基因工程[上学期]

课件24张PPT。基因工程简介第三章 第四节2005年9月19日一 基因工程的基本内容主要内容1）基因工程的概念
2）基因操作的工具
3）基因操作的基本步骤基因工程步骤中需要哪些工具？（一）基因操作的工具步骤一的工具：
步骤二的工具：
步骤三的工具：基因的剪刀——限制性内切酶基因的针线——DNA连接酶基因的运载工具——运载体基因的剪刀——限制性内切酶（一）基因操作的工具限制酶DNA的一段序列EcoRI识别序列 大肠杆菌的质粒：（二）基因操作的工具基因的运载工具——运载体：作为运载体必须具备哪些条件？（二）基因操作的工具1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。
2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。
3）具有某些标记基因，便于进行筛选。
如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。基因的针线——DNA连接酶（二）基因操作的工具 DNA连接酶连接形成磷酸二酯键用相同的限制性内切酶切割质粒
目的基因四个基本步骤：1）提取目的基因
2）目的基因与运载体结合
3）将目的基因导入受体细胞
4）目的基因的检测和表达（二）基因操作的基本步骤目的基因的提取方法（三）基因操作的基本步骤直接分离基因
人工合成基因反转录法
根据已知的氨基酸序列合成DNA：鸟枪法三种目的基因提取的方法优缺点操作简便广泛使用工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因专一性强操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高专一性最强仅限于合成核苷酸对较少的简单基因常用的受体细胞：步骤三：目的基因导入受体细胞 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。主要借鉴细菌或病毒侵然细胞的途径导入方式：步骤四：目的基因的检测和表达四环素
抗性基因氨苄青霉
素抗性基因（二）基因操作的基本步骤受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？什么叫基因工程？（三）基因工程的概念基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→ 拼接→ 导入→ 表达实质基因重组ECORI切割位点 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。
2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。
3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。步骤三：目的基因导入受体细胞基因的运载工具——运载体：（二）基因操作的工具