③中添加聚乙二醇进行处理，也可以选择在过程⑥中添加秋水仙素进行处理。
【答案】 (1)纤维素酶和果胶(答“纤维素酶”即对) 吸水涨破
(2)不一定相同 ⑨⑩(答⑨或⑩均对)
(3)聚乙二醇 秋水仙素
二、动物细胞培养及单克隆抗体的制备
1．动物细胞培养过程
2．单克隆抗体的制备
(1)过程
(2)获取单克隆抗体的场所
①若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取。
②若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。
(3)抗体与单克隆抗体的比较
产生
特点
抗体
由B淋巴细胞分泌
一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差
单克隆抗体
由杂交瘤细胞分泌
特异性强、灵敏度高、能大量制备
4．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( )
A．连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B．某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C．由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D．未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
【解析】 本题考查动物细胞培养过程中细胞的特点。连续细胞系的细胞，其核型已发生改变；一个祖细胞培养形成的细胞群才为一个克隆；未经克隆化培养的细胞系细胞可能是由不同细胞分裂形成的，其性状可能不同。
【答案】 B
5．某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。
回答下列问题：
(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________小鼠，理由是_________________
________________________________________________________________。
(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_____________________________________
________________________________________________________________，
体系中出现多种类型细胞的原因是_______________________
________________________________________________________________。
(3)杂交瘤细胞中有________个细胞核，染色体数目最多是________条。
(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是________________________________________________________________。
【解析】 (1)分析题图可知，经4次免疫后，X、Y、Z小鼠的血清抗体效价都达到16 000以上。由于4次免疫后的Y小鼠的血清抗体效价最高，故最适合用于制备B淋巴细胞。(2)细胞融合实验中，由于细胞融合是随机的，而且诱导融合率不可能达到100%，所以会有未融合的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞、融合的具有同种核的细胞和杂交瘤细胞三种类型。(3)杂交瘤细胞同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的核物质，但细胞核只有一个。由于杂交瘤细胞在分裂过程中染色体会丢失，故细胞核中染色体数目最多是40＋60＝100(条)。(4)B淋巴细胞，无限增殖。
【答案】 (1)4 Y Y小鼠的血清抗体效价最高
(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
(3)1 100
(4)不能无限增殖
6．单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下图所示：
(1)过程③常用的方法是________________________________。
(2)向小鼠体内注射抗原蛋白，使小鼠产生___________免疫。从小鼠体内分离的细胞Ⅰ是__________________________，细胞Ⅱ应具有的特点是________________________________________________。
(3)体外培养细胞Ⅱ，首先应保证其处于________的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度。培养箱充入二氧化碳的作用是________________________________________________________________
________________________________________________________________。
(4)对于转基因成功的细胞Ⅱ还要进行克隆化培养和________检测。
(5)若要预防H7N9禽流感，可用图中的________________作为疫苗。
【解析】 (1)基因工程中将目的基因导入动物细胞，常用显微注射法。
(2)向小鼠体内注射了抗原后，刺激小鼠将发生特异性免疫中的体液免疫。从小鼠体内分离出能产生抗体的细胞，即已免疫的B细胞，也称浆细胞。通过基因工程技术导入了无限增殖调控基因后，再经过检测，得到的该细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体。
(3)动物细胞培养需要满足无菌无毒的环境，充足营养和适宜的pH，其中二氧化碳的作用就是维持培养液的pH。
(4)细胞Ⅱ要大量培养，对其产生的抗体进行检测、筛选，以便获得能产生针对H7N9抗原的特定抗体的细胞Ⅱ。
(5)传统的疫苗是脱毒或减毒的病原体，通过图示过程可知，抗原蛋白就可以刺激机体产生相应的特异性免疫，即抗原蛋白可作为预防H7N9禽流感的疫苗。
【答案】 (1)显微注射法 (2)体液(不能只答特异性) B细胞(浆细胞或已免疫B细胞) 既能无限增殖，又能产生特异性抗体 (3)无菌 维持培养液的pH (4)(专一)抗体 (5)抗原蛋白
课件35张PPT。第二章 细胞工程微专题突破Thank you for watching !章末综合测评(二)
(时间：45分钟，分值：100分)
一、选择题(共8个题，每小题5分，共40分)
1．下列关于细胞工程的叙述，错误的是( )
A．电场法或聚乙二醇均可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合
B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理
C．小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可形成杂交瘤细胞
D．某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同
【解析】 电场法或聚乙二醇均可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合，A正确；去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理，前者需要用纤维素酶和果胶酶处理，后者需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理，B正确；小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可形成杂交瘤细胞，C正确；某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与甲乙两品种杂交后代的染色体数目不同，前者是后者的两倍，D错误。
【答案】 D
2．科学家用灭活的病毒把骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞，灭活病毒的作用是( )
A．病毒比较小，可钻入细胞内
B．灭活的病毒已完全死亡，死亡的病毒可以让细胞聚集
C．灭活的病毒已失去感染性，对各种动物细胞不造成破坏，但所保留的融合性，能使不同的动物细胞进行融合
D．灭活的病毒带有目的基因，通过融合可以让杂交细胞带有目的基因
【解析】 动物细胞融合常用灭活的病毒作诱导剂，因为灭活的病毒不再具有感染性，不会对细胞造成破坏，但仍可促使不同的动物细胞融合。
【答案】 C
3．体细胞克隆技术的发明，在生物科学发展史上的确有里程碑的意义。但是，它同其他事物一样，既有积极的一面，也有消极的一面。下列哪项不符合克隆技术积极的一面( )
A．丰富生物的多样性，促使生物进化
B．有利于生物界基因库的保护
C．有利于一些濒于绝迹的动物的保护
D．有利于维持生态系统的稳定
【解析】 体细胞克隆是一种无性生殖，不会产生新的物种，所以不会丰富生物的多样性，但其保护了生物界基因库的稳定，有利于保护濒危物种，也就有利于维持生态系统的稳定。
【答案】 A
4．细胞工程中，选择合适的生物材料是成功的关键。下列选择不合理的是( )
A．选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量细胞
B．选择去核的卵细胞作为核受体进行核移植可提高克隆动物的成功率
C．选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得优质的突变体
D．选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
【解析】 本题考查细胞工程中材料的选择。选择高度分化的动物体细胞进行培养不利于获得大量细胞，应选择分化程度低、分裂能力强的细胞进行培养。
【答案】 A
5．动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。如图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。从该图提供的信息不能得出的结论是( )
血清对正常细胞和癌细胞培养的影响
A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同
B．有无血清对正常细胞培养的影响不同
C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养
D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
【解析】 由题图中所示的正常细胞和癌细胞的生长曲线可明显看出在有血清或无血清条件下，癌细胞的增殖速率都高于正常细胞的增殖速率。
【答案】 A
6．对下面制备单克隆抗体的过程示意图的叙述不正确的是( )
A．①表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的
B．④中的筛选是通过抗原、抗体反应实现的
C．③促进细胞融合的过程可以利用聚乙二醇作介导
D．⑤可以无限增殖
【解析】 ①表示提取过程，指的是从小鼠的脾脏内提取B淋巴细胞，从骨髓中提取骨髓瘤细胞。
【答案】 A
7．如图列举了几种植物的育种方式，据图分析下列说法中正确的是( )
A．丁过程证明已经分化的植物细胞具有全能性
B．经乙过程处理，愈伤组织发生定向的变异
C．甲、丙两种育种方式与传统杂交育种相比，其优点是能克服不同物种间远缘杂交的不亲和性
D．丙方式将外源目的基因导入植物细胞，只能以受精卵作为受体，因为受精卵大，容易操作
【解析】 离体的植物细胞经脱分化后可表现出全能性，已经分化的细胞全能性并不能表达；经乙处理的细胞发生了基因突变，但突变是不定向的；甲、丙过程分别采用了细胞工程技术和基因工程技术，都克服了远缘杂交不亲和的障碍；将目的基因导入植物细胞时，常采用受精卵和体细胞作为受体细胞。
【答案】 C
8．下图是利用玉米(2N＝20)的幼苗芽尖细胞(基因型BbTt)进行实验的流程示意图。下列分析错误的是( )
A．基因重组发生在图中②过程，线粒体、高尔基体、核糖体等细胞器参与了③过程
B．该实验中涉及到的原理包括细胞的全能性、染色体变异、细胞增殖等
C．植株A、B为二倍体，发育起点不同，植株C属于单倍体，其发育起点为配子，植株B纯合的概率为25%
D．获得植株B的育种方式优点是明显缩短育种年限
【解析】 本题考查植物组织培养和单倍体育种。基因重组发生在减数分裂(过程②)形成配子的过程中，过程③细胞分裂时需要线粒体、核糖体和高尔基体参与，A对。用芽尖细胞培养成完整植株的原理是细胞的全能性；获得植株B属于单倍体育种，其原理是染色体变异；过程③是细胞增殖，B对。植株A发育的起点是体细胞，植株B发育的起点是花药，植株C是花药离体培养得到的单倍体，植株B纯合的概率是100%，C错。
【答案】 C
二、非选择题(共4个题，共60分)
9．(15分)如图是通过植物细胞工程技术获得紫衫醇的途径，请据图回答：
―→紫杉醇
(1)过程①为______________，除了提供水分、无机盐、糖类、维生素以及氨基酸外，还需要在培养基中加入______________，获得的愈伤组织具有的特点是____________________________________________________________
________________________________________________。
(2)过程②__________(填“是”或“不是”)再分化，该过程需要用___________
处理愈伤组织；
(3)过程③需要使用____________(填“固体”“液体”或“半固体”)培养基，有利于细胞增殖，在培养观察中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外， 成功的另一个关键是操作过程中必须保证______________，该途径是否体现了植物细胞具有全能性？______________________________________。
【解析】 图示是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，其中①表示脱分化过程，②表示将愈伤组织分散成单个细胞，③表示细胞增殖过程。
(1)过程①为脱分化，除了提供水分、无机盐、糖类、维生素以及氨基酸外，还需要在培养基中加入植物激素(生长素和细胞分裂素)，愈伤组织具有的特点是一团没有特定的形态、结构和功能，并处于旺盛分裂状态的薄壁细胞。
(2)过程②表示将愈伤组织分散成单个细胞，不是再分化，该过程需要用果胶酶处理愈伤组织。
(3)过程③需使用液体培养基，有利于细胞增殖，在培养观察中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证无菌，该过程植物细胞并没有发育成个体，没有体现全能性。
【答案】 (1)脱分化 植物激素(生长素和细胞分裂素) 是一团没有特定的形态、结构和功能，并处于旺盛分裂状态的薄壁细胞 (2)不是 果胶酶 (3)液体 无菌 否
10．(15分)为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：
(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为________。
(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如下图所示。细胞干重在12 d后下降的原因有__________________________；培养液中蔗糖的作用是________、________。
(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经________处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和________酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是________、________。
(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有________(填序号)。
①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 ②必须在光照条件下培养 ③培养过程中需通空气 ④固定化后植物细胞生长会变慢
【解析】 (1)外植体经诱导形成愈伤组织的过程称为脱分化。
(2)观察图示可知，12 d后蔗糖浓度和pH都下降到较低水平，影响能量的供应和酶的活性，导致细胞干重下降。另外，培养液中的蔗糖还具有调节渗透压的作用。
(3)在细胞分裂过程中，用低温或秋水仙素处理，都可抑制纺锤体的形成，使子染色体不能移向两极，从而使细胞中染色体数目加倍。愈伤组织的细胞之间含有纤维素和果胶，欲将其分散成单个细胞，压片前需用纤维素酶和果胶酶处理。愈伤组织细胞经诱导处理后，有的细胞染色体数目加倍(4n)，有的细胞染色体数目未加倍(2n)，也可能有的细胞在连续分裂中每次都因低温或秋水仙素抑制了纺锤体的形成，导致细胞中染色体数目连续加倍，出现染色体数目为8n的细胞。所以染色体数目加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期时染色体数目为8n，染色体数目加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期时染色体数目也为8n。
(4)为了更好地获得次生代谢产物，应选用生长旺盛的愈伤组织。愈伤组织细胞无叶绿体，不进行光合作用，因此不需要光照；培养过程要通入无菌空气，确保细胞正常生命活动的进行。细胞的固定化通常使用包埋法，由于包埋材料的影响，营养物质和氧气的扩散都受到一定的影响，所以固定化后植物细胞生长速度变慢。
【答案】 (1)脱分化 (2)蔗糖浓度下降，pH降低 提供能源 调节渗透压 (3)秋水仙素(低温) 果胶 经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期 经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期 (4)①③④
11．(15分)下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：
(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是________。
(2)图甲中②过程常在________诱导下完成。④过程与体外培养相比，其优点是_________________________________________________________________
________________________________________________________________。
(3)单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其________。
(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？________。原因是______________________________________________________________
____________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
(5)在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是( )
A．卵细胞大，便于操作
B．卵细胞含有的营养物质多
C．卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达
D．重组细胞才具有全能性
【解析】 (1)单克隆抗体制备过程和克隆动物的过程都需用到的动物细胞工程技术手段是动物细胞培养。(2)诱导动物细胞融合的方法有物理法(如电场法)、化学法(如聚乙二醇法)和生物法(如仙台病毒法)。杂交瘤细胞可以通过体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖，只是注射到小鼠腹腔内增殖收集单克隆抗体时不需特定的培养基和严格的外界环境条件。(3)单克隆抗体具有特异性强的特点，能准确识别各种抗原物质的细微差异。(4)克隆羊的性状受细胞核和细胞质内的遗传物质的共同影响，由于卵细胞为克隆羊提供了细胞质中的遗传物质，所以性状不会全部同于供核个体。(5)由于成熟的动物体细胞不能培育成一个新个体，而经细胞核移植后能发育成个体，说明在受体细胞质中含有使细胞核全能性得以表达的物质。
【答案】 (1)动物细胞培养
(2)聚乙二醇(或仙台病毒法、电场法也可) 不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件 (3)特异性
(4)不完全像 卵细胞细胞质中的遗传物质也能控制某些性状 (5)C
12．(15分)动物细胞培养时需要在培养液中加入动物血清。为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，科研人员做了以下实验：
将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间。取三根刻度吸管，将血清从上到下轻轻吸成均等的三份，分别装入消毒后的瓶中，标记为上、中、下，再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中，混合均匀备用。分别取等量的不同“层次”的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中，再接种小鼠上皮细胞(接种细胞密度为5×104个/mL)，在适宜条件下培养72 h后，进行计数。结果如下表：
级别
上
中
下
混
72 h细胞数/个·mL－1
9.75×104
1.04×105
7.5×104
1.85×105
请回答：
(1)吸取血清过程中，要严格禁止震动和摇晃，目的是________________。
(2)细胞培养过程中，二氧化碳的主要作用是________________，每天更换培养基的目的是______________________________________________________
________________________________________________________________。
(3)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如下图所示的操作，统计出来的数据比实际值偏________，正确的操作应该是__________________。
(4)从表中结果可以看出，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同。造成这种结果的主要原因是不同“层次”血清中____________________________。
(5)根据实验结果，在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是_________________________________________________________________
________________________________________________________________。
【解析】 本题考查不同“层次”血清对动物细胞增殖的影响实验。(1)该实验为研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，故为了防止不同层次血清混合，吸取血清的过程中，要严格禁止震动和摇晃。(2)细胞培养中二氧化碳的作用是维持培养液的pH。每天更换培养基可以补充营养物质和去除代谢废物，有利于细胞增殖。(3)计数时应该先盖上盖玻璃片，后从侧面加细胞悬液，因为盖玻片和计数板之间的凹槽形成的狭缝空间的体积是固定的，加液体时靠虹吸作用将液体吸入。若先滴细胞悬液，再盖盖玻片则盖玻片可能由于已加入的液滴的表面张力作用使其未能严密地盖到计数板表面上，使计数室内的体积增大，从而使计数结果偏大。(4)因不同“层次”的血清中营养成分不同，所以不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同。(5)根据实验结果，在动物细胞培养过程中，应将血清充分混匀后再加入到培养液中，以利于细胞的增殖。
【答案】 (1)防止不同层次血清混合 (2)维持培养液的pH 补充营养物质和去除代谢废物，有利于细胞增殖 (3)大 先盖上盖玻片，后从侧面加细胞悬液 (4)营养成分不全(或营养成分不同) (5)将血清充分混匀后再加入培养液中
